血友病基因治疗国内外研究新进展

血友病是一种由于X染色体上凝血因子基因突变所致的遗传性出血性疾病,目前主要的治疗方法是凝血因子替代疗法。但长期频繁的注射用药往往导致患者依从性差,容易产生抑制性抗体,从而影响治疗效果。虽然现在延长半衰期的新型凝血因子药物、人源化双特异性抗体以及抗组织因子途径抑制剂单克隆抗体等用于疾病治疗,在给药方式和作用持续时间上已有很大进步,但它们仍无法治愈血友病。因此,以疾病根治为重要目标的基因治疗被设计出来,近年来受到了广泛的关注。该文介绍了血友病基因治疗的原理、基因治疗载体的选择、基因治疗预处理方案,总结了现阶段基因治疗临床应用的安全性和有效性;最后讨论基因治疗目前存在的问题以及未来发展方向。

PCR检测降钙素基因甲基化及其在某些恶性血液病中的意义

目的 :探讨急性非淋巴细胞白血病 (acutenonlymphoblasticleukecia ,ANLL)、骨髓增生异常综合征(myelodysplasticsyndrome ,MDS)和慢性粒细胞白血病 (chronicmyeloidleukemia ,CML)患者降钙素基因 (calcitoningene ,CT基因 )甲基化状况及其意义。方法 :利用限制性内切酶和多聚酶链反应 ( polymerasechainreaction ,PCR)技术。结果 :72 % ( 18/ 2 5 )的ANLL和 6 0 % ( 6 / 10 )的MDS患者有CT基因高度甲基化 ,在CML慢性期CT基因甲基化阳性率为 2 3 .8% ( 5 / 2 1) ,而急变期阳性率为 80 % ( 8/ 10 ) ,两者之间有显著性差异 ,系列稀释法发现本试验敏感性至少达 10 3 水平。结论 :CT基因高度甲基化较广泛地存在于ANLL、MDS和CML急变期 ,是ANLL和MDS患者白血病细胞克隆以及CML进展和急变的一个共同的分子标志 。

Lenstar LS 900与角膜超声测厚仪测量角膜中央厚度的对比观察

目的比较lenstar LS 900与角膜超声测厚仪测量人中央角膜厚度(CCT)的差异,为临床检查提供参考。方法选取屈光手术者26例(52只眼),分别用lenstar LS 900和角膜超声测厚仪测量双眼CCT,两种仪器均测量3次或以上,取其平均值,对所得数据进行统计学分析。结果 52只眼CCT测量结果:lenstar LS 900为(538.27±40.38)μm,A超为(534.15±41.12)μm。两种测量方法结果差异有统计学意义(t=2.9643,P<0.005)。但测量结果高度相关(r=0.970),前者所测CCT较后者厚(4.11±10.11)μm。结论 lenstar LS 900与角膜超声测厚仪对CCT的测量结果呈较高的相关性,两种仪器具有较高的测量准确性,lenstar LS 900可以作为角膜厚度的测量工具之一。

联合用药治疗持续性角膜上皮缺损的临床观察

目的 :采用碱性纤维细胞生长因子贝复舒滴眼液联合素高捷疗眼膏治疗持续性角膜缺损患者。方法 :和素高捷疗眼膏对比。结果 :联合用药的治愈率 81 4% ,有效率达 86 6 %。结论 :联合用药能显著促进组织复原和再生功能 。

