用于细胞活性研究的高重频脉冲磁场装置

一定时间的脉冲磁场序列可刺激某些类型的细胞和组织产生有益的生物效应。由于磁体本质上是一个大感性负载,难以同时实现磁体电流的高di/dt和高精度调节。为此,该文提出一种两级联合调控拓扑,前级电路为同步降压电路,用于实现di/dt随磁场期望值同步调节,后级电路是桥式电路,用于实现脉冲磁场波形周期、振幅、稳定度、刺激间隔等参数的控制,为了实现电流从快速上升到稳定值的平滑过渡,引入一种由滞环控制器和PI控制器组成的混合型控制器。在此基础上,研制了频率范围为1 Hz~5 kHz、脉冲边沿小于50μs、可调精度为0.1 mT、峰值强度高达10 mT的便携式高频脉冲磁场发生装置样机,并应用于脉冲磁场对高龄小鼠的体外成熟卵母细胞受精和胚胎发育能力影响的研究。在脉冲磁场作用下囊胚形成率从15.15%提高至52.94%,表明脉冲磁场显著促进了高龄小鼠体外成熟卵母细胞的发育能力。

少弱精子症患者睾丸组织中NOSTRIN的表达及其与eNOS的相关性研究

目的通过测定少弱精子症患者睾丸组织中内皮型一氧化氮合酶运输介导物(endothelial nitric oxide syn-thase traffic inducer,NOSTRIN)和内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的表达,探讨其与少弱精子症发病的相关性。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测11例严重少弱精子症患者(病例组)和7例正常男性(正常组)睾丸组织中NOSTRIN mRNA的表达;分光光度法测定睾丸组织中eNOS的活性;应用硝酸还原酶法测定睾丸组织上清液中NO代谢产物NO2-/NO3-水平。结果病例组患者睾丸组织中NOSTRIN mRNA呈弱表达(0.312±0.076),明显低于正常组(0.793±0.082,P<0.01);病例组患者睾丸组织eNOS活性[(33.73±3.58)U/mg]与正常组[(17.69±3.84)U/mg]比较显著增强(P<0.01);病例组患者睾丸中NO2-/NO3-水平为(48.56±8.49)μmol/L,较正常组(25.37±9.61)μmol/L显著升高(P<0.01);病例组睾丸组织中NOSTRIN表达水平与eNOS活性呈负相关(r=-0.57,P<0.01),与NO代谢产物NO2-/NO3-同样呈负相关(r=-0.61,P<0.01)。结论少弱精子症患者睾丸组织中NOSTRIN表达水平降低,eNOS活性增强,NO2-/NO3-水平升高,可能与少弱精子症的发生有着相关性。

维生素E抑制子痫前期脐血清诱导脐静脉内皮细胞中NOSTRIN表达上调的体外研究

目的：探讨子痫前期患者脐血清诱导脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell，HUVEC）中人内皮型一氧化氮合酶运输介导物（endothelial nitric oxide synthase traffic inducer，NOSTRIN）的表达及维生素E对其表达的调节作用。方法：采用消化培养法培养正常晚孕妇女的HUVEC，传代后待细胞长满至70％～80％后，加或不加维生素E作用30min后分别加入正常妊娠（正常组）及子痫前期（子痫前期组）脐静脉血清，培养48h后，MTI测定细胞活力，RT-PCR测定NOSTRINmRNA的表达，分光光度法测定细胞上清中eNOS的活性。结果：子痫前期患者脐静脉血清培养的HUVEC，其细胞的活力明显低于正常组（P〈0．05），细胞中NOSTRINmRNA的表达量明显高于正常妊娠组（P〈0．01），细胞上清中eNOS的活性明显低于正常组（P〈0．01）；加维生素E预处理后，子痈前期组细胞的活力明显升高（P〈0．05），其细胞中NOSTRIN的表达水平明显下降（P〈0．01），eNOS活性明显升高（P〈0．01）。结论：子痫前期患者脐静脉血清可使HUVEC细胞活力降低、NOSTRIN表达增加以及eNOS活性降低，维生素E可抑制子痫前期患者脐静脉血清诱导的NOSTRIN表达的增加以及eNOS活性降低。

