基于“冲为血海”的分期针灸对肾虚痰湿型多囊卵巢综合征患者IVF-ET助孕结局及性激素、子宫内膜血流参数的影响

目的评价基于“冲为血海”的分期针灸对肾虚痰湿型多囊卵巢综合征患者体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕结局及性激素、子宫内膜血流参数的影响。方法选取2020年1月至2022年1月于河南中医药大学第一附属医院生殖医学科接受治疗的60例肾虚痰湿型多囊卵巢综合征,分为对照组(30例)与联合组(30例)。对照组接受单纯卵泡期长方案促排卵,在阴道B超引导下经阴道穿刺取卵,取卵后72 h移植优质胚胎;联合组在对照组基础上接受基于“冲为血海”的分期针灸,直至取卵,IVF-ET后随访10个月观察妊娠结局。比较两组胚胎获得及种植情况、IVF-ET助孕结局,治疗前和治疗后子宫内膜血流参数、厚度、类型,性激素、中医证候积分,治疗期间不良反应。结果联合组获卵数、优质胚胎率、胚胎种植率、临床妊娠率、生化妊娠率、活产率更高(P<0.05)。与治疗前比较,治疗后两组血流搏动指数(PI)、血流阻力指数(RI),血清睾酮(T)水平降低,且联合组更低(P<0.05)。与治疗前比较,治疗后两组子宫内膜厚度、子宫内膜分型A型比例,血清孕酮(P)、雌二醇(E_(2))水平升高,且联合组更高(P<0.05)。两组不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论基于“冲为血海”的分期针灸治疗肾虚痰湿型多囊卵巢综合征可缓解中医症候,调节性激素、子宫内膜血流参数,改善子宫内膜形态,促进IVF-ET中胚胎的获得及种植,最终优化IVF-ET助孕结局。

基于网络药理学与分子对接技术探讨滋肾养血活血汤治疗胚胎反复种植失败作用机制

目的:通过网络药理学和分子对接技术探讨滋肾养血活血汤治疗胚胎反复种植失败(RIF)的作用机制。方法:利用中药系统药理数据库和分析平台(TCMSP)查找滋肾养血活血汤组成药物的化学成分,并筛选出有效活性成分及有效活性成分的作用靶点,通过GeneCards和人类在线孟德尔遗传(OMIM)数据库筛选RIF疾病靶点,将药物有效活性成分作用靶点与RIF疾病靶点取交集,借助String平台制作蛋白质-蛋白质互作(PPI)网络,然后利用Cytoscape3.9.1软件进行网络结构的拓扑分析筛选核心靶点,并构建中药-活性成分-靶点可视化网络图,利用DAVID在线数据库对核心靶点进行富集分析,采用AutoDock Vina软件对筛选出的主要药物有效活性成分和疾病关键靶点进行分子对接验证。结果:共获得122个药物有效活性成分和256个药物作用靶点,疾病相关靶点2215个,药物-疾病核心靶点36个。经筛选获得5个主要药物有效活性成分与9个疾病关键靶点。京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析结果显示,滋肾养血活血汤治疗RIF可能主要通过调控缺氧诱导因子-1(HIF-1)、肿瘤坏死因子(TNF)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)等多种信号通路发挥治疗作用。分子对接结果表明,β-谷甾醇与蛋白激酶B1(AKT1)、丹参酮ⅡA与HIF-1A、丹参酮ⅡA与TNF、槲皮素与HIF-1A对接活性较好。结论:滋肾养血活血汤可能通过槲皮素、山柰酚、木犀草素、β-谷甾醇、丹参酮ⅡA等与靶蛋白相互结合,调控多种信号通路发挥治疗RIF的作用。

