先天性后极性白内障超微结构分析及突变基因筛查

目的探讨一先天性后极性白内障家系晶状体的超微结构改变,并初步筛查其致病基因。方法收集一常染色体显性遗传性先天性后极性白内障家系资料,对家系成员行眼部检查;在透射电镜下观察晶状体细胞超微结构的改变;选择CRYAB、CRYBA1/A3、CRYBB2、GJA8、CHMP4B、PITX3和EPHA2这7个热点基因进行突变位点筛查。结果根据家系图分析该家系为垂直遗传,符合单基因常染色体显性遗传特点。裂隙灯显微镜下检查示全部患者晶状体混浊形态完全相同。透射电镜下发现患者前囊面晶状体上皮细胞排列紧密,结构完整,未见特异性病理变化;前皮质晶状体纤维细胞排列紧密,细胞内密度均一一致,但后皮质晶状体纤维细胞内出现斑驳状中高密度异常颗粒沉着。热点基因筛查显示:7个候选基因的外显子及其邻近内含子序列与基因库对照未发现任何突变。结论本研究将后极性白内障病变定位于后皮质晶状体纤维细胞,排除了前囊面晶状体上皮细胞及前皮质晶状体纤维细胞。此家系携带的遗传突变位点位于尚未见报道的与后极性白内障相关的致病基因上。

粘弹剂小管扩张联合超声乳化白内障吸除折叠式人工晶状体植入术治疗白内障合并青光眼

目的 :评价粘弹剂小管扩张联合超声乳化白内障吸除折叠式人工晶状体 (IOL)植入手术治疗白内障合并青光眼的安全性及有效性。方法 :对 19例 (2 1只眼 )白内障合并青光眼患者行上方粘弹剂小管扩张术和透明角膜切口超声乳化折叠式人工晶状体植入联合手术。结果 :术后随访 3～ 6个月 ,粘弹剂小管扩张联合手术组 (P- C组 )平均眼压 (14 .80± 2 .6 3) mm Hg,较术前降低 9.73mm Hg,差异有显著性 (P=0 .0 0 0 ) ;与小梁切除联合手术组 (P- T组 )相比 ,术前和术后 1周、1个月、3～ 6个月差异均无显著性 (P=0 .85 3、0 .338、0 .970、0 .72 5 )。P- C组术后 1周和3～ 6个月 ,视力≥ 0 .5者分别为 16只眼 (76 .2 %)和 17只眼 (80 .95 %) ,与 P- T组相比 ,两组差异均无显著性 (P=0 .777、0 .80 7)。P- C组术中并发症包括小梁网 Descemet膜穿破 2只眼和 Schlemm管刺破 2只眼 ;术后 2 4 h一过性眼压升高 3只眼。P- T组术后并发症包括炎症反应较明显 3只眼 ,少量前房出血 1只眼和脉络膜脱离 1只眼。结论 :粘弹剂小管扩张联合超声乳化白内障吸除折叠式人工晶状体植入术是治疗开角型青光眼合并白内障安全、有效、可重复的联合手术。

超声乳化联合toric人工晶体植入对老年白内障患者的效果及对泪膜功能和炎性因子的影响

目的探讨超声乳化联合toric人工晶体植入对老年白内障患者的效果及对泪膜功能和炎性因子的影响。方法选择老年白内障患者82例,依据随机表法分为观察组与对照组各41例。对照组采用白内障超声乳化结合非球面人工晶体植入治疗;观察组采用白内障超声乳化结合toric人工晶体植入治疗。比较两组术后并发症情况,术前、术后1 w和3个月视力和散光变化,术前和术后3个月泪膜功能和炎性因子变化。结果两组术后并发症比较差异无统计学意义(P>0.05)。两组术后1 w和术后3个月视力较术前明显增加,且观察组明显高于对照组(P<0.05)。两组术后1 w和术后3个月散光较术前明显降低,且观察组明显低于对照组(P<0.05)。两组术后3个月血清炎性因子水平较术前明显升高,且观察组明显低于对照组(P<0.05)。两组术后3个月泪膜破裂时间(BUT)较术前明显下降,而主观干眼症状问卷(SDES)评分较术前明显增加(P<0.05);观察组术后3个月BUT明显低于对照组,主观干眼症状问卷(SDES)评分明显高于对照组(P<0.05)。结论超声乳化联合toric人工晶体植入对老年白内障患者效果明显,且可改善患者泪膜功能及减轻炎性反应。

晶体上皮细胞正常生理及其病理改变

晶体上皮细胞是晶体内代谢最活跃的部分，它决定了晶体的生长发育、正常生理和病理改变。本文对正常晶体上皮细胞的形态和功能以及白内障。

先天性白内障一大家系

先天性白内障表型种类繁多,而先天性核性伴珊瑚状晶状体混浊却十分罕见,国内外文献尚未见报道.本文调查一罹患此病的典型的遗传性白内障家系,现报告如下.

