靶向抑制MAP3K1对小鼠乳腺癌细胞生物学行为的影响

为了在细胞学水平研究靶向抑制MAP3K1(mitogen-activated protein kinase kinase kinase 1)基因对小鼠乳腺癌4T1细胞黏附、运动及侵袭能力等生物学行为的影响,试验用体外构建靶向"沉默"MAP3K1基因的amiRNA(artificial microRNA)干扰载体,以X-treme GENE HP转染4T1细胞(干扰组转染amiRNA干扰载体,对照组转染空载体,空白组未转染质粒)对MAP3K1基因mRNA及蛋白表达水平进行检测,以测定干扰效率;分别以黏附试验检测小鼠乳腺癌4T1细胞的黏附能力,用划痕-愈合试验与Transwell侵袭试验测定小鼠乳腺癌4T1细胞的运动与侵袭能力。结果表明:小鼠乳腺癌4T1细胞转染MAP3K1 amiRNA-3干扰载体与空载体后,干扰4T1细胞MAP3K1 mRNA水平及蛋白水平均被有效抑制,干扰效率高达70%(P<0.01)。试验组4T1细胞黏附能力极显著低于对照组(P<0.01);干扰组4T1细胞的运动与侵袭能力均显著低于对照组(P<0.05)。说明构建的amiRNA干扰载体能够有效抑制靶基因MAP3K1的表达,并能够显著抑制小鼠乳腺癌4T1细胞的黏附、运动与侵袭能力;靶向抑制MAP3K1基因能够广泛地影响小鼠乳腺癌4T1细胞的生物学行为。

C57BL/6小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养与纯化鉴定

为了建立一种易于操作,能够获得高纯度、高活力C57BL/6小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养体系,并对分离提取的细胞进行纯化鉴定,试验在无菌环境下取E12.5胎鼠皮肤,剪碎至1 mm2大小,均匀铺于皿中,用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基连续培养4 d,以胰蛋白酶消化-再贴壁法分离纯化目的细胞,分别以NIH3T3、角质形成性细胞作为阳性与阴性对照,采用免疫荧光、Western-blot检测Vimentin及Keratin的表达情况,以鉴定所分离的细胞及其纯度。结果表明:组织块培养24 h即可见成纤维样细胞爬出,培养96 h细胞生长爬满全皿,经胰酶消化、筛网过滤再贴壁接种后能够获得形态均一、活力旺盛、具有成纤维细胞形态学特征的目的细胞;所分离细胞Vimentin表达阳性率为100%,而Keratin表达阳性率为0;与阴性对照角质形成性细胞相比,C57BL/6分离成纤维细胞和NIH3T3细胞均高表达Vimentin,且差异极显著,有统计学意义。说明以E12.5胎鼠皮肤为材料建立成纤维细胞分离培养体系,所分离培养的成纤维细胞具有更高的细胞活力和细胞纯度。

HSP90在脓毒症小鼠中的表达及血必净对其表达的影响

为了研究热休克蛋白90(HSP90)因子在脓毒症小鼠中的表达水平,并研究血必净干预、治疗对HSP90表达的影响,探讨HSP90因子在脓毒症病程中的生物学意义,试验采用尾静脉注射脂多糖(LPS)建立脓毒症小鼠模型,血必净干预组小鼠腹腔注射10 m L/kg剂量血必净,每日2次,而模型组小鼠予以等量生理盐水处理,采用实时定量PCR(Real time PCR)方法检测两组小鼠心脏和肾脏组织中HSP90 mRNA的相对表达量;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组小鼠血清肌酐(Cr)、血尿素氮(BUN)水平及心脏、肾脏组织液中HSP90因子表达水平;采用H.E.染色观察两组小鼠心脏、肾脏组织病理结构。结果表明:小鼠尾静脉注射LPS后,血清Cr和BUN水平出现持续性增高,于18小时达到最高水平,两组小鼠血清BUN、Cr水平最早于注射LPS造模8 h后出现显著差异(P<0.05);在脓毒症小鼠心脏组织中,HSP90 mRNA及蛋白水平均出现明显上调,整体呈先上升后下降的趋势,模型组HSP90 mRNA及蛋白总体水平高于血必净干预组(P<0.05,P<0.01),HSP90 mRNA及蛋白在脓毒症小鼠肾脏组织中的表达水平及变化趋势与其在心脏组织中相似;脓毒症小鼠心、肾组织发生明显炎性反应,可见组织结构异常,而干预组小鼠保持较为完整的心脏、肾脏组织结构,无显著病理学变化。说明脓毒症小鼠心脏、肾脏组织中的HSP90基因和蛋白的表达随脓毒症发生、发展表现不同程度的上升,最早于造模后2小时出现显著增高,表明HSP90因子参与脓毒症发生、发展病程,提示可将HSP90列为脓毒症临床早期检测、诊断指标之一;血必净干预对HSP90因子具有调节作用,能够有效改善脓毒症症状。

