基于网络药理学和分子对接研究红花黄色素延缓衰老的作用机制

目的使用网络药理学和分子对接方法探究红花黄色素延缓衰老作用。方法利用PubChem、PharmMapper、SwissTargetPrediction和TargetNet数据库查询红花黄色素相关基因;借助Uniprot数据库查询红花黄色素化合物对应基因名称;Cytoscape 3.9.0构建化合物-靶点网络;通过GeneCards、OMIM、TTD、DisGeNET和DrugBank数据库筛选衰老相关基因;取交集获取红花黄色素-衰老共同基因;利用R软件(clusterProfiler包)和微生信平台对交集靶点基因进行GO和KEGG通路富集分析;采用Cytoscape 3.9.0软件进行化合物-靶点-通路网络构建与可视化分析;绘制蛋白互作(protein proteininteraction,PPI)网络并获取核心基因;通过TRRUST和MetaScape数据库进行转录因子及相关调控基因富集;利用LeDock和PyMOL软件对化合物与核心靶点基因行分子对接;最后,利用DisGeNET数据库获取靶点类型信息。结果得到386个红花黄色素作用相关基因,913个衰老相关基因,两者交集靶点共71个。富集分析显示共涉及129条信号通路及1519种生物过程、107种分子功能、71种细胞组分;靶点主要涉及糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B信号通路、癌症蛋白聚糖通路、MAPK信号通路,获得STAT3、PIK3CA、TP53、EP300、VEGFA、EGFR、PTPN11、JUN、CCND1和PTPN110个节点基因、53个相关转录因子;分子对接显示,红花黄色素4种化合物SYA、SYB、HSYA、AHSYB与核心靶点之间均具有稳定的结合能力;作用靶点类型主要涉及激酶、转录因子、信号分子、核酸结合蛋白、酶调制器等类型。结论红花黄色素抗衰老的作用是多靶点和多途径的,与衰老相关靶点共有71个交集靶基因,对这些靶基因进行GO功能富集分析,发现红花黄色素延缓衰老的基因功能;并进行KEGG通路富集分析,发现红花黄色素延缓衰老是一个多重复杂的过程,并且通过调节多个信号通路共同发挥作用。这为实验室及临床进一步探究药物抗衰老作用的机制提供了一定依据。

红花多糖对人PBMC增殖活性及分泌细胞因子的影响

[目的]探讨红花多糖(SPS)对人外周血单个核细胞(PBMC)的增殖作用及PBMC诱生细胞因子的影响。[方法]采集健康成人外周血,常规分离PBMC,体外与不同浓度的SPS共同培养,检测PBMC的增殖活性及白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)的水平。[结果]SPS对PBMC增殖有促进作用,以1.25g/L和0.625g/L剂量组增殖活性增加明显(P<0.05);红花多糖(SPS)各组IL-2和IFN-γ水平明显高于对照组(P<0.05),而各组TNF-α的水平无显著性差异。[结论]SPS可促进PBMC的增殖,提高IL-2和IFN-γ水平,增强免疫功能。

刺五加总黄酮对脑缺血大鼠脑组织P38及GAP-43蛋白表达影响的实验研究

目的探讨脑缺血大鼠脑组织P38、GAP-43的变化及刺五加总黄酮的保护作用。方法制作大鼠脑缺血模型,应用免疫组化方法,测定正常对照组、治疗组、正常组P38、GAP-43表达的影响。结果P38和GAP-43的表达水平随再灌注延长而不断上升;在各时间点,治疗组P38和GAP-43的表达水平均高于对照组(P<0.01)。结论刺五加总黄酮可上调突触素P38、生长相关蛋白GAP-43的表达,具有促进突触再建和增强、完善再建突触效能的作用。

