不同浓度噻苯隆对芒果果实品质和有机酸组分的影响

为探讨不同浓度噻苯隆处理与果实营养成分及有机酸组分含量的相关性,筛选在芒果生产中噻苯隆的最佳施用浓度。以8、16、32、64mg/L4个浓度梯度的噻苯隆浸泡芒果小果2次,测定不同浓度噻苯隆处理后果实大小、果形、营养成分和有机酸含量,并探讨噻苯隆浓度与这些指标的相关性。结果表明:不同浓度噻苯隆处理对芒果果实生长具有较明显的作用,随着噻苯隆浓度的升高,贵妃芒果单果重、纵径、横径均呈增加趋势,且均呈极显著正相关;果实可滴定酸含量也随噻苯隆浓度的增加而提高,而可溶性糖、维生素C含量均与噻苯隆浓度呈负相关,其中可溶性糖相关系数为-0.982,达到极显著水平;32mg/L噻苯隆处理芒果蛋白质含量最高。芒果主要有机酸组分为柠檬酸、莽草酸、苹果酸和奎尼酸,其中柠檬酸含量占比为43.46%,其次为莽草酸,占比18.28%。噻苯隆浓度与芒果柠檬酸、莽草酸含量均呈负相关,其中与柠檬酸含量相关性达极显著水平;与苹果酸、奎尼酸含量均呈正相关,但均未达到显著水平。施用噻苯隆可促进芒果生长,提高单果重和纵横比,对果实内在品质也有一定的影响,其浓度影响程度总体为64mg/L>32mg/L>16mg/L>8mg/L。

芒果MinSPP基因的克隆及表达载体构建

磷酸蔗糖磷酸酶(sucrose phosphate phosphatase)是合成蔗糖的关键酶,为了研究其在芒果果实中蔗糖合成的作用机制,从芒果果肉中克隆得到1个与蔗糖合成相关的基因,将其命名为MinSPP,其cDNA全长序列为1561bp,开放阅读框为1275bp,编码424个氨基酸,蛋白质分子量为48.46ku,等电点为5.34,对MinSPP基因编码的蛋白进行系统发育分析,发现其与克莱门柚具有较近的亲缘关系。采用qRT-PCR对该基因在后熟处理的贵妃芒果肉中的表达量进行分析,结果显示从青熟期到成熟期芒果果肉中该基因表达量逐渐上升,从成熟期到完熟期芒果果肉表达量逐渐降低,其中成熟期芒果果肉中表达量较高。本研究深入了解了芒果蔗糖合成的分子机制,进一步构建了pBI121-MinSPP过表达载体,为MinSPP的功能鉴定奠定了理论基础。

微小RNA-744在动脉粥样硬化患者中表达的诊断和预后意义评估

目的:动脉粥样硬化(Atherosclerosis, AS)是一种常见的血管疾病,是冠心病、缺血性心肌病、心力衰竭、血栓栓塞病的病理基础,具有较高的发病率和死亡率。近期大量的研究证明microRNAs (miRNAs)在AS的诊断和预后中发挥着至关重要的作用。本研究通过检测miR-744在AS中的表达情况,进一步评估miR-744对AS诊断和预后价值的影响。方法:采用荧光定量PCR技术检测120例AS患者和58例健康对照人群血清中miR-744的表达情况。通过受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析miR-744的诊断的价值。使用Spearman相关系数评估miR-744与颈动脉内膜–中膜厚度(CIMT)的相关性,利用Kaplan-Meier生存曲线和多因素Cox回归分析miR-744在AS中的预后价值。结果:相较于健康对照组,AS患者血清中miR-744的表达水平显著降低(P 【0.001),且miR-744的表达水平与CIMT值呈显著负相关性(r = −0.776, P 【0.001)。ROC曲线的AUC为0.887,特异性为93.33%,敏感性为82.85%,证实miR-744可能是AS的潜在的良好诊断标志物。生存分析表明miR-744低表达的患者发生心血管事件的概率较高(log rank P = 0.005),miR-744可能是AS的潜在预后标志物(HR = 2.680, 95%CI = 1.105~6.503, P = 0.029)。结论:miR-744的低表达可能是良好的AS诊断标志物,并且与AS的不良预后相关。