普通级与SPF级新西兰兔肝脏、十二指肠病理、超微结构及肝功能的比较研究

为了研究普通级与SPF级新西兰兔肝脏及肠道病理、超微结构和肝功能的变化差异,从而为正确选择、应用实验兔开展相关科学试验提供参考依据,试验分别选择6只普通级与SPF级新西兰白兔,采集粪便经饱和盐水漂浮法检查是否感染兔球虫;采血测定肝功能生化指标;解剖兔取部分肝脏和十二指肠,制作切片后进行H.E.染色,观察病理变化和超微结构。结果表明:在病理及超微结构比较上,普通级兔肝脏、十二指肠均出现明显的变化,主要表现在普通级兔肝脏、十二指肠表面与实质出现大小、数量不一的球虫结节,结节病灶有大量兔球虫卵囊,侵入周围组织、细胞,进而影响肝脏、十二指肠正常的病理结构与超微结构。与SPF级兔相比,普通级兔肝功能相关的5项指标中有3项出现显著差异,2项出现极显著差异。说明普通级兔肝脏正常的机理功能受到影响,提示有条件时应选用微生物控制等级更高的SPF级兔开展相关科学实验。

纤维母细胞生长因子10基因在角膜混浊小鼠中的克隆测序与表达研究

目的研究纤维细胞生长因子10(Fgf10)基因在角膜混浊小鼠(B6-Co)中的克隆测序及表达。方法正常小鼠(C57BL/6,B6)和B6-Co小鼠交配,取胚胎16.5dB6和B6-Co小鼠皮肤组织,提取总RNA并逆转录,采用逆转录聚合酶链反应(PCR)技术分段扩增目的基因,连接T载体,转化感受态细胞,筛选阳性克隆,并测序分析;采用实时荧光PCR的方法进一步检测该基因在B6-Co小鼠中的表达。结果测序发现在Fgf10基因第三外显子1 914bp和1 915bp之间插入了碱基A;实时荧光PCR结果显示Fgf10在B6-Co小鼠中的表达明显下降(P<0.05)。结论 Fgf10与B6-Co小鼠出生时眼睑开放(EOB)表型有关,其表达调控机制有待进一步研究。

