大质粒DNA提纯方法的改进

本文报道了一种源于Kado-Liu法经系列改进后产生的大质粒DNA检测与提取方法。改进之处主要是:裂解液组成中的Tris度为500mM,pH值为12.8～13.0;蛋白质的抽提除了酚—氯仿外同时使用了适量的醋酸钠(3M pH4.8)溶液;以异丙醇室温静置30分钟左右,取代冷乙醇较长时间的低温处理,进行DNA浓缩。该方法在肠道菌方面的应用中,显示了其简易、快速和较好的重复性。另外,用930～950μl新鲜10N NaOH液使裂解液pH值为最佳的经验值,既可避免因不同类型pH计产生不同结果的麻烦,亦为该方法能在普通实验室推广应用提供了方便。

痢疾杆菌不同群、型间交叉保护性试验研究

本文对痢疾杆菌不同群、型间的交叉保护作用进行了观察。试验模型为恒河猴，将其分为４组，第一、三组分别为感染过福氏１ａ和宋内菌并已康复的猴；第四组为用双价菌苗株ＦＳ（福氏２ａ和宋内）免疫的猴体，剂量依次为４×１０１０、６．５×１０１０、６×１０１０，共１６．５×１０１０活菌，第二组为空白对照。所有４组皆用福氏２ａ２５８００×１０８活菌攻击。从发病率来看，不同菌群与菌型间没有明显的交叉保护作用；从发病程度看则一组显著低于对照组，三组与对照组无显著差异，此结果表明痢疾杆菌Ｂ群内存在交叉保护作用，但较同型保护作用弱。

痢疾疫苗的现状与发展趋势

本文对细菌性痢疾疫苗的现状作了简要的论述 ,特别是对研究痢疾疫苗的思路与手段作了一些介绍 ,提出了一些看法 ,可供探讨。

人用细菌性疫苗

本文对当前人用细菌性疫苗的现状及其前景作了扼要的介绍 。

霍乱菌苗:回顾与前瞻

本文概述了霍乱菌苗的历史沿革及其存在的问题，着重从霍乱菌苗的预防效果方面进行了讨论并提出一些看法。

口服福氏2a和宋内氏痢疾双价活菌苗FS的研究

细菌性痢疾(菌痢)是世界范围内严重的卫生问题,据推算全世界每年约有两亿人染患痢疾,死亡人数约65万人左右.在我国,痢疾的发病率一直高居24种法定传染病之首,全国至少有200万例菌痢发生,(实际发病数为报告发病数的3～5倍),且以儿童、青壮年和老年人为主,因此,菌痢是严重危害人民健康的重要疾病.从痢疾菌流行菌型看,国内近年来一直以福氏2a型和宋内氏痢疾菌为优势流行菌,两种群型的痢疾菌引起的菌痢约占总菌痢的70%以上,因此如果能研制出同时预防福氏2a和宋内氏痢疾菌感染的菌苗,即可以显著降低和控制菌痢的发病率.

伤寒的免疫预防问题

本文介绍了当前伤寒流行的状况及用于预防伤寒的现有疫苗的情况 。

谈谈生物技术在疫苗研究工作中的应用问题

谈谈生物技术在疫苗研究工作中的应用问题王秉瑞（卫生部兰州生物制品研究所，兰州７３００４６）一、背景生物技术（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）也叫做生物工程，它牵涉的范围很广，包括细胞工程，反应器工程，仿生工程，基因工程等。实际上它是一种方法学。总的来说，...

口服福氏2a和宋内氏痢疾双价活疫苗FS的双盲对照现场观察

将 2 6 2 30人随机分为 3组 ,分别服用高剂量、低剂量口服痢疾活疫苗FS和安慰剂 ,观察安全性和保护效果 ,由结果可以看出 ,FS菌苗安全可靠。在半年的观察期内 ,能产生 6 2 76 %的对FS型保护 ,其中对福氏 2a保护率 6 1 0 7% ,宋内氏保护率 72 48% ,对菌痢的总保护率达 5 2 0 2 % ,高。