妊高征患者胎盘组织中NOSTRIN表达的研究

目的:观察内皮型一氧化氮合酶运输介导物(endothelial n itric oxide synthase traffic inducer,NOSTR IN)在妊高征(pregnancy induced hypertension syndrom e,PIH)患者胎盘组织中的表达,探讨其在血管病变中的作用。方法:HE染色观察胎盘绒毛血管病变;硝酸还原酶法测定胎盘组织中的NO代谢产物亚硝酸基/亚硝基(NO2ˉ/NO3ˉ);分光光度法测定胎盘组织中eNOS的活性;W estern b lot检测胎盘血管组织中NOSTR IN蛋白质的表达。结果:HE染色可见PIH组胎盘细小血管壁增厚,管壁纤维素样坏死发生率显著高于对照组(P<0.01);PIH组孕妇胎盘组织中的NO2ˉ/NO3ˉ为(27.53±7.48)μmol/mg,与对照组(54.27±9.53)μmol/mg比较显著降低(P<0.01);PH I组患者胎盘组织eNOS活性(12.826±3.61)U/mg与对照组(21.720±3.83)U/mg比较显著降低(P<0.01);W estern b lot显示,两组胎盘组织中均有58kDa的NOSTR IN蛋白质表达,但PIH组表达量明显增高(P<0.01)。PIH组胎盘组织中NOSTR IN表达水平与eNOS活性呈负相关(r=-0.58,P<0.01)。结论:NOS-TR IN表达增加参与了妊高征患者胎盘绒毛血管的病变过程。

线粒体融合基因2在小鼠卵巢组织中的表达及意义

目的:检测小鼠卵巢组织中线粒体融合基因2(Mfn2)的表达、ATP水平以及卵巢组织的超微结构,探讨Mfn2与卵巢功能的相关性。方法:采用Western blot和real-time PCR分别检测年轻组(8～10周龄,20例)和老龄组小鼠(52～54周龄,20例)卵巢组织中Mfn2蛋白和Mfn2 mRNA的表达;磷钼酸比色法检测小鼠卵巢组织中ATP含量;透射电镜观察卵巢组织的超微结构。结果:老龄组小鼠卵巢组织中Mfn2蛋白的表达水平(0.234±0.120)显著低于年轻组(0.876±0.460),差异有统计学意义(P<0.01)。老龄组小鼠卵巢组织中Mfn2 mRNA相对表达量为(0.0063±0.0034)显著低于年轻组(0.0232±0.0045),差异有统计学意义(P<0.01)。老龄组小鼠卵巢组织中ATP含量[(20.6±7.2)μmol/g]显著低于年轻组[(33.8±11.5)μmol/g]。电镜显示,年轻组小鼠卵巢组织中的线粒体形态规则,轮廓光滑完整,线粒体嵴排列基本规则,老龄组小鼠卵巢组织中线粒体断裂增加,线粒体嵴肿胀,线粒体内出现空泡。结论:老龄组小鼠Mfn2表达水平下降,线粒体出现功能下降和结构损伤。Mfn2表达水平下降可能参与与年龄相关的卵巢功能维持。

NOSTRIN基因克隆及其在人脐静脉内皮细胞中的表达

目的 :构建内皮型一氧化氮合酶运输介导物 (endothelialnitricoxidesynthasetrafficinducer ,NOSTRIN)基因的真核表达载体 ,通过质粒转染人脐静脉内皮细胞 (humanumbilicalveinendothelialcell,HUVEC)获得高表达NOSTRIN基因的细胞克隆。方法 :构建真核表达载体pcDNA3.1 NOSTRIN ,采用脂质体介导将重组质粒导入体外培养的HUVEC ,Westernblot检测转染细胞和未转染细胞中NOSTRIN蛋白质的表达。结果 :成功构建了真核表达载体pcDNA3.1 NOSTRIN ,并用脂质体介导的方法获得了高稳定表达NOSTRIN的细胞克隆 ;Westernblot显示转染前后的细胞均有 5 8kD的蛋白质表达 ,转染后表达量明显增高。结论 :重组质粒pcDNA3.1 NOSTRIN经转染能在HUVEC细胞中高效表达 。

