结直肠癌组织高表达IL-35对Th1和Th17可塑性的作用

目的 探讨结直肠癌组织中高表达的抑制性细胞因子白细胞介素(IL)-35对辅助性T细胞1(Th1)和辅助性T细胞17(Th17)可塑性的作用。方法 选取2019年3月—2020年2月上海交通大学医学院附属新华医院结直肠癌患者90例(结直肠癌组)和健康体检者28名(正常对照组)。采用流式细胞术检测结直肠癌组和正常对照组外周血Th1百分比(Th1%)和Th17百分比(Th17%)。基于Kaplan-Meier Plotter数据库分析γ-干扰素(IFN-γ)和IL-17A高表达对结直肠癌患者总生存期和预后不良的影响。采用免疫组化法检测结直肠癌患者癌组织和癌旁组织(距肿瘤边缘≥2 cm)中IL-35的表达。采用酶联免疫吸附试验检测结直肠癌患者和正常对照者血清IL-35水平。采用体外诱导Th1分化实验观察IL-35对Th1分泌IL-17A和IFN-γ的影响。结果与正常对照组比较,结直肠癌组Th1%显著降低(P=0.019),Th17%显著升高(P<0.001)。结直肠癌组Th1%与Th17%的r2值(0.393 4)与正常对照组(0.041 0)比较差异有统计学意义(P=0.007)。基于KaplanMeierPlotter数据库的分析结果显示,IFN-γmRNA低表达是结直肠癌患者总生存期缩短的危险因素[风险比(HR)=0.74,95%可信区间(CI)为0.58~0.94,P=0.013],IL-17A mRNA高表达是结直肠癌患者总生存期缩短的危险因素(HR=1.26,95%CI为1.02~1.59,P=0.020)。结直肠癌患者癌组织IL-35表达显著高于癌旁组织(P<0.001)。Ⅰ~Ⅱ期(早期)和Ⅲ~Ⅳ期(晚期)结直肠癌患者血清IL-35水平均显著高于正常对照者(P<0.05)。体外诱导Th1分化实验结果显示,IL-35可降低Th1中IFN-γ表达,提高IL-17A表达。结论 结直肠癌患者外周血Th1和Th17呈异常变化,且IL-35表达增加。高表达的IL-35可降低Th1中IFN-γ表达,提高IL-17A表达。

鲍曼不动杆菌生物被膜形成能力的研究

目的:研究鲍曼不动杆菌生物被膜形成能力的影响因素,为临床防治鲍曼不动杆菌医院感染和控制其生物被膜形成提供依据。方法:收集2017年10月至12月上海交通大学医学院附属新华医院感染患者分离到的101株鲍曼不动杆菌,利用结晶紫染色法检测其生物被膜在不同温度条件下的形成能力;采用VITEK 2 Compact全自动微生物分析仪联合纸片扩散法对菌株进行药物敏感性(药敏)试验;用PCR技术检测菌株生物被膜形成相关基因(bap、abaI、bfmS、csuAB、csuA、csuC、csuD、csuE、cpaA、ompA)的携带情况。结果:在25℃条件下,101株鲍曼不动杆菌的生物被膜形成阳性率(93.1%)比35℃时(60.4%)高(P<0.05);临床分离株对氨苄西林/舒巴坦和氨基糖苷类药物的耐药率与生物被膜形成能力间存在一定关系(P<0.05),生物被膜形成能力为强阳性(++)的菌株对上述抗菌药物的耐药率显著低于生物被膜形成能力为阳性(+)或阴性(-)的菌株的耐药率,但是耐药率并不是随着生物被膜形成能力的增强而降低的,生物被膜形成能力为阳性(+)的菌株的耐药率反而高于形成能力为阴性(-)的菌株。鲍曼不动杆菌生物被膜形成能力的强弱与其是否携带以上10种相关基因间并无统计学相关性(P>0.05)。结论:鲍曼不动杆菌生物被膜形成能力与培养温度有关,与培养温度35℃相比,25℃条件时生物被膜形成能力高,亦与氨苄西林/舒巴坦及氨基糖苷类药物的耐药率间存在某种关联,但其与是否携带生物被膜形成相关基因(bap、abaI等)无关。

