2型猪链球菌天津分离株的鉴定及其遗传特征分析

为了解天津市某猪场引起育肥猪神经症状的病原及其特性和遗传特征,本研究采集8份患病猪脑组织样品经细菌分离、形态学观察、gdh基因和cps2J基因的PCR扩增及序列分析,确定8份样品中的分离株均为同一2型猪链球菌(SS2),命名为TJS75。测定其生长曲线、并按照文献方法进行溶血性试验、黏附/侵入试验和对小鼠的致病性试验,分析该SS2分离株特性。结果显示,TJS75菌株经TSB培养6 h~15 h可达对数生长期,对绵羊血红细胞(RBC)具有崩解效果,可黏附并侵入PK-15细胞(黏附率和侵袭率分别为5.16%和7.90%),且感染TJS75株的BALB/c小鼠出现不同程度的行动迟缓、呼吸急促、精神萎靡和神经症状等,经测定其LD50为2.15×107cfu/mL。进一步采用高通量测序,并预测其毒力基因,分析该菌株的遗传特征,结果显示,TJS75菌株基因组全长2368195 bp,GC含量40.88%,含有2299个编码基因,其中有1822、1830和1077个基因分别注释于GO、COG和KEGG数据库,携带的16S r RNA基因序列与国内分离的SS强毒株98HAH33和05ZYH33的亲缘性较近,毒力基因的预测结果显示该菌株携带499种毒力相关基因(编码173种毒力相关因子),依据功能分类,这些毒力基因参与SS2的黏附和侵袭、溶血、促进铁转运、自溶酶的合成、降解胶原酶、唾液酸的合成等。本研究首次分离到携带MRP毒力因子的ST25型SS2,为深入开展SS2 TJS75株的致病机制研究提供了科学依据。

Ⅰ群4型禽腺病毒Y17215-1株体外增殖规律及免疫原性研究

为探讨禽腺病毒4型分离株Y17215-1的体外增殖特性和免疫原性,本研究以LMH细胞为模型,摸索Y17215-1株最佳接种剂量和收获时间;通过活毒滴鼻接种和灭活疫苗肌肉注射的方式免疫SPF鸡,测定其免疫原性。结果显示:Y17215-1株0.1 MOI接种LMH细胞,培养48~72 h病毒滴度达到峰值108.625 TCID_(50)/mL。该病毒经肌肉注射对42日龄SPF鸡具有较强致病性,LD_(50)为103.000 TCID_(50)/0.2 mL。以10^(7.676) TCID_(50)的Y17215-1株滴鼻免疫21日龄SPF鸡,免疫后7 d 100%试验鸡产生中和抗体,14 d达到高峰。以Y17215-1株制备灭活疫苗肌肉注射免疫21日龄SPF鸡(10^(7.676) TCID_(50)/羽),免疫后7 d 70%试验鸡产生中和抗体,21 d达到高峰。在免疫后21 d用1000LD_(50)的Y17215-1株进行攻毒,活毒和灭活疫苗的保护率均为100%。以上结果表明:Y17215-1株具有很好的体外增殖特性和免疫原性,可以作为候选疫苗毒株。

京津冀地区猪繁殖与呼吸综合征流行特点及防控建议

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine respiratory and reproductive syndrome,PRRS)俗称“猪蓝耳病”,临床以母猪繁殖障碍和仔猪及生长猪群呼吸道症状为主要特征。该病1987年在美国东南部首次报道,之后迅速扩散至美国主要养猪地区和加拿大。1990年和1991年该病相继在欧洲和亚洲暴发和流行。

