胶原蛋白神经酰胺脂质体的制备及质量评价

以蛋黄卵磷脂、胆固醇和神经酰胺为成膜材料,采用薄膜分散法制备胶原蛋白神经酰胺脂质体(CO-CS)。以包封率为响应值,以药脂比、膜材比、超声时间和水合时间为影响因素对工艺进行优化。结果表明,当药脂比为1:16、超声时间为8.5 min、膜材比为4.3:1时,包封率可达90.73%。在此条件下,样品的粒径为(206.63±2.06) nm,聚合物分散性指数(polymer dispersity index, PDI)为0.187±0.010,Zeta电位为(-34.90±0.82) mV。避光保存60 d后,CO-CS的包封率为87.2%,粒径为(223.70±1.85) nm、PDI为0.174±0.013、Zeta电位为(-33.51±2.10) mV。结果表明,本研究制备的CO-CS包封率高,稳定性良好,制备工艺合理可行。

纳米农药登记毒理学试验方法研究进展

纳米农药是应用纳米技术制成的农药制剂产品,与传统农药剂型相比,纳米农药能提高农药药效和利用率,实现农药的响应控释和减施增效。但纳米特性也给纳米农药的安全性评价带来挑战,传统毒理学试验方法未必适用于纳米农药。因此本研究对纳米农药毒理学试验方法的研究进展进行了系统综述,以期为我国纳米农药的登记管理提供有益参考。

材料表征与纳米农药毒性关系研究进展

纳米材料因具备比表面积大、表面活性高等独特的物理化学性质而成为农业领域的应用热点。在正式推广纳米农药产品之前,纳米材料可能存在的健康危害以及纳米农药的风险评估问题有待解决。在此基础上,纳米颗粒的尺寸、形状、表面电荷等表征对农药吸附性、利用度乃至毒性的影响得到关注。本综述旨在总结不同物理化学表征对体外和体内模型毒性的研究概况,深入分析纳米农药与表征相关的健康风险,以便为将来的纳米农药研究和安全性评价提供一定参考。

雷公藤甲素对白血病HL-60和Jurkat细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨雷公藤甲素对人急性髓系白血病HL-60细胞、急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用MTT法、Annexin V-FITC/PI双染法、PI染色法、透射电镜观察不同浓度雷公藤甲素作用于两种细胞,对其生长增殖、凋亡、细胞周期及形态等方面的影响。结果:雷公藤甲素能显著抑制HL-60、Jurkat细胞的增殖,降低其存活率。给药24 h后,半数细胞抑制剂量(IC50)分别为(42.50±9.38)nmol/L和(60.91±9.77)nmol/L。能以剂量依赖方式诱导两种细胞凋亡,细胞周期分布G1期比例增加,S期比例降低(P<0.05),且伴有典型的细胞凋亡形态学改变。结论:雷公藤甲素能显著抑制HL-60、Jurkat细胞的生长增殖,并诱导细胞凋亡。

雷公藤红素对白血病HL-60和Jurkat细胞增殖及凋亡的影响

探讨雷公藤红素对人急性髓性白血病HL-60细胞、急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖及凋亡的影响。采用MTT法、Annexin V-FITC/PI双染法、PI染色法、透射电镜观察不同浓度雷公藤红素作用于两种细胞后对其生长增殖、凋亡、周期及形态等方面的影响。结果表明雷公藤红素能显著抑制HL-60细胞、Jurkat细胞的增殖,降低其存活率。给药24 h后,半抑制浓度(IC50)分别为(0.46±1.05)μmol/L和(0.88±1.13)μmol/L。以剂量依赖方式诱导两种细胞凋亡,细胞周期分布G1期比例增加,S期比例降低(P<0.05),且伴有典型的细胞凋亡形态学改变。雷公藤红素能显著抑制HL-60细胞、Jurkat细胞的生长增殖,并诱导细胞凋亡。

番茄红素的安全性评价及对小鼠免疫功能的影响

目的:研究番茄红素的食品安全性及对小鼠免疫功能的影响。方法:进行大鼠30 d喂养实验,小鼠急性毒性实验,测定小鼠细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能及NK细胞活性。结果:雌、雄小鼠的番茄红素急性经口毒性>2 666.64 mg/kg,属实际无毒级;番茄红素200、433.33、666.67 mg/(kg?d)剂量(以体质量计,下同)在30 d喂养实验中没有对大鼠的血液常规和血清生化指标产生影响,且Ames实验、小鼠骨髓细胞微核实验、小鼠精子畸形实验结果呈阴性;以33.33、66.67、200 mg/(kg?d)3个剂量进行小鼠免疫功能实验,200 mg/(kg?d)剂量组的鸡红细胞吞噬指数、自然杀伤(natural killer,NK)细胞活性高于阴性对照组,且差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:番茄红素食品安全性良好,高剂量番茄红素作为食品添加剂在小型啮齿类动物实验中具有增强免疫力的功能。