非清髓性造血干细胞移植加供者淋巴细胞输注治疗多发性骨髓瘤1例报告并文献复习*

目的:研究非清髓性造血干细胞移植(NST)治疗多发性骨髓瘤(MM)的疗效,观察移植相关并发症的发生。方法:1例42岁MM患者,供者为其胞姐,HLA配型完全相合。动员方案:粒细胞集落刺激因子(G CSF)10μg·kg-1·d-1×5 d。预处理方案:抗胸腺细胞球蛋白(ATG)8 mg·kg-1 ·d-1 ×3 d,马法兰(MEL)120 mg/m2×1 d。移植单个核细胞数(MNC)6.5×108/kg;CD34+ 细胞4.4×106/kg。环胞菌素A(CsA)和短程甲氨蝶呤(MTX)预防移植物抗宿主病(GVHD)。移植后分别于+41 d、+76 d和+112 d进行3次供者淋巴细胞输注(DLI)。结果:移植后15 d中性粒细胞计数>0.5×109/L,21 d血小板计数>50×109/L,24 d性染色体和微卫星法DNA指纹图监测显示为混合嵌合体,随着DLI的进行,逐渐转为供者型完全嵌合体,骨髓瘤细胞和血清M蛋白均逐渐消失,移植后8个月达完全缓解。在+180 d(第三次DLI后68 d)发生II度急性GVHD,经甲泼尼龙和CsA治疗得以控制。现随访36个月,患者情况良好,仍处于完全缓解状态。结论:非清髓性造血干细胞移植加供者淋巴细胞输注治疗MM是可行和有效的。

ABO血型不合异基因造血干细胞移植临床观察

目的:探讨ABO血型不合异基因造血干细胞移植治疗血液病的临床疗效和近远期并发症.方法:对15例包括恶性血液病5例(多发性骨髓瘤1例、急性白血病3例、慢性粒细胞白血病1例)、再生障碍性贫血-阵发性睡眠性血红蛋白尿2例、重型再生障碍性贫血8例,进行同胞供者外周血干细胞移植、外周血联合骨髓造血干细胞移植和无关供者脐血造血干细胞移植.观察植入效果、血型的转变、以及移植近远期并发症.结果:15例患者均恢复造血功能,13例植入混合性嵌合体(MC)、其中5例由MC转变为供者完全性嵌合体(CC),8例长期保持MC状态,2例未植入.所有患者在输注移植物时出现轻微短暂的血红蛋白尿,无严重急性溶血和迟发性溶血发生,无急性移植物抗宿主病(aGVHD),1例局部型慢性移植物抗宿主病(cGVHD),1例广泛型cGVHD.在造血植入的患者,脐血移植4例保持MC状态、血型未转变,其余干细胞移植血型在1～2个月转变.结论:ABO血型不合异基因造血干细胞移植治疗血液病疗效肯定,对移植物和供受者体内凝集素的处理十分重要.

飞秒激光微小切口角膜基质透镜取出术患者的围手术期配合

总结了100例(200眼)近视患者行飞秒激光微小切口角膜基质透镜取出术的护理经验,主要包括术前做好各项检查及心理护理,术中配合医生手术,术后做好健康教育、用药指导及复查指导。认为做好围手术期护理是飞秒激光微小切口角膜基质透镜取出术获得成功的关键。

HLA单倍体相合造血干细胞移植研究进展

异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）是治愈恶性及部分重症非恶性血液病重要乃至唯一的手段。同胞HLA全相合造血干细胞移植（ISD-HSCT）为最佳选择,但同胞间HLA匹配概率仅约25%,由于我国独生子女家庭比例大,HLA全相合的同胞供者严重匮乏,替代供者造血干细胞移植正成为重要移植方式。

脱细胞猪角膜角膜移植患者的心理分析及对策

总结了13例脱细胞猪角膜角膜移植患者心理状况并提出护理对策。患者在围手术期焦虑、恐惧、抑郁、悲观、回避等负性心理。认为对脱细胞猪角膜角膜移植患者心理疏导,可减轻其心理压力,提高生活质量。

应用酵母双杂交技术筛选与RANK蛋白新基序IVVY相互作用的蛋白

目的:应用酵母双杂交技术筛选小鼠巨噬细胞中与核因子κB受体激活因子(RANK)蛋白上新基序IVVY相互作用的蛋白,以探寻RANKL/RANK系统中介导破骨细胞形成的RANK下游新信号转导蛋白。方法:应用GAL4酵母双杂交系统3,构建仅包含编码新基序535IVVY538的一小段RANK的cDNA片段为诱饵质粒pGBKT7-IVVY,并与巨噬细胞cDNA文库质粒pGADT7-library共转化AH109酵母,筛选与RANK蛋白新基序IVVY相互作用的蛋白,通过回复性杂交实验验证其可靠性,并对阳性克隆进行测序和基因同源性分析。结果:筛选出4个可能与IVVY基序有相互作用的蛋白,包括Ring1和YY1结合蛋白(RYBP)、ATP结合盒、E2F转录因子和热休克蛋白8,其中表达RYBP的阳性克隆出现频率高、速度快。结论:应用酵母双杂交技术成功地筛选出4个可能与IVVY基序相互作用的候选蛋白,其中RYBP可能性最大。