应用MSK试剂盒-质谱法直接鉴定阳性血培养标本

目的评估应用MALDI Sepsityper^(TM)Kit与MicroflexTMLT型基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪(MSK试剂盒-质谱法)直接鉴定阳性血培养标本中微生物的可行性与临床价值。方法 2014年3—8月,应用MSK试剂盒-质谱法和传统血培养鉴定法对上海交通大学医学院附属新华医院临床阳性血培养标本中微生物进行鉴定。若两者鉴定结果不符,则用基因测序法予以确认。结果 491例阳性血培养标本中,462例为单种菌,29例为复数菌,共包括30个属和64个种。应用MSK试剂盒-质谱法直接鉴定血培养标本中单种菌的种、属水平符合率分别为72.5%(335/462)、76.0%(351/462)。其中革兰阴性菌的种、属水平符合率分别为75.4%(132/175)、77.7%(136/175);革兰阳性菌的种、属水平符合率分别为70.9%(178/251)、74.9%(188/251);念珠菌的种、属水平符合率均为75.0%(27/36)。复数菌血培养标本中鉴定出1种、2种细菌的种水平符合率分别为55.2%(16/29)、20.7%(6/29)。应用MSK试剂盒-质谱法直接鉴定血流感染中临床常见菌的属水平符合率达74.2%~96.9%,鉴定时间仅需40 min/样本。结论应用MSK试剂盒-质谱法能准确和快速地鉴定血流感染常见菌,从而缩短血流感染诊断时间,为临床上快速、合理选用抗生素提供依据。

分离胶促凝管联合MALDI-TOF MS直接检测血培养阳性细菌

目的建立用分离胶促凝管联合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）直接检测血培养阳性待测菌的方法并评估其鉴定符合率。方法共收集阳性血培养491例,利用分离胶促凝管直接从血培养瓶中富集并提纯菌体,采用MALDI-TOF MS对待测菌进行菌种鉴定,同时对报阳性血培养瓶进行转种培养,纯菌落用Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统（简称Vitek 2 Compact）进行鉴定。若两者鉴定结果不一致,则以基因测序结果予以确证。结果 491例阳性血培养瓶鉴定出的待测菌包括30个属和64个种。在462例单菌株感染血培养瓶中,菌株的种、属鉴定符合率分别为73.6%和3.7%。其中175例革兰阴性菌的种、属鉴定率分别为84.0%（147例）和2.9%（5例）;251例革兰阳性菌的种、属鉴定率分别为75.3%（189例）和4.4%（11例）;36例念珠菌的种、属鉴定率分别为19.4%（7例）和2.8%（1例）。在29例复数菌感染血瓶中,鉴定出其中一种细菌的种、属鉴定率分别为79.3%（23例）和10.3%（3例）。血流感染中常见病原菌的菌种鉴定符合率达83.3%～96.9%。结论本研究建立了分离胶促凝管联合MALDI-TOF MS直接检测血培养阳性待测菌的方法,与传统的培养鉴定方法相比,对血流感染中主要病原菌的鉴定符合率较高,且方法快速、简便,成本低廉,适合在临床微生物实验室中推广应用。

Microflex^(TM) MALDI-TOF MS和Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统对肠杆菌科细菌鉴定能力的比较

目的比较MicroflexTM基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)和Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统(简称Vitek 2 Compact)对肠杆菌科细菌的鉴定能力。方法采用MicroflexTMMALDI-TOF MS和Vitek 2 Compact同时对545株肠杆菌科质控菌株和临床分离菌株进行鉴定,鉴定结果不一致者采用沙门菌血清凝集试验或细菌16S r DNA基因测序予以确证。结果 MicroflexTMMALDI-TOF MS对545株细菌的种和属的鉴定率分别为97.1%、2.9%。Vitek 2 Compact对545株细菌的种、群、属的鉴定率分别为83.3%、13.9%和2.2%,鉴定错误率为0.2%,未鉴定率为0.4%。结论 MicroflexTMMALDI-TOF MS对肠杆菌科细菌的鉴定符合率高于Vitek 2 Compact,且操作快速、简便,成本低,可用于临床肠杆菌科细菌的常规快速鉴定。