痢疾菌苗的研究现状与发展趋势

从日本人志贺氏发现菌痢的病原到现在已经有近一百年的历史了。在整整一个世纪的时间里,全世界的有志之士从未间断过对痢疾菌苗的研究。这主要是因为它的感染剂量小,10个菌即可使没有免疫力的人患病,而伤寒则起码要10000个菌。它不但可以通过食物和水传播,而且可以经过人与人的接触传播,在发展中国家,由于卫生条件不好,至今菌痢仍是一个主要的公共卫生问题,年发病率很高,最高的可达20万/10万人口。我国的菌痢,据近两年疫情报告的统计也均居首位:1988年为190/10万,1989年为140/30万。相比之下发达国家则较低,为50/10万。迫切需要一种有效的预防制品对之进行免疫。可惜的是,前人的努力均以失败而告终。志贺氏发现菌痢的病原之后,即曾以之制成菌苗,给一万多人做了注射免疫,但因灭活不全,菌苗中尚有毒菌,结果有不少人得了该病;苏联从1924年即用痢疾死菌苗口服免疫。

b型流感嗜血杆菌结合疫苗的制备及免疫学特性

目的制备ｂ型流感嗜血杆菌结合疫苗，观察免疫学特性。方法通过已二酸二肼（ＡＤＨ），将纯 化的荚膜多糖抗原与破伤风类毒素（ＴＴ）蛋白共价结合，制备ｂ型流感嗜血杆菌结合物。以２．５μｇ多糖或含２．５μｇ 多糖结合物经皮下免疫ＮＩＨ雌性小鼠，用ＥＬＩＳＡ法检测小鼠血清ＰＲＰ抗体及Ｔ抗体水平。结果用本实验方法提 取的多糖、合成的多糖衍生物、多糖－蛋白结合物都具有ｂ型流感嗜血杆菌的抗原特异性，其化学组成及结构特性 与国外文献报道结果基本一致。单独用多糖免疫小鼠未能诱导高水平的血清ＰＲＰ抗体，而用结合物免疫小鼠却诱 导出高水平的血清ＰＲＰ抗体及ＴＴ抗体，并存在免疫记忆性。结论本实验为进一步临床评价结合物的体内保护 性效果提供了实验基础。

预防O139霍乱B亚单位/全菌体口服疫苗的研究

目的 研制预防O139霍乱的B亚单位／全菌体口服疫苗。方法 应用重组霍乱毒素B亚单位及福尔马林灭活的O139霍乱弧菌全菌体，构建成B亚单位／全菌体疫苗，并进行安全性及免疫原性检测。结果 经连续3天大剂量灌喂小鼠后，未见体重下降、发病或死亡现象。全部小鼠均健康活存。以腹腔或口服免疫小鼠后，均能产生外周血或肠道局部高滴度的特异抗体。免疫小鼠对O139活菌攻击有良好的保护作用。结论B亚单位／全菌体口服疫苗在小鼠试验中安全性及免疫原性良好。

伤寒Vi多糖菌苗的安全性和免疫效果研究

对我国首次研究成功的伤寒Vi多糖菌酋进行了人体接种安全性、反应性、血清学效果和流行病学效果观察，各期观察达21万余人，结果证实伤寒Vi多糖茵茵安全世良好，反应轻微。血清学效果显示，30μg一次免疫，Vi抗体4倍增长可达91．6％。两次流行病学效果考核，按血培养伤寒杆菌阳性病例统计，保护率可达70％左右，茵茵的效果指数为3．29～3．49。该菌苗性质稳定，初免只需注射一针，替代现行菌体菌苗推广应用是完全可行的。

幽门螺杆菌

幽门螺杆菌是一种呈螺旋状或S形、微需氧的革兰阴性杆菌,专一性定居于人胃,是人类慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌和胃MALT淋巴瘤的主要病因.幽门螺杆菌在人群中的感染率非常高,达40%～90%,通常在儿童期感染,而且一经感染,若不根除治疗,将终生携带,携带者是幽门螺杆菌的传染源.幽门螺杆菌感染的诊断有侵入性方法如细菌培养、快速脲酶试验等,亦有非侵入性方法如脲呼吸试验、抗体检测等.幽门螺杆菌感染引起胃-十二指肠疾病的机制涉及细菌本身毒力因子、细菌黏附与定植、宿主炎症/免疫反应、氧化应激、细胞的增殖与凋亡等,情况复杂.迄今,幽门螺杆菌的确切致病机制未有定论.幽门螺杆菌相关疾病的治疗普遍采用根除细菌的抗菌疗法.预防幽门螺杆菌感染以及治疗幽门螺杆菌相关疾病的疫苗正在研究中.

