一个新的与泛素化有关的蛋白家族——TRIM家族

TRIM家族是一个结构保守、进化快速的蛋白家族,它参与了细胞凋亡、周期调控、细胞对病毒的应答等重要的生命过程。结构上的保守预示着TRIM家族可能是以一种共同的机制参与各种生命过程的。最近的一些研究显示TRIM家族可能是一类新的RING指泛素连接酶。

HBV转基因小鼠——乙型肝炎研究的重要工具

HBV感染具有严格的种属特异性和组织亲嗜性,所以可用于研究的动物模型很少。随着转基因技术的出现和发展,人们通过研制转基因动物模型来研究病毒致病机理。把HBV的DNA或其片段转入小鼠受精卵建立起来的HBV转基因小鼠,已被广泛地应用于乙型肝炎的研究中,主要体现在以下3个方面:研究HBV的致病机制、与肝细胞癌的关系及寻找、评价治疗乙肝的方法。

小鼠附睾分泌蛋白Spink12的原核表达与纯化

目的原核表达带有His标签的小鼠附睾蛋白Spink12,对表达产物进行鉴定和纯化,以研究Spink12的免疫避孕效果。方法提取小鼠附睾组织总RNA,RT-PCR扩增不含信号肽的Spink12蛋白编码序列,以NdeⅠ和EcoRⅠ酶切后,将其连入原核表达载体pET28(a);经酶切和测序鉴定正确的重组质粒pET28(a)-Spink12,转化大肠埃希菌BL21感受态细胞。融合蛋白经IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE电泳和Western blotting免疫印迹鉴定。用Ni-NTA在非变性条件下利用不同的咪唑梯度浓度纯化融合蛋白6×His-Spink12。结果酶切和测序结果显示成功构建出原核表达载体pET28(a)-Spink12。重组质粒转化大肠埃希菌BL21并经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳显示表达出约9kD的融合蛋白6×His-Spink12,与理论分子量相符。融合蛋白的表达量占菌体蛋白总量的23.5%。用抗His单克隆抗体进行Western blotting免疫印迹鉴定,检测到同样大小的条带。经纯化获得较高纯度的融合蛋白6×His-Spink12,纯度达91.1%。结论成功表达并纯化了融合蛋白6×His-Spink12,为进一步研究Spink12的免疫避孕效果奠定了基础。

小鼠β-防御素30的原核表达和纯化

目的:在原核细胞中表达小鼠β-防御素30(DEFB30),并对表达产物进行鉴定和纯化。方法:用RT-PCR方法扩增小鼠Defb30的cDNA序列,将2个拷贝的cDNA序列串联连入原核表达载体pET28(a),构建重组表达载体pET28(a)-Defb30,并将重组表达载体转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,以Western印迹分析表达产物His-DEFB30,用Ni-NTA亲和柱纯化融合蛋白。结果:构建了Defb30基因的原核表达载体,经IPTG诱导,相对分子质量约15×103的融合蛋白获得表达,Western印迹分析证实此蛋白即为目的蛋白,经Ni-NTA柱亲和纯化,获得了高纯度的融合蛋白His-DEFB30。结论:获得了在大肠杆菌中表达的DEFB30,为研究该蛋白的免疫避孕效果、抗菌活性奠定了基础。

小鼠精囊自身抗原的原核表达和纯化

目的:在原核细胞中表达小鼠精囊自身抗原(SVA),并对表达产物进行鉴定和纯化。方法:提取小鼠附睾组织总RNA,RT-PCR获得SVA的cDNA,设计并合成特异引物序列,进一步扩增出不含信号肽的SVA编码序列,连入原核表达载体pET28a中,经酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,Western印迹分析表达产物His-SVA,采用Ni-NTA纯化融合蛋白His-SVA。结果:原核表达获得融合6个组氨酸的SVA,用抗His单克隆抗体进行Western印迹鉴定,检测到相对分子质量约18×103的目的蛋白,与理论值一致;经Ni-NTA纯化获得较高纯度的His-SVA融合蛋白。结论:获得了在大肠杆菌中表达的小鼠附睾蛋白SVA,为后续研究其对小鼠生殖的影响奠定了基础。