氧化性白内障中晶状体上皮细胞内Ca^(2+)浓度的变化

目的 通过测定过氧化氢诱发的白内障中晶状体上皮细胞内Ca^(2+)浓度的变化,探讨Ca^(2+)浓度的改变在氧化性白内障发生机制中的作用。方法 用过氧化氢诱发实验组离体培养的大鼠晶状体产生白内障,用Fura-2/AM荧光标记法测定晶状体上皮细胞胞浆内Ca^(2+)的浓度,并与对照组正常晶状体相比。结果 经过氧化氢作用的实验组,6、12和24h时,晶状体上皮细胞胞浆内Ca^(2+)浓度与对照组相比明显升高,差异有显著性(P=0.001,0.000,0.000)。结论 本研究证实过氧化氢作用于大鼠晶状体后,其上皮细胞内Ca^(2+)浓度明显升高,从而为Ca^(2+)依赖的蛋白水解酶如钙蛋白酶等的激活创造必要条件。

环孢素A对兔晶状体上皮细胞增殖的影响

目的研究环孢素A(CsA)在不同情况下,对兔晶状体上皮细胞(RLECs)超微结构和增殖的影响。方法用CsA分别处理正常生长的RLECs和经过H2O2损伤的RLECs后,用透射电镜观察RLECs超微结构变化;噻唑蓝(MTT)法测定RLECs增殖能力改变。结果CsA浓度≥10μmol/L时,明显损伤正常RLECs的超微结构和增殖;当浓度<40μmol/L时,能部分抑制H2O2对RLECs超微结构损伤和增殖抑制。与对照组比较,差异有显著意义(P<0.01)。结论CsA对不同情况下的兔晶状体上皮细胞的超微结构和增殖具有不同的作用。

Wet Lab实践教学模式在眼科临床教学中的应用

Wet Lab是眼科近年来推出的一种全新实践教学模式,是以动物眼或计算机软件等为手术模型,模拟临床手术操作平台,并配备显微镜、手术操作系统以及眼科显微器械、耗材等,可满足规培学员进行清创缝合、白内障超声乳化吸除、人工晶体植入等手术操作的实践需求,使学员在实践中不断提高临床操作水平,并逐步向临床手术转化。

蛋白激酶C_(-α)在晶状体上皮细胞中的表达及其与白内障关系的研究

目的 研究蛋白激酶C-α(PKC-α)在晶状体上皮细胞中的表达及其在皮质性白内障形成过程中的变化及作用。方法 离体培养的大鼠晶状体,应用Western-blot检测蛋白激酶C在晶状体上皮细胞中的表达和分布;H_2O_2诱导大鼠皮质性白内障形成,Western-blot检测晶状体上皮细胞内蛋白激酶C-α的蛋白表达变化;RT-PCR检测其mRNA含量改变。同时,流式细胞仪检测晶状体上皮细胞调亡率。结果 在正常晶状体上皮细胞中PKC-α高表达,经H_2O_2处理产生凋亡的晶状体上皮细胞中PKC-α的蛋白表达和mRNA含量均降低,与对照组比较,差异有显著意义(P<0.05)。结论 H_2O_2可抑制大鼠晶状体上皮细胞中PKC-α的活性,提示PKC-α与白内障的发生发展有关。

碱性成纤维细胞生长因子对牛晶状体上皮细胞增殖的影响及其在牛晶状体上皮细胞中的蛋白表达

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ） 在体外对牛晶状体上皮细胞（ＢＬＥＣ） 增殖的影响及确定ＢＬＥＣ 是否表达ｂＦＧＦ 蛋白。 方法 ＢＬＥＣ 原代培养。用不同浓度的ｂＦＧＦ 及３Ｈ胸腺嘧啶（３ＨＴＤＲ） 处理ＢＬＥＣ３６ ｈ 后，液闪测定ｂＦＧＦ 对ＢＬＥＣ３ＨＴＤＲ 掺入率的影响。Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹（ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ） 法确定ＢＬＥＣ 是否表达ｂＦＧＦ 蛋白。 结果 ｂＦＧＦ 在体外有促进ＢＬＥＣ 增殖作用，Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 法表明ＢＬＥＣ 可表达低分子量（１８ ０００）ｂＦＧＦ 蛋白。 结论 ｂＦＧＦ 可能通过晶状体上皮细胞的自分泌，促进白内障术后残留晶状体上皮细胞的增殖。

Caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO对氧化损伤诱导晶状体上皮细胞凋亡的防护作用

目的 探讨半胱氨酸天冬氨酸酶(caspase-3)及其抑制剂Ac-DEVD-CHO对过氧化氢(H_2O_2)诱导大鼠晶状体上皮细胞凋亡的影响,为进一步研究晶状体氧化损伤机制及其防护提供实验依据。方法 采用大鼠离体晶状体器官培养的方法,用Western blot法分析氧化损伤后晶状体上皮细胞内caspase-3蛋白酶活性,流式细胞AnnexinV-PI双染色法定量检测caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO对晶状体上皮细胞凋亡率的影响。结果 氧化损伤诱导晶状体上皮细胞凋亡过程中,细胞内caspase-3酶活性明显增强,caspase-3特异性抑制剂Ac-DEVD-CHO可有效降低晶状体上皮细胞凋亡率。结论 caspase-3蛋白酶在氧化损伤诱导晶状体上皮细胞凋亡过程中占有重要地位,caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO可有效防护体外晶状体上皮细胞氧化损伤。

不同设计非球面人工晶状体临床应用效果评价

目的评价负球差的非球面人工晶状体、无像差的非球面人工晶状体和传统球面人工晶状体对白内障术后人工晶状体眼球差与视觉质量的影响。方法180位白内障患者超声乳化术，随机植入非球面人工晶状体（TecnisZ9001，AMO）、无像差的非球面人工晶状体（Akreos AO，Baush ＆ Lomb）或球面人工晶状体（KS-1．CanonStaar）。

基于多模态影像云的“教学研”结合教学方式 在眼科住院医师规范化培训中的应用

目的探索基于多模态影像云的“教学研”结合教学方式在眼科住院医师规范化培训(以下简称住培)中的应用效果。方法选择浙江大学医学院附属第二医院眼科中心2018级和2019级共32名眼科住培学员为研究对象。将2019级19名住培学员设为试验组,采用基于多模态影像云的“教学研”结合教学方式;将2018级13名住培学员设为对照组,采用传统的理论授课教学方式。8周轮转教学结束后,采用临床综合能力考核成绩(包括临床专科技能、临床思维与决策能力、临床科研能力)和教学满意度调查结果,比较两组住培学员不同教学方式的教学效果。结果试验组住培学员的临床专科技能、临床思维与决策能力、临床科研能力考核成绩分别为(86.11±2.99)分、(85.89±2.28)分、(85.05±2.50)分,发表SCI文章4篇;对照组住培学员相应成绩分别为(83.46±2.50)分、(82.77±1.96)分、(82.92±3.15)分,发表普通中文文章1篇。试验组教师教学满意度和住培学员教学满意度评分分别为(92.11±2.00)分、(93.11±2.13)分,对照组教师和住培学员相应评分分别为(86.62±3.64)分、(89.15±3.24)分。试验组教师和住培学员教学满意度评分均高于对照组,其差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论基于多模态影像云的“教学研”结合教学方式,对于全面提高眼科住培学员的临床综合能力和教学满意度大有裨益,并为创建培养高素质眼科住培学员的新型教学方式提供了有益参考。

特殊表型遗传性先天性白内障的超微结构和基因定位

目的 探讨一表型特殊、晶状体呈簇状混浊的常染色体显性遗传性先天性白内障(ADCC)的超微结构 ,并初步定位该疾病的相关候选基因。方法 收集特殊表型ADCC一家系资料 ,对家系成员行眼部检查 ;在光学显微镜和透射电镜下观察晶状体细胞超微结构的改变 ;选择γ 晶状体蛋白基因附近多个微卫星位点 ,对该家系ADCC疾病相关候选基因进行连锁分析。结果 光学显微镜下特殊表型ADCC患者晶状体纤维细胞失去正常排列规则 ,产生不规则折光 ,并可见网格样改变、黏液样变性及结晶样物质析出等局灶性退行性变 ;透射电镜下可见细胞皱缩、变形 ,失去正常长六边形形态 ,细胞间隙增宽 ,细胞内可见异常高密度球形颗粒沉着。连锁分析结果显示 ,该家系ADCC疾病相关候选基因与微卫星位点D2S2 2 0 8、D2S2 382及D2S16 4连锁 ,最大LOD值为 3 34。结论 特殊表型ADCC的特异性病理学改变集中在晶状体纤维细胞 ,其疾病相关候选基因极可能为γ 晶状体蛋白基因。

bFGF对人晶状体上皮细胞增殖的影响

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子 (basic fibroblast growth factor,b FGF)在体外对人晶状体上皮细胞增殖的影响及机制探讨。方法 取人晶状体前囊膜培养 ,加入不同浓度b FGF(1μg· L- 1、10 μg·L- 1、10 0 μg·L- 1 ) ,48h后免疫组化测增殖核细胞抗原阳性面积率。取人晶状体前囊膜免疫组化测 b FGF受体。结果 一定浓度 (1～ 10 0 ug· L- 1 )的 b FGF在体外有促人晶状体上皮细胞增殖的作用 ,且呈剂量相关性。人晶状体上皮细胞 b FGF受体表达阳性。结论 b FGF通过受体介导可促人晶状体上皮细胞增殖 ,在维持人晶状体上皮细胞的正常生理和后发障的发病机制中占有重要的地位。

