中药方剂葛根芩连汤缓解LPS诱导小鼠回肠炎症作用研究

本文拟研究葛根芩连汤(GQD)对脂多糖(LPS)刺激诱导的小鼠回肠炎症的抑制作用与对肠道菌群的调节作用。雄性C57BL/6小鼠经口给予治疗剂量的GQD和抗生素(ABX) 7 d,第8天腹腔注射10 mg/kg的LPS。使用HE染色和AB-PAS染色进行回肠组织学评价;RT-qPCR检测回肠组织炎症因子(IL-1 β、IL-6、TNF-α、IL-10、IL-17和IL-22)、LPS受体(CD14、TLR4和MyD88) mRNA水平;ELISA测定超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量;对盲肠内容物与粪便进行细菌革兰氏染色计数。GQD显著降低了小鼠回肠组织中由LPS诱导的炎症因子的mRNA水平(IL-1 β、IL-6、TNF-α、IL-17、IL-22、IL-10),LPS受体(CD14、MyD88、TLR4)的表达、SOD活性、MDA含量、修复了上皮细胞之间的紧密连接。GQD一定程度上改变了肠道菌群的结构。GQD预处理可以通过改变肠道菌群和肠屏障在一定程度上减轻LPS导致的肠损伤。This paper investigates the inhibitory effects of Ge Gen Qin Lian Decoction (GQD) on LPS-induced intestinal inflammation and dysbiosis. Male C57BL/6 mice were given therapeutic doses of GQD and antibiotics (ABX) orally for 7 days, followed by LPS challenge (10 mg/kg) intraperitoneally on day 8. Histological evaluation was performed using HE and AB-PAS staining;RT-qPCR was performed to detect inflammatory factors (IL-1β, IL-6, TNF-α, IL-10, IL-17 and IL-22), LPS receptors (CD14, TLR4 and MyD88) at mRNA levels;Superoxide Dismutase (SOD) activity and Malonic dialdehyde (MDA) content were determined using ELISA;Cecum and fecal bacterial Gram staining and 16S rDNA-Seq were used to analyze the changes of intestinal flora. GQD significantly reduced LPS-induced inflammatory factors (IL-1β, IL-6, TNF-α, IL-17, IL-22, and IL-10), expression of LPS receptors (CD14, TLR4) and MyD88. GQD decreased SOD activity and MDA content, and repaired tight junctions between epithelial cells in mouse ileal tissues. GQD somewhat altered the structure. Pretreatment with GQD can change the intestinal flora and the intestinal barrier, and reduce the intestinal injury caused by LPS.

黄桷树叶总黄酮提取物对脓毒症小鼠肝、肺的保护作用研究

目的:了解不同浓度黄桷树叶总黄酮提取物(FLA)对脂多糖(LPS)诱导的脓毒症小鼠肝、肺损伤的保护作用。方法:将SPF级C57/6J雄性小鼠随机分成对照组(CON组)、LPS模型组(LPS组)、LPS + 40 mg/kg FLA组(LPS + FLA-L组)和LPS + 80 mg/kg FLA组(LPS + FLA-H组),每组6只。适应性喂养一周,再分别灌胃生理盐水和不同浓度FLA一周后,CON组腹腔注射PBS缓冲液,其余组均腹腔注射10 mg/kg LPS诱导建立脓毒症小鼠模型,腹腔注射12小时后进行血清和肝、肺组织的收集。ELISA检测血清中炎症因子IL-6和TNF-α的含量;HE染色观察肝、肺组织的病理情况;试剂盒检测血清ALT和AST水平;RT-qPCR检测肝、肺组织中炎症因子水平。结果:LPS + FLA-L组和LPS + FLA-H组均能逆转LPS导致的血清促炎因子IL-6 (从507.00 ± 121.43降至348.46 ± 87.65和310.13 ± 68.62 pg/ml)和TNF-α (从364.60 ± 68.60降至245.22 ± 58.94和192.14 ± 35.85 pg/ml)的升高(n = 4, P 0.05)。结论:黄桷树叶总黄酮提取物能有效改善LPS诱导的脓毒症小鼠炎症失衡和肝、肺损伤。