贝莱斯芽孢杆菌对金霉素作用下肉鸡生长性能、肠道菌群及其耐药基因的影响研究

试验旨在研究在饲粮中添加贝莱斯芽孢杆菌H-7对金霉素作用下肉鸡生长性能、肠道菌群和耐药基因的影响。首先挑选体重相近,性别比例相同,健康状态良好的1日龄雏鸡360羽,分为4个试验组,每组6个重复,每个重复15只,分别饲喂含金霉素0、50、150、250 mg/kg的基础日粮,饲喂28 d,确定对肉鸡肠道菌群影响最大的金霉素剂量和作用。随后挑选1日龄雏鸡450羽,分为5个试验组,每组6个重复,每个重复15只。1~7日龄,前4组饲喂基含150 mg/kg金霉素的日粮,7~35日龄时,分别饲喂含0、10^(8)、10^(9) CFU/kg和10^(10) CFU/kg贝莱斯芽孢杆菌的日粮,同时以1~35日龄均饲喂基础日粮的为空白对照组。结果表明,肉鸡盲肠的菌群结构随着时间和金霉素剂量发生变化。尤其是在生命早期7日龄时,中剂量组(150 mg/kg)中有益菌属Bifidobacterium、Lactobacillus丰度显著降低(P<0.05),肠道常见条件致病菌Enterococcus、Enterobacter的丰度上升,且耐药基因(ARGs)丰度上升。金霉素作用7 d后,在饲粮中添加贝莱斯芽孢杆菌H-7可增加肉鸡体重,但对生长性能无显著影响(P>0.05)。显著增加21日龄肉鸡肠道中Firmicutes的相对丰度(P<0.05),降低Bacteroidetes和Proteobacteria的相对丰度,显著提高F/B值(P<0.05)。贝莱斯芽孢杆菌的添加促进Akkermansia、Ruminococcus、Blautia、Bacillus和Lactobacillus等有益菌属的富集,同时降低了四环素类耐药基因的丰度,有助于改善肉鸡肠道的健康水平。

一株猪链球菌8型菌株的分离鉴定及其生物学特性研究

为明确天津市某猪场保育猪疑似发生猪链球菌病的病原菌及其致病力等生物学特性,将猪场一头发病猪扑杀,无菌采集病料于哥伦比亚血琼脂平板上划线培养,对分离的疑似菌株进行形态学观察、生化试验、16S rDNA序列分析和血清型鉴定,确定分离菌株为猪链球菌8型,命名为TJS31。药敏试验结果显示,TJS31株对8种受试药物耐药,4种受试药物中介,1种受试药物敏感。致病性试验结果显示,TJS31株经腹腔接种昆明小鼠,24 h内可以引起小鼠出现精神萎靡、扎堆、呼吸急促、发抖、运动迟缓、死亡等,LD50为1.8×10^(8) CFU/mL。毒力基因检测发现TJS31的毒力基因型为sly^(+)/gdh^(+)/orf2^(+)/gapdh^(+),不携带mrp、epf和fbps基因。研究结果丰富了我国猪链球菌病病原的生物学资料,为猪链球菌8型的防控提供了依据,也为深入开展猪链球菌8型的致病机制和耐药机理奠定了基础。

植物提取物在家禽养殖中应用的研究进展

概述了植物提取物作为添加剂具有的基本特性,即天然可靠、毒副作用小、无耐药性、功能多样、资源丰富,在家禽生产中能提高生产性能,改善家禽产品品质,提高免疫机能,对血液生化指标具有调节能力、抗氧化能力,介绍了其对家禽肠道健康及肠道微生物的影响,对环境的作用和抗病毒作用的应用效果,分析了应用研究中存在的问题。

不同品种鸡蛋品质与蛋营养物质分析比较

鸡蛋品质作为蛋鸡生产中极为重要的一个指标,直接影响商品蛋的营养成份、食用价值,进而影响商品蛋的市场售价。同时蛋的品质对鸡蛋的保存时间、种蛋孵化率、破损率等有一定的影响。本研究的主要目的是通过测定仿土鸡杂交鸡的蛋营养成分，分析对比仿土鸡杂交鸡与其他品种鸡的蛋营养成分，探明不同品种问蛋营养成分的差异，对于改良蛋品质，提高产品附加值有重要的作用，为育种工作者改良品种、消费者选择鸡蛋提供理论依据。

