牛IL-18成熟蛋白基因在昆虫细胞中的表达及其活性

目的:在杆状病毒表达载体中表达牛白细胞介素-18(bovine interleukine-18,BoIL-18)成熟蛋白基因,并鉴定其生物学活性。方法:设计一对特异性引物,将编码BoIL-18的成熟蛋白基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBac HTb上,构建重组质粒repFastBac HTb-18,转化至DH10Bac感受态细胞中得到重组Bacmid(Bacmid-BoIL18)。在Cellfectin作用下,将Bacmid-BoIL18转染昆虫细胞sf9获得重组杆状病毒,然后将重组杆状病毒感染sf9,感染后不同时间收获sf9细胞,进行SDS-PAGE电泳,分析表达情况;用BoIL-18的原核表达产物作为抗原制备的兔多克隆抗体进行Western blot分析;将纯化的表达产物对牛外周血单个核细胞(PBMC)进行细胞增殖试验,对健康牛脾进行IFN-γ诱生试验,初步分析表达产物的生物学活性。结果:BoIL-18成熟蛋白基因在昆虫细胞中获得了表达,经薄层凝胶扫描分析证实,表达量占总蛋白的21.3%;Western blot分析证明,在相对分子质量(Mr)约为26 000处有一条特异性条带。生物学活性分析表明,纯化的表达产物可明显增强淋巴细胞增殖,促进IFN-γ的产生。结论:BoIL-18成熟蛋白基因在昆虫细胞中获得了表达,表达产物具有良好的生物学活性。

综合性实验在临床免疫学检验实验教学中的应用及体会

临床免疫学检验是医学检验专业的一门重要的必修课，它是一门实践操性比较强的课程，为了使学生尽快理解并掌握临床免疫学检验的新知识和新技术，培养学生的动手操作能力及分析问题和解决问题的能力，提高学生的综合素质，研究者对临床免疫学检验的实验教学进行初步改革和大胆尝试，探索出了适应该门课程实验教学特点的综合性实验教学模式和方法。

白细胞介素-32与疾病的关系研究进展

IL-32是新发现的一种促炎症细胞因子,它与多种疾病的发生发展有着密切关系。该文主要从IL-32的命名、产生、特性及其与多种疾病的关系进行介绍。

人白细胞介素32基因的克隆表达及其生物学活性的研究

目的:克隆人白细胞介素32(hIL-32)基因,构建高效稳定的hIL-32大肠杆菌表达菌株,并对纯化的目的蛋白进行生物学活性的初步测定。方法:将人外周血单个核细胞(PBMC)经刀豆素A(Con A)刺激60 h后提取细胞的总RNA,通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从刺激的PBMC中扩增出hIL-32的基因,通过基因克隆技术,构建hIL-32在pET-30 a(+)中的重组质粒pET30a-hIL32,用IPTG进行诱导,得到hIL-32的原核表达蛋白;采用Ni2+-NTA亲和层析方法纯化目的蛋白;应用ELISA方法检测纯化蛋白诱导人PBMC产生IL-6的情况。结果:序列测定表明,hIL-32基因核苷酸长度为567 bp,编码189个氨基酸。重组质粒pET30-hIL32转化至大肠杆菌BL21(DE3),重组菌菌体裂解物SDS-PAGE可检测到相对分子质量(Mr)为28 000的重组蛋白,表达的重组蛋白IL-32可促进人PBMC产生IL-6,浓度达到(127±4.8)ng/L,而对照组IL-6的浓度仅为(25±2.3)ng/L。结论:成功克隆了hIL-32基因并构建了高效且稳定表达hIL-32基因的大肠杆菌菌株,且表达的目的蛋白能诱导IL-6细胞因子的产生。

利用实验动物制备肥达反应阳性抗血清的研究

目的建立肥达反应阳性实验结果,帮助学生理解肥达反应的原理、操作方法、结果判断及临床意义。方法将肥达反应的5种诊断菌液适当处理后,按照一定程序免疫家兔,然后采集全血,分离免疫血清,采用直接试管凝集实验检测凝集效价。结果在免疫的50只家兔中,5种免疫血清的凝集效价达到1∶1 280以上的有41只,占82%;30只家兔的血清效价达到1∶2 560,占60%。结论获得了高效价的肥达反应的阳性抗血清,为医学专业学生实验教学中正常开展该项实验奠定了基础。

WAB生物粘合剂在犬耳整形术中的应用试验

用 WAB生物粘合剂代替丝线 ,应用于犬耳整形。结果表明 ,WAB生物粘合剂除具有闭合伤口的作用外 ,还有促进伤口愈合、减少瘢痕形成 ,加速瘢痕成熟与软化的效果。 WAB生物粘合剂是一种可替代传统丝线用于动物外科手术的理想物质。