子痫前期-子痫患者胎盘组织中内皮型一氧化氮合酶运输介导物与内皮型一氧化氮合酶的相关性研究

目的:通过测定子痫前期-子痫患者胎盘组织中内皮型一氧化氮合酶运输介导物(endothelial nitric oxide synthase traffic inducer,NOSTR IN)和内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的表达,探讨它在子痫前期-子痫发病中的作用。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测21例子痫前期-子痫患者(病例组)和17例正常晚孕妇女(正常组)胎盘组织中NOSTR IN mRNA的表达;W estern blot检测胎盘组织中NOSTR IN和eNOS蛋白质的表达;分光光度法测定胎盘组织中eNOS的活性;应用硝酸还原酶法测定孕妇静脉血中的NO代谢产物亚硝酸基/亚硝基(NO2-/NO3-)。结果:病例组患者胎盘组织中NOSTR IN mRNA呈强表达,明显高于正常组(P<0.01);W esternblot显示两组胎盘组织中均有58kDa的NOSTR IN蛋白质表达,但病例组表达量明显增高(P<0.01),同时也均有145kDa的eNOS蛋白质表达,两组表达量比较无差异(P>0.05);病例组患者胎盘组织eNOS活性为13.727±3.58 U/mg,与正常组的21.69±3.84U/mg比较降低显著(P<0.01);病例组孕妇外周血清NO2-/NO3-为38.56±8.49μmol/l,与正常组的65.37±9.61μmol/l比较显著降低(P<0.01);病例组胎盘组织中NOSTRN表达水平与eNOS活性呈负相关(r=-0.57,P<0.01)。结论:子痫前期-子痫患者胎盘组织中NOSTR IN表达水平升高,eNOS活性降低,这可能在子痫前期-子痫的发病中起重要作用。

NOSTRIN在无精子症患者睾丸组织中的表达

目的:通过测定无精子症患者睾丸组织中内皮型一氧化氮合酶运输介导物(NOSTRIN)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达,探讨其与无精子症发病的相关性。方法:采用免疫组化法检测17例特发性无精子症患者(病例组)和10例正常男性(正常组)睾丸组织中NOSTRIN的定位和定量表达;RT-PCR检测睾丸组织中NOSTRINmRNA的表达;分光光度法测定睾丸组织中eNOS的活性;应用硝酸还原酶法测定睾丸组织上清液中NO代谢产物亚硝酸基/亚硝基(NO2-/NO3-)水平。结果:NOSTRIN在睾丸组织中表达于生精细胞、支持细胞以及血管内皮细胞,NOSTRIN在特发性无精子症患者睾丸中的表达水平显著低于正常男性;病例组患者睾丸组织中NOSTRINmRNA呈弱表达(0.312±0.076),明显低于正常组(0.793±0.082,P<0.01);病例组患者睾丸组织eNOS活性[(33.727±3.58)U/mg]与正常组[(17.69±3.84)U/mg]比较显著增高(P<0.01);病例组患者睾丸中NO2-/NO3-水平为[(48.56±8.49)μmol/L],与正常组[(25.37±9.61)μmol/L]比较显著升高(P<0.01);病例组睾丸组织中NOSTRIN表达水平与eNOS活性呈负相关(r=-0.57,P<0.01),与NO代谢产物NO2-/NO3-同样呈负相关(r=-0.61,P<0.01)。结论:无精子症患者睾丸组织中NOSTRIN表达水平降低,eNOS活性增强,NO-/NO-水平升高,这可能与无精子症的发生有着相关性。

