大肠埃希氏菌疫苗生产用菌种种子批的建立与鉴定

为了研制仔猪大肠杆菌病三价(K88+K99+987P)灭活疫苗,以大肠埃希氏菌生产菌种C83549(k88)第2代和C83644(k99)、C83710(987p)第3代基础种子作为原始种子,建立了用于仔猪大肠杆菌病疫苗生产的大肠埃希氏菌基础种子批,分别对种子批的F1、F5、F10、F13代进行了全面鉴定。结果表明,各代种子的培养特性、生化特性均符合大肠埃希氏菌特征,抗原结构分别为C83549(O149∶K88)、C83644(O68∶K99)和C83710(O9∶987P);各代次菌株的菌毛抗原RIHA单位≥800,菌种免疫原性鉴定合格;各菌株经口服途径灌服1.5×10^(10)CFU/头,可引起仔猪100%发病。因此,3个菌株均可用作仔猪大肠杆菌病三价(K88+K99+987P)灭活疫苗生产的菌种。

猪链球菌MnmE蛋白功能的初步研究

为了解析猪链球菌中MnmE蛋白的生物学功能,通过同源重组技术获得了mnmE基因缺失菌株,采用活菌计数、高效液相色谱、质谱分析、荧光定量PCR等技术,鉴定MnmE蛋白在猪链球菌中的主要功能。结果显示,与野生菌株(SC19)相比,mnmE基因缺失菌株(△mnmE)在酸性条件pH 4.5下的存活能力显著下降;氨基酸靶向代谢组学共检测到23种氨基酸及其衍生物,其中△mnmE缺失菌株中有17种氨基酸具有显著差异(P<0.05,倍数差异>1.2),尤其是精氨酸上调4.8倍,丝氨酸上调2.9倍。荧光定量PCR发现△mnmE缺失菌株中与环境适应性相关的精氨酸分解代谢基因ArcA下调表达显著,丝氨酸合成酶SerB上调表达显著。初步鉴定了MnmE蛋白与猪链球菌对酸性环境适应性相关,MnmE蛋白缺失后,精氨酸分解代谢基因下调表达导致精氨酸在菌体里积累,不能被分解成CO_(2)、ATP、NH_(3),使得细菌代谢紊乱、适应性减弱。

焦棓酸对猪链球菌体外抑菌效果试验

研究焦棓酸对猪链球菌的体外抗菌活性及对生物被膜的抑制作用,并初步探讨其抑菌机制。采用96孔微量稀释法测定常用抗菌药物及焦棓酸对猪链球菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度;平板活菌计数法和分光光度计测定焦棓酸对猪链球菌作用的时间-杀菌曲线;采用结晶紫染色法检测焦棓酸对猪链球菌生物被膜形成的影响;通过荧光定量PCR从转录水平分析焦棓酸对猪链球菌生长与生物被膜形成相关基因表达的情况。结果显示,猪链球菌2型HB菌株对磺胺异恶唑、磺胺甲恶唑耐药严重,焦棓酸对猪链球菌2型HB菌株的最小抑菌浓度为32μg/mL,最小杀菌浓度为64μg/mL,并且焦棓酸对猪链球菌的抑制作用呈剂量依赖性;焦棓酸在16μg/mL能显著抑制猪链球菌2型HB菌株生物被膜形成的能力;另外,经焦棓酸处理后,发现猪链球菌的生长、生物被膜形成、毒力相关基因ftsZ、stK、mrp、fbps、gapdh、ccpA、luxS下调表达。综上所述,焦棓酸可为耐药猪链球菌在临床上感染的治疗提供新思路。

新生仔猪大肠杆菌病的防治

为了更好地防治新生仔猪大肠杆菌病,本试验将已确诊为新生仔猪大肠杆菌病猪场的母猪随机分成疫苗免疫组、疫苗免疫联合药物防治组、药物防治组和对照组共4个组,进行新生仔猪大肠杆菌病防治试验,分别统计各组母猪的平均产仔数以及仔猪黄痢的发病率和死亡率。结果显示,药物防治组、疫苗免疫组和疫苗免疫联合药物防治组的母猪平均产仔数分别为11.7头、11.5头和11.4头,与对照组(11.4头)无明显差别;仔猪发病率分别为12.57%、7.51%和3.51%,死亡率分别为5.14%、2.31%和1.17%,与对照组相比均有较大程度的降低。结果表明,试验猪场除了加强饲养管理外,采用疫苗免疫和药物防治相结合的方法,可有效降低新生仔猪大肠杆菌病的发生。