大鼠急性脑梗死后大脑皮质DNA断裂率和细胞形态学变化及活脑康作用研究

目的 探讨大鼠急性脑梗死后大脑皮质DNA断裂率变化和细胞形态学改变以及中药活脑康的保护作用。方法 采用大脑中动脉栓塞法制备大鼠急性脑梗死模型 ,应用二苯胺法测定模型组及活脑康治疗组大脑皮质DNA断裂率变化和细胞形态学改变。结果 脑缺血后DNA断裂率增加 ,模型组与假手术组及正常组比较有统计学意义(P <0 .0 0 1)。结论 脑梗死后有DNA断裂损伤 ,中药活脑康能降低DNA断裂率 ,保护神经元 ,抑制缺血性脑损伤。

几种中草药水煎剂对小鼠肠道菌群的调整作用

目的 :探讨几种中草药水煎剂对小鼠肠道菌群的影响 ,以便弄清其作用机制 ,为进一步研究及临床应用提供理论基础。方法 :用抗生素造成小鼠肠道菌群失调模型 ,然后给予中草药水煎剂 ,检测肠道正常菌群的变化。结果 :中药治疗组小鼠肠道菌群数明显增加。结论 :中草药水煎剂对小鼠肠道菌群有调整作用。

黄连水煎剂对小鼠肠道菌群的影响

目的 :观察黄连水煎剂对小鼠肠道菌群的调整作用。方法 :用抗生素造成小鼠肠道菌群失调 ,然后给予黄连水煎剂 ,检测肠道正常菌群的变化。结果 :黄连水煎剂治疗组小鼠肠菌群菌数明显增多。结论 :黄连水煎剂对小鼠肠道正常菌群失调有调节作用。

芍药甘草汤免疫学研究

目的研究芍药甘草汤的免疫学机制。方法用溶血空斑试验,小鼠溶血素测定淋巴细胞转代试验,腹腔纯噬细胞吞等功能测定等方法。结果能显著提高正常小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率、吞噬指数,促进正常小鼠淋巴细胞转化率、溶血空斑及溶血素的形成。结论芍药甘草汤大、中、小剂量组均能能显著提高机体特异性和非特异性免疫功能,起到扶正祛邪之目的。

刺五加总黄酮和针刺对脑缺血后TGF-β1的影响

目的:研究脑缺血与TGF-β1的关系及刺五加总黄酮和针刺联合治疗作用。方法:通过建立大鼠局灶性脑缺血模型(MCAO),用免疫组化的方法,测定模型组(A组)、针刺组(B组)、总黄酮组(C组)、针药结合组(D组)、正常对照组(E组)TGF-β1的表达。结果:梗死灶中心区无明显TGF-β1阳性染色。与E组比较,A、B、C、D组明显增加,有明显差异(P<0.01);与B、C组比较,D组表达更明显增多(P<0.01)。结论:刺五加总黄酮和针刺能提高TGF-β1蛋白表达,减少脑缺血区细胞凋亡的发生。针药结合治疗有良好的疗效。

五味消毒饮增强小鼠免疫功能及调整菌群失调的影响

目的：观察五味消毒饮对小鼠免疫功能及失调小鼠肠道菌群的影响，为进一步研究其作用机理及临床应用提供理论基础。方法：以淋转率、溶血空斑均值，巨噬细胞功能为免疫学指标，肠道菌群数为微生态学指标进行检测。结果：给予五味消毒饮后，可明显增加溶血空斑均值、淋转率、巨噬细胞吞噬率和吞噬指数，提高巨噬细胞的YC-花环形成率和肠道菌群菌数。结论：五味消毒饮能增强免疫功能，调整菌群失调。

活脑康对缺血大鼠脑组织P38蛋白表达影响的实验研究

目的探讨缺血大鼠脑组织P38的变化及中药活脑康的保护作用。方法应用免疫组化方法,测定正常对照组(A组)、假手术组(B组)、模型组(C组)、活脑康治疗组(D组)、脑心通组(E组)P38的表达。结果与A组、B组比较,C组、D组、E组P38表达增多(P<0.001),与C组比较,D组、E组表达明显增多(P<0.001或P<0.05)。结论活脑康可上调突触素P38的表达,具有促进突触再建和增强、完善再建突触效能的作用。