人脐静脉内皮细胞中肿瘤坏死因子-α诱导NOSTRIN基因表达上调的实验研究

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中内皮型一氧化氮合酶运输介导物(NOSTRIN)基因表达的诱导作用以及二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对此诱导作用的抑制。方法:将培养的内皮细胞分为3组:第1组为无任何处理的HUVEC,第2组为子痫前期(PE)患者血清作用的HUVEC,第3组为正常晚孕妇女血清作用的HUVEC。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测3组细胞中NOSTRIN mR-NA的表达。酶联免疫吸附实验(ELISA)检测PE患者和正常孕妇血清中TNF-α含量。用1,3,5ng/ml3种浓度的TNF-α分别作用3组细胞6h,以及用浓度3ng/ml的TNF-α作用3组细胞分别达6h、12h、24h,RT-PCR检测NOSTRIN mRNA的表达;将PDTC(5mmol/ml)与TNF-α(3ng/ml)同时作用以及TNF-α(3ng/ml)单独作用3组细胞6h,RT-PCR检测NOSTRIN基因mRNA的表达。结果:3组细胞中都有NOSTRIN表达,第2组表达量显著高于第1组和第3组(P<0.01)。ELISA结果显示,PE患者血清中TNF-α含量显著高于正常晚孕妇女(P<0.01)。TNF-α作用HUVEC细胞后NOSTRIN显著高表达,呈时间和剂量依赖关系(P<0.01)。PDTC和TNF-α同时作用的HUVEC与TNF-α单独作用的HUVEC相比,其NOSTRIN表达显著降低(P<0.01)。结论:TNF-α可上调NOSTRIN在HUVEC中的表达。

妊高征患者胎盘组织中胎盘异铁蛋白的表达及其与血清VCAM-1的相关性研究

目的 :观察胎盘异铁蛋白 (PLF)在妊娠高血压综合征 (妊高征 )患者胎盘组织中的表达 ,及其与患者血清中血管细胞粘附分子 1(VCAM 1)的相关性。方法 :用免疫组化染色法检测 4 5例妊高征胎盘组织 (妊高征组 )和 15例正常妊娠胎盘组织 (正常组 )中PLF的表达 ,通过高清晰度彩色病理图文分析系统对其定量分析 ;用酶联免疫吸附双抗体夹心法 (ELISA)测定血清VCAM 1含量。结果 :在中、重度妊高征胎盘组织中PLF的表达明显低于轻度妊高征组和正常组 (P <0 .0 1) ;妊高征组血清VCAM 1水平 (1310± 177ng/ml)比正常组 (6 0 9± 72ng/ml)升高显著 (P <0 .0 1) ;胎盘组织中PLF表达水平与血清VCAM 1水平呈负相关 (r=- 0 .5 8,P <0 .0 1)。结论 :妊高征患者胎盘组织中PLF表达水平降低 ,与血清VCAM 1水平呈负相关 。

一氧化氮和内皮型一氧化氮合酶与妊娠高血压综合征

妊娠高血压综合征是产科严重的并发症 ,是引起孕产妇和围生儿死亡的主要原因之一 ,其病因及发病机理目前尚不十分清楚。近年 ,越来越多的研究表明 ,一氧化氮和内皮型一氧化氮合酶表达异常与妊娠高血压的发病有着密切的关系。国内外学者对此领域进行了一些大量研究 ,但仍存在着争议。现就一氧化氮和内皮型一氧化氮合酶与妊高征的发病关系作一综述。