超声乳化白内障吸除联合青光眼黏弹剂小管扩张术的临床疗效观察

目的 评价超声乳化白内障吸除折叠式人工晶状体 (IOL)植入联合黏弹剂小管扩张术(V P术 )的安全性和有效性。方法 收集 2 8例 (30只眼 )因白内障合并原发性开角型青光眼行V P术患者 (V P组 )的临床资料 ,总结和分析患者的视力、眼压及手术并发症的发生情况 ,并与行超声乳化白内障吸除折叠式IOL植入联合小梁切除术 (T P术 )的 2 7例 (2 8只眼 )白内障合并青光眼患者 (T P组 )进行比较。术后随访时间 6个月。结果 术后 6个月 ,V P组平均眼压为 (14 6 5± 2 70 )mmHg(1mmHg=0 133kPa) ,较术前降低 10 33mmHg ,差异有显著意义 (P =0 0 0 0 ) ;术后 1周、1个月、6个月两组降眼压效果比较 ,差异均无显著意义 (P =0 6 6 1,0 381,0 5 2 6 )。V P组术后 1周、1个月、6个月最佳矫正视力≥ 0 5的眼数占随访眼数的百分比分别为 6 2 1% (18/ 2 9)、71 4 % (2 0 / 2 8)及 80 0 % (2 4 /30 ) ,与T P组比较 ,差异均无显著意义 (P =0 6 2 1,0 70 2 ,0 893)。V P组术中并发症包括小梁网Descemet膜穿破和Schlemm管刺破 (各 2只眼 ) ,术后 2 4h一过性眼压升高 (4只眼 ) ,无其他严重并发症。T P组术后并发症包括前房明显炎性反应 (6只眼 ) ,少量前房出血和脉络膜脱离 (各 1只眼 )。结论 V P术疗效好。

Expression and proteolytic activity of calpain in lens epithelial cells of oxidative cataract

Objective: To study the role of calpain in the mechanism of oxidative cataract through detecting the level of intracellular free Ca2+, the expression and proteolytic activity of calpain in the lens epithelial cells (LECs) of H2O2-induced cataract. Methods: Rat lenses were cultured in vitro and cataract was induced by H2O2. The level of intracellular free Ca2+ was measured by fluorescence determination with fura-2/AM. The expression of m-calpain protein in LECs was detected with immunohistochemical method. The proteolytic activity in LECs was measured using a fluorogenic synthetic substrate. Results: There were significant differences of the level of intracellular free Ca2+ (P=0.001, 0.000, 0.000), the expression of m-calpain (P=0.001, 0.000, 0.000) and the proteolytic activity of calpain (P=0.001, 0.000, 0.000) between H2O2-induced and control group at 6, 12 and 24 h, respectively. Conclusions: H2O2 can increase intracellular free Ca2+, then enhance the expression and proteolytic activity of calpain which may play a role in the mechanism of oxidative cataract of rat.

碱性成纤维细胞生长因子对不同年龄白内障患者晶状体上皮细胞增殖的影响

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)对不同年龄白内障患者晶状体上皮细胞 (humanlensepithelialcells,HLEC)增殖的影响并探讨机制。方法 将白内障手术中取出的晶状体前囊膜在 10 μg/LbFGF中培养 48h ,免疫组织化学法染色后 ,采用医用多功能图像分析软件测定增殖细胞核抗原 (proliferatingcellnuclearantigen ,PCNA)阳性面积率 ;免疫组织化学方法测定晶状体前囊膜bFGF受体蛋白表达数量。结果 bFGF可促进不同年龄白内障患者HLEC增殖 ,其促增殖作用以及HLEC内bFGF受体蛋白的表达均与白内障患者年龄呈负相关 (P <0 .0 1)。结论 bFGF参与后发性白内障的形成 ;随着白内障患者年龄递减 ,bFGF促HLEC增殖作用增强 。

Expression and effect of basic fibroblast growth factor on human cataract lens epithelial cells

OBJECTIVE: To detect the expression of basic fibroblast growth factor (bFGF) in human ocular tissues, and to assess the effect of bFGF on the proliferation of human cataract lens epithelial cells (LECs) and its correlation with age. METHODS: Enucleated eyes were subjected to immunostaining for bFGF protein. Human cataract LECs were cultured in vitro, and treated with bFGF for 48 hr. Proliferation was estimated by the positive area ratio of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in immunohistochemistry. RESULTS: bFGF protein was found in various human ocular tissues. bFGF stimulated human cataract LEC proliferation, and there was an age-related decrease in responsiveness of human cataract LECs to bFGF (P