泰安市某高校大学生痤疮患病情况及多种影响因素Logistic分析

目的了解大学生痤疮的患病情况,从多方面对大学生痤疮发病的影响因素进行调查分析,为痤疮的预防和治疗提供依据。方法整群随机抽取泰安市某高校一至四年级学生1416名,使用《自编基本情况问卷》和《青少年生活事件量表》进行问卷调查。结果大学生痤疮患病率为44.07%,其中男性患病率为39.85%,女性为46.61%,两性间患病率差异有统计学意义(P<0.05)。非条件Logistic回归分析显示,油性皮肤、痛经(女性)、睡眠时间少、喜食油炸或肥腻食物、阳性家族史、就业压力、学习压力、健康适应因子等因素为痤疮发病的危险因素。结论痤疮是好发于青少年的常见疾病,其发生受到生物、心理、社会等因素的影响,预防与治疗应综合考虑。

重组鸡白细胞介素18(rChIL-18)对MDV感染SPF鸡细胞免疫的影响

用马立克氏病病毒(MDV)感染5日龄SPF鸡后,取21日龄和35日龄鸡的淋巴细胞,运用3H-TdR掺入法检测T淋巴细胞对ConA和重组鸡白细胞介素18(rChIL-18)的反应,并用MTT法检测NK细胞和CTL对MD肿瘤细胞系CU147的杀伤活性及rChIL-18和IFN-γ对它们的作用。结果显示,SPF鸡感染MDV后淋转水平显著下降,NK细胞、CTL杀伤活性在感染后21日龄时升高,而在35日龄时NK细胞杀伤活性显著下降。rChIL-18对对照组和感染组SPF鸡的淋转水平和杀伤活性均有提高作用,同样IFN-γ也具有提高NK细胞和CTL杀伤活性的作用。

HSV-2gD、gBCTL表位及Hsp70融合DNA疫苗的免疫效果观察

目的研究多表位重组DNA疫苗pc(pcDNA3.1-)-P6-gBCTL-Hsp70的免疫原性。方法将构建的真核表达质粒pcP6-gBCTL-Hsp70转染CHO细胞表达,采用间接免疫荧光和Western blotting检测P6抗原的表达情况。将重组质粒肌肉注射免疫接种Balb/c小鼠3次,每次间隔2周。末次免疫后1周采集眼眶静脉血,末次免疫后1月无菌分离小鼠脾脏。采用ELISA法检测小鼠血清特异性抗体滴度、IFN-γ及IL-18含量,MTT法测定脾淋巴细胞增殖率,LDH法检测CTL活性。结果重组质粒pc-P6-gBCTL-Hsp70具有一定的免疫原性,可刺激机体产生特异性抗体,诱导分泌较高水平的IFN-γ和IL-18,促进小鼠脾淋巴细胞的增殖,CTL杀伤病毒感染细胞活性增强。结论重组核酸疫苗pc-P6-gBCTL-Hsp70能诱导较强的细胞免疫和体液免疫。

鸡培养细胞γ-干扰素诱生条件的优化

目的:探讨鸡γ-干扰素(IFN-γ)的最佳诱生条件。方法:采用夹心ELISA对培养的不同种类细胞在不同诱生剂作用下IFN-γ的分泌水平进行了检测,并对影响IFN-γ产量的条件进行了优化。结果:在ConA、PHA、ARV三种诱生剂中,ARV诱生能力最强,ConA其次,PHA最弱;其最佳诱生剂量分别为:ARV105TCID50/mL,ConA30μg/mL,PHA1.5μg/mL。鸡脾淋巴细胞、外周血白细胞(PBL)和鸡胚成纤维细胞(CEF)在同种诱生剂作用下,脾淋巴细胞IFN-γ分泌量最高,为47.65±3.26pg/mL。各种细胞最佳浓度均为3.0×106/mL。脾淋巴细胞在ConA和PHA刺激下,培养60h时产生的IFN-γ最高;而ARV诱导48hIFN-γ即可达峰值。同种IFN-γ具有启动效应。结论:确定了鸡IFN-γ的最佳诱生条件,为鸡IFN-γ定量检测奠定了基础。

鸡致病性大肠杆菌的质粒DNA指纹图谱分析

从山东省诸城地区6个集约化养鸡场的大肠杆菌感染鸡群的死鸡、毛蛋的心血中分离到32株细菌,经形态、培养特性及生化反应鉴定为大肠埃希氏杆菌(Escherichia.coli)简称大肠杆菌(E.coli)。对其作动物回归试验结果表明,全部为致病性大肠杆菌。从而证明从死鸡(毛蛋)心血中分离到的大肠杆菌与其致病性密切相关。将分离到的鸡大肠杆菌的14株优势血清型菌株进行了质粒DNA分析,通过碱裂解法小量提取质粒,然后对质粒进行了琼脂糖凝胶电泳分析,用hindⅢ限制性内切酶对质粒进行了酶切分析,结果表明:质粒的得率为100%,来源相同的菌株具有相同或相似的质粒图谱,来源不同的菌株的质粒图谱一般不同。将血清型和质粒图谱比较发现:同一血清型可以有不同的质粒图谱,不同血清型可以有相似的质粒图谱,血清型与质粒图谱没有直接的联系。本试验同一来源菌株的质粒指纹图谱相同、但它们的血清型不一致的现象可作为自然条件下同一质粒在不同血清型大肠杆菌中扩散转化的一个分子生物学依据。