三七提取物对蛋鸡产蛋后期蛋品质及免疫功能的影响

为了研究日粮中不同水平三七提取物(PNS)对产蛋后期蛋鸡鸡蛋品质及免疫功能的影响,采用单因素完全随机分组试验设计,选择同一批次288只55周龄的健康海兰蛋鸡,随机分成4组(每组6个重复,每个重复12只鸡),各组日粮中三七总皂甙(PNS)的添加量分别为0 mg/kg(A组)、50 mg/kg(B组)、100 mg/kg(C组)、150 mg/kg(D组)。饲养试验为期60 d,结果表明,试验C、D组蛋形指数显著高于对照组(P<0.05);试验B、D组蛋白高度比对照组提高26.92%、34.91%,差异显著(P<0.05),哈夫单位比对照组提高19.27%、18.37%,差异显著(P<0.05);试验B、C、D组蛋黄胆固醇与对照组相比分别降低6.93%、10.64%、11.59%,各组与对照组相比差异极显著(P<0.01);添加PNS对鸡蛋蛋壳厚度、蛋壳强度、蛋黄相对重、蛋白相对重、蛋黄颜色均无显著影响(P>0.05)。试验B组血清Ig A、Ig G含量比对照组高4.41%、10.55%,差异显著(P<0.05),试验C、D组血清C3、C4含量比对照组低12.68%(P<0.05)、12.37%(P<0.05)和8.31%、7.35%,试验B组血清C3、C4含量比对照组高22.6%和35.78%(P<0.05),结果显示,高剂量PNS能降低血清C3、C4含量,低剂量则提高血清C3、C4含量。

紫外线照射在家禽生产中的应用

紫外线（ultravioletradiation，UV）通常是指波长范围在100～400nm的光，是太阳光谱中的一个组成部分，用肉眼无法看见。是一种比可见光波长更短的波长，是一种辐射能，一种能以光速穿过空气与空间的电磁波能量。根据波长范围的不同，将紫外线分为（UV—A）、（UV—B）和（UV—C）三段，分别称为长波紫外线、中波紫外线和短波紫外线，即波长315-400nm波长的紫外线称为UV—A；280～315nm波长的紫外线为UV—B；更短波长的100～280nm紫外线称为UV—C。

乳酸菌发酵物与中药配伍对预防鸡大肠杆菌病协同作用的研究

试验旨在考察乳酸菌发酵物与中药（TCM）配伍后对预防鸡大肠杆菌病中药药效的影响。试验采用对鸡大肠杆菌病有效的中药组方与乳酸菌发酵物配伍组成中药乳酸菌复合物（CTcML）。以胸肌注射0．2mL（9×10^8CFU／mL）大肠杆菌培养液的方法建立雏鸡大肠杆菌病人工感染模型。将144只8日龄雏鸡平均分为9个组，其中3个组为CTCML高、中、低剂量组，在雏鸡感染前按0．6、0．4、0．2g／d剂量将药物颗粒混入日粮中给予，在雏鸡感染后按0．3、0．2、0．1mL／d剂量将药物提取液混入饮水中给予，同时设置3个与CTCML剂量相同的TCM高、中、低剂量组及药物（盐酸环丙沙星）对照组、感染对照组和健康对照组。结果显示，CTCML高、中、低剂量组雏鸡存活率分别为75．。0％、75．oO％和93．75％，TCM高、中、低剂量组雏鸡存活率分别为68．75％、68．75％和75．00％，药物对照组为75．OO％，感染对照组为56．25％，健康对照组为100．00％。CTCML低剂量组与CTCML高、中剂量组及TCM高、中、低剂量组、药物对照组、感染对照组相比均差异显著（P〈0．05），CTCML高、中剂量组及TCM高、中、低剂量组、药物对照组彼此间差异均不显著（P〉0．05）。所有感染组中，CTCML低剂量组对雏鸡增重影响最小，增重率较健康对照组低29．93％；其次是CTCML中剂量组，增重率较健康对照组低36．95％；其余各感染组较健康对照组降低42．49％～51．07％。结果表明，中药对人工感染大肠杆菌的雏鸡具有保护作用，乳酸菌对中药具有明显的协同作用。