芒果MinMYB10基因的克隆及表达分析载体的构建

MYB(myeloblastosis)转录因子主要参与调控植物类黄酮代谢、植物生长发育等。为了研究在芒果果实中类黄酮代谢调控机制,本研究从金煌果肉中克隆得到一个MYB基因,将其命名为MinMYB10,其全长cDNA序列为1021 bp,开放阅读框为837 bp。该基因编码的蛋白有278个氨基酸残基,分子重量为31.60 ku,等电点为5.89。通过系统发育分析发现MinMYB10与拟南芥是亲缘关系较近的蛋白。本研究还构建了基因沉默载体pTRV2-MinMYB10和过表达载体pGreenⅡ62-SK-MinMYB10,以期在后续研究中探明MinMYB10基因在芒果果实花青素代谢中的作用。

微小RNA-139-5p对AS患者血管平滑肌细胞增殖和迁移作用的研究

目的:检测微小RNA-139-5p(miR-139-5p)在动脉粥样硬化(AS)患者中的表达情况,分析miR-139-5p的临床价值及对人血管平滑肌细胞(HVSMCs)生物学功能的调控作用。方法:采用荧光定量PCR技术检测112例AS患者(AS组)和78例健康志愿者(对照组)血清miR-139-5p的表达情况,用受试者工作特征曲线(ROC曲线)评估miR-139-5p对AS的诊断价值。采用CCK-8实验和Transwell实验分析miR-139-5p对HVSMCs增殖和迁移能力的影响。结果:与对照组相比,AS组患者miR-139-5p的表达明显下调(P<0.001),同时AS组患者血清miR-139-5p的表达水平与颈动脉内中膜厚度(CIMT)呈负相关(r=-0.7579,P<0.001)。miR-139-5p诊断AS的ROC曲线下面积(AUC)为0.888,具有较高敏感性(86.6%)和特异性(84.6%)。miR-139-5p低表达会促进HVSMCs的增殖和迁移能力,相反miR-139-5p过表达会显著地抑制HVSMCs的增殖和迁移能力(P<0.001)。结论:miR-139-5p的低表达可能是AS的潜在诊断标志物,过表达miR-139-5p可能通过抑制HVSMCs的增殖和迁移发挥改善AS的潜能。

芒果无机焦磷酸酶基因的克隆及其表达载体构建

无机焦磷酸酶(inorganic pyrophosphatase,PPase)催化焦磷酸(PPi)水解为2个无机正磷酸(Pi),是蔗糖合成途径中的调控关键节点之一。本研究根据已经报道的PPase基因的序列设计兼并引物,采用3′RACE和5′RACE方法,从贵妃芒果的果实中克隆得到了一个芒果PPase基因,将其命名为MiPPase,其全长cDNA序列为1014 bp,开放阅读框为837bp,编码278个氨基酸,分子量为30.85ku,等电点为4.68。通过系统发育分析发现该基因编码的蛋白与红花烟草具有较近的亲缘关系。为深入探究MiPPase基因在蔗糖代谢过程中的作用,本研究成功构建出pGreenII62-SK-MiPPase基因过量表达载体,为后续研究MiPPase基因在芒果果实蔗糖合成的作用机理提供理论依据。

茄科植物中HCT基因家族的鉴定及进化和表达分析

莽草酸/奎宁酸羟基肉桂酰转移酶(shikimic acid/quinic acid hydroxy cinnamyl transferase,简称HCT)是辣椒素苯丙烷代谢途径中关键的限速酶,其催化的产物对茄科植物具有重要的生理学意义。为了探清HCT在茄科植物基因组中的状况,重点考察了其在茄科植物基因组中的分布,并利用生物信息学分析的方法,对HCT基因进行全面的鉴定,共获得拟南芥、烟草、番茄和辣椒的13条基因序列。其次,构建了HCT在茄科植物中的系统发育树,并对其进行相关的结构、功能和表达的分析。结果揭示了茄科植物中HCT基因的亲缘关系;HCT基因编码的蛋白结构域高度保守,该保守性体现在植物的结构和功能上。本研究为进一步研究茄科植物中的HCT基因的酶学及生理功能提供了基础。