O139霍乱灭活全菌体菌苗免疫后人群抗体水平测定

Ｏ１３９霍乱弧菌经甲醛灭活制备而成的全菌体菌苗在广西田阳县进行临床考核。每组５０名中学生经肌肉途径接种４５亿菌和９０亿菌两种剂量，一个月后８０％接种者血清中杀弧菌抗体升高，最高可达１∶１６０，免疫后３个月开始缓慢下降，但仍有６８－７２％接种者抗体效价在１∶２０以上。高剂量组半数接种者的杀弧菌抗体可维持存在６个月。血清中凝集抗体升高明显，但３个月后下降也明显。与对照组Ｏ１菌苗相比，两种抗体水平升高与下降趋势一致。采用ＥＬＩＳＡ法测定抗毒抗体，Ｏ１３９菌苗组与Ｏ１菌苗组结果相似，均有一定上升。

肽6A对球囊损伤后大鼠主动脉血管壁增殖的影响

本文在大鼠主动脉球囊内皮剥脱术后血管壁细胞过份增殖模型上，用合成的纤维蛋白（原）降解产物肽６Ａ（４０μｍｏｌ／ｋｇ／ｄ）治疗，可有效地抑制损伤血管壁的细胞计数增加和内膜增殖，显著降低其血管组织￣３Ｈ－ＴｄＲ和￣３Ｈ－Ｌｅｕ掺入增加程度，实验结果提示肽６Ａ作为血管成型术的辅佐剂，对于防治再狭窄可能具有潜在临床应用前景。

肽6A与RGDS肽对大鼠颈总动脉血栓形成的影响

在２０％ＦｅＣｌ３造成大鼠颈总动脉血栓形成的模型上，分别预防（血栓形成前）和治疗（血栓形成后）应用合成的纤维蛋白（原）降解肽片段，肽６Ａ（５０μｍｏｌ／ｋｇ）和ＲＧＤＳ（１０μｍｏｌ／ｋｇ）或联合肽６Ａ（２５μｍｏｌ／ｋｇ）与ＲＧＤＳ（５μｍｏｌ／ｋｇ）静脉滴注，明显抑制动物的血栓形成，使血浆和血管组织ｃＧＭＰ含量明显增加，肽６Ａ还明显降低血浆纤维蛋白原含量。本工作为肽６Ａ和ＲＧＤＳ作为新型血管再通剂提供了实验依据。

01群与非01群0139型霍乱弧菌毒力的对比研究

非０１群０１３９型霍乱弧菌是近年引起南亚次大陆霍乱流行的新型病原体，将其与０１群霍乱弧菌的毒力特性进行对比研究对于了解其特性及研制相关的菌苗具有重要意义。本文报告了４株０１３９型霍乱弧菌与０１群霍乱弧菌菌株的对比测定结果。发现０１３９型霍乱弧菌与０ｌ群霍乱弧菌有所不同，呈不透明的菌落形态，光学显微镜及电子显微镜镜检显示有荚膜的表型，在体内具有较高的繁殖能力并产生肠毒素，体内侵袭试验结果表明所有４株０１３９型菌株均能形成菌血症，补体抵抗力测定证实０１３９型菌株具有高度抵抗正常人血清杀菌作用的能力及较高的小鼠致死性。据信荚膜是一种重要的毒力决定簇，是保护菌体免受宿主防御机制作用的重要因子。经０１３９株死菌苗免疫的小鼠产生了抵抗同型菌株攻击的能力，表明０１３９株死菌苗可提供抗同型菌株感染的保护作用。

套式PCR检测体系扩增效率的分析及对假阳性的控制

用扩增效率等量化的指标来控制PCR检测过程中出现的假阳性 ,调查了受假阳性污染的试剂在特定的PCR检测系统和环境中产生假阳性的PCR循环数界限 ,采用模板量与扩增倍数的线性回归关系分析系统的扩增效率并以此测定计算了两个不同循环数系统 (C2 7+15) 和C2 7+2 0 )的检测界限分别为 0 78fg和 0 0 6 5fg ,提出以此检测界限的 1/2量作为假阳性耐受量 ,两个不同循环数系统的假阳性耐受量分别为 5 80个和 48个拷贝。

非O1群霍乱弧菌O139型荚膜多糖的制备及生物学特性

目的 提取Ｏ１３９型霍乱弧菌荚膜多糖，并检测其理化特性及免疫原性。方法 采用Ｃａｔａｖｌｏｎ、冷 酚、不同浓度乙醇沉淀、离心等步骤精制Ｏ１３９霍乱弧菌荚膜多糖，用生物学、免疫学等方法分析检定。结果 提取 的霍乱Ｏ１３９型荚膜多糖具有良好的多糖特性、结构特征和免疫原性。结论 为组分疫苗的研制打下基础。