神经节苷脂GM．1对脑缺血再灌注大鼠诱导型．氧化氮合成酶的影响

目的:研究单唾液酸四已糖神经节苷脂(GM-1)对脑缺血再灌注后诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的影响并探讨其可能机制。方法:采用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型,缺血2h再灌注22h。将雄性SD大鼠随机分成假手术组,模型对照组和GM-1处理组(15、30、60mg/kg3个给药剂量组)。通过红四氮唑(TTC)染色和图像分析计算各组脑梗死体积,采用生物化学法测量各组伤侧脑中NO含量和iNOS活性。结果:与模型对照组相比,GM-1中、高剂量处理组脑梗死体积缩小,iNOS活性和NO量下降,低剂量组变化不明显。结论:脑缺血后iNOS升高与脑损伤关系密切,而GM-1可以对抗iNOS和NO上升,并减轻脑缺血损伤。

胞二磷胆碱对大鼠海马神经元缺糖缺氧再灌注损伤的保护作用

目的观察胞二磷胆碱对大鼠海马神经元缺糖缺氧再灌注损伤的保护作用。方法建立海马神经元缺糖缺氧再灌注损伤模型,随机分为正常对照组、缺糖缺氧再灌注组、胞二磷胆碱干预组(1、10、100μmol/L),观察再灌注6、24h还原型谷胱甘肽含量以及谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性的改变;于再灌注24h检测海马神经元四甲基偶氮唑盐(MTT)代谢率,以及流式细胞术检测凋亡。结果与缺糖缺氧再灌注组相比,胞二磷胆碱于再灌注6h可明显提高谷胱甘肽(GSH)的含量及GPx的活性(P<0.05);于再灌注24h可增高MTT代谢率,提高GPx的活性及减少海马神经元凋亡(P<0.05)。结论胞二磷胆碱对海马神经元缺糖缺氧再灌注损伤有明显的保护作用,其机制可能与改善神经元GSH含量、GPx活性及减少凋亡有关。

神经节苷脂对大鼠脑缺血／再灌注后一氧化氮合酶的影响及机制

目的观察单唾液酸四已糖神经节苷脂(GM-1)对脑缺血/再灌注后一氧化氮合酶(NOS,包括cNOS和iNOS)的影响并探讨其机制。方法采用线拴法制作大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型,分别在缺血后即刻和缺血后12 h腹腔注射GM-1,观察GM-1不同时点给药对脑缺血后24 h脑梗死体积、NOS以及NO的作用,并选取诱导型一氧化氮合酶抑制剂氨基胍(AG)作为阳性对照,同样分两个时间点腹腔注射给予AG,比较AG和GM-1两药对脑缺血后24 h NOS和NO的影响。结果①与生理盐水对照组相比,脑缺血后即刻予GM-1处理可有效地缩小脑梗死体积,抑制iNOS和NO的升高,而缺血后12 h GM-1处理则均无变化;AG组在两个时间点给药都可抑制iNOS和NO的升高。②两种药对cNOS都无明显作用。结论GM-1对缺血侧脑中iNOS的抑制作用受起始给药时间影响,这可能是因为GM-1通过减少脑梗死体积、减轻脑损伤而间接影响了iNOS的升高,当延迟给药时,GM-1抗损伤能力下降,进而对iNOS的间接抑制作用降低。

高效液相色谱-荧光法或超高效液相色谱-四极杆/轨道阱质谱法测定抑郁症小鼠海马中5-羟色胺和相关的2种物质含量的比较

为测定抑郁症小鼠海马中5-羟色胺(5-HT)、色氨酸(TRP)和5-羟吲哚乙酸(5-HIAA),比较了两种测定方法的应用,即带荧光检测器的高效液相色谱法(HPLC-FLD)和超高效液相色谱-四极杆/轨道阱质谱法(UHPLC-Q-Obitrap-MS)的比较。样品的前处理选用0.4 mol·L-1高氯酸溶液以1∶5(g∶mL)比例加入于小鼠海马组织的匀浆液中沉淀其中的蛋白,经涡旋和离心后取上清液,分别按上述两种方法进行测定。在两种方法中均采用C18柱分离。试验结果表明:Q-Obitrap-MS测定显示较强的基质干扰,而HPLC-FLD测得的5-HT、TRP和5-HIAA的色谱峰形对称,峰宽窄,基质无明显干扰。3种目标物的质量浓度在500.0μg·L-1以内呈线性。不同浓度水平的加标回收率为86.2%,92.1%,91.0%。上述3项测定目标物的检出限(3S/N)依次为1.0,1.0,0.5μg·L-1。