内皮型一氧化氮合酶运输诱导物NOSTRIN基因的克隆与表达

目的 构成内皮型一氧化氮合酶运输介导物 (endothelialnitricoxidesynthasetrafficinducer,NOSTRIN)基因的原核表达重组体 ,并进行初步表达。方法 从人胎盘组织中提取总RNA ,经反转录 -聚合酶链式反应 (RT -PCR)扩增出NOSTRIN基因 ;将NOSTRIN基因克隆入 pGEM -T载体中 ,经DNA测序确认后 ,构建原核表达重组体 pRSET -NOS ,在工程菌BL2 1(DE3)中进行IPTG诱导表达。结果 所获得的NOSTRIN基因测序正确 ,并表达重组蛋白 ,经SDS -PAGE分析 ,相对分子量为 5 8KD。结论 构建的原核表达重组体 pRSET -NOS能高效表达重组NOSTRIN蛋白。

内皮型一氧化氮合酶运输介导物在子痫前期患者脐血管中的表达

目的研究内皮型一氧化氮合酶运输介导物(endothelial n itric oxide synthase traffic inducer,NOSTR IN)在子痫前期(pre-ec lampsia,PE)患者脐血管中的表达,探讨其在子痫前期发病中的作用。方法免疫组织化学法检测脐血管中NOSTR IN的表达,并通过高清晰度彩色病理图文分析系统对其定量分析;RT-PCR检测子痫前期患者脐血管组织中NOS-TR IN mRNA的表达。结果免疫组织化学显示正常妊娠和子痫前期患者脐血管中都有NOSTR IN的表达,但子痫前期患者脐血管内皮细胞胞浆染色为深棕色,而正常妊娠者脐血管内皮细胞胞浆染色为浅棕色;RT-PCR显示子痫前期患者脐血管组织中NOSTR IN mRNA的表达水平显著高于正常妊娠(P<0.01)。结论子痫前期患者脐血管组织中NOSTR IN表达增加,这可能是子痫前期发病机制的重要因素之一。

内皮型一氧化氮合酶运输介导物在子痫前期患者胎盘组织中的定位及定量研究

目的探讨内皮型一氧化氮合酶运输介导物(endothelial n itric oxide synthase traffic inducer,NOSTR IN)在子痫前期(pre-ec lampsia,PE)患者胎盘血管内皮细胞中表达的变化及其在子痫前期发病过程中的作用。方法HE染色后镜下观察胎盘组织及血管的病理变化,免疫组织化学方法及W estern b lot检测子痫前期患者胎盘组织中NOSTR IN的表达。结果HE染色显示子痫前期患者胎盘绒毛血管变细,数目减少,血管合体膜增厚,纤维素样坏死明显多于正常妊娠;免疫组织化学显示正常妊娠和子痫前期患者胎盘血管内皮细胞中都有NOSTR IN的表达,但子痫前期患者胎盘血管内皮细胞胞浆染色较正常妊娠明显增强;W estern b lot显示子痫前期患者胎盘组织中NOSTR IN的表达显著高于正常妊娠(P<0.01)。结论胎盘组织中NOSTR IN表达增加可能是子痫前期发病机制的重要环节之一。

胎盘异铁蛋白的研究进展

胎盘异铁蛋白 (placentalisoferritin ,PLF)是妊娠期胎盘合成分泌的一种特异性的蛋白质 ,其重链P4 3可与单克隆抗体CM H 9结合。PLF是胎盘功能的一种标志物 ,其免疫抑制作用对于维持正常妊娠必不可少 ,如果产生不足则可诱发早产或流产。PLF与多种病理妊娠、乳腺癌都有密切关系。

利用3种抗体流式分选母血中胎儿细胞的比较

目的比较单克隆抗转铁蛋白受体抗体(CD71McAb)、单克隆抗血型糖蛋白A抗体(GPAMcAb)和抗血红蛋白-ξ抗体(ξ-Hb)3种胎儿有核红细胞(FRBCs)特异性抗体在流式细胞仪上分选母血中胎儿细胞的检出率,评价分选胎儿细胞的最适方法。方法收集55例孕妇外周血,利用淋巴细胞分离液从中分离出单个核细胞层后,每例标本分为5组,分别加入不同抗体第1组CD71Mchb单用;第2组GPAMcAb单用;第3组ξ-Hb单用;第4组CD71+GPA联用;第5组CD71+GPA+ξ-Hb联用,孵育后流式细胞仪进行分选,应用PEP-PCR检测分选后的胎儿细胞的SRY基因。结果5组FNRBC的阳性细胞检出率及鉴定符合率分别为2.74%,77.14%;5.25%,65.4%;0.22%,95.7%;0.72%,98.6%;0.02%,60%。结论利用CD71McAb和GPAMcAb双重标记胎儿细胞进行分选或者利用抗ξ-Hb特异性McAb分选FRBCs是更有效的分选方法。