某规模化猪场外环境中非洲猪瘟监测及防控建议

国内养殖企业经过近5年的摸索,已经总结出1套完善的非洲猪瘟生物安全防控技术体系,其中猪场场外环境中ASFV的监测环节是最为重要的部分。笔者对贵州某集团种猪场1年的监测数据进行分析发现,车辆风险系数较高,其次是人员和物资,值得注意的是2-3月和6-8月为该地区的疫情高发期,这与阴冷潮湿、调猪频率、周边疫情等因素有密切关系。因此,场外监测是猪场防控中最为重要的一道防线,尤其重视车辆和人的监测,同时,笔者提出通过了解当前非洲猪瘟流行特点、提高猪群健康度、有效降低猪场环境病毒的载量和重视硬件生物安全改造等措施,在场内外环境和生产管理过程中构建好猪场的生物安全体系,可有效阻断非洲猪瘟病毒的传播途径。

山羊支原体山羊肺炎亚种MCCG-0521乳酸脱氢酶基因的克隆表达及其编码氨基酸的生物学分析

旨在获得山羊支原体山羊肺炎亚种MCCG-0521乳酸脱氢酶(L-lactate dehydrogenase,LDH)的蛋白表达产物,分析其编码氨基酸的生物学特性,为进一步研究LDH蛋白的功能奠定基础。试验完成了LDH基因的克隆和密码子改造,成功将LDH基因中473、761、779 nt处的A突变为G,使改造后的LDH基因能在大肠埃希氏菌Rosetta中正确表达。SDS-PAGE电泳结果显示,IPTG诱导目的蛋白表达后获得一条大小约34 ku的蛋白条带,Western blot结果表明获得的原核表达产物可与抗6×His tag的单克隆抗体发生特异性反应,研究采用DNAStar Protean模块分析了LDH的二级结构、蛋白骨架柔性区域和可能的B细胞抗原优势表位,为进一步研究其功能奠定了基础。

不同海拔铁心杉天然群体的叶表型变异

【目的】揭示不同海拔梯度下铁心杉天然群体的叶表型多样性及其变异规律,探究叶表型性状与海拔气候的相关关系,为铁心杉种质资源的收集、保护与利用提供科学依据。【方法】以湖南小溪国家级自然保护区内的铁心杉天然群体为研究对象,运用巢氏方差分析、相关性分析、主成分分析、聚类分析等方法,对来自4个不同海拔铁心杉天然群体的12个叶表型性状开展研究。【结果】除叶宽外,有11个叶表型性状在群体间和群体内存在显著(P<0.05)或极显著差异(P<0.01),变异较为丰富;随着海拔的升高,不同海拔铁心杉天然群体间的叶表型变异整体呈现降低趋势,变异系数最高和最低的群体分别为Pop1(18.52%)、Pop4(13.95%);群体内的表型分化系数(77.46%)大于群体间的表型分化系数(22.54%),表明群体内变异是铁心杉变异的主要来源,群体分化程度属于中等水平。相关性分析表明,随着海拔的升高,针叶厚、比叶面积、比叶重与温度呈极显著负相关关系(P<0.001),与降水量呈极显著正相关关系(P<0.001),这表明铁心杉的针叶为了适应环境表现出胁迫耐受策略。利用Ward.D2层次聚类法对铁心杉群体进行聚类分析,4个不同海拔铁心杉天然群体可划分为4个类群。【结论】随着海拔的升高,铁心杉群体叶表型多样性整体呈现下降趋势,且与海拔气候因子显著相关。群体间和群体内均存在较为丰富的表型变异,但以群体内变异为主。