ht-PAm基因在山羊β-酪蛋白基因座定位整合的研究

利用体细胞基因打靶与核移植技术制备动物乳腺生物反应器是当今转基因定位整合表达的一种新技术。分别克隆山羊的 β_酪蛋白基因 5′调控区的 6 3kb片段 ,外显子 7、外显子 8和 9三个基因片段 ,并与克隆的人tPA突变体cDNA一起构建了含有neo和tk正负筛选标记基因的 β_酪蛋白基因打靶载体PGBC4tPA,并验证了neo基因、tk基因以及Cre_LoxP系统的有效性。将线性化的PGBC4tPA通过电转染整合到山羊胎儿成纤维细胞基因组中 ,利用G4 18和GANC进行抗性细胞克隆的药物筛选 ,初步获得抗性细胞克隆 2 4 4个 ,PCR检测后获得阳性细胞克隆 31个 ,其中初步验证 2个细胞克隆转植基因整合位点重组后的基因序列正确 ,并且该细胞克隆能够有效扩增。这为下一步基因打靶体细胞核移植制备山羊乳腺生物反应器奠定了基础。

人源化免疫毒素的研究进展

免疫毒素是通过化学连接或基因融合的方法将细胞选择性配体与毒素分子相连组成的嵌合体蛋白,它能够靶向肿瘤细胞高表达的肿瘤相关抗原、膜受体和糖蛋白。尽管以细菌毒素或植物毒素为基础的免疫毒素显示出良好的应用前景,但细菌毒素和植物毒素的免疫原性和非特异的细胞毒性等因素,阻碍了它们在临床上的应用。针对这些问题,以人源蛋白如促凋亡蛋白与RNA酶为毒素部分的新一代免疫毒素被研发出来,本文对此类人源化免疫毒素的体内外实验研究进展进行综述。

快速诊断试剂盒在援非人员疟疾诊断中的应用研究

目的：探讨疟疾快速诊断试剂盒在援非人员中临床运用效果，为临床应用提供参考。方法快速诊断试剂盒与镜检法对98例援非人员疟疾、疑似疟疾进行检测对比分析。结果镜检疟原虫阳性41例（恶性疟疾pf38例，间日疟 Pv2例，卵形疟 Pm1例），阳性率：41．83％；快速诊断试剂盒诊断疟原虫阳性40例（pf38例，Pv ＋Pm2例），阳性率：40．82％；该试剂盒的总灵敏度97．56％，总特异性100％。（Kappa ＝0．487，P＞0．05）。结论疟疾快速诊断试剂盒对非洲恶性疟疾诊断敏感性、特异性均较高，非常适合于镜检技术及条件不足的中国援非人员开展疟疾检测。

人干细胞转录因子Nanog和BTB/POZ家族蛋白NAC1的相互作用

目的:研究人干细胞转录因子Nanog和BTB/POZ家族蛋白NAC1的相互作用,并初步确定作用区域。方法:应用免疫共沉淀、GSTpull-down实验验证人Nanog与NAC1的相互作用。结果:人Nanog与NAC1能够相互作用,且NAC1的BTB/POZ结构域对于二者相互作用是必需的。结论:人Nanog和NAC1在体内、外均能形成复合物,二者的相互作用对于人胚胎干细胞的自我更新及肿瘤的发生可能具有重要的作用。