红花提取物细胞毒性作用研究

目的:研究红花提取物体外对人肝癌细胞株SMMC7721、人张氏肝细胞株Chang liver、小鼠胚胎成纤维细胞株3T3-Swiss albino生长的影响,探讨其细胞毒性作用。方法:采用MTT法检测红花提取物对SMMC7721、Chang liver、3T3-Swiss albino细胞生存率的影响,并观察不同时间点的半数抑制浓度IC50。结果:红花提取物对人肝癌SMMC7721细胞的生长具有明显的抑制作用,且生长抑制作用呈现明显的剂量-效应依赖性和时间-效应依赖性。对人张氏肝细胞株Chang liver、小鼠胚胎成纤维细胞株3T3-Swiss albino也具有较低的细胞毒性作用。结论:红花提取物可抑制人肝癌SMMC7721细胞的增殖,而对人张氏肝细胞Chang liver、小鼠胚胎成纤维细胞株3T3-Swiss albino增殖的影响不大,即细胞毒性较小。故红花提取物有可能用于抗肿瘤治疗。

红花多糖对荷S180肉瘤小鼠血清IL-10和IL-12及TNF-α的影响

目的探讨红花多糖(SPS)对荷S180肉瘤小鼠免疫功能的影响及其抗肿瘤的作用机制。方法 40只雄性BABL/c小鼠随机分为5组:空白对照组、模型对照组、SPS低剂量组、SPS中剂量组及SPS高剂量组。模型对照组及SPS低、中、高剂量组小鼠均于右侧腋窝皮下接种0.2 mL浓度为1×107.mL-1瘤细胞悬液,制备成荷S180肉瘤鼠模型;空白对照组不造模。模型制备后,SPS低、中、高剂量组小鼠分别经腹腔注射SPS 20、40、80mg/(kg.d),空白对照组和模型对照组给予同体积生理盐水。给药10 d后测定各组小鼠肿瘤生长抑制率,酶联免疫吸附法检测荷瘤鼠血清中白细胞介素(IL)-10、IL-12及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。结果 SPS低剂量组荷瘤鼠肿瘤生长未受到明显抑制(P>0.05),而SPS中、高剂量组荷瘤鼠肿瘤生长受到明显抑制(P<0.05);SPS低剂量组荷瘤鼠血清IL-10含量显著降低(P<0.01),但TNF-α、IL-12含量升高不明显(P>0.05);SPS中、高剂量组荷瘤鼠血清IL-10含量显著降低(P<0.01),同时TNF-α、IL-12含量显著升高(P<0.01)。结论 SPS可能是通过提高荷瘤鼠血清IL-12和TNF-α的含量,降低IL-10含量,从而起到调节细胞免疫功能及抑制肿瘤生长的作用。

红花多糖诱导SMMC-7721细胞增殖阻滞的实验研究

目的:通过研究红花多糖(Safflower polysaccharide,SPS)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖及活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的影响,进一步探讨SPS抗肿瘤作用的分子机制。方法:应用MTT法测定SPS对SMMC-7721细胞增殖的影响;流式细胞术检测SPS对细胞周期和ROS的影响。结论:SPS可以抑制SMMC-7721细胞的增殖,最佳剂量为0.64 mg/ml;细胞增殖阻滞于G2/M期;细胞内ROS的产生随SPS浓度增高而增多,与对照组相比具有统计学意义(P<0.001)。SPS可能通过诱导ROS的产生而使细胞增殖阻滞,进而起到抗肿瘤的作用。