滋阴疏肝汤治疗卵巢储备功能低下性不孕症

目的:观察滋阴疏肝汤治疗卵巢储备功能低下性不孕症的临床疗效及其对患者妊娠率、性激素水平的影响。方法:将70例卵巢储备功能低下性不孕症患者按照随机数字表法分为对照组和观察组,每组各35例。对照组给予常规西药治疗,观察组在对照组治疗的基础上给予滋阴疏肝汤治疗。比较两组患者的临床疗效、妊娠率及治疗前后中医证候评分、血清性激素水平[雌二醇(estradiol,E2)、FSH、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、孕酮(progesterone,P)]、卵巢功能[卵巢动脉搏动指数(pulsatility index,PI)、窦卵泡数(antral follicle count,AFC)、卵巢平均容积(average ovarian volume,OAV)、卵巢动脉阻力指数(resistance index,RI)]变化情况。结果:对照组有效率为65.71%,观察组有效率为97.14%,两组患者有效率比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。两组患者治疗后经期延迟、月经量少、腰酸腿软、倦怠乏力、潮热盗汗等中医证候积分均低于本组治疗前,且治疗后观察组各项中医证候积分均低于对照组(P<0.05)。两组患者治疗后FSH、LH、P水平均低于本组治疗前,E2高于本组治疗前,且治疗后组间比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。两组患者治疗后PI、AFC、OAV水平均高于本组治疗前,RI水平均低于本组治疗前,治疗后组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组妊娠27例(77.14%),对照组妊娠19例(54.29%),观察组妊娠率高于对照组(P<0.05)。结论:滋阴疏肝汤治疗卵巢储备功能低下性不孕症,能够有效改善患者性激素水平和卵巢功能,提高妊娠率。

丹寿汤含药血清对抗心磷脂抗体引起的内皮细胞损伤的影响

目的探讨丹寿汤含药血清对抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody, aCL)致人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVEC)损伤的影响及作用机制。方法制备丹寿汤大鼠含药血清,将HUVEC为5组:空白血清对照组、损伤模型组、低浓度含药血清处理组、中浓度含药血清处理组、高浓度含药血清处理组。10%含药血清预处理24 h后,加入aCL诱导建立细胞模型。细胞增殖检测试剂盒(cell counting kit-8, CCK-8)分析各组细胞的增殖能力,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测各组细胞Toll样受体4(Toll-like receptor4, TLR4)、髓样分化因子88(mydoid differentiation factor88, MyD88)、胞核p65的表达,酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测各组细胞上清液中白细胞介素1β(interleukin1β, IL-1β)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF-α)、白细胞介素6(interleukin6, IL-6)表达水平,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)结合Western Blot检测组织因子(tissue factor, TF)、血管细胞黏附分子1(vascular cell adhesionmolecule-1, VCAM-1)。结果丹寿汤含药血清可抑制aCL引起的细胞活力下降,抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路活性,抑制炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α释放,降低TF、VCAM-1 mRNA和蛋白表达。结论丹寿汤含药血清对aCL所致HUVEC损伤的保护作用可能与其抗炎及抗黏附作用有关。

丹寿汤对妊娠丢失大鼠Th17/Treg细胞平衡的调节作用

目的探讨丹寿汤对妊娠丢失大鼠辅助性T细胞17(helper T cells17,Th17)/调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)失衡的影响。方法将受孕SD大鼠按照随机数字法均分为空白对照组、阴性对照组、模型组、丹寿汤干预组(低、中、高)。分别于孕8 d和孕12 d背部皮下多点注射抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody,aCL)建立妊娠丢失大鼠模型,丹寿汤干预组自受孕第1天起灌胃丹寿汤,2次/d,剩余组大鼠灌胃等体积生理盐水,孕15 d处死孕鼠取材。胚胎称重,计算胚胎吸收率,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中白介素10(interleukin 10,IL-10)、转化生长因子β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)、白介素17A(interleukin 17A,IL-17A)、白介素6(interleukin6,IL-6)水平变化,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)结合蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测胎盘组织中维甲酸相关核孤儿受体γt(retinoic acid-related orphan nuclear receptorγt,RORγt)、叉头状螺旋转录因子3(Foxp3)表达。结果与模型组比较,丹寿汤显著抑制RORγt表达,降低血清IL-17A、IL-6水平,促进Foxp3表达,升高血清IL-10、TGF-β1水平,增加胚胎重量,降低胚胎吸收率,呈剂量依赖性。结论丹寿汤能够抑制胚胎吸收,提高妊娠成功率,其作用机制可能与调节Th17/Treg平衡失调有关。

卫爱武教授治疗因PCOS行IVF-ET的中医调治经验

多囊卵巢综合征(PCOS)是育龄妇女常见的内分泌疾病,临床以月经失调、不孕、多毛、肥胖、痤疮、卵巢多囊样改变为主要表现,而持续性无排卵及高雄激素是引起各种临床表现的主要原因。对于顽固性的排卵障碍患者,在经过反复(>3次)促排卵治疗及手术治疗(腹腔镜下卵巢打孔术)后仍失败者,多行体外受精-胚胎移植技术(IVF-ET),可解决无排卵问题。但仍存在许多问题,如取卵引起卵巢过度刺激的风险较大;取得的卵子质量较差,难以形成高质量胚胎;内膜不符合移植需要;妊娠率低;生化妊娠率高;抱婴回家率低等。导师卫爱武教授在临床工作中将中医药应用于该类患者的治疗,针对以上问题,在进入周期前整体调理月经周期,进入周期后养卵提高卵泡质量,滋肾养血准备内膜,移植后积极安胎,在临床上取得了良好的疗效。

