CRISPR/CAS9敲除PD-1的肿瘤浸润T淋巴细胞回输对小鼠结肠癌的治疗作用

目的:探讨应用成簇规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白(CRISPR/Cas9)技术敲除程序性死亡分子-1(PD-1)的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)回输对结肠癌小鼠的治疗作用。方法:皮下注射CT26构建小鼠结肠癌模型,从3只模型小鼠肿瘤组织中提取TIL,并提取外周血淋巴细胞;对TIL进行PD-1基因敲除;回输实验分为对照组(Control)、输注淋巴细胞组(Lym)、输注荷瘤小鼠TIL组(TIL)、慢病毒空载对照组(pVSV-G-PX458-NC)组、PX458-PD-1-sgRNA1组(PD-1-sgRNA1),每组10只;测量各组小鼠肿瘤组织质量及肿瘤抑制率;TUNEL法检测各组小鼠肿瘤组织细胞凋亡;ELISA检测各组小鼠肿瘤组织TNF-α和IFN-γ含量;免疫组化检测肿瘤组织CD4+T、CD8+T细胞表达;免疫荧光法检测肿瘤组织细胞增殖核抗原-67(Ki-67)和血管内皮生长因子(VEGF)表达;Western blot检测肿瘤组织PD-1及其主要配体PD-L1表达。结果:PD-1-sgRNA1能明显抑制小鼠肿瘤细胞体内生长,抑制肿瘤组织Ki-67和VEGF表达及PD-1、PD-L1表达,提高肿瘤组织细胞凋亡率、TNF-α、IFN-γ含量、CD4+T、CD8+T细胞表达(均P<0.05)。结论:CRISPR/CAS9敲除PD-1的TIL回输能明显抑制结肠癌小鼠肿瘤组织Ki-67和VEGF表达,增加CD4+T、CD8+T细胞,诱导肿瘤细胞凋亡,发挥抑制肿瘤生长作用。

南蛇藤提取物对结肠癌肿瘤浸润淋巴细胞抗肿瘤效果的影响及机制

目的探究南蛇藤提取物(Celastrus orbiculatus extracts,COE)对结肠癌肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltrating lymphocyte,TIL)抗肿瘤效果的影响及其机制。方法收集2022年4月至2022年7月经手术切除的22例结肠癌样本,分离提取TIL,经鉴定后进行体外培养。TIL分为对照组(正常培养)、COE组(40 mg/L COE)、COE+Erastin组(40 mg/L COE+10μmol/L Erastin),通过MTT、流式细胞术、生化检测各组TIL体外存活、杀伤能力、凋亡情况、氧化应激水平,Western blotting检测铁死亡相关蛋白表达,裸鼠体内异种移植实验观察抑瘤效果。结果与对照组相比,COE组、COE+Erastin组体外存活、杀伤能力、GSH、GPX4提高(P<0.05),凋亡水平、ROS、MDA、DMT1、TFR1下降(P<0.05);与COE组相比,COE+Erastin组体外存活、杀伤能力、GSH、GPX4下降(P<0.05),凋亡水平、ROS、MDA、DMT1、TFR1上升(P<0.05)。体内异种移植实验结果显示,与SW480、HCT-116空白组相比,对照组、COE组、COE+Erastin组肿瘤体积、重量减小(P<0.05);与对照组相比,COE组、COE+Erastin组肿瘤体积、重量进一步减小(P<0.05);与COE组相比,COE+Erastin组肿瘤体积、重量增大(P<0.05)。结论COE通过增强GSH信号通路抑制TIL铁死亡,延长TIL体外增殖能力,增强对结肠癌细胞的杀伤效果。