天津地区2型猪链球菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解天津地区2型猪链球菌的流行及耐药情况,本研究收集该地区部分规模化养猪场疑似猪链球菌病病料317份,通过病原分离培养、染色特性观察、生化试验、PCR扩增等方法进行鉴定,并对分离菌进行致病性及药敏试验。结果从样品中分离鉴定出11株2型猪链球菌。对小鼠的致病力试验结果显示,应用0.5×10~8 CFU/mL的细菌攻击小鼠,11株2型猪链球菌分离株中有6株具有致死性,其中1株致死率较强,5株致死率较弱。药敏试验结果表明,11株分离菌对9种临床常见药物均表现出很强的耐药性,其中对阿米卡星、四环素和强力霉素耐药性最强,耐药率达到100.00%;且所有分离株均呈多重耐药,其中4个分离株为9重耐药,占36.36%(4/11)。本试验结果表明,天津地区存在2型猪链球菌感染情况,且对多种抗菌药均产生了耐药性,应引起养殖户的高度重视,在防制猪链球菌病时,应有针对性地合理、科学、规范用药和交替用药。

2014年—2015年天津地区PRRSV分子流行病学调查及流行毒株的分离鉴定

为了解天津地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的遗传变异情况和流行趋势,用RT-PCR对2014年—2015年在天津地区采集的疑似PRRS病料检测,并扩增阳性病料PRRSV NPS2部分基因片段和进行PRRSV分离鉴定。结果显示,237份疑似PRRSV感染病料中64份为阳性,阳性率为27%,分离获得33株PRRSV;Nsp2序列分析发现,天津地区流行的PRRSV主要为美洲型,其中54份与高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)高度同源,8份与经典PRRSV高度同源,2份与NADC30-like高度同源。结果表明,2014年—2015年天津地区主要流行HP-PRRSV,并出现了NADC30-like变异毒株,说明PRRSV流行种类的多样化,提示加强PRRSV流行及变异监测十分必要。

猪链球菌2型感染昆明小鼠模型的建立及评价

为建立稳定的猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)人工发病模型,本试验以天津某发病猪场分离的SS2 Y15293株为研究对象,经腹腔注射感染昆明小鼠,测定其LD_(50),确定造模感染剂量,通过观察感染后小鼠的临床症状和病理变化,测定试验期间各组小鼠体重和采食量的变化及细菌回归等试验对模型进行评估。结果显示,SS2 Y15293株致昆明小鼠的LD_(50)为6.7×10~7 CFU/mL。以1个LD_(50)的剂量攻毒,与对照组相比,试验小鼠主要发病表现为攻菌后24 h出现精神沉郁、被毛逆立、眼睛有分泌物,72～96 h出现头颈歪斜、翻滚、震颤等神经症状,死亡高峰在48～72 h。3次重复试验中,试验组小鼠的发病率均为100%,死亡率为50%～70%,神经症状小鼠出现比率20%～30%。与对照组相比,试验组小鼠采食量和体重显著下降(P<0.05),临床症状分值显著升高(P<0.05)。组织病理检查发现,试验组小鼠心脏、肺脏组织均有不同程度出血、炎性细胞浸润;脑膜炎,脑室出血,充满炎性细胞。细菌回归试验结果表明,试验组死亡小鼠脑、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏均有细菌定植,且形态、染色和分子生物学特性与攻毒菌一致。以上结果证实,SS2 Y15293株能感染昆明小鼠并致其发病,感染动物发病规律性强,重复性好,临床症状典型,说明SS2 Y15293株感染昆明小鼠可作为SS2的候选人工感染模型。