快速制备免疫血清方法研究

目的探讨快速制备免疫血清的方法和效果,以适应其在实验教学中的需要。方法对家兔分组,采用短程免疫法,用绵羊红细胞(SRBC)抗原和鸡蛋黄抗原小剂量连续多次接种后,收集免疫血清,对其效价进行测定,并与传统免疫血清制备方法进行比较。结果经绵羊红细胞(SRBC)抗原和鸡蛋黄抗原短程免疫后的免疫血清最终分别达到1∶1200和1∶10240的高效价;经绵羊红细胞(SRBC)抗原和鸡蛋黄抗原长程免疫后的免疫血清最终分别达到1∶2400和1∶10240的效价。结论短程免疫法制备免疫血清所用时间短,效价高,亲和力强,适用于实验教学。

乙型肝炎病毒感染孕妇血液中IL-12和IL-18检测的临床意义

目的探讨孕妇外周血HBV-DNA含量、IL-12和IL-18水平与发生宫内感染的关系。方法研究对象为HBsAg阳性孕妇39例,正常对照组为HBsAg阴性孕妇8例。将HBsAg阳性孕妇按HBV-DNA含量分成三组:105copy/m l组、106copy/m l组、107copy/m l组,采用ELISA法检测各组IL-12、IL-18含量。新生儿脐静脉血用荧光定量PCR法检测HBV-DNA,用ELISA法检测其HBsAg。结果 HBsAg阳性孕妇的三组中IL-12、IL-18含量分别为:105copy/m l组为759.6±30.3,950.1±83.4;106copy/m l组为403.1±23.3,800.1±80.9;107copy/m l组为356.3±43.4,708.7±89.7;IL-12、IL-18水平均明显高于HBsAg阴性组,差异有统计学意义(P<0.05);106copy/m l组和107copy/m l组IL-12、IL-18水平明显低于105copy/m l组,差异有统计学意义(P<0.05)。脐血检测结果:107copy/m l组宫内感染率为66.7%,明显高于106copy/m l组(31.5%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论检测孕妇外周血IL-12、IL-18可以预测胎儿宫内感染率,IL-12、IL-18水平下调可能是HBV宫内感染的危险因素之一;胎儿HBV宫内感染与Th1/Th2免疫平衡失调有关。

肠杆菌科细菌产金属β-内酰胺酶的研究进展

金属β-内酰胺酶(MBL)可广泛水解多种抗生素,对常规β-内酰胺酶抑制剂如克拉维酸、舒巴坦等不敏感。产MBL肠杆菌科细菌一直是临床公认的多重耐药病原体。尤其是在发现新德里金属β-内酰胺酶后,人们更加重视肠杆菌科细菌中检出MBL的情况,因为其所致感染日渐严重。因此,快速、准确检测出产MBL菌株是有效预防、控制感染发生与播散的重要环节。本文就肠杆菌科细菌MBL的发现及分类、耐药基因传播、检测方法等进行简要概述。

台湾辅仁大学PBL教学模式浅析

目前,PBL(Problem-Based Learning)教学模式正在我国多所院校进行。台湾辅仁大学是我国台湾地区开展PBL教学较早的院校,并积累了大量的经验,取得了较好的教学成果。现将对辅仁大学PBL教学模式的学习和体会总结如下,希望对PBL教学模式改革中存在的问题和疑惑提供有益的参考。

医学检验本科食品理化检验课程建设的体会

通过科学合理的选择教材,根据食品理化检验课程的特点,丰富教学内容,提高教学效果,并在基础操作方面、开放性、创新性、安全方面对食品理化检验课程的实验课进行充分的完善。提高了食品理化检验课程在医学检验本科学生开设的质量,极大的促进学生综合素质的全面提高。

PBL教学法在临床微生物学与检验中的应用

作者采用PBL教学方法,加强对学生的基本操作技能训练,通过制定严格的实验操作规范和评分标准,进行实验技能考试,改进实验考核办法,对学生的实验课进行教学改革。通过教学改革提高学生学习的积极性和综合素质,为学生从事临床检验工作打下坚实的基础。PBL教学法在临床微生物学与检验教学中的应用取得了一定的成效。