三种抗球虫药物对家兔CYP1A2 mRNA和蛋白表达的影响

利用Real-time PCR和Western blot分别检测抗球虫药物磺胺喹噁啉、氯苯胍和妥曲珠利对家兔肝脏、肾脏、十二指肠中CYP1A2mRNA和蛋白表达的影响。40只新西兰白兔分为空白对照组、磺胺喹噁啉处理组、氯苯胍处理组和妥曲珠利处理组。空白对照组家兔饲喂正常颗粒饲料,磺胺喹噁啉处理组饲喂含25mg/kg浓度磺胺喹噁啉的颗粒饲料,氯苯胍处理组饲喂含66mg/kg浓度氯苯胍的颗粒饲料,妥曲珠利处理组饲喂含2mg/kg浓度妥曲珠利的颗粒饲料,连续30d。在第31天无菌条件下取出动物的部分肝脏、肾脏以及十二指肠,提取RNA、蛋白分别进行Real-time PCR、Western blot检测。Real-time PCR的结果表明,磺胺喹噁啉、氯苯胍和妥曲珠利都能够诱导家兔肝脏和肾脏CYP1A2mRNA的表达,而妥曲珠利能够显著的抑制十二指肠CYP1A2mRNA的表达。Western blot结果表明,磺胺喹噁啉、氯苯胍和妥曲珠利能够显著的诱导家兔肝脏CYP1A2蛋白水平的表达;磺胺喹噁啉显著的诱导肾脏和十二指肠CYP1A2蛋白表达,而氯苯胍能够显著的抑制肾脏CYP1A2蛋白的表达。结果提示,磺胺喹噁啉、氯苯胍和妥曲珠利对家兔CYP1A2mRNA和蛋白水平的表达均具有组织特异性,在不同的组织器官呈现出显著的诱导和抑制作用。

MEKK1在B6-Co小鼠胚胎发育过程中的表达

为了检测MEKK1在B6-Co小鼠胚胎眼睑发育关键时期的表达,探讨其在该突变系小鼠EOB(出生时眼睛睁开)表型形成过程中的作用,试验剖取E16.5和E18.5小鼠,剪取整个头部,用4%多聚甲醛固定脱水,制作冰冻切片,通过免疫荧光技术检测MEKK1在小鼠胚胎眼睑部位的表达;剪取胎鼠皮肤,提取蛋白,以GAPDH为内参,通过Western-blot检测MEKK1在B6-Co小鼠胚胎中的表达情况。结果表明:与B6小鼠相比较,MEKK1在B6-Co小鼠胚胎眼睑发育关键时期的表达差异不显著;但游离C端在E16.5小鼠的表达明显要高于E18.5的表达,差异显著。说明MEKK1对促进小鼠眼睑融合起到了重要作用。

分子印迹荧光探针在农药检测中的应用进展

分子印迹聚合物由于可特异性地从样品溶液中富集目标物,已被广泛应用于粮食、果蔬等食品以及水、土壤等环境中农药的提取和检测.将分子印迹技术和量子点修饰技术相结合形成的分子印迹荧光探针,可以实现对目标物的高灵敏快速检测.据此,对分子印迹技术的原理、制备方法及应用进行了概述,并进一步阐述了量子点修饰的分子印迹荧光探针在农药检测中的应用和展望.

啶虫脒分子印迹荧光传感器的构建及检测研究

作者首先修饰和制备了对啶虫脒农药有特异响应的硅碳量子点(SiCDs),并以此作为荧光探针开发了可快速检测啶虫脒农药的高灵敏分子印迹荧光传感器SiCDs@MIPs,同时研究了模板与功能单体物质的量比、交联剂添加量、SiCDs包埋量对SiCDs@MIPs检测灵敏度的影响。结果表明,SiCDs@MIPs的最适制备条件为:模板与功能单体的物质的量比为1∶4,交联剂添加量为25μL,SiCDs包埋量为10 mg。在最优检测条件下,SiCDs@MIPs对啶虫脒的检出限为0.086μmol/L,线性范围为0.045~0.450μmol/L,相关系数为0.989,检测时间仅需25 min。进一步将制备的SiCDs@MIPs应用于白菜、番茄和冬瓜中啶虫脒农药残留的检测,回收率可达到73.0%~109.0%。该方法为蔬菜中啶虫脒农药残留的检测提供了新策略。