老年功能性消化不良患者血浆神经肽S受体1、5-羟色胺的表达及其临床意义

目的探讨老年功能性消化不良(FD)患者血浆神经肽S受体1(NPSR1)、5-羟色胺(5-HT4)的表达及其临床意义。方法选取2020年2月—2022年8月在武汉市第一医院就诊的96例老年FD患者作为FD组,另取同期该院健康体检老年人80例作为对照组。对比FD组与对照组临床资料、血浆NPSR1、5-HT4水平。多因素逐步Logistic回归分析影响老年FD发生的相关因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析血浆NPSR1、5-HT4及两者联合检测对老年FD的诊断效能。结果FD组体质量指数、脂肪肝、睡眠障碍、焦虑、抑郁及IL-6、CCK及SS水平高于对照组(P<0.05),饮食规律、每周运动时间≥4 h占比及MTL水平低于对照组(P<0.05)。FD组血浆NPSR1水平低于对照组(P<0.05),5-HT4水平高于对照组(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示,睡眠障碍[O^R=2.735(95%CI:1.299,5.756)]、NPSR1[O^R=3.203(95%CI:1.461,7.023)]、5-HT4[O^R=3.093(95%CI:1.410,6.781)]为老年FD发生的危险因素(P<0.05);饮食规律[O^R=0.361(95%CI:0.165,0.792)]为老年FD发生的保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血浆NPSR1、5-HT4及两者联合诊断老年FD的敏感性分别为78.13%(95%CI:0.683,0.857)、75.00%(95%CI:0.649,0.830)、73.96%(95%CI:0.638,0.821),特异性分别为72.50%(0.95%CI:0.612,0.816)、81.25%(95%CI:0.706,0.888)、95.00%(95%CI:0.870,0.984),曲线下面积分别为0.779(95%CI:0.711,0.838)、0.784(95%CI:0.716,0.843)、0.891(95%CI:0.836,0.933)。结论老年FD患者血浆NPSR1、5-HT4水平高于健康者,且血浆NPSR1、5-HT4联合诊断老年FD的效能较高。

肠内营养联合聚乙二醇在结直肠肿瘤伴不全肠梗阻病人围手术期中的应用

目的:探讨口服肠内营养(EN)联合聚乙二醇对伴有不全肠梗阻的结直肠肿瘤病人行围手术期准备的可行性及疗效。方法:对结直肠癌伴有不全梗阻的病人分为两组,研究组(n=72)病人术前口服整蛋白型EN和聚乙二醇进行围手术期准备;对照组(n=105)病人术前给予流质饮食和冲服番泻叶行常规术前准备。观察两组病人术前营养评分、术中肠道清洁度、术后肛门首次排气时间、术后吻合口瘘、感染并发症、免疫指标以及血浆内毒素水平等。结果:研究组病人营养评分、肠道清洁度均好于对照组(P<0.05)。对照组病人感染并发症的发生率明显高于研究组。研究组病人术后第7天的Ig G、Ig M和CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平较对照组高,术前1 d血浆内毒素含量低于对照组,两组比较均有显著性差异(P<0.05)。结论:整蛋白型EN制剂联合聚乙二醇在结直肠肿瘤伴不全肠梗阻病人围手术期中的应用,不仅术中肠道清洁度满意,而且还能改善病人术后营养和免疫功能,保护肠黏膜屏障,加速胃肠功能的恢复。

SRC激酶抑制剂对前列腺癌细胞侵袭与增殖的影响

目的:以PP2[4-Amino-5-(4-Chloro-Phenyl)-7-(t-Butyl)Pyrazolo(3,4-d)Pyrimidine]药物(src激酶抑制剂)处理前列腺癌细胞,检测src激酶及E-cadherin蛋白表达水平的变化,探讨PP2对前列腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:PP2处理前列腺癌细胞PC-3,Western blot检测src及其相关蛋白的表达;Boyden小室实验检测细胞侵袭能力;MTT检测细胞的增殖能力。结果:PP2处理PC-3细胞后,src表达水平明显降低,E-cadherin表达水平升高;细胞的增殖和侵袭能力均受到明显抑制,剂量越高抑制作用越明显(P<0.05)。结论:PP2通过提高细胞黏附分子E-cadherin的表达抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖和侵袭能力。

原发性胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤临床病理与预后分析

目的探讨原发性胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤的临床病理特征、治疗方法、预后影响因素等。方法分析我院与天津医科大学总医院1994年至2006年收治的41例患者的病理及临床特点?治疗方法和预后。结果患者平均发病年龄63.6岁;男女比例为1.3∶1;症状以上腹不适、上腹隐痛、呕血和/或黑便为主者约占90.2%;内镜下主要表现为溃疡型肿物者约占61.0%,病变部位以胃窦小弯侧多见占78.0%;幽门螺旋杆菌阳性率为82.9%;82.9%的患者行手术切除治疗。患者平均5年生存率为51.5%,是否进行抗幽门螺旋杆菌治疗以及手术治疗方式的选择等对生存率有显著影响。结论原发性胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤发病以中老年人为主,男性稍多,临床症状不典型,大部分患者无明显体征,可疑患者应做胃镜及多处活检,对于中晚期患者如病情及患者身体条件允许,全胃切除术能提高生存率。