血培养阳性标本处理流程再造的初步探索

目的·以分离胶促凝管联合Microflex?基质辅助激光解析电离飞行时间质谱直接检测血培养阳性标本中细菌,并依据质谱鉴定结果进行直接药敏试验,对传统血培养阳性标本处理流程再造进行初步探索。方法·收集2015年9月1日至2016年8月31日上海交通大学医学院附属新华医院临床微生物实验室血培养报阳单菌株感染标本449份,按照新的血培养阳性标本处理流程进行操作。改造后的新处理流程主要包括:涂片染色镜检、分离胶/质谱直接鉴定、菌膜/质谱鉴定、纯菌落/质谱鉴定、直接药敏试验和常规药敏试验等。依据镜检、鉴定与药敏试验结果依次发出:Ⅰ级直接镜检报告、阳性血培养Ⅱ级(直接鉴定/菌膜鉴定或直接药敏)报告和Ⅲ级最终报告。结果·改造后的新处理流程在工作当日10:00、17:00和次日10:00可分别获得82.2%、95.8%和100%阳性血标本中细菌"种"水平鉴定结果并报告至临床;对于经初步评估有临床意义的病原菌在血培养阳性报警次日就能发出初步药敏结果报告,且与常规药敏结果有较高的符合率。结论·与传统处理流程相比,改造后的处理流程使得血培养瓶阳性报警至发送初步鉴定和药敏结果所需时间缩短1~2 d,为临床医师提供快速准确的血流感染病原学诊断依据,对提高临床血流感染的早期诊断和治疗能力具有重要意义。

耐碳青霉烯类大肠埃希菌临床分离情况及碳青霉烯酶基因研究

目的:研究碳青霉烯酶基因,探讨临床分离的大肠埃希菌碳青霉烯类抗生素的耐药基因分布情况,为相关抗感染治疗提供依据。方法:收集2009年3月至2017年10月期间,我院住院患者临床标本中分离到的非重复耐碳青霉烯类大肠埃希菌菌株;使用MicroflexTMMALDI-TOF MS进行菌种复核;用Vitek-2 Compact全自动微生物分析仪联合纸片扩散法进行药物敏感性试验;采用碳青霉烯类抗菌药物灭活试验(modified carbapenem inactivation method,mCIM)快速筛查大肠埃希菌的产碳青霉烯酶表型;采用耐药基因常规PCR及测序的方法检测常见碳青霉烯酶基因;另收集所有患者的临床资料,分析其临床特征。结果:2009年3月至2017年12月,我院住院患者临床标本中分离到的非重复耐碳青霉烯类大肠埃希菌共84株。药物敏感性(药敏)试验结果显示,只有氨基糖苷类抗生素中阿米卡星的耐药率<50%,其他各种药物的耐药率都非常高,达到80%~100%。mCIM检测共筛选出71株产碳青霉烯酶菌株,而耐药基因PCR及测序的结果则显示,有65株携带blaNDM,以blaNDM-5(64.6%,42/65)和blaNDM-1(24.6%,16/65)为主,其中2株同时携带blaNDM-1和blaMCR-1。另有6株携带blakpc-2,未检测到blaGES、blaIMP、blaVIM、blaOXA等碳青霉烯酶基因。检测到产碳青霉烯酶菌株来自23个科室的17种标本,其中尿液占30.95%(26/84)和痰占21.43%(18/84);标本检出产碳青霉烯酶的患者则以儿科最多(66.7%,56/84)。儿童及婴幼儿中分离的大肠埃希菌中产酶型占96.4%(54/56),且以产酶型别blaNDM-5最多(63.0%,34/54);而老年患者中分离的非产酶型大肠埃希菌占62.5%(10/16);在这些患者中,54%(45/84)的患者在住院期间曾接受过手术,33%(28/84)的患者曾接受留置深静脉导管等侵入性医疗操作。结论:我院临床患者分离到的耐碳青霉烯类大肠埃希菌呈多重耐药,产碳青霉烯酶的类型为NDM和KPC 2种,其中NDM-5检出率高达50%(42/84);来自儿科病房尤其是儿重症病房的标本,耐碳青霉烯类大肠埃希菌分离率最高。

线性和非线性定量在同位素稀释质谱法中应用的比较

目的比较同位素稀释质谱法时,采用线性和非线性响应函数制作校准和(或)标准曲线对结果的影响。方法实验室建立的同位素稀释质谱法检测伊立替康及其3种主要代谢产物,使用C18反相柱梯度洗脱,以ABSciex API 3200检测。按《液相色谱-质谱临床应用建议》完成方法学验证。结果伊立替康(CPT-11)、SN-38G和APC在4.6~4.7 min出现洗脱峰,SN-38约在5.2 min出现洗脱峰。检测4种分析物的3种浓度质量控制(QC)样本,分别以线性函数、二次函数、三次函数和新的线性最小二乘法Padé[1,1]近似拟合分析,比较4种拟合方法计算得出的结果偏差。结论结果适合线性标准曲线时,优先应用线性;非线性校准曲线时,三参数有理函数一定程度上可以消除同位素稀释分析中不必要的误差源。