NMDA型谷氨酸受体在骨祖细胞和成骨细胞表达并介导力学信号转导

目的:鉴定骨髓间充质干细胞D1和成骨细胞MC3T3-E1、MC3T3-E1亚克隆14是否表达NMDA型谷氨酸受体(NMDAR),并初步探讨NMDAR是否参与力学信号转导。方法:采用RT-PCR技术、免疫荧光染色技术、蛋白免疫杂交技术和体外细胞循环拉伸装置,鉴定了上述3个细胞系中NMDAR的表达情况,并初步探讨了在MC3T3-E1亚克隆14细胞系中,NMDAR在力学信号转导中的可能作用。结果:3个细胞系均表达NMDA受体亚基1(NR1)和不同的亚基2(NR2A-NR2D)。细胞微丝骨架的破坏并没有阻断力学应变诱导的c-jun、c-fos的表达上调;而阻断NMDAR后,却抑制了力学应变诱导的c-jun、c-fos和成骨细胞特异的转录因子Cbfa1/Runx2的表达上调。结论:NMDAR在骨中表达并发挥功能,参与了骨的力学信号转导过程。

小鼠睾丸支持细胞的生物学特性研究

目的:获得高纯度的小鼠支持细胞,用以研究睾丸支持细胞在诱导胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化过程中的作用,同时借助睾丸支持细胞减少进行体内诱导试验时可能产生的免疫排斥反应。方法:用胶原酶和胰蛋白酶组合消化结合选择性贴壁法从1周龄昆明白小鼠睾丸分离获得睾丸支持细胞,纯化后进行体外培养,观察其体外培养的生物学特性。结果:睾丸支持细胞体外培养3～4h即贴壁,贴壁后伸出3～4个突起,为成纤维型细胞,在体外培养2～3d即长满全瓶。油红Ο染色显示,其胞质含有大量脂滴。透射电镜观察结果表明,支持细胞核仁周围有卫星核小体。RT-PCR结果显示获得的细胞表达缪勒管抑制物,不表达促黄体素受体和小鼠VASA同源物。结论:获得了较高纯度的小鼠睾丸支持细胞,可以用于诱导小鼠胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的体内和体外试验。

高血压的过度诊疗

高血压的过度诊疗危害很大,但常被忽视。本文从如何认识高血压是疾病还是危险因素、血压与心血管疾病的风险的关系、高血压的诊断界值、血压计和各种血压测量方法的局限、肱动脉血压与中心动脉压的关系方面探讨了与高血压过度诊疗相关的五个问题,并对通过大样本人群队列研究,促进高血压的精准、适度诊疗提出了展望。

加强顶层设计,构建疾病诊疗溯源体系

当前诸如血脂异常、高血压、矮小症等疾病的诊疗标准存在很大争议,制定科学的诊断标准以及药物的适应症与疗效评价需要基于我国的大样本人群数据作为溯源体系,但当前医学数据采集模式在一定程度上限制了数据的长期采集、广泛采集和开放共享,需要加强顶层设计,从国家层面部署大人群队列研究,整合资源,设计队列建设的总体框架和实施方案,最大限度地提高队列研究的效益,本文对大人群队列研究的研究目标和方法提出了建议。

染色质免疫沉淀法筛选转录因子Nanog调控的目的基因

目的:利用染色质免疫沉淀法筛选转录因子Nanog调控的目的基因。方法:用甲醛固定胚胎干细胞,利用超声将其染色质随机断裂成0.5～1.0kb的染色质片段,通过免疫沉淀富集与Nanog结合的DNA片段,回复交联后分离纯化DNA片段,最终用凝胶迁移阻滞实验验证Nanog与DNA片段的结合。结果:我们发现fzr为Nanog调控的目的基因,并通过电泳迁移率变动分析证明了二者的结合。结论:Fzr在细胞周期调控中发挥重要作用,这为阐明Nanog的作用机理奠定基础。

论教育与多元文化的关系

年初,法国查理周刊编辑遇袭事件再次引起人们的关注,极端思想阴霾持续笼罩着欧洲.进入20 世纪90 年代以来,全球化的进程日益加快,在这样的一个全球化大家庭里,各种文化相互碰撞、影响、冲突与融合变得更加激烈.文化作为人类社会的特有现象,各种不同的文化应运而生,文化多元化已经成为世界范围内共有的文化现象.在不同的文化传统,不同的政治、经济和社会背景下,学会了解他人,尊重他人,成为了全球化的今天,世界各地人们交流和沟通的基础.因此,教育理应承担起全球化时代的新使命, 在教育领域实现民族性与国际性的统一, 推进世界文化的多元化发展.