卫生检验与检疫专业《食品理化检验》混合式教学模式的探索

在全球化加速推进和信息化迅猛发展的背景下,如何将信息技术与教育教学深度融合,如何利用现代技术加快推动人才培养模式和教学方法改革,实现规模化教育与个性化培养的有机结合是高校教师值得深思的问题。《食品理化检验》课程是卫生检验与检疫专业的专业核心课程,旨在培养学生的理论联系实际、实验操作技能、实际工作能力及自主学习能力。文章针对《食品理化检验》课程的特色及传统课堂理论教学中存在的问题,对重庆医科大学卫生检验与检疫专业《食品理化检验》理论教学开展线上线下相结合的混合式教学模式进行探索,对如何进行该门课程混合式教学的整体设计及课前、课中、课后设计作详细阐述,并对教学效果进行评价,为后续该门课程混合式教学的全面实施奠定基础。

不同炮制程度麦芽对小鼠DSS溃疡性结肠炎的保护作用研究

目的:了解不同炮制程度麦芽对小鼠DSS溃疡性结肠炎的保护作用。方法:7周SPF级C57/6J小鼠随机分为对照组、DSS组、DSS + 生麦芽组、DSS + 炒麦芽组、DSS + 焦麦芽组,每组5只,适应性饲养一周后,对照组和DSS组用生理盐水灌胃,DSS + 生麦芽组、DSS + 炒麦芽组和DSS + 焦麦芽组分别按2.25 g/kg对应麦芽水提取物灌胃,共灌胃2周。在第二周灌胃期间,除对照组正常饮用蒸馏水外,其余各组均饮用2.5%葡聚糖硫酸盐(DSS)溶液。灌胃结束后,处理小鼠收集组织,记录脾重及结肠长度,收集结肠组织,后续进行苏木精–伊红(HE)染色及实时荧光定量(RT-qPCR)检测,观察小鼠结肠组织病理情况及炎症水平的变化。结果:与对照组相比,模型组体重明显降低(p < 0.01),结肠充血水肿、长度缩短(p < 0.01),脾脏指数升高(p < 0.01),结肠组织病理评分显著升高(p < 0.01)。结肠组织炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)表达显著升高(p < 0.01),紧密连接蛋白(ZO-1、occludin)表达降低(p < 0.01)。与模型组相比,生麦芽可抑制结肠炎导致脾脏指数升高(p < 0.05)、结肠组织病理评分上升(p < 0.01)和肠道炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)表达水平升高现象(p < 0.01);炒麦芽组结肠长度显著增长(p < 0.05)、脾脏指数降低(p < 0.01)、结肠组织病理评分降低(p < 0.01),结肠组织高水平表达的炎症因子和低表达的紧密连接蛋白情况显著缓解(p < 0.01)。焦麦芽对结肠炎无显著治疗效果。结论:麦芽对溃疡性结肠炎有较好的保护作用,其中以炒麦芽效果最优。