陈旧性腔隙性脑梗死对初发脑梗死患者预后判断的影响

[目的]探讨陈旧性腔隙性脑梗死(LI)对初发脑梗死患者预后判断的影响。[方法]回顾性分析本院收治的145例存在陈旧性LI病史的初发脑梗死患者的临床资料。根据陈旧性LI情况病灶的数目分为A组(病灶≤4个)、B组(病灶>4个)。比较两组脑微出血分级、脑白质病变程度分级、颅内动脉钙化评分。对影响患者预后的因素进行回归分析。[结果]与A组比较.B组患者中3級脑微出血的比例明显增多(P<0.05),2.3级脑白质病变的比例明显增多(P<0.05),颅内动脉钙化评分3分以上的比例明显增多(P<0.05).Spearman分析显示陈旧性Ll病灶数目与脑微出血分级程度,脑白质病变程度和颅内动脉钙化评分呈正相关(Rs=0.735,0.774,0.695,P<0.05)。多因素COX回顾分析显示:陈旧性LI病灶数目、脑微出血分级、脑白质病变程度分级、颅内动脉钙化评分、出院后未使用抗血小板药、出院后未使用他汀类药物是初发脑梗死患者预后的独立危险因素(P<0.05)。[结论]陈旧性LI病灶数目与脑微血管病变、脑白质病变程度和颅内动脉钙化评分密切相关,且都是初发脑梗死患者预后的独立危险因素.

植物转化酶家族基因鉴定及序列进化分析

转化酶CWIN(Cell wall invertase)、VIN(Vacuolar invertase)和CIN(Cytoplasmic invertases)是蔗糖代谢途径中蔗糖转化成葡萄糖和果糖的关键酶,直接参与了植物蔗糖代谢的生物合成。为了系统梳理转化酶相关基因在植物基因组中的状况,实验室对其基因进行了全面的鉴定和进化分析,并重点考察植物在拟南芥和番茄中的表达。首先,实验室针对CWIN、VIN和CIN的基因序列,鉴定得到其保守结构域,在此基础上对相关基因进行了全面鉴定,从而构建了其进化树;其次,将拟南芥(Arabidopsis thaliana)和番茄(Solanum lycopersicum)CDS序列比对到各探针,从而从数据库中提取组织中的表达数据;最后,通过结构域鉴定、进化树和表达量的分析,得出CWIN、VIN和CIN在植物中的生物合成的机理。本研究为转化酶相关基因提供了基因信息,为植物中蔗糖代谢生物合成途径的作用机理及对蔗糖代谢影响相关基因进化机制的研究提供帮助。

槟榔叶表微生物基因组DNA提取方法的比较

为确定槟榔叶表微生物基因组DNA的最佳提取方法,本研究采用改良CTAB法、MP Biomedicals土壤试剂盒、QIAGEN土壤试剂盒、天根多糖多酚植物试剂盒和MP Biomedicals植物试剂盒分别提取槟榔叶表微生物基因组DNA,通过超微量分光光度计测定、变性梯度凝胶电泳和聚合酶链式反应(PCR)对提取效果进行比较。结果表明,采用MP Biomedicals植物试剂盒提取的DNA效果最好,DNA浓度为81.57μg/mL,A_(260)/A_(280)值为1.80,A_(260)/A_(230)值为2.06,PCR扩增产物亮度高、无杂带,且具有提取时间短、效率高、污染小等特点。本研究为槟榔叶表微生物基因组DNA的提取提供了参考,为后续进行分子生物学实验提供了科学依据。