1例准分子激光偏中心切削后再矫正患者的护理

激光光学角膜切削术（PhotoRefractiveKeratectomy，PRK）在1996年前是治疗近视的主流术式，后来逐渐被准分子激光原位角膜磨镶术（IAsIK）所替代。有报道称，近视度数愈高，发生偏中心切削可能性就愈大，这与切削深，角膜基质床透明度下降，不能良好的注视视标有关。本科收治1例经准分子激光偏中心切削后再矫正患者，经积极治疗合理后再矫正患者，经积极治疗合理护理后取得了很好的治疗效果，现将护理体会报告如下。

毕节山地玉米田间杂草种类及危害程度调查

为明确毕节山地玉米种植区田间杂草的组成以及群落结构特征,采用倒置“W”九点取样法于2023年7月对毕节地区的玉米田杂草发生种类及危害情况进行调查。结果表明,毕节地区玉米田杂草184种,隶属于47科140属,其中双子叶杂草153种,单子叶杂草31种,分别占样方中杂草种类的83.16%和16.84%。优势杂草主要有菊科(共37种,占20.11%)、禾本科(共24种,占13.04%)、蓼科(共16种,占8.70%);通过优势度分析,相对多度最大的是升马唐,为31.49,其次是粗毛牛膝菊和狗尾草,分别为28.43和27.69。发生广泛且危害严重的有粗毛牛膝菊、升马唐、狗尾草、繁缕、鬼针草;其次是腺梗豨莶、细柄野荞麦、阿拉伯婆婆纳、尼泊尔蓼、野艾蒿、酢浆草、铁苋菜、裂苞铁苋菜、藜、打碗花、小蓬草、牛筋草、野草香、反枝苋和续断菊。

In Situ-RT PCR定量检测16例慢性粒细胞白血病仇bcr/abl融合基因

目的 研究原位逆转录多聚酶链反应技术（Ｉｎ Ｓｉｔｕ－ＲＴ ＰＣＲ）在检测慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因中的应用价值及其意义。方法：用 Ｉｎ Ｓｉｔｕ－ＲＴ ＰＣＲ方法测定 ＣＭＬ病人ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因表达量。结果：在不破坏细胞完整性条件下细胞系Ｋ５６２和ＣＭＬ病人检测到ｂｃｒ／ａｂｌＲＮＡ的扩增产物，表现为细胞浆内出现蓝紫色颗粒，计算这种阳性细胞的百分率来相对定量地检测ＣＭＬ病人ｂｃｒ／ａｂｌ ｍＲＮＡ的表达水平，这种检测技术的敏感性达１０－４水平以上。结论：Ｉｎ Ｓｉｔｕ－ＲＴ ＰＣＲ可以相对定量地检测ＣＭＬ病人ｂｃｒ／ａｂｌ ｍＲＮＡ的表达，直观地评价α－干扰素（α－ＩＦＮ）、骨髓移植（ＢＭＴ）等治疗ＣＭＬ的疗效，本检测方法敏感性高，又可用做微小残留病（ＭＲＤ）的检测。

急性非淋巴细胞白血病降钙素基因甲基化的检测及其意义

目的探讨急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）中降钙素基因（ＣＴ基因）的甲基化状况及其意义。方法利用限制性内切酶和聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术。结果２５例ＡＮＬＬ患者中１８例检测到ＣＴ基因高度甲基化，阳性率７２％，而且实验的敏感性至少达到１０－３水平，结论ＣＴ基因高度甲基化较普遍地存在于ＡＮＬＬ，可作为ＡＮ－ＬＬ恶性细胞的分子标志，用于ＡＮＬＬ患者治疗后微小残留病（ＭＲＤ）的检测，以利于预测复发、指导治疗和评价疗效。