滋阴和温阳方剂对帕金森病小鼠神经损伤及肠道炎症和肠微生态的影响

目的:探索滋阴和温阳方剂(六味地黄丸与肾气丸)对帕金森病小鼠神经损伤及肠道炎症和肠微生态的影响。方法:将小鼠随机分为对照组、MPTP处理组、补脾组、滋阴组、温阳组,用MPTP诱导的亚急性帕金森病小鼠模型,观察滋阴和温阳方剂对帕金森病小鼠纹状体多巴胺含量、运动能力、回肠和纹状体中的细胞炎性因子的表达、肠道微生态的影响作用。结果:滋阴和温阳方剂可明显促进帕金森病小鼠神经损伤的恢复,促进多巴胺的含量增加(p < 0.05),并且温阳方剂较滋阴方剂效果更明显(p < 0.05),增加纹状体中酪氨酸羟化酶基因的表达(p < 0.05),且温阳方剂效果更明显(p < 0.001),运动能力较MPTP组也有显著的恢复(p < 0.05)并且温阳方剂较滋阴方剂效果更明显(p < 0.05);抑制纹状体中IL-1β基因的表达(p < 0.05),且温阳方剂效果更明显(p < 0.05),抑制回肠中IL-1β基因的表达(p < 0.0001),并促进回肠中IL-22基因的表达(p < 0.05);促进回肠中的粘膜屏障结构修复;在门、科、属水平上,各组肠道微生物中优势物种类似,但丰度有所不同,滋阴组chao指数显著升高(p < 0.05),PCoA分析中各组肠道微生物的群落组成均存在显著的差异(R = 0.2942, p =0.003)。讨论:滋阴方与温阳方(六味地黄丸与肾气丸)可以改善帕金森病小鼠所产生的运动症状、肠道菌群失调、肠道炎症、肠粘膜屏障受损、DA能神经细胞损伤的情况,且温阳配方较滋阴配方效果稍强。

葛根素对脂多糖诱导N9小胶质细胞激活的抑制作用

目的：探索葛根素对脂多糖（LPS）诱导N9小胶质细胞激活的抑制作用,为其在神经退行性疾病的防治方面提供依据。方法：用MTT法检测脂多糖和葛根素对小胶质细胞的细胞毒性作用;用流式细胞术（FCM）检测葛根素对LPS诱导N9细胞内活性氧（ROS）产生的抑制作用;分别用Griess法和FCM检测细胞培养液和细胞内一氧化氮（NO）含量;用HE染色法观察LPS激活N9细胞,及葛根素恢复细胞静息状态下细胞的形态;以FCM检测细胞凋亡和细胞周期。结果：葛根素（100~200μmol/L）能使LPS激活的N9细胞,从阿米巴样的活化形状明显恢复至静息态的圆形;LPS激活的N9细胞能产生大量的NO到培养液中,葛根素（50~200μmol/L）能使NO的产生减少,其中,高浓度组（200μmol/L）与LPS模型组相比,NO从23.45±0.19μmol/L降至12.43±0.11μmol/L（P〈0.01）。胞内ROS检测表明：葛根素（200μmol/L）同样明显降低ROS的产生。葛根素对激活的N9细胞胞内ROS的产生具有抑制作用,高浓度组（200μmol/L）能使其恢复至对照组水平;此外,葛根素能显著抑制LPS诱导的细胞凋亡,并恢复LPS对N9细胞G0/G1期的阻滞作用。结论：葛根素具有抑制小胶质细胞激活的作用。

加替沙星体外抗菌活性研究

采用琼脂二倍稀释法测定加替沙星对 6 5 1株临床分离致病菌的体外抗菌活性 ,并与左氧氟沙星、司帕沙星、环丙沙星、诺氟沙星、头孢唑林、头孢呋辛、头孢噻肟、头孢他啶、万古霉素、阿米卡星、阿莫西林、哌拉西林 /三唑巴坦比较。结果表明 ,加替沙星具有强而广谱的体外抗菌活性。对甲氧西林敏感的金葡球菌(MSSA)、表葡球菌 (MSSE)、肠球菌的MIC90 分别为 0 12 5、1、16mg/L ,抗菌活性为左氧氟沙星的 1～ 2倍、环丙沙星的 2～ 4倍 ,逊于第三代头孢菌素类。对肺炎克雷伯氏菌、伤寒沙门氏菌、痢疾杆菌、奇异变形菌、粘质沙雷氏菌 ,MIC90 分别为 4、0 2 5、0 5、4、32mg/L ,抗菌活性为左氧氟沙星、司帕沙星、环丙沙星的 1～ 2倍 ,与第三代头孢菌素类相当。对聚团肠杆菌、阴沟肠杆菌、乙酸钙不动杆菌、铜绿假单胞菌的MIC90 分别为 32、32、16、4mg/L。加替沙星对革兰氏阳性、阴性菌均具强大抗菌作用。