心踝血管指数、踝臂指数与颈动脉超声检查在体检中的相关性分析

目的研究心踝血管指数(CAVI)、踝臂指数(ABI)与颈动脉超声检查结果的相关性及这些指标在体检筛查动脉硬化上的应用。方法对481例体检人员进行CAVI、ABI、颈动脉超声检查,对结果的相关性进行统计学分析。结果相对于ABI,CAVI与颈动脉内中膜厚度(IMT)相关度更高(r=0.437,P=0.001),超声检出颈动脉斑块与未检出斑块的人群CAVI、ABI均有显著性差异(P<0.05);CAVI正常与异常人群比较,ABI无显著性差异,而IMT、颈动脉斑块阳性率均有显著性差异。结论 CAVI和ABI与颈动脉超声检查结果均有相关性,针对不同性别、年龄、身高、体重给出CAVI的正常值范围对于早期诊断动脉硬化更为敏感,但各个指标之间不能相互替代,需要进行综合判断。

小鼠附睾分泌的防御素Defb48的原核表达及纯化

目的:获取小鼠附睾分泌的防御素Defb48的基因并原核表达、纯化,为研究其功能奠定基础。方法:提取小鼠附睾组织的总RNA,用RT-PCR技术扩增出不含信号肽的Defb48编码序列,将2段Defb48编码序列串联克隆至原核表达载体pET28(a)中,经酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白;用镍柱进行重组蛋白的纯化,然后进行SDS-PAGE和Western印迹分析鉴定。结果:获得实验所需小鼠附睾分泌的防御素Defb48的基因序列,测序结果与已发表的基因序列一致;在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达了His-Defb48融合蛋白,经Western印迹分析,在相对分子质量18 000处有特异的蛋白条带,镍柱纯化后获得纯度较好的融合蛋白。结论:克隆了小鼠附睾分泌的防御素Defb48基因,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达纯化出融合蛋白,为制备其多克隆抗体,进而进一步研究Defb48的功能奠定了基础。

高血压诊疗的成本效益分析

高血压作为我国的第一大疾病和首要的疾病负担,如何科学防治是个关系健康中国建设的大问题。本文对高血压诊疗的两个焦点争议问题:低危高血压患者是否需要药物治疗;高危高血压是否需要强化治疗。从卫生经济学成本效益的角度进行了分析探讨,并对与降压药的成本效益相关的重要指标需治数以及血压测量的成本效益问题进行了分析探讨,供卫生决策者和临床医师参考。

高技术战争条件下提高基层部队卫勤保障能力的探讨

高技术条件下的战争对部队卫勤保障能力提出了新的更高的要求，卫勤保障工作直接影响后勤保障的水平和效能，甚至影响战争的进程和结局。笔者结合自身的工作体会，就基层卫勤人员如何适应新形势的要求、提高卫勤保障能力谈几点看法。

小鼠附睾分泌蛋白Fam12b的原核表达与纯化

本研究旨在克隆小鼠附睾基因fam12b,构建pET28(a)-fam12b-fam12b原核表达重组质粒,从大肠杆菌Rosetta(DE3)中获得融合蛋白。应用RT-PCR方法从小鼠附睾中扩增出fam12编码序列,串联克隆至原核表达载体pET28(a),转化大肠杆菌Rosetta(DE3)细胞,诱导表达,Ni-NTA纯化融合蛋白。结果显示,获得小鼠附睾基因fam12b,纯化后的融合蛋白经过SDS-PAGE和Western印记分析鉴定,在相对分子质量31kD处有特异的条带,并获得高纯度融合蛋白。本研究成功克隆了小鼠附睾基因fam12b,并从Rosetta(DE3)中获得高纯度融合蛋白,为进一步研究Fam12b的功能创造了条件。