CR16在特发性无精子症患者睾丸组织中的表达

目的:研究糖皮质激素区域表达基因16(corticosteroids and regional expression 16,CR16)在特发性无精子症患者睾丸组织中的表达,探讨CR16在精子发生中的作用。方法:采用免疫组化法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CR16蛋白和CR16 mRNA在48例特发性无精子症患者(病例组)和10例正常生育男性(正常组)睾丸组织中的表达情况。结果:CR16蛋白表达于睾丸生精小管上皮,主要分布在支持细胞与生精细胞连接区,在特发性无精子症患者睾丸组织中的表达显著弱于正常生育男性睾丸组织中的表达。CR16 mRNA在病例组睾丸组织中的表达水平显著低于正常组。结论:特发性无精子症患者睾丸组织中CR16表达水平显著降低,这可能与无精子症相关。

妊高征患者胎盘组织中胎盘异铁蛋白表达的研究

目的观察胎盘异铁蛋白(p lacental isoferritin,PLF)在妊高征(pregnancy induced hypertension syndrom e,PIH)患者胎盘组织中的表达,探讨其在血管病变中的作用。方法HE染色观察胎盘绒毛血管病变;免疫组化染色法检测妊高征胎盘组织(妊高征组)和正常妊娠胎盘组织(正常组)中PLF的表达,通过高清晰度彩色病理图文分析系统对其定量分析;W estern b lot检测胎盘血管组织中PLF蛋白质的表达。结果HE染色可见妊高征组胎盘绒毛细小血管壁增厚,管壁纤维素样坏死发生率显著高于正常组(P<0.01);免疫组化染色定量分析发现,PLF在中、重度妊高征胎盘组织中的表达明显低于轻度妊高征组和正常组(P<0.01);W estern b lot显示两组胎盘组织中均有34kDa的PLF蛋白质表达,但PIH组表达量明显降低(P<0.01)。结论妊高征患者胎盘组织中PLF表达水平降低参与了妊高征患者胎盘绒毛血管的病变过程。

课程思政融入避孕与节育教学的思考和探索

避孕与节育的教学目标是帮助青年学生掌握避孕节育相关的科学知识,建立正确的生活方式,促进其身心健康。课程思政的本质是立德树人,因此将课程思政融入避孕与节育教学具有可行性。根据教学实践,提出课程思政融入避孕与节育教学的内容点,并指出教师要深度挖掘思政教育与知识点之间的内在关系,以“润物细无声”的方式实现教学目标。

胎盘异铁蛋白的表达异常与妊娠高血压综合征的关系

目的 通过比较正常孕妇与妊娠高血压综合征 (妊高征 )患者胎盘组织中胎盘异铁蛋白的表达 ,从分子免疫学角度探讨妊高征的病理机制。方法 用免疫组化染色法检测 30例妊高征胎盘组织 (妊高征组 )和 10例正常妊娠胎盘组织 (正常组 )中PLF的表达 ,通过高清晰度彩色病理图文分析系统对其定量分析。结果 PLF在中、重度妊高征胎盘组织中的表达明显低于轻度妊高征和正常组 ,两者间差异有非常显著意义 (P <0 .0 1)。结论 胎盘组织中PLF表达降低 ,导致母胎的免疫耐受的破坏 ,其异常的免疫反应可能是妊高征发病的重要机制。诱导PLF的产生或调节母胎的免疫耐受 ,将为临床治疗妊高征提供新的思路和方向。