健康人国产加替沙星片的药代动力学

目的 :研究健康人口服加替沙星片后药代动力学特征。方法∶10名健康受试者单剂口服加替沙星片 2 0 0mg ,反相高效液相色谱法 (HPLC)测其血清、尿药物浓度。结果∶受试者单剂口服加替沙星片 2 0 0mg后 ,人体耐受良好 ,体内过程符合二室开放模型。药物口服后迅速吸收 ,达峰时间短 ,tmax为 (1.0 8± 0 .38)h ,血cmax为 (1.0 8± 0 .18)mg/L ,AUC0 -∞ 为 (9.0 1±0 .15 )mg·h/L ,V/Fc值为 (133.0 3± 36 .39)L/ 5 5kg。消除半衰期平均为 (7.84± 1.83)h ,48h尿累积回收率为 (6 2 .3± 8.0 )%。结论∶加替沙星口服吸收良好 ,血峰浓度高于敏感菌MIC值 ,组织分布广 ,2 0 0mg每日 1～ 2次口服可用于治疗常见敏感细菌感染。

大黄抑制鼠疫耶尔森菌的体外转录组学研究

目的应用鼠疫菌全基因组芯片研究大黄抑制鼠疫菌的分子作用机制。方法液体稀释法测定大黄对鼠疫菌的最低抑菌浓度(MIC),以10倍MIC作用鼠疫菌30min,提取鼠疫菌总RNA,逆转录合成cDNA,荧光素标记,与芯片杂交,扫描仪扫描,应用SAM软件分析结果。结果获得了大黄作用鼠疫菌的表达谱。大黄作用鼠疫菌的明显差异基因为498个,其中上调基因358个,下调140个。结论蛋白质合成基因、细胞膜相关基因、转运结合蛋白基因以及部分热休克基因的改变是大黄抑制鼠疫菌的主要作用机制。

耐铬菌株CQMUXH-1耐受和还原Cr(Ⅵ)的特性研究

目的:探讨菌株CQMUXH-1耐受和还原C(rⅥ)的特性。方法:实验室模拟含C(rⅥ)环境,于各种不同的条件下(反应时间、pH、温度、C(rⅥ)浓度、其它污染物)培养细菌,测定细菌的生长量和(或)剩余C(rⅥ)浓度以评价菌株耐受和还原C(rⅥ)的能力。结果:菌株CQMUXH-1在30℃振荡培养5~20h为对数生长期;该菌株对C(rⅥ)的耐受能力明显高于对照菌大肠杆菌DH5α;该菌株在恒温振荡培养(37℃,200r/min)下,对100mg/LC(rⅥ)的去除率为84h73%;弱碱环境对CQMUXH-1的生长有较大影响,37℃培养能加快细菌的生长,Hg^(2+)、As^(3+)能明显抑制、Cu^(2+)能促进CQMUXH-1的生长。结论:菌株CQMUXH-1能耐受和还原较高浓度C(rⅥ),可有效应用于废水中C(rⅥ)污染的生物治理。

高效液相色谱法测定人血清和尿中加替沙星药物浓度

目的:建立高效液相色谱法测定血清和尿中加替沙星药物浓度。方法:采用 ODS-C_(18)柱(150 mm×4.6 mm,5μm,迪马公司),以0.008 mol·L^(-1)磷酸(2 mol·L^(-1)氢氧化钠溶液调 pH 为3.0)-乙腈(80:20,v/v,含0.005 mol·L^(-1)四丁基溴化铵)为流动相;血清及尿样品经10%三氯乙酸沉淀去蛋白后上柱分析。用内标法对加替沙星进行定量测定,内标物为诺氟沙星。结果:该法内标物和加替沙星出峰时间分别为2.8 min 和4.4 min,分离系数 R>2,分离效果好;加替沙星质控3种浓度(0.06,0.36,1.2 mg·L^(-1))日内、日间的 RSD,血清样品小于10%,尿样品小于7.6%;血清回收率为94.7%～105.6%,尿回收率为94.7%～98.8%;血清样品线性范围为0.015～2.4 mg·L^(-1),相关系数为0.9995,尿样品线性范围为0.015～4.8 mg·L^(-1),相关系数为0.9999;血清、尿样品加替沙星最低检出限分别为0.015及0.007 mg·L^(-1)。结论:HPLC 测定血清及尿中加替沙星浓度,准确、特异、稳定、灵敏,可用于相关研究。