链球菌的危害及天然化合物抗链球菌作用的研究进展

链球菌种类众多,对人类危害严重的三种链球菌为肺炎链球菌、变异链球菌与猪链球菌。目前,肺炎链球菌是导致儿童、老人死亡的重要病原菌,变异链球菌是龋齿的主要病因,而猪链球菌是人畜共患病原菌,上述三种链球菌对畜牧业和人类健康造成重大危害。然而,随着抗生素的不合理使用,这三种链球菌的耐药性逐年升高。天然化合物有毒副作用较小、不易产生耐药性的特点,是开发抗链球菌药物的重要资源宝库。文章综述了不同种类天然化合物(茶多酚类、生物碱类、黄酮类、抗菌肽类、精油类等)抗链球菌的作用(结合溶血素、作用于ATP酶、抑制拓扑异构酶、影响细菌生长分裂等),以期为研发抗链球菌的天然化合物提供参考。

一株猪圆环病毒2d基因型毒株的全基因组序列及其衣壳蛋白的小鼠免疫原性分析

旨在确定引起湖北省某规模化猪场断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)的主要病原。本研究采集该猪场具有PMWS典型临床症状的仔猪组织样品,经PCR检测,发现其存在猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)感染。对阳性样品中PCV2全基因组进行扩增和测序后,与国内外流行毒株进行全基因组和ORF2基因的比对,分析其核苷酸同源性。通过猪肾上皮细胞系PK-15对病毒进行分离培养和鉴定,对其核衣壳蛋白Cap的抗原表位和小鼠免疫原性进行分析和评估。病毒分离鉴定结果表明,成功分离到1株PCV2毒株(名称:XY2022;GenBank登录号:OM249965.1),全基因组长度为1767 nt,在PK-15细胞上的毒价为10~(5.70)TCID_(50)·mL^(-1);序列分析结果显示,XY2022属于PCV2d,与参考毒株的全基因组核苷酸相似性为94.3%~99.8%,ORF2核苷酸相似性为89.2%~99.6%;Cap的免疫原性分析和测定结果显示,相比于其他基因型毒株的Cap,XY2022 Cap的线性免疫优势区、线性中和表位和构象中和表位均存在差异位点,PCV2d(XY2022)Cap和PCV2b(WH)Cap均可诱导小鼠机体产生抗PCV2的中和抗体,但2d Cap诱导的中和抗体水平更稳定。本研究为湖北省PCV2的流行病学研究和变异毒株的防控提供了参考,可为研究PCV2致病机制和开发新型疫苗提供材料。

基于非洲猪瘟病毒MGF505-3R蛋白的间接ELISA检测方法的建立

为了建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)的间接ELISA检测方法,试验基于ASFV MGF505-3R基因序列,构建pET-28a(+)-3R原核表达系统和pFastBac1-3R杆状病毒表达系统,分别通过37℃诱导5 h和28℃培养5 d获得3R重组蛋白,以此为包被抗原建立快速检测ASFV的间接ELISA检测方法,对该检测方法的反应条件、阴阳性临界值、敏感性、特异性及重复性进行检测,并用该检测方法与ASFV抗体ELISA检测试剂盒对70份临床血清样品进行符合率验证试验。结果表明:原核表达系统与杆状病毒表达系统表达的3R重组蛋白抗原特异性均良好。利用杆状病毒表达系统表达的3R重组蛋白为包被抗原建立的间接ELISA检测方法的最佳条件为:包被浓度为2μg/mL,血清稀释度为1∶80,5%BSA 37℃封闭2 h,ASFV阳性血清(一抗)37℃孵育90 min,辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗猪IgG(二抗)37℃孵育45 min。该间接ELISA检测方法的批间和批内变异系数均小于10%;与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等常见病原阳性血清无交叉反应;该检测方法的临界值为0.38,ASFV阳性血清稀释至640倍检测仍高于临界值。该检测方法与ASFV抗体ELISA检测试剂盒的阳性符合率、阴性符合率、整体符合率分别为92%(37/40)、86%(26/30)、90%(63/70)。说明试验基于3R重组蛋白建立的间接ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性与重复性,可以用于临床血清样品中ASFV抗体的检测。

发动机活塞温度场三维有限元分析

本研究利用Pro/E软件建立某天然气发动机活塞的几何模型,并借助有限元分析软件ANSYS6.1对其进行温度场分析计算,得到活塞的三维温度场分布情况,数值计算结果表明了活塞温度场的分布情况,为活塞的结构改进和优化提供了依据。