代森锰锌对PC-12细胞凋亡的影响

目的探讨代森锰锌对PC-12细胞凋亡的影响及其机制。方法 采用体外细胞培养方法,PC-12细胞加入代森锰锌0,1,10,30,60和120μmol.L-1,培养24h后,应用WST-8法检测PC-12细胞增殖;PC-12细胞中加入代森锰锌0,1,30和120μmol.L-1,培养24h后,流式细胞术FITC-AnnexinⅤ/PI双染检测细胞凋亡率;Hoechst33258染色及倒置荧光显微镜观察细胞形态学改变;Western印迹法检测Bcl-2和Bax的表达以及ERK蛋白磷酸化水平。结果与正常对照组相比,随着代森锰锌浓度增加,代森锰锌组晚期凋亡率升高,呈浓度依赖关系,IC50为49.95μmol.L-1。代森锰锌120μmol.L-1组细胞晚期凋亡率为(90±4)%(P<0.05);Hoechst33258染色可见细胞核膨大、染色质边集浓染等凋亡特征;与正常对照组相比,Bcl-2逐渐降低,Bax和p-ERK1/2表达增高(P<0.05),代森锰锌120μmol.L-1组p-ERK1/2积分吸光度分别为128.0±2.5和178.4±4.0。结论代森锰锌能够诱导PC-12细胞凋亡,ERK信号通路可能在此过程中发挥作用。

石斛人参蝙蝠蛾姜胶囊的功效成分测定与其对CI/F1小鼠免疫功能的调节作用研究

目的测定石斛人参蝙蝠蛾姜胶囊中功效成分人参皂甙、多糖和腺苷的含量,研究石斛人参蝙蝠蛾姜胶囊对CI/F1(BALB/c×ICR)雌性小鼠的免疫调节作用。方法采用比色法测定人参皂甙和多糖,采用液相色谱法(HPLC)测定腺苷;采用小鼠经口灌胃分别给予260、530、1580 mg/kg的石斛人参蝙蝠蛾姜胶囊30 d后,观察其体重,测定其免疫器官指数、脾淋巴细胞增殖能力、小鼠迟发型变态反应,血清溶血素、自然杀伤细胞(NK细胞)活性、抗体生成细胞水平及腹腔巨噬细胞吞噬功能的变化。结果石斛人参蝙蝠蛾姜胶囊中功效成分的含量分别为人参皂甙:1.495 g/100 g、多糖:12.90 g/100 g和腺苷:73.8 mg/100 g;1580 mg/kg组可增强细胞免疫功能(脾淋巴细胞增殖能力和小鼠迟发型变态反应增强)、提高抗体生成细胞水平、提高小鼠巨噬细胞吞噬活性。结论在本实验条件下,石斛人参蝙蝠蛾姜胶囊有增强小鼠免疫功能的作用。

尼莫地平对脑缺血早期神经元型一氧化氮合酶的影响

目的观察局灶性脑缺血大鼠早期缺血部位神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)的变化,以及钙拮抗剂尼莫地平对其的影响。方法以线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型为基础,选取雄性SD大鼠共75只,随机分成假手术组(n=25)、模型对照组(n=25)和尼莫地平处理组(n=25)。以NDAPH-d组织化学方法观测各组大鼠脑缺血后30min、2h和6h纹状体中nNOS阳性细胞的变化;利用生物化学法和Hoechst凋亡染色分别检测各组大鼠脑缺血30min纹状体nNOS活性和6h半暗区细胞凋亡。结果脑缺血30min,与假手术组相比,模型对照组大鼠缺血侧纹状体中nNOS活性和nNOS阳性细胞数均升高(P<0.01),而尼莫地平组无明显变化(P>0.05);随脑缺血时间延长,模型对照组和尼莫地平组nNOS阳性细胞数都下降(P<0.05);脑缺血6h,尼莫地平组半暗区的凋亡细胞少于模型对照组(P<0.01)。结论钙拮抗剂尼莫地平可抑制脑缺血早期的nNOS上升,并减轻随后的脑组织损伤。

梅花鹿茸血冻干粉的安全性评价及缓解体力疲劳功能研究

通过小鼠急性毒性试验,大鼠30d喂养试验,三项遗传毒性试验,小鼠尾部铅皮负重游泳,小鼠血清中尿素水平检测,小鼠肝脏中糖原储备量测定以及小鼠运动前后血清中乳酸水平的测定对梅花鹿茸血冻干粉的食品安全性及对小鼠的缓解体力疲劳作用进行探讨。结果表明:小鼠急性经口毒性>15g/kg·BW,属无毒级;鹿茸血冻干粉0.6,1.3,2.0g/(kg·BW·d)剂量在30d喂养试验中未对大鼠的体重、摄食量、血液常规和血液生化指标产生影响,且三项遗传毒性试验结果均为阴性。0.6g/(kg·BW·d)组小鼠负重游泳时间长于阴性对照组,差异有统计学意义(P <0.05);0.1,0.2,0.6g/(kg·BW·d)组肝糖原储备量高于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05);0.6g/(kg·BW·d)组小鼠游泳前后血乳酸变化的曲线下面积值低于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。梅花鹿茸血冻干粉食用安全,且具有缓解小鼠体力疲劳功能。