红花多糖对人胃癌SGC-7901细胞线粒体膜电位及增殖的影响

目的体外观察红花多糖(SPS)对人胃癌SGC-7901细胞线粒体膜电位(MMP)及细胞增殖的影响,初步探讨SPS对SGC-7901细胞的抑制机制。方法不同浓度的SPS处理SGC-7901细胞,倒置显微镜观察SGC-7901细胞的形态学变化,透射电镜观察SGC-7901细胞超微形态结构变化,罗丹明123染色观察SGC-7901细胞MMP变化,MTT比色法检测SGC-7901细胞的增殖。结果倒置显微镜观察到经SPS处理的贴壁细胞体积变小,部分细胞崩解,有凋亡小体形成,随剂量增加愈加明显;透射电镜观察到经SPS处理的细胞线粒体肿胀、胞核浓缩偏移,呈凋亡形态改变;罗丹明123染色可见经SPS处理的细胞内荧光强度显著下降,该作用呈明显的时间依赖性;MTT检测显示经SPS处理的细胞体外增殖受抑制,该作用呈明显的剂量依赖性。结论 SPS可以降低人胃癌SGC-7901细胞MMP,同时能明显抑制SGC-7901细胞体外增殖并可诱导细胞凋亡,该作用呈一定的时间与剂量依赖。

红花多糖对人胃癌SGC-7901细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的影响

目的观察红花多糖(SPS)对人胃癌SGC-7901细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA及其蛋白表达的影响,探讨SPS抑制人胃癌细胞的作用机制。方法 SPS在不同时间(0、24、48、72 h)处理体外培养的人胃癌SGC-7901细胞,采用Real-time PCR检测Bcl-2、Bax mRNA表达水平,采用Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达水平的动态变化。结果 SPS处理的人胃癌SGC-7901细胞,Bcl-2基因及蛋白表达量明显下降,而Bax基因及蛋白表达量明显升高。结论 SPS可能是通过提高Bax基因表达、降低Bcl-2基因表达,而诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡,其作用具有一定的时间依赖性。

五味消毒饮对金黄色葡萄球菌凝固酶活性的影响

目的 :研究五味消毒饮对金黄色葡萄球菌的杀灭作用及其对残余菌株致病力的影响。方法 :设计凝固酶干扰抑制试验 ,即是用五味消毒饮 (5 0 0 g/L )对金黄色葡萄球菌 (金葡菌 )标准株进行前期诱导处理后再作试验 ,进一步探讨五味消毒饮的杀菌能力。结果 :金葡菌在五味消毒饮肉汤中孵育后的凝固酶活力降低水平与在青霉素 G钠肉汤中接近 (P >0 .0 5 )。与空白对照组比较 (P<0 .0 1)差异有非常显著性意义。结论 :五味消毒饮不仅能直接抑制、杀伤金葡菌 。

红花注射液对人肝癌HepG-2细胞AKT表达的影响

目的探讨红花注射液对肝癌HepG-2细胞增殖的影响及分子机制。方法应用红花注射液(0、50、150、250 g/L)处理HepG-2细胞,经AnnexinⅤ-FITC/PI双染荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学改变,实时荧光定量PCR检测AKT mRNA表达,蛋白质印迹(Western blot)检测AKT、p-AKT蛋白表达。结果 50、150、250g/L的红花注射液作用于HepG-2细胞48 h后,荧光显微镜下呈现典型的凋亡细胞形态;细胞内AKT mRNA表达水平显著降低,AKT、p-AKT蛋白表达水平也显著下调,且变化趋势均呈一定的剂量依赖关系。结论红花注射液可能通过抑制AKT信号通路,阻碍肝癌HepG-2细胞的增殖及诱导凋亡。

活脑康对急性脑梗死大鼠血浆一氧化氮合酶(NOS)和一氧化氮(NO)的影响

目的 :观察活脑康对急性脑梗死大鼠血浆一氧化氮合酶 (NOS)活力和一氧化氮 (NO)含量的影响 ,探讨其治疗作用机制。方法 :应用线栓法制备大鼠急性脑梗死模型 ,给予中药活脑康灌胃 10d后 ,测定血浆中NO含量和NOS的活力。结果 :中药治疗组血浆NO含量和NOS活力明显下降 ,与模型组相比差异显著 (P <0 .0 1)。结论 :中药活脑康可降低急性脑梗死大鼠血浆NO含量和NOS的活力 ,抑制缺血性脑损伤。