猪德尔塔冠状病毒TJ_1株的分离鉴定及生物学特性分析

本研究旨在获得猪德尔塔冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)分离株,并对其生物学特性进行探讨。将RT-PCR检测PDCoV阳性样品无菌处理后接种猪肾(PK-15)细胞并连续传代培养,通过细胞病变、M基因序列分析及耐热、耐酸等试验对细胞培养物进行鉴定,采用Reed-Muench法测定PDCoV的TCID50,应用5×104.0TCID50/mL的病毒悬液接种11日龄仔猪并观察临床症状。结果显示,试验成功分离到1株PDCoV,将其命名为TJ1株,该病毒的第5代病毒效价为104.5 TCID50/mL;TJ1株对脂溶剂氯仿和乙醚不敏感,耐酸,在pH 3.0的环境下稳定,对热较敏感,在50℃条件下1h便可将其灭活;其M基因和GenBank中已发表的PDCoV M基因核苷酸序列同源性为94%~99%;致病力试验结果显示,该病毒可引起仔猪发生腹泻,发病率100%。本研究成功分离了1株PDCoV毒株TJ1株,对该分离株生物学特性进行初步研究,为进一步开展PDCoV相关研究奠定了基础。

猪圆环病毒2型天津株的全基因组克隆与序列分析

利用PCR方法对采自天津地区某猪场的疑似猪圆环病毒2型（PCV-2）感染的病料进行检测，并确定病料中PCV-2的分子特征。将阳性病料接种无PCV污染的PK-15细胞并传代8次，分离出l株PCV-2毒株，命名为PCV-2TJ-1，同时对其全基因组进行克隆和序列分析。结果表明，该分离株基因组全长1767bp，与我国上海LN-19株和韩国的A4099株的核苷酸同源性最高，均达到99．6％。PCV-2全基因组序列的进化分析表明，分离毒株为PCV-2b基因亚型；对分离毒株与5个不同基因亚型的10个参考株的ORF2和ORF3氨基酸序列进行比较，同源性分别为87．1％～97．4％和93．3％～99．0％。结果表明，在天津地区流行的PCV-2毒株为PCV-2b，为PCV-2的分子流行病学、遗传变异及防控奠定了基础。

2016—2018年天津地区规模化猪场猪主要病毒性腹泻病原的调查与分析

为了确定2016—2018年天津地区规模化猪场流行的猪腹泻病主要病原,试验共采集腹泻样品1519份,应用RT-PCR的方法进行病原检测,检测病原包括猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(RV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV),对样品的PEDV、PDCoV、TGEV和RV的阳性率进行统计,并按不同年份、不同地区、不同月份、不同季节及猪群腹泻病原混合感染和单一感染情况进行统计分析。结果表明:PEDV是导致天津地区猪群发病的主要病原,2016,2017,2018年阳性率分别为56.60%、45.44%、55.78%;其次为PDCoV,阳性率分别为25.24%、26.64%、33.33%;TGEV阳性率分别为7.46%、5.98%、7.48%;RV阳性率分别为5.54%、5.27%、5.10%。统计不同地区腹泻病毒的感染情况,发现宁河区的PEDV阳性率较高,为13.03%,静海区的TGEV阳性率是2.17%;RV和PDCoV在宝坻的阳性率较高,分别是1.38%和8.10%。PEDV和RV在春季高发,阳性率是60.06%和5.91%;TGEV在夏季阳性率较高,为7.33%;PDCoV在秋季阳性率较高,为40.06%。在被检样品中,混合感染病例占6.91%(105/1519),其中PEDV和RV混合感染率最高,为2.11%(32/1519)。说明天津地区猪腹泻病病原种类多且感染情况复杂,给该地区猪场的腹泻病防控工作带来了严峻的挑战。