卫生检验专业实验教学中引入条件开放性实验的探索

探讨了在卫生检验专业实验教学中引入条件开放性实验的可行性、实施程序、效果评价、存在的问题及未来的改进措施。条件开放性实验虽然存在需要改进和完善的地方,但能从多方面培养学生的实际动手能力、与人合作能力、全局意识、责任心等能力和素质,还能提高学生的学习热情与主动参与意识,促进师生间的和谐关系。

具六价铬高度耐受和祛除能力菌株的分离

目的从六价(Cr6+)铬污染环境中分离具有Cr6+高度耐受和祛除能力的菌株,以用于处理含高浓度Cr6+的废水。方法从Cr6+严重污染的河流中采集河底淤泥样品,采用选择性增菌培养筛选Cr6+耐受菌株,并从中进一步筛选Cr6+祛除的高效菌株。水中Cr6+的含量用二苯碳酰二肼分光光度法测定。结果从淤泥样品中分离出了20株能耐受300mg/LCr6+的菌株,其中Cr6+祛除能力最强的14号和18号菌株,分别能在144h内,使Cr6+浓度为200mg/L的LB培养液中Cr6+清除94.0%和100.0%。结论在铬(Ⅵ)污染的环境中分离出了高度耐受和祛除水中铬(Ⅵ)的菌株。

黄芪甲苷对H_2O_2致PC12细胞氧化应激损伤的保护作用

目的探讨黄芪甲苷对H2O2引起PC12细胞氧化应激损伤的保护作用与分子机制。方法用H2O2作用PC12细胞建立氧化应激损伤模型,通过MTT法检测细胞活力;Hoechst 33258染色观察细胞内核酸形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡、胞内活性氧的产生及细胞周期变化情况;Western blot检测细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin A、磷酸化p38及T-p38的表达。结果成功建立了H2O2致PC12细胞氧化应激损伤模型;黄芪甲苷能够提高H2O2损伤的PC12细胞的活力,提升因H2O2导致的细胞凋亡率的下降,降低H2O2所致的胞内ROS升高的状况。机制研究表明:黄芪甲苷通过恢复H2O2诱导细胞周期蛋白Cyclin D1表达下调的情况,调控各细胞周期的百分比,恢复细胞的正常增殖;进一步研究发现黄芪甲苷是通过抑制H2O2对p38的激活发挥作用的。结论黄芪甲苷对H2O2致PC12细胞氧化应激损伤具有保护作用,其作用机制可能是通过调控细胞周期蛋白Cyclin D1的表达来实现的,调控过程与p38/MAPK通路密切相关。该发现为临床上抗氧化治疗策略提供有益的实验依据。

超声乙醇法提取大豆异黄酮的研究

比较了索氏法与超声法、甲醇与乙醇提取大豆异黄酮的效果。分别以体积分数80%甲醇、60%乙醇、80%乙醇和100%乙醇4种溶剂为样品提取液,采用超声法与索氏提取法进行样品中大豆异黄酮的提取,用高效液相色谱法进行检测。结果表明:利用超声波能快速、高效提取大豆异黄酮;在相同超声条件下,利用乙醇与甲醇对大豆异黄酮具有相同的提取效果。结论超声法提取大豆异黄酮优于索氏法,可用于代替索氏法;可用更安全的乙醇作为提取液来取代甲醇。

