妊娠期PM2.5,暴露影响子代鼠主要脏器发育

目的探讨妊娠期大气细颗粒物PM2.5(颗粒直径≤2.5μm)暴露对子代鼠主要脏器发育的影响。方法孕鼠随机分为空白组、对照组、PM2.5低剂量组、PM2.5中剂量组、PM2.5高剂量组。利用气管滴注方法,建立小鼠妊娠期PM2.5暴露模型。通过HE染色和PAS反应,观察妊娠期暴露于PM2.5后新生子代鼠主要脏器的病理形态学改变,通过电子显微镜观察细胞超微结构变化。结果与空白组和对照组相比,PM2.5模型组新生子代鼠心、肝、脾、肺和肾组织结构均受损,可见炎症等病理改变。子代鼠主要脏器超微结构出现不同程度的细胞核周隙局部增宽、自噬体增多、线粒体嵴模糊和断裂等变化。结论妊娠期暴露于PM2.5可导致新生子代鼠心、肝、脾、肺、肾等主要脏器出现组织形态异常。这可能是PM2.5致生后远期慢性疾病发生的解剖学基础和发育源性病因。

尾静脉注射碘酸钠对小鼠视网膜形态结构变化的影响

目的探讨尾静脉注射碘酸钠(NaIO3)对小鼠视网膜形态结构的影响。方法36只昆明小鼠分为4组对照组、损伤3 d组、损伤7 d组、损伤14 d组。对照组不作任何处理,各损伤组小鼠经尾静脉单剂量注射NaIO3(35 mg·kg-1)。在NaIO3损伤3 d、7 d、14 d后取材,进行视网膜组织铺片和组织切片。利用HE染色、NeuN免疫组织化学染色及Opn1mw、GFAP、Iba1免疫荧光染色,检测NaIO3注射后不同时间小鼠视网膜形态结构的改变。结果HE染色结果显示,损伤3 d后外核层每10μm长度细胞数由正常水平(31.97±2.27)个下降至(26.21±0.83)个,差异有统计学意义(P<0.05);损伤7 d后内核层每10μm长度细胞数由正常水平(12.33±0.16)个下降至(11.39±0.43)个,差异有统计学意义(P<0.05)。NeuN染色结果显示,损伤14 d后视网膜神经节细胞层每100μm长度视网膜神经节细胞数由正常水平(14.92±1.74)个下降至(11.25±0.09)个,差异有统计学意义(P<0.05)。GFAP染色结果显示,损伤3 d组每200μm×200μm范围内活化的Müller细胞数由对照组的(16.96±0.85)个增加至(20.42±1.64)个,差异也有统计学意义(P<0.05)。Opn1mw、Iba1染色结果显示,损伤后视网膜视锥细胞外节段变薄、小胶质细胞数增加。结论尾静脉注射NaIO3会引起小鼠视网膜形态结构不可逆的损伤,且该损伤具有时间依赖性。

敲低MSX2抑制小鼠成釉细胞釉基质蛋白表达及牙釉质形成

目的研究肌节同源结构域同源框基因2(MSX2)对小鼠成釉细胞釉基质蛋白的表达及牙釉质形成的影响。方法免疫化学染色检测出生后小鼠牙胚MSX2的表达情况及其在成釉细胞中的定位;设计并合成靶向小鼠MSX2基因的短发夹RNA(shRNA)寡聚单链DNA,将退火成双链的DNA构建到RNAi慢病毒载体pG MLV-SC5中,包装慢病毒;慢病毒感染成釉细胞,实时荧光定量PCR筛选最佳干扰片段,并检测釉原蛋白(Amelx)、成釉蛋白(Ambn)、釉蛋白(Enam)、釉成熟蛋白(Amtn)及激肽释放酶4(Klk4)在mRNA水平表达的改变。通过分离小鼠E18.5牙胚并感染靶向MSX2的RNAi重组慢病毒,种植于小鼠肾囊膜下,10周后,取出组织,分离并观察牙齿结构。结果 MSX2在小鼠成釉细胞分泌期及成熟期均有表达,但分泌期表达信号较弱,成熟期较强。成功包装靶向MSX2基因的RNAi慢病毒MSX2-shRNA,敲低MSX2基因表达可不同程度地降低成釉细胞Amelx及Klk4的mRNA水平。靶向MSX2基因的RNAi慢病毒感染牙胚后其牙釉质矿化程度降低。结论 MSX2基因在小鼠成釉细胞中表达,敲低成釉细胞MSX2并促进釉基质蛋白基因的表达和牙釉质的矿化。

妊娠期细颗粒物暴露致小鼠子代海马神经炎症发生

目的观察妊娠期PM2.5暴露后出生后21d子代鼠海马炎症因子的表达变化。方法孕鼠随机分为空白组、对照组、PM2.5低剂量组、PM2.5中剂量组、PM2.5高剂量组,利用气管滴注法分别向PM2.5低、中、高剂量组滴注不同浓度的PM2.5悬浊液,对照组滴注相同体积PBS,空白组不做处理。孕期间断染毒6次。实时荧光定量PCR技术检测出生后21d子代鼠海马中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和干扰素-γ(IFN-γ)mRNA含量变化情况,酶联免疫技术检测炎症因子TNF-α、IL-1β和IFN-γ蛋白表达情况。结果与对照组相比,PM2.5高剂量组子代鼠海马中IL-1βmRNA含量升高,PM2.5中、高剂量组TNF-α和IFN-γmRNA含量均显著升高;PM2.5模型组海马TNF-α、IL-1β和IFN-γ蛋白表达量均明显升高。结论妊娠期PM2.5暴露可致子代鼠出生后海马炎症因子TNF-α、IL-1β和IFN-γ含量改变,其改变可能会导致子代神经炎症发生。