天津地区猪链球菌3型菌株的致病性及耐药特性研究

试验旨在对分离自天津地区发病猪场的7株猪链球菌3型菌株(Streptococcus suis type 3,SS 3)进行致病性和耐药特性研究。应用剂量为1.0×10^7、1.0×10^8和1.0×10^9 CFU/只的细菌对小鼠进行致病力研究,用PCR方法检测7株SS 3型菌株的毒力基因mrp、ef、sly、gdh、gapdh、fbps和orf 2,并对这7株SS 3型菌株进行药物敏感试验。致病力试验结果显示,接种剂量为1.0×10^9和1.0×10^8 CFU/只时分别有6和3株SS 3型菌株可使小鼠100.0%(5/5)发病死亡,接种剂量1.0×10^7 CFU时仍有1株SS 3型菌株可使80.0%(4/5)小鼠发病死亡,这7株SS 3型菌株对小鼠的致病力依次为R15056>R15042=S15030>Y12024=Y09011>Y13125>Y13164。毒力基因检测结果表明,共有3种毒力基因型,R12024、Y13164、R15042和S15030株为gdh、gapdh、fbps和orf 2毒力基因阳性,Y13125和R15056株为sly、gdh、gapdh、fbps和orf 2毒力基因阳性,Y09011株为gdh、fbps和orf 2毒力基因阳性。药物敏感性试验结果显示,7株SS 3型对头孢喹肟相对最敏感,其次为阿莫西林、环丙沙星和磺胺间甲氧嘧啶钠,但对强力霉素100.0%耐药,且所有菌株均呈现3重以上的耐药性。本研究为进一步开展天津地区SS 3型流行特点及致病机理研究奠定了基础,可为天津地区SS 3型菌株的综合防控提供理论指导。

重组猪圆环病毒2型Cap蛋白在毕赤酵母中的表达及免疫原性研究

为了获得在体外表达的猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)Cap蛋白,研究其免疫原性,试验根据GenBank公布的国内PCV2-Cap蛋白基因序列特点,结合毕赤酵母密码子偏好对Cap基因进行优化,合成目的基因后,构建分泌型表达载体pPIC9K-Cap,转化毕赤酵母GS115后,经诱导表达获得重组Cap蛋白。重组蛋白以50μg/只的剂量连续3次免疫豚鼠后检测抗体水平。结果表明:含有PCV2-Cap基因的质粒成功转化到酵母菌基因组中,重组酵母菌株在30℃,经1%甲醇诱导表达96 h后,培养液中能够检测到33 ku的重组蛋白,重组蛋白表达量为155μg/mL,占培养上清液总蛋白的9.362%,Western-blot试验结果显示重组蛋白具有良好的抗原活性。重组蛋白以50μg/只的剂量连续3次免疫豚鼠后,能够刺激豚鼠产生特异性抗体且与接种0.3头份/只剂量的市售PCV2灭活疫苗产生的抗体水平无显著差异(P>0.05)。说明成功利用毕赤酵母表达系统分泌表达了PCV2-Cap蛋白,表达的重组蛋白具有良好的抗原活性。

猪繁殖与呼吸综合征和副猪嗜血杆菌混合感染诊治报告

2017年天津市静海区某饲养规模400头母猪场内断奶仔猪出现发烧,消瘦,呼吸困难,部分关节肿胀及死亡等现象,其发病率在80%左右,病死率约为30.0%。根据临床发病情况、病理剖检及实验室诊断确诊为猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)和副猪嗜血杆菌(HPS)混合感染。报告如下。

丹参提取剩余物的体外抗氧化活性研究

采用DPPH、超氧阴离子、羟自由基和过氧化氢自由基的反应体系,评价丹参提取剩余物对自由基的清除能力。结果显示,复方丹参提取剩余物浓度依次为10,20,30,40,50mg·mL-1,对DPPH的清除率分别为2%,4%,11%,15%,27%;对超氧阴离子的清除率分别为12%,20%,27%,43%,47%;对羟自由基的清除率分别为7%,22%,20%,27%,40%;对过氧化氢的清除率分别为0,5%,19%,25%,23%。研究表明,丹参提取剩余物具有一定的体外抗氧化活性,为将其开发成为动物抗氧化饲料保健品提供了理论依据。