比较 Bruker Microflex MALDI-TOF MS和 Vitek 2 Compact 全自动分析系统对酵母菌的鉴定能力

目的：比较Bruker Microflex MALDI-TOF MS和Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统对酵母菌的鉴定能力。方法回顾性研究。利用 Bruker Microflex MALDI-TOF MS 和 Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统同时对2013年3月至2014年3月上海交通大学医学院附属新华医院临床标本分离得到的742株酵母菌进行鉴定，结果不符菌株用基因测序予以确证。结果 Bruker Microflex MALDI-TOF MS和Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统对699株念珠菌的种鉴定符合率分别为100％（699／699）和99.6％（696／699），对43株酵母样菌的种鉴定符合率分别为90.7％（39／43）和79.1％（34／43）。这2种仪器均未鉴定出马尔尼菲青霉菌，但本研究利用MALDI-TOF MS技术建立了马尔尼菲青霉菌的蛋白质图谱。结论 Bruker Microflex MALDI-TOF MS对酵母菌的鉴定率高于Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统，且操作快速简便，成本低廉，准确率高，可用于临床微生物实验室常见酵母菌的常规鉴定。（中华检验医学杂志，2015，38：382-386）

基于基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪快速鉴定结果的阳性血培养中常见细菌直接药物敏感性试验的评估

目的 :为有效缩短阳性血培养中常见细菌药物敏感性(药敏)试验的报告周转时间,探讨在基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)直接鉴定结果的基础上,对阳性血培养中的常见细菌直接进行药敏试验的可行性。方法:应用MALDI-TOF MS直接鉴定阳性血培养中的细菌,对其中能够准确鉴定的常见细菌直接进行纸片扩散法(Kirby-Bauer法,K-B法)和自动微量稀释测最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)法药敏试验(直接药敏试验)。同时,将血培养阳性细菌按常规操作流程转种至合适的培养基,培养过夜后获得的纯菌落再进行K-B法和MIC法常规药敏试验。将直接药敏试验结果与常规药敏试验结果进行比对。结果:以常规药敏试验结果为标准,革兰阳性球菌的K-B法和MIC法直接药敏试验结果与之符合率分别为98.5%和98.4%,小误差率均为0.9%,大误差率分别为0.6%和0.7%;革兰阴性杆菌的K-B法和MIC法直接药敏试验结果的符合率分别为97.8%和98.1%,小误差率分别为1.4%和1.1%,大误差率分别为0.8%和0.9%。以血培养阳性报警为起始时间,阳性血培养中细菌直接药敏试验的报告周转时间约为24 h,而常规药敏试验的报告周转时间约需48 h。结论:阳性血培养中常见细菌的直接药敏试验结果与常规药敏试验结果高度相符,且直接药敏试验的报告周转时间可提前至24 h。因此,结合MALDI-TOF MS快速鉴定的结果,对阳性血培养中的常见细菌直接进行药敏试验可在临床微生物室中推广应用,为临床及时、合理和有效的抗生素治疗提供可靠依据。

源自皮肤分泌物的金黄色葡萄球菌毒力因子研究

目的:对分离自皮肤分泌物标本的金黄色葡萄球菌进行毒力基因检测,初步探讨并分析这些毒力因子的分布与相应的皮肤病种类及患者年龄间的关系。方法:收集新华医院临床微生物实验室2010年12月至2012年4月从皮肤科患者的皮肤分泌物标本分离得到的100株不重复的金黄色葡萄球菌。采用聚合酶链反应(PCR)检测这100株细菌的eta、etb、sea、seb、sec、seh、pvl和tst这8种毒力基因,并对其进行基因测序。结果:sec、seb、seh、sea、eta、tst、pvl、etb基因检出率依次为16%、15%、14%、12%、3%、2%、2%、1%。其中分离自特应性皮炎患者的金黄色葡萄球菌检出毒力基因eta、sea、seb、sec、seh和pvl,分离自银屑病患者的菌株检出毒力基因seb、sec和tst,分离自葡萄球菌性烫伤样皮肤综合征患者的菌株检出毒力基因eta、etb、sea、seb、sec和pvl,分离自湿疹患者的菌株检出毒力基因sea、seb、sec和seh,而分离自天疱疮及类天疱疮患者的菌株仅检出毒力基因sec。结论:分离自皮肤病分泌物标本的金黄色葡萄球菌中各毒力基因的分布与相应的皮肤病种类及患者年龄间有一定相关性。