siRNA靶向干扰KLF17对结直肠癌细胞株SW480增殖和迁移的影响

目的利用小分子干扰RNA(small interfering RNA,s i R N A)技术探究体外沉默K rüp p e l样因子17(Krüppel like factor 17,KLF17)的基因表达对结直肠癌细胞株SW480细胞增殖和迁移的影响,为抑制结直肠癌复发转移奠定理论基础.方法使用基因重组方法构建KLF17的si RNA真核质粒表达载体,用电转染法转染至人结直肠癌SW480细胞中.使用荧光定量PCR检测KLF17、E-钙黏素(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的基因表达水平;用Western blot检测KLF17的蛋白表达以及细胞转移相关蛋白E-cadherin和Vimentin的表达.用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖活性.结果与对照组相比,转染si RNA后的SW480细胞培养48 h后增殖能力受到显著抑制,且细胞形态由圆形或多边形变成梭形并向外伸出多个细胞突起;转染si RNA后KLF17和E-cadherin蛋白表达以及基因表达水平显著降低,Vimentin的蛋白表达水平和基因表达水平显著升高.结论抑制KLF17的表达可以通过诱导结直肠癌细胞发生上皮-间质转化而促进其细胞的增殖以及转移.

前入路Stoppa手术治疗巨大难复性疝的临床应用

目的 评价前入路Stoppa手术治疗巨大难复性疝的疗效.方法 回顾、总结2011年8月至2015年1月对24例巨大难复性疝的病人运用前入路Stoppa手术修补的临床资料.结果 本组无手术死亡病例,24例病人无切口感染,术后疼痛轻、恢复快,随访23例,随访时间3～48个月,平均31.5个月,无复发病例.结论 前入路Stoppa手术治疗巨大难复性疝具有操作可行、并发症少、复发率低的优点,是针对巨大难复性疝较好的治疗方法.

芒硝外敷联合通腑合剂保留灌肠治疗术后早期炎性肠梗阻的护理

目的探讨芒硝外敷联合通腑合剂保留灌肠治疗术后早期炎性肠梗阻的疗效及护理方法。方法按随机数字表法将100例早期炎性肠梗阻患者分为观察组和对照组各50例,观察组在西医常规治疗的基础上,配合使用芒硝外敷及通腑合剂保留灌肠,对照组则配合生理盐水保留灌肠。结果治疗后观察组肠鸣音恢复时间、肛门排气时间、中医症候疗效指数、住院时间及临床疗效显著优于对照组(P<0.05,P<0.01)。结论芒硝外敷联合通腑合剂保留灌肠及西医常规治疗可提高术后早期炎性肠梗阻治疗效果。

结直肠癌组织中Krüppel样因子17的表达及其与预后的关系

目的研究Krüppel样因子17(Krüppel-like factor 17,KLF17)在结直肠癌组织中的表达及其与患者临床病理特征及预后的关系。方法收集武汉市第一医院128例结直肠癌患者的临床病理资料,采用免疫组织化学法检测KLF17在结直肠癌及对应的非癌结直肠黏膜组织中的表达,Kaplan-Meier法绘制生存曲线,Cox比例风险模型进行生存分析。结果 128例结直肠癌中,83例癌组织存在KLF17低表达。KLF17低表达与结直肠癌患者淋巴结转移相关(P=0.012)。KLF17低表达患者5年无病生存率及总生存率分别为46.3%和49.3%,明显低于KLF17高表达患者的78.3%和82.0%(P均=0.001)。Cox模型分析结果显示:KLF17、术前肠梗阻、肿瘤分化程度和病理学N分期是结直肠癌患者无病生存时间及总生存时间的独立预后因素(P均<0.05)。结论 KLF17低表达与结直肠癌淋巴结转移相关,是结直肠癌患者预后不良的一个潜在分子指标。

腰硬联合麻醉下免气腹腹腔镜阑尾切除术75例分析

目的总结并探讨蛛网膜下联合连续硬脊膜外阻滞麻醉下,免气腹行腹腔镜阑尾切除术的优势。方法蛛网膜下联合连续硬脊膜外阻滞麻醉下对75名急性阑尾炎患者行免气腹腹腔镜阑尾切除术。结果手术均成功,2例中转开腹手术、无手术并发症及死亡,所有手术患者都痊愈出院。结论蛛网膜下联合连续硬脊膜外阻滞麻醉下免气腹腹腔镜阑尾切除术能扩大腹腔镜阑尾切除术的手术适应证,尤其是对不能满足全身麻醉要求或二氧化碳气腹的患者更有优势。