植物UDP-葡萄糖焦磷酸化酶家族基因鉴定及序列进化分析

UDP-葡萄糖焦磷酸化酶(UDP glucose pyrophosphorylase, UGP)是糖代谢合成途径中的一个关键酶。UGP以葡萄糖-1-磷酸和尿苷三磷酸为底物,催化反应生成尿苷二磷酸葡萄糖和焦磷酸,直接参与了植物糖代谢的生物合成。为了系统梳理UGP在植物基因组中的状况,我们对其基因进行了全面的鉴定和进化分析,并重点考察该基因在番茄中的表达。首先,我们针对UGP的基因序列,鉴定得到其保守结构域,在此基础上对相关基因进行了全面鉴定,从而构建了其进化树;其次,将番茄CDS序列比对到各探针,从而从数据库中提取组织中的表达数据;最后,通过结构域鉴定,进化树和表达量的分析,得出UGP在植物中的生物合成的机理。本研究为UDP-葡萄糖焦磷酸化酶提供了基因信息,为植物中糖代谢生物合成途径的作用机理及其对蔗糖合成的影响相关基因进化机制的研究提供帮助。

杧果中DXS基因的鉴定及与其他植物的比较分析

1-脱氧-D-核酮糖5-磷酸合成酶(1-deoxy-D-xylulose-5-phosphate synthase, DXS)是2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸(2-C-Methyl-D-erythritol-4-phosphate, MEP)途径的第一个关键酶。本研究鉴定了杧果DXS基因,以拟南芥DXS基因为参考,通过BLASTP方法获得了番木瓜、金钱橘、甜橙、苹果、桃子、白梨、葡萄、中华猕猴桃、无油樟、小果野蕉的DXS基因的蛋白序列,共32条序列,对其进行了保守结构域、保守基序、系统发育、理化性质、蛋白二级结构分析等研究。保守结构域及保守基序分析结果表明,杧果DXS蛋白包含一个PLN02582结构域,保守结构域内包含6个motif,其宽度、排列顺序与大多数植物相同,说明DXS基因家族具有高度保守性。系统发育分析结果显示,单子叶植物纲与双子叶植物纲的DXS基因没有分别形成分支,推测在进化过程中DXS基因的分化在双子叶植物纲和单子叶植物纲形成之后。理化性质分析及蛋白二级结构分析结果显示,稳定性蛋白占65.63%,碱性蛋白占25%,所有蛋白均为亲水性蛋白。杧果DXS蛋白为酸性、不稳定蛋白,具有亲水性。杧果DXS蛋白的二级结构主要结构元件是无规则卷曲、α-螺旋。本研究为进一步阐明杧果DXS基因在萜类合成途径中的功能提供了理论依据。

杧果成熟过程中果肉可溶性糖组分分析

甜味是影响水果风味品质的重要因素,而甜味主要由糖含量决定。杧果含糖量高,风味浓郁,但不同品种间甜味差异较大。为深入了解糖组分代谢机制,本研究针对不同杧果品种甜味差异大的问题,主要分析了‘贵妃’、‘土杧’和‘白象牙’3个杧果品种果肉糖含量。通过HPLC测定了杧果青熟期和完熟期两个时期的蔗糖、葡萄糖和果糖的含量变化,结果显示:在3个品种完熟期果实中,蔗糖含量均最高,果糖含量次之,葡萄糖含量最低。针对不同品种而言,蔗糖含量最高的是‘贵妃’,果糖含量最高的是‘土杧’,而葡萄糖含量最高的是‘白象牙’。在果实后熟的过程中,‘贵妃’和‘白象牙’果实中的蔗糖含量上升幅度较大,其次是果糖,而葡萄糖含量呈下降趋势;‘土杧’果实中3种糖含量均呈上升趋势,其中果糖含量上升幅度最大。‘贵妃’的总糖含量和甜度值最高;‘白象牙’的最低。由此可见,杧果在成熟过程中的蔗糖含量最高,果糖含量次之,葡萄糖含量最低。本研究拟通过对不同杧果品种果实中蔗糖、葡萄糖和果糖的积累模式阐述不同杧果品种在后熟过程中果肉蔗糖、葡萄糖和果糖的含量变化及趋势。并解析其影响果实风味不同的机制。