0.05％环孢素A滴眼液治疗干眼的有效性和安全性临床评价

背景 干眼是常见的眼表疾病,质量分数0.05％环孢素A是一种免疫抑制剂,国外的研究表明其对干眼具有治疗作用,但中国尚未批准将0.05％环孢素A滴眼液用于干眼治疗. 目的 研究0.05％环孢素A治疗干跟的有效性和安全性. 方法 采用随机、双盲、安慰剂平行对照的优效试验方法,纳入2010年10月至2011年2月在四川大学华西医院确诊的干眼患者40例40眼,采用随机卡片法将经筛选期、基线期以及再次核查后符合纳入标准的患者随机分为2个组,2个组患者均给予羟丙基甲基纤维素滴眼液点眼作为基础治疗,同时分别给予0.05％环孢素A滴眼液（Ⅱ）和环孢素A滴眼液（Ⅱ）溶媒点眼84 d.患者均于用药后（7±1）、（28±2）、（56±3）、（84±3）d以及停药后14 d进行复查,将用药前后眼部症状、体征以及干眼相关检查指标作为有效性评价指标,将用药前后视力的改变、用药后不适感、全身安全性以及不良事件作为安全性评价指标,评估0.05％环孢素A滴眼液治疗干眼的有效性和安全性. 结果 治疗前后0.05％环孢素A滴眼液组和溶媒组的眼部症状评分、结膜充血评分、泪膜破裂时间（BUT）、Schirmer试验Ⅰ（SⅠ t）、角膜结膜染色总评分明显不同,差异均有统计学意义（均P＜0.01）.0.05％环孢素A滴眼液组和溶媒组的临床总有效率分别为75％（15/20）和25％ （5/20）,组间比较差异有统计学意义（P=0.000）,0.05％环孢素A滴眼液组与溶媒组总有效率的差值的95％可信区间（CI）为30.80％ ～53.75％,证实0.05％环孢素A组较溶媒组的统计优效成立.治疗后84d2个组受试者视力的差异无统计学意义（P=0.890）.大多数受试者用药后眼部无不适感,少数有轻中度不适.结论 0.05％环孢素A滴眼液（Ⅱ）对于治疗干眼有较好的疗效,并且具有良好的安全性.

不同准分子激光角膜屈光手术对近视眼角膜滞后量和角膜阻力因子的影响

背景准分子激光角膜屈光手术因术后痛苦小、视力恢复快、有效性佳和预测性好，成为目前治疗屈光不正的主流方法，但术后角膜生物力学性能降低可导致继发圆锥角膜、角膜扩张等并发症，因此准分子激光角膜屈光术后角膜生物力学的研究是临床上受到关注的问题之一。目的研究不同准分子激光角膜屈光手术对角膜生物力学的影响。方法采用前瞻性非随机对照的研究方法，纳入拟行角膜屈光手术的中度近视患者82例164眼，按手术方式的不同将患者分为前弹力层下激光角膜磨镶术（SBK）组（30例60眼）、准分子激光角膜原位磨镶术（LASIK）组（27例54眼）和准分子激光上皮下角膜磨镶术（LASEK）组（25例50眼），3个组受检者基线特征均相匹配。利用眼反应分析仪（ORA）分别测定和比较不同手术方式组术眼术前及术后1周和5个月的角膜滞后量（CH）值和角膜阻力因子（CRF）值，并分析角膜切削厚度与CH、CRF手术前后差值的关系。结果不同时间点SBK、LASIK、LASEK组间CH和CRF的总体比较差异均无统计学意义（F分组=2．17，P=0．08；F分组=2．67，P=0．07），各组不同时间点间CH值和CRF值的总体比较差异均有统计学意义（F时间=41．90，P=0．00；F时间=49．65，P=0．00），3个组术后1周、5个月，CH、CRF值均较术前明显下降，差异均有统计学意义（均P=0．00）。对角膜切削厚度与CH、CRF的差值分析发现，术后1周至术后5个月，角膜切削厚度与CH差值均不相关（均R^2=0．000），但与CRF差值呈弱相关（1周：Y=3．253＋0．010X，R^2=0．007；5个月：Y=1．073＋0．021X，R^2=0．004）。结论SBK、LASIK、LASEK术后术眼的角膜CH和CRF值均下降，导致角膜的生物力学变化，3种手术方式对角膜生物力学的影响相似，CRF在评价角膜屈光手术后角膜生物力学变化方面比CH更有价值。