超声引导下肩袖三角间隙注射结合常规康复技术治疗部分及全层小撕裂型肩袖损伤

目的:观察超声引导下肩袖三角间隙注射结合常规康复技术治疗部分及全层小撕裂型肩袖损伤的临床疗效。方法:将部分或全层小撕裂型肩袖损伤患者128例随机分为对照组42例、痛点注射组43例和超声注射组43例(最终脱失7例)。3组患者均接受常规康复治疗,痛点注射组加行肩关节局部痛点注射,超声注射组加行超声引导下肩袖三角间隙注射。治疗前和治疗3周后对患者进行肩痛程度视觉模拟评分(VAS)、Constant-Murley肩关节评分系统(CMS)各分项评分及功能独立性测量量表(FIM)中的自理能力评定,并比较3组临床治疗的总有效率。结果:治疗3周后,3组患者VAS评分较治疗前比较均明显降低(均P<0.01),痛点注射组和超声注射组较对照组评分均更低(均P<0.05),且超声注射组更低于痛点注射组(P<0.05);3组患者CMS各项评分和FIM的自理能力评分较治疗前均明显提高(均P<0.01),痛点注射组和超声注射组较对照组上述评分均更高(均P<0.05),且超声注射组更高于痛点注射组(P<0.05);痛点注射组和超声注射组临床疗效的总有效率均明显高于对照组(均P<0.05),且超声注射组总有效率更高于痛点注射组(P<0.05)。结论:超声引导下肩袖三角间隙注射结合常规康复技术较痛点注射结合常规康复技术治疗部分及全层小撕裂型肩袖损伤能更好地减轻患者临床症状,改善肩关节功能,提高日常生活自理能力,疗效更好。

土木工程物资设备进场组织设计与现场管理

物资设备管理是土木工程建设的重要组成部分,对现代企业的发展将产生重大影响。只有做好物资设备的进场和现场管理,才能最大限度地节约项目资金,提高企业效益。同时,通过对物资设备的管理,减少库存,加快资金的整体流动,提高企业的现代化管理水平。本文主要从土木工程的角度,设计物资设备进场组织,简要分析物资设备的现场管理。

乳及乳制品中抗生素检测方法研究进展

近年来,不断出现的食品安全问题引发人们广泛关注,尤其是乳制品,其安全问题涉及到每一个人,而牛奶安全问题中比较严重的一个就是抗生素残留问题。通过综述抗生素残留现状、来源和危害,以及比较流行的抗生素检测技术和新的检测方法,对牛奶中抗生素检测方法的发展进行展望。

工程物资设备管理中存在的问题及相应对策

随着现代高速公路工程的快速发展,工程物资设备管理工作逐渐受到施工企业的重视,该项管理工作对整体现代高速公路工程的建设所造成的影响是非常巨大的,对工程物资设备加以严格的管理非常重要,施工企业需要从具体的管理工作入手,从实际中找到提升管理效率的方法。本文从现代高速公路工程物资设备管理中存在的问题进行分析,研究了可以应对工程物资设备管理问题的方法与策略,以供参考。

机械应力调控软骨细胞炎症反应中长链非编码RNA的机制研究

目的探讨机械应力调控软骨细胞炎症反应的作用机制。方法体外分离培养新生SD大鼠软骨细胞，经白介素-1β（IL—1β）干预构建软骨细胞炎症模型，设置对照组（IL-1β）、2000μstrain组（2000μstrain应力＋IL-1β）、5000μstrain组（5000μstrain应力＋IL-10），IL-1β浓度为5ng／ml，以1Hz应力干预2h。采用Real—timePCR和Western Blot检测Ⅱ型胶原（C01．2）、基质金属蛋白酶13（MMP13）、自噬标记蛋白LC3、Beclin-1及n1．TOR表达，同时检测MEG3表达，采用免疫荧光染色检测自噬小体形成；si＋RNA沉默MEG3后，采用Real—timePCR检测LC3及Beclin-1表达。结果2000μstrain组软骨细胞Col-2、LC3、Beelin-1基因及Beelin-1蛋白表达量均较对照组及5000μstrain组明显上调（P〈0．05）；2000μstrain组软骨细胞MEG3基因表达量较对照组及5000μstrain组明显下调（P〈0．05）；5000μstrain组In—TOR蛋白表达较对照组及2000μstrain组明显增加（P〈0．05）；应力组自噬标记蛋白LC3Ⅱ／Ⅰ相对表达量均较对照组明显减少（P〈0．05）；免疫荧光染色显示2000μstrain组自噬小体形成较对照组及5000μstrain组明显增加，5000μstrain组自噬小体形成较对照组及2000μstrain组明显减少（P〈0．05）；si—RNA沉默MEG3后，发现LC3及Beclin-1表达量均明显增加（P〈0．05）。结论机械应力可影响软骨细胞LncRNA—MEG3表达，从而调控炎症环境中软骨细胞自噬水平。