头孢地尼对临床分离菌的体外抗菌活性

目的:测定头孢地尼体外抗菌活性并与其他抗菌药比较。方法:采用琼脂稀释法测定抗生素最低抑菌浓度(MIC)。结果:651株细菌测定结果表明,头孢地尼对甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌(MSSA、MSSE)抗菌作用与头孢唑林、头孢呋辛相似,较头孢他啶强;对 MSSA、MSSE的 MIC90分别为 1、0.5 mg/L,细菌敏感率分别为 97%、100%。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌(MRSA、MRSE)、肠球菌对本药耐药,MIC90分别为＞128mg/L、8mg/L、＞128mg/L。头孢地尼对革兰阴性菌抗菌活性与头孢他啶相似,对大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、奇异变形杆菌MIC90分别为 2、4、1、0.25与 2 mg/L,敏感率分别为 85%、88%、100%、100%、88%,对部分细菌抗菌活性较阿米卡星、左氧氟沙星、司帕沙星强。聚团肠杆菌、阴沟肠杆菌、粘质沙雷菌、醋酸钙不动杆菌、铜绿假单胞菌对本药耐药,MIC90均＞128 mg/L。结论:头孢地尼对甲氧西林敏感葡萄球菌属、常见肠杆菌科细菌具强大的抗菌作用。

干灰化-火焰原子吸收分光光度法测定头发中钙铁锌铜

采用干灰化法处理发样，用火焰原子吸收分光光度法连续测定其Fe、Zn、Ca、Cu的含量。结果表明，本方法相对标准偏差≤2%，加标回收率83.65%~113.2%。本法简便有效，能同时大批量测定样品，检测结果准确。

肺炎克雷伯菌转录调控子CRP对菌株粘附能力及细胞活性的影响

目的分析肺炎克雷伯菌临床分离株WT(wild type)、回补株(c-Δcrp)和突变株(Δcrp)对人肺癌上皮细胞A549细胞的粘附能力及细胞活性的影响。方法肺炎克雷伯菌WT株、c-Δcrp株和Δcrp株感染人肺癌上皮细胞A549,经裂解液裂解后平板计数计算粘附的菌量。LDH释放法检测细菌对细胞的毒性,优化感染时间和感染指数。结果 WT株及c-Δcrp株粘附的菌量分别为logCFU=5.145和logCFU=4.915,均高于Δcrp株(logCFU=4.122),差异有统计学意义(F=8.366,P=0.004)。以MOI=1 000(细菌∶细胞=1 000)的菌量感染靶细胞,37℃孵育8 h,加底物液避光显色10 min,离心所得上清稀释10倍进行测定为最佳反应条件。WT株对细胞的毒性百分比(70.69%)明显高于Δcrp株(19.54%),差异有统计学意义(t=8.843,P=0.001)。结论 crp基因敲除后,突变株的细胞毒性和粘附力明显下降,肺炎克雷伯菌转录调控子CRP对菌株粘附力及细胞活性具有正向调控作用。

细胞能量矛盾——帕金森病进展的主要推动力及防治对策

帕金森病是常见的老年神经变性疾病,目前机制不清,无有效的治疗方法。线粒体功能障碍与帕金森病密切相关。认为,某些常见的环境因素和身体状态,如环境毒物、受寒、人体的免疫反应、炎症因子、感染、应激状态等,可导致多巴胺能神经元等常见易损伤的细胞发生能量矛盾,并因此造成线粒体损伤累积,认为这是导致帕金森病发病和病情进展的主要推动力。针对能量矛盾的产生,采取减少能量干扰和促进线粒体功能的策略,将会对阻止帕金森病的进展和研发有效的治疗方法,起到良好的促进作用。

基于实验的《卫生理化检验》理论教学设计思考

卫生理化检验是卫生检验学的重要组成部分,是预防医学专业的重要基础课程。重庆医科大学公共卫生与管理学院开设预防医学本科专业的《卫生理化检验》课程,旨在培养学生的卫生检验基本理论知识和操作技能,提高学生预防医学理论和卫生检验实践的能力。该文根据现行的实验教学,从理论课程的时间安排、授课方式和测试标准3个方面入手,对如何更加合理有效地设计《卫生理化检验》的理论课程进行探讨。