珍珠粉的食用安全性毒理学评价

目的:对珍珠粉的食用安全性进行毒理学评价。方法:采用小鼠急性毒性试验、遗传毒性试验(Ames试验、小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验)和大鼠30 d喂养试验。结果:小鼠急性经口半数致死剂量(LD50)大于15 000 mg/(kg体重);Ames试验、小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验结果均为阴性;在30 d喂养试验中,大鼠的生长发育、血液学、生化、脏器重比及病理组织学未见与受试物相关的异常变化。结论:珍珠粉急性毒性属无毒级,无遗传毒性,珍珠粉30 d喂养实验未发现明显毒性反应,临床剂量安全。

甲基苯丙胺对大鼠小胶质细胞的损伤及炎性相关基因表达的影响

目的:观察甲基苯丙胺(methamphetamine,Meth)对原代小胶质细胞的损伤及炎性相关基因表达的影响。方法:原代培养SD胎鼠小胶质细胞,利用MTT和原位末端转移酶标记技术(TUNEL)分别检测Meth引起小胶质细胞活力和凋亡的变化。采用实时荧光定量聚合酶链反应法(real-time PCR)观察Meth对小胶质细胞炎性相关因子mRNA表达的影响。ELISA及试剂盒法检测Meth作用后小胶质细胞白介素(interleukin,IL)-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)的分泌改变。结果:MTT实验显示,Meth降低小胶质细胞活力,呈浓度依赖性,浓度为200μmol/L时与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。TUNEL实验结果显示200μmol/L Meth可引起细胞凋亡,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。q-PCR结果显示Meth作用于小胶质细胞24 h可降低IL-24、一氧化氮合酶3(nitric oxide synthase 3,NOS3)表达水平,上调Peli3、Sigma受体1(Sigma receptor 1,Sig1-R)、IL-1β、IL-6、Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)的表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。此外,蛋白水平亦发现,Meth可促进IL-6和TNF-α的分泌。结论:Meth可降低小胶质细胞活力,诱导小胶质细胞凋亡,并引起IL-1β、IL-1R、IL-6、TLR4等炎性因子mRNA表达变化,促进IL-6和TNF-α的分泌,进而可能损伤中枢神经系统,产生神经毒性。

趋化因子受体4在神经胶质瘤中的表达及血管生成中的作用

目的:探讨趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)在神经胶质瘤中的表达及在血管生成中的作用。方法:通过免疫组化法检测正常或神经胶质瘤患者的瘤体组织标本CXCR4、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,其结果做方差分析及相关性分析;采用ELISA观察CXCR4的配体基质细胞衍生因子-1(stromal derived factor-1,SDF-1)对U87胶质瘤细胞系VEGF分泌的影响;同时利用多种处理方式(对照组、SDF-1处理组、CXCR4拮抗剂AMD3100处理组、CXCR4 RNA干扰处理组)作用于U87后,取其条件培养上清与人脐静脉内皮细胞系(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)共培养,比较小管样结构(tubule-like structure,TLS)生成数量的变化。结果:神经胶质瘤中CXCR4、VEGF的表达量随着肿瘤恶性度的升高而增加,且二者呈线性正相关(P<0.01)。ELISA实验表明SDF-1可通过CXCR4促进VEGF的分泌(P<0.01)。成管实验提示CXCR4与胶质瘤血管生成相关。结论:CXCR4与神经胶质瘤恶性度相关,且其配体SDF-1可通过CXCR4影响VEGF的表达,将CXCR4拮抗或干扰明显影响胶质瘤血管增生,提示CXCR4可能为神经胶质瘤的治疗提供相应靶点和思路。

彩色正畸不锈钢弓丝的Ames试验研究

目的对应用表面化学着色工艺研制的彩色正畸不锈钢弓丝进行鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Ames试验),研究材料是否具有遗传危害和潜在的致癌作用。方法采用平板掺入法,计数TA97、TA98、TA100、TA102在材料4种人工唾液浸提浓度下的回复突变菌落数。结果无论在-S-9和+S-9的情况下,材料各剂量组均未引起测试菌株回变菌落数的明显增加。Ames试验结果为阴性。结论应用表面化学着色工艺研制的彩色正畸不锈钢弓丝未见潜在致突变性。