芒硝外敷联合通腑合剂灌肠对腹部手术后胃肠动力的影响

目的:研究芒硝外敷联合通腑合剂保留灌肠对腹部手术后胃肠功能影响。方法:选取在医院就诊的328例肠麻痹患者,采用数表法随机将其分为观察组(165例)和对照组(163例),观察组术前、术后给予芒硝外敷联合通腑合剂保留灌肠;对照组术后6 h清水灌肠,比较两组术后肠鸣音出现、肛门排气时间、测定腹腔压力、胃电图振幅和频率以及血浆胃动素和胃泌素的变化。结果:观察组肠鸣音出现、肛门排气时间早于对照组,差异有统计学意义(t=7.56,t=8.32;P<0.05);腹腔内压力在术后一般低于对照组,术前、术后12 h和24 h腹腔压力测定比较,差异无统计学意义(t=1.56,t=1.71,t=1.53;P>0.05);术后胃电图正常慢波百分比在第24 h和第48 h要明显高于对照组,差异有统计学意义(t=6.32,t=6.71;P<0.05);胃电图平均振幅在第24 h和第48 h明显高于对照组,差异有统计学意义(t=7.69,t=8.62;P<0.05);胃动素水平在术后24 h和48 h明显高于对照组,差异有统计学意义(t=5.24,t=4.71;P<0.05);胃泌素水平在手术前后的观察组和对照组相比较,差异无统计学意义。结论:芒硝外敷联合通腑合剂保留灌肠可以有效促进患者在腹部手术后胃肠功能的早期恢复。

过表达KLF17对结直肠癌细胞SW480血管生成拟态以及体外侵袭能力的影响

目的:探讨转染KLF17基因对人结直肠癌血管生成拟态及体外侵袭能力的影响。方法:将KLF17表达质粒PIRES-EGFP-KLF17转染至SW480细胞中,以未转染质粒的细胞作为对照;荧光定量PCR和Western blotting法检测转染前后KLF17和血管生成拟态相关基因血管上皮钙黏附素(VE-cadherin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和粘连蛋白5γ2链(LN-5γ2)的mRNA和蛋白表达水平; Transwell实验检测KLF17基因转染对SW480细胞体外侵袭能力的影响。结果:转染KLF17表达质粒后SW480细胞中的KLF17基因和蛋白表达水平均显著高于正常细胞(P <0. 01)。过表达KLF17后SW480细胞中VE-cadherin、MMP-2和LN-5γ2的表达量以及细胞侵袭能力显著降低。结论:转染KLF17可以抑制结直肠癌细胞血管生成拟态相关基因的表达,抑制其血管拟态的形成,降低其体外侵袭能力。

腹腔镜疝修补术治疗腹膜透析后并发腹股沟疝

目的探讨腹腔镜疝修补术治疗腹膜透析后并发腹股沟疝的可行性。方法对26例慢性肾功能不全、长期接受腹膜透析后并发腹股沟疝行腹腔镜下疝修补术，术中对斜疝行腹腔镜下内环口缝扎并在腹腔内置入网片，对直疝行腹腔镜下疝囊高位悬吊后腹腔内置入网片。结果26例均获成功，无中转开放手术，术后无阴囊血肿、顽固性神经痛等。26例随访6-12个月，平均9个月，疝无复发。结论腹腔镜疝修补术治疗腹膜透析后腹股沟疝可行，有效，安全。

微米大黄炭白芨胶对上消化道内镜黏膜下剥离术后创面愈合的作用机制研究

目的探究微米大黄炭白芨胶在上消化道内镜黏膜下剥离术后创面愈合中的应用效果及可能机制。方法回顾性分析武汉市第一医院2019年10月—2021年10月收治的102例行上消化道内镜黏膜下剥离术患者的病历资料。根据治疗方案将其分为对照组和研究组,每组51例。对照组在上消化道内镜黏膜下剥离术后给予去甲肾上腺素联合埃索美拉唑治疗,研究组给予微米大黄炭白芨联合埃索美拉唑治疗。比较两组术前、术后凝血酶原时间(PT)、部分活化凝血酶原时间(APTT)、胃液及溃疡边缘黏膜中表皮生长因子(EGF)和血管内皮生长因子(VEGF)表达、溃疡愈合效果及安全性。结果两组术后出血发生率比较,差异无统计学意义(P<0.05)。研究组术前、术后1周PT、APTT差值均低于对照组(P<0.05)。研究组术后4周与术后即刻溃疡指数差值高于对照组(P<0.05)。研究组术前、术后4周胃液中EGF、VEGF差值高于对照组(P<0.05)。两组术后4周溃疡边缘黏膜中EGF、VEGF阳性表达率均高于术前(P<0.05),研究组高于对照组(P<0.05)。两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论微米大黄炭白芨胶应用于上消化道内镜黏膜下剥离术后有助于促进创面愈合,可能与提高EGF、VEGF表达促进胃黏膜屏障重建有关。