经颅直流电刺激治疗脊髓损伤后神经病理性疼痛的疗效观察

目的:观察经颅直流电刺激(tDCS)对脊髓损伤(SCI)后神经病理性疼痛的治疗效果。方法:用Leeds神经性症状和体征评估量表(LANSS)、贝克抑郁量表(BDI)、简易精神状态量表(MMSE)筛选出18例神经病理性疼痛病程<2年的SCI患者。先完成1~2周基线评估,该阶段用SCI神经功能(ASIA)及视觉模拟评分法(VAS)评价病情,直至疼痛趋于稳定状态,随机分为试验组(12例)和对照组(6例)。试验组接受常规康复治疗、药物治疗和tDCS治疗(第一运动区M1区、2 mA、每次20 min、每日1次、连续5 d),对照组接受常规康复治疗和药物治疗。治疗前、后,采用VAS、简明疼痛评估量表(BPI)对2组患者的疼痛程度及睡眠、情绪情况进行评定。用t检验分析试验组内不同病程与疼痛缓解程度的相关性。结果:治疗前,2组患者VAS评分、BPI睡眠及情绪评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与组内治疗前比较,试验组治疗后VAS、BPI睡眠及情绪评分显著改善(P<0.05),对照组治疗后仅BPI情绪评分优于治疗前(P<0.05)。与对照组治疗后同指标比较,试验组VAS评分改善显著(P<0.05)。详见表2。按照病程将试验组患者分为病程>3月组和病程<3月组,对VAS评分及病程进行相关性分析后,暂未发现病程与tDCS疗效之间存在相关性。结论:tDCS对病程<2年SCI患者的神经病理性疼痛有改善作用,暂未发现病程与tDCS疗效之间存在相关性。

重复经颅直流电刺激治疗神经病理性疼痛的效果观察及机制初探

目的观察重复经颅直流电刺激治疗大鼠神经病理性疼痛的效果并初步探索其作用机制。方法成年雄性SD大鼠40只,随机选取10只大鼠纳入正常组(n=10),10只大鼠纳入假手术组(n=10),其余20只大鼠行坐骨神经慢性压迫性损伤的模型制作,并按照随机数字表法分为假治疗组(n=10)和治疗组(n=10)。术后14 d,治疗组进行连续8 d的经颅直流电刺激,假治疗组进行假刺激,正常组和假手术组不做任何干预。于术前1 d、术后第14天和术后第22天(即治疗8 d后),分别利用Von Frey和Hot-plate测试大鼠痛阈变化,术后第22天行脊髓组织取材,利用Western blot技术检测各组大鼠的NR2B-NMDA-R、GABA_(a)-R和GABA_(b)-R的蛋白表达。结果①术后第14天,与假手术组对比,假治疗组和治疗组大鼠的50%MWT和WTL值均明显下降(P<0.05);②术后第22天,与假治疗组对比,治疗组50%MWT和WTL值均明显升高(P<0.05),治疗组的WTL值与术前1 d对比,差异无统计学意义(P>0.05);③术后第22天,与假手术组对比,假治疗组的NR2B-NMDA-R含量增高(P<0.05),而GABA_(a)-R和GABA_(b)-R含量均下降(P<0.05);术后第22天与假治疗组对比,治疗组的NR2B-NMDA-R含量下降(P<0.05),GABAa-R含量增高(P<0.05),但GABA_(b)-R含量与假治疗组对比,差异无统计学意义(P>0.05);术后第22天,治疗组的NR2B-NMDA-R含量与假手术组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论重复经颅直流电刺激可改善神经病理性疼痛反应,并对痛觉过敏(热痛)的改善优于痛觉超敏(机械痛),其作用机制可能是下调脊髓NR2B-NMDA-R至正常水平,并部分上调GABA_(a)-R。