植物蔗糖合酶家族基因鉴定及序列和进化分析

蔗糖合酶(SUS)是植物中广泛存在的一种糖基转移酶,而蔗糖磷酸合成酶(SPS)是高等植物体内控制蔗糖合成的关键酶之一。对于SUS与SPS是否来自同一源头,其序列是否存在同源区域,以及其进化路径等,尚未见相关报道。本研究针对这两个酶的基因序列,鉴定得到其保守结构域,在此基础上对相关基因进行了全面鉴定,从而构建了其进化树。从序列上看,这两种酶(SUS,SPS)具有一定的同源性。通过结构域鉴定,SPS1基因的蛋白序列中鉴定得到3个结构域,而从SUS1中鉴定得到2个结构域;由以上结果可知,SUS和SPS属于同一基因家族。通过进化树构建,SUS、SPS家族的基因聚成了两个显著独立枝。因此,SUS、SPS分别属于一个独立的亚家族。本研究为植物糖代谢相关研究提供了基因靶标,为蔗糖代谢和转运相关基因进化机制的研究提供了基础。

杧果中DXR基因的鉴定及与其他果树的比较分析

1-脱氧-D-核酮糖5-磷酸还原酶(1-deoxy-D-xylulose 5-phosphate reductoisomerase, DXR)是2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸(2-C-Methyl-D-erythritol-4-phosphate, MEP)途径的一个关键酶。本研究以杧果DXR基因作为研究目标,通过BLASTP方法获得了甜樱桃、白梨、西洋梨、苹果、桃子、枇杷、金钱橘、甜橙、葡萄、软枣猕猴桃、榴莲、枣、番木瓜、小果野蕉、凤梨的DXR基因的蛋白序列,共18条序列,对其进行了保守结构域、保守基序、系统发育、理化性质、蛋白二级结构分析等研究。保守结构域及保守基序分析结果表明:杧果DXR蛋白包含一个PLN02696结构域,保守结构域内包含5个motif,其宽度、排列顺序与其他15种果树均相同,说明DXR基因家族具有高度保守性。系统发育分析结果显示:单子叶植物纲与双子叶植物纲的DXR基因分别形成了分支,推测在进化过程中DXR基因的分化至少在双子叶植物纲和单子叶植物纲形成之前。理化性质分析及蛋白二级结构分析结果显示:所有蛋白均为酸性、无信号肽蛋白,稳定性蛋白占38.9%,亲水性蛋白占44.4%,杧果DXR蛋白为稳定的亲水性蛋白;杧果DXR蛋白的二级结构主要结构元件是无规则卷曲、α-螺旋。本研究为进一步研究杧果DXR基因在萜类合成途径中的作用提供理论支持。

植物磷酸蔗糖磷酸酶家族基因鉴定及序列和进化分析

磷酸蔗糖磷酸酶(sucrose phosphate phosphatase,SPP)是蔗糖合成途径中的关键酶;二磷酸尿苷葡萄糖和6-磷酸果糖为底物,蔗糖磷酸合成酶催化生成磷酸蔗糖,磷酸蔗糖在磷酸蔗糖磷酸酶作用下水解形成蔗糖。为了系统梳理SPP在植物基因组中的状况,我们对SPP基因进行了全面的挖掘、鉴定和进化分析,并重点分析该基因在番茄中的表达。首先,针对SPP的基因序列,挖掘得到2个蛋白结构域;其次,对该基因进行全面鉴定,构建其进化树,可发现SPP是从高等植物开始登陆的;最后,将番茄CDS序列比对到各探针,从数据库中提取组织中的表达数据,表明野生型番茄的表达量较高。本研究为磷酸蔗糖磷酸酶提供了基因信息,为植物中蔗糖合成途径的作用机理及其进化机制提供了基础研究。