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定、致病性与药敏试验

从湖北省几个猪场具有严重呼吸道症状的疑似病例中,采集了肺脏、扁桃体、关节液及心包液等病料,进行了细菌的分离培养及菌落形态观察、染色镜检、生化试验、PCR检验、血清型鉴定、药敏试验及致病性试验。结果表明,分离到的8株细菌为猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)。血清型分型鉴定结果为1型的6株,3型的2株。药敏试验结果显示,分离的菌株对头孢类、先锋霉素类表现较高的敏感性,为猪场用药提供了科学参考。

湖北省猪病流行特点及防控策略

猪病已成为制约湖北省养猪业发展的一个重要瓶颈,主要特点表现为疾病的种类不断增多,危害不断增大,呈混合感染,免疫抑制性疾病的威胁也逐渐加剧,人畜共患传染病也有抬头的趋势。为此,猪场应该建立健全生物安全体系、树立科学的防疫观念、建立完善的疫病监测与免疫监测方案、制定合适的保健方案,以保证养猪业的健康发展。

喷嘴叶片形状的改善对涡轮增压器效率的影响

对涡轮增压器蜗壳内流场进行了三维CFD模拟,分析了蜗壳内的流动并找到了叶片造成流动损失的原因,然后引入双纽线流量计的工作原理对叶片尤其是造成流动损失大的叶片头部进行了重新设计,进而对新方案进行了CFD模拟和叶片的加工及整机试验,模拟和试验结果表明新设计的叶片对增压器效率有明显提高。

双热带气旋相互作用的研究

采用无基本气流的无辐散正压模式模拟了双热带气旋的运动。应用非对称理论研究了双热带气旋的相互作用。双热带气旋中的每个热带气旋主要由通过其中心的非对称气流（即通风气流）作用而移动。这股非对称气流是由其自身的线性和非线性效应产生的非对称涡旋与其配对热带气旋形成的非对称涡旋相叠加而引起的。

相同强度双台风相互作用的物理机制

在无基本气流的假定下，应用无辐散正压模式研究双台风相互作用的物理机制。台风Ａ位于台风Ｂ以西，两台风相距６００ｋｍ，且具有相同的强度。在台风Ａ（台风Ｂ）的非对称流场中，由台风Ａ（台风Ｂ）的线性β效应产生的非对称涡旋的方位相位与由台风Ｂ（台风Ａ）形成的非对称涡旋的方位相位相反（相同）。因此，台风Ａ（台风Ｂ）的大尺度非对称涡旋较弱（较强）。小尺度涡旋逆时针旋转导致台风Ａ逆时针打转。稳定的偏南非对称气流使台风Ｂ向偏北移动。

经产母猪的胚胎移植

以生产场大白猪核心群自然发情的经产母猪为供体 ,以非种用的初情前期的青年杜洛克、杜长大母猪为受体 ,进行胚胎移植试验 ,共获得 5 1 7枚胚胎 ,胚胎收集率达 92 .6 5 %;将 5 0 1枚可用胚胎移植给 4 2头同期发情的受体母猪 ,受体母猪移植受胎率达 88.1 0 %,平均产仔 6 .84头。

热带气旋的水平尺度对其移动的影响

应用无基本气流的无辐散正压模式研究热带气旋的水平尺度对其移动的影响。水平尺度较小的（较大的）热带气旋向西北偏北（西北偏西）移动。水平尺度较小的（较大的）热带气旋使其大尺度β涡旋逆时针旋转一个较小的（较大的）角度αｌ。热带气旋的移向θｃ与角度αｌ有关，即θｃ≈３６０°－αｌ。因此，热带气旋的移向随其水平尺度的增大而逆时针向西偏转。

家畜转基因抗病育种研究进展

人们一直期望畜产品产量和动物健康水平能快速得到提高,DNA重组技术和转基因技术的出现使得其在不同物种间,甚至不同系统发育领域间成为可能。转基因、动物克隆等技术的进步在一定程度上已经实现了在动物转基因领域的期望。本文讨论了当前家畜转基因技术和转基因抗病育种的研究近况,并对转基因抗病动物的发展进行了展望。

β涡旋的垂直结构及其对热带气旋移动的影响

应用准地转斜压模式数值模拟热带气旋的移动．。分析大尺度β涡旋的水平和垂直结构及其对热带气旋移动的影响。研究结果表明，两β涡旋之间的准均匀流（通风气流）仍然与热带气旋的运动相关。