下腹正中切口行腹膜前修补治疗嵌顿疝37例临床分析

目的探讨经下腹正中切口行腹腔探查联合腹膜前间隙修补的手术方式在嵌顿疝治疗中的应用价值。方法回顾总结我院2008年1月至2011年11月行下腹正中切口进行腹腔探查，再行腹膜前间隙修补的37例嵌顿疝患者的临床资料。结果无手术死亡病例，无伤口感染。3例患者术后阴囊积液，穿刺抽液后痊愈。本组随访6—36个月，术后无复发。结论经下腹正中切口行腹腔探查及腹膜前间隙修补在嵌顿疝的治疗中安全、有效，减少手术并发症，降低了术后复发率。

伴有同侧全髋关节置换手术史的腹股沟疝手术术式的选择

目的探讨全髋关节置换术后同侧腹股沟疝病人的手术方式的选择及手术难点。方法 2010年3月~2018年5月,有全髋关节置换手术史伴同侧新发腹股沟疝的手术病人21例,分析手术中的解剖特点及术式选择。本组21例病人种,9例病人选用腹腔镜手术,其中行腹腔镜下经腹腔腹膜外疝修补术(TAPP)手术7例,腹腔镜下完全腹膜外疝修补术(TEP)手术2例;开放手术12例,均采用Lichtenstein手术。结果 17例病人有不同程度的耻骨膀胱间隙粘连,腹膜前内侧间隙分离困难,难以完全暴露耻骨支;而Lichtenstein手术层次间隙清晰,操作顺利。结论全髋关节置换术后同侧腹股沟疝病人,会有不同程度的耻骨膀胱间隙粘连,选用Lichtenstein为主要手术方式,减少耻骨膀胱前间隙的大面积分离。

Jagged2在结肠癌中的表达及临床意义

目的探讨Jagged2在结肠癌中的表达及其临床意义.方法应用免疫组化、实时定量PCR及蛋白质印迹等方法检测Jagged2在42例结肠癌及癌旁组织中的表达,并结合免疫组化结果及结肠癌患者的临床病理资料进行统计学分析.结果结肠癌及癌旁组织中均检测到Jagged2 mR NA和蛋白质的表达.Jagged2在结肠癌中的表达水平明显高于其对应的癌旁组织(P<0.05);免疫组化染色结果显示,Jagged2在结肠癌组织中的阳性比例显著高于癌旁组织(85.7%vs 33.3%,χ~2=23.92,P<0.01),且Jagged2的表达与肿瘤分化程度、Dukes分期、淋巴结转移及浸润深度密切相关(P<0.05).结论Jagged2在结肠癌肿瘤组织中表达上调,可能与结肠癌的发生发展和浸润转移等恶性生物学行为相关.

腹腔开放技术在胃肠外科中应用的价值分析

目的分析腹腔开放技术在胃肠外科中的应用价值。方法回顾性分析2006年至2010年我院6例采用腹腔开放技术患者的临床资料。结果6例患者均采用早期腹腔开放技术控制腹腔感染，暂时关腹保护创面，二期行确定性手术关闭腹腔，均恢复良好，无继发肠瘘、切口疝、腹腔脓肿的发生。结论腹腔开放技术对于胃肠外科严重腹腔感染、严重创伤及肠瘘的治疗是安全可靠、方便应用的。

大柴汤在大鼠全身炎症反应综合征中的作用

目的:通过TNF-αI、L-6的变化,观察大柴汤对实验性大鼠全身炎症反应综合征(SIRS)的影响,并探讨其可能机制。方法:将大鼠分为造模组和治疗组,建立大鼠SIRS模型,分别检测2组大鼠不同时段的TNF-aI、L-6水平变化及生存率和死亡率,并比较差别。结果:治疗组的TNF-aI、L-6水平较造模组明显下降,且具有显著性差异(P<0.05)。结论:柴黄汤具有抑制过度炎症反应,改善病情的严重程度的作用。