芒果MinSPS1基因的克隆及表达载体的构建

蔗糖磷酸合成酶(sucrose phosphate synthase, SPS)既是调控蔗糖合成的关键酶又是限速酶,为了研究其在芒果果实中蔗糖合成的作用机理,本研究从芒果果肉中克隆得到一个与蔗糖合成相关的基因,将其命名为MinSPS1,其cDNA全长序列为3 344 bp,开放阅读框为3 168 bp,编码1 055个氨基酸,蛋白质分子量为118.13 k D,等电点为6.08,对MinSPS1基因编码的蛋白进行系统发育分析,发现其与柑橘具有较近的亲缘关系。采用qRT-PCR对该基因在后熟处理的贵妃芒果肉中的表达量进行分析,结果显示在完熟期贵妃芒果肉中表达量较高,而在青熟期表达量较低。本研究为深入了解芒果蔗糖合成的分子机理,进一步构建了p CAMBIA1301-MiSPS1过表达载体,为MinSPS1的功能鉴定提供理论依据。

芒果MinMYBPA基因的克隆及载体的构建

MYB (Myeloblastosis)是植物最大的转录因子家族之一,广泛参与植物代谢调控。为了研究其在芒果果皮中花青苷合成的作用机理,本研究从芒果果皮中克隆得到一个与花青苷合成相关的基因,将其命名为MinMYBPA,其cDNA全长序列为1 081 bp,开放阅读框为843 bp,编码280个氨基酸,蛋白质分子量为32.09 k D,等电点为9.01,对MinMYBPA基因编码的蛋白进行系统发育分析,发现其与克莱门柚具有较近的亲缘关系。本研究为深入了解其在芒果花青素合成和积累的分子机理,进一步构建了pTRV2-MinMYBPA沉默表达和pGreenⅡ62-SK-MinMYBPA过表达载体,为MinMYBPA的功能鉴定提供参考依据。

橡胶树中碱性转化酶HbNIN9表达及酶学特性分析

转化酶作为蔗糖分解代谢的关键酶,在植物生长发育、生物与非生物胁迫响应等生理过程中发挥重要作用。基于对橡胶树不同组织转录组数据库的分析,本研究克隆了一个在橡胶树种子中有较高丰度表达的中碱性转化酶基因HbNIN9;系统进化分析和在线软件预测均显示其亚细胞定位为线粒体,属于中碱性转化酶α亚族成员;利用原核表达体系成功获得Hb NIN9优化表达的重组蛋白,优化表达的诱导条件为0.5 mmol/L IPTG,25℃培养6 h;酶学特性分析表明,HbNIN9蛋白酶活反应的最适温度为45℃,最适pH值为7.5,米氏常数Km值为18.09 mmol/L。本研究从蛋白水平证实了Hb NIN9为典型的中碱性转化酶,有助于深入揭示线粒体型转化酶在橡胶树种子糖代谢中生理功能,丰富橡胶树中碱性转化酶家族成员的生理生化研究。

香蕉BADH基因序列及表达特性分析

甜菜碱醛脱氢酶(BADH)是植物体内甜菜碱合成过程中的关键酶,对植物抵御逆境具有重要作用。为研究香蕉BADH基因序列及表达特性,本研究利用香蕉基因数据库对香蕉BADH基因序列及蛋白序列进行生物学信息分析,采用qTR-PCR技术对香蕉幼苗中BADH基因进行表达分析。结果表明:MaBADH基因属单克隆基因,含有15个外显子,14个内含子;顺式调控元件预测显示在MaBADH启动子区域存在15种激素和逆境胁迫相关的顺式调控元件;蛋白结构域和功能分析有一个甜菜碱醛脱氢酶结构域具有氧化还原酶活性;亚细胞定位在叶绿体中,多重序列比对发现其具有N-端信号肽和C-端信号肽两种信号肽;系统进化树显示其与水稻、玉米、菠萝亲缘关系最近。基因表达分析发现MaBADH具有组织特异表达特性,在叶片中相对表达量最高,假茎次之,根最低;此外,茉莉酸甲酯能够诱导香蕉幼苗根和叶中MaBADH差异表达,其中对叶片的诱导能力更强。本研究为激素信号调控甜菜碱分子保护机制和利用基因工程提高香蕉抗逆性提供了参考依据。