非清髓性移植后供者淋巴细胞输注治疗血液病的疗效观察

【目的】研究非清髓性造血干细胞移植治疗血液病和供者淋巴细胞输注的疗效及并发症。【方法】以抗淋巴细胞球蛋白(anti-T-lymphocyteglobulin,ALG)或抗胸腺细胞球蛋白(anti-themocyteglobulin,ATG)为基础,减量化疗的非清髓性预处理方案治疗血液病6例,包括急性淋巴细胞白血病1例、多发性骨髓瘤2例、慢性粒细胞白血病1例、急性髓细胞白血病1例、骨髓纤维化1例,6例血液病于+28d～+30d进行第1次供者淋巴细胞输注,每隔3～4周1次,平均4.2(2～8)次,逐渐增加输注细胞数量,输注的T细胞数由(1.2～9.5)×104/kg逐渐增加至(0.75～2.15)×108/kg。【结果】移植早期均形成混合性嵌合体和血液学部分缓解(1例进步),供者淋巴细胞输注后,6例血液病中4例逐渐形成供者型完全嵌合体,并达到血液学完全缓解,骨髓纤维化患者仍然为混合性嵌合体和进步状态,并发急性移植物抗宿主病2例,慢性移植物抗宿主病2例,骨髓抑制2例,1例死于严重感染。【结论】以ATG/ALG为基础的非清髓性造血干细胞移植,可实现异基因造血干细胞的成功植入。通过供者淋巴细胞输注可实现混合性嵌合体向供者完全嵌合体的转变;移植物抗宿主病和骨髓抑制为其主要并发症。

浅层地热源节能技术及其在设施农业中的应用

浅层地源热泵是一种利用高位能使浅层地能从低位热源转移到高位热源的机械装置。该文回顾了浅层地源热泵的种类及各自的优缺点,重点介绍了地源热在国内外的发展背景与意义,探讨了浅层地源热泵技术在设施农业中的研究进展及存在的问题如初期投资高、控制水平低等,并结合存在的问题提出相应的对策和建议。

CD3^+ CD4^+ T细胞计数在重型再生障碍性贫血患者异基因造血干细胞移植术后病毒感染的预示价值

目的:探讨重型再生障碍性贫血(SAA)患者在异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后CD3^+ CD4^+ T细胞对预测病毒感染的价值。方法:选广州市第一人民医院血液内科2014年1月至2016年5月SAA行allo-HSCT患者78例。用流式细胞术检测移植后第1、2、3、6、12个月外周血CD3^+ CD4^+ T细胞计数,并根据结果分为<50/μl(n=120)、50-100/μl(n=48)和>100/μl 3个组(n=123)。在时间点的前后2周,监测巨细胞病毒、EB病毒DNA的感染情况,计算各类感染发生率。移植后3个月,按移植患者的CD3^+ CD4^+ T细胞计数分为2组,>100/μl组(n=30)及≤100/μl组(n=48),计算2组的CMV和EBV感染率、持续时间及发病情况,并进行随访,行生存情况比较。结果:CD3^+ CD4^+ T细胞计数>100/μl组较50-100/μl和<50/μl组的CMV、EBV感染率下降。移植后第3个月,CD3^+ CD4^+ T细胞计数>100/μl组CMV及EBV感染率较≤100/μl组低,CMV感染持续时间缩短;移植后3月,CD3^+ CD4^+ T细胞绝对数>100/μl组生存情况优于≤100/μl组。结论:SAA患者allo-HSCT后,CD3^+ CD4^+ T细胞数恢复至100/μl以上时,CMV及EBV感染率明显下降。移植后第3个月,CD3^+ CD4^+ T细胞绝对数>100/μl时CMV及EBV感染率明显下降,CMV感染持续时间缩短,生存率较高。CD3^+ CD4^+ T细胞绝对数是SAA患者alloHSCT后良好的CMV及EBV感染的一个预示指标。