卫爱武教授中药干预体外受精-胚胎移植的经验

体外受精-胚胎移植技术(in vitro fertilization-embryo transplantation,IVF-ET)自1978年由steptoe博士和Edowrds博士首创以来,经过30余年的发展创新,已成为解决不孕病的有力手段,但其妊娠率并不理想。卫爱武教授结合多年临床经验对IVF-ET患者采取进周期前辩证调理;进周期后补肾填精,调理气血促进卵泡生长;移植后补肾活血,助孕安胎的方法,在临床取得了良好疗效。

补肾活血方对抗心磷脂抗体致复发性流产大鼠的治疗效果

目的探讨补肾活血方对抗心磷脂抗体(aCL)致复发性流产(RSA)大鼠的治疗效果及对血小板/嘌呤能离子通道型7(P2X7)/Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体通路的影响.方法随机将受孕大鼠24只,分为aCL-RSA、aCL-RSA+低分子肝素组、aCL-RSA+丹寿汤组、模型组,每组6只;建立aCL-RSA孕鼠模型,给予补肾活血方干预,观察16天孕鼠体质量,孕鼠胚胎吸收率,胎鼠体质量;检测大鼠血浆血小板活化因子受体(PAFR)、血小板第4因子(PF4)含量,大鼠胎盘组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-18含量,HE染色检测胎盘组织病理学改变,TUNEL染色法检测胎盘组织中细胞凋亡;Western Blot检测cleaved caspase-1、人细胞凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、NLRP3、Bcl2、Bax、cleaved caspase-3、嘌呤能离子通道型7(P2X7)蛋白的表达,探讨aPL致复发性流产与血小板活化、NLRP3炎症小体通路及P2X7的相关性,及丹寿汤对aCL-RSA孕鼠的影响及对血小板活化/P2X7/NLRP3通路的影响.结果与模型组比较,aCL-RSA组能明显降低孕鼠体质量,增加孕鼠胚胎吸收率,降低胎鼠体质量,增加血浆PAFR、PF4含量(P<0.05);aCL-RSA组胎盘组织迷宫区母性红细胞较少,较多血栓形成,胎盘血窦空间明显减小;胎盘组织中凋亡细胞数目明显增加,胎盘组织中IL-1β、IL-18增加,胎盘组织中cleaved caspase-1、ASC、NLRP3、Bax、cleaved caspase-3、P2X7蛋白表达增加(P<0.05),Bcl2蛋白水平降低(P<0.05).结论补肾活血方能抑制血小板活化,下调P2X7的表达,抑制NLRP3的激活,减轻胎盘的高凝、炎症状态进而减少aCL-RSA的发生.

丹寿汤对不明原因复发性流产白介素-16表达水平及蜕膜化调控的意义

目的 探索肾虚血瘀型不明原因复发性流产(URSA)患者与正常女性孕早期外周血中的白介素-16(IL-16)水平及蜕膜化水平的差异,并探究丹寿汤对URSA患者IL-16水平及蜕膜化水平的影响进而分析其治疗URSA的作用机制。方法 选取肾虚血瘀型URSA早孕患者60例为观察组,随机分为中药观察组和西药观察,每组各30例;选取同期无自然流产病史早孕女性30例为对照组。中药观察组予中药汤剂丹寿汤连续口服4周,西药观察组予依诺肝素钠注射液连续皮下注射4周,对照组不予药物干预。运用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各组治疗前(孕5周)后(孕9周)血清IL-16、蜕膜标志物催乳素(PRL)和胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)的表达水平;超声检查监测各组孕期胚胎发育情况;观察各组孕12周妊娠结局及各观察组治疗前后中医证候评分。结果 治疗前,对照组IL-16、PRL、IGFBP-1水平均高于中药观察组和西药观察组,且差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,各组IL-16水平均较治疗前下降,且治疗前后对比差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,各组PRL、IGFBP-1水平均较治疗前升高,且治疗前后对比差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,中药观察组与西药观察组中医证候总评分均较治疗后下降,中药观察组低于西药观察组,且两组对比差异均有统计学差异(P<0.05);3组进行孕12周妊娠结局随访,三组持续妊娠率基本持平,中药观察与对照组持续妊娠率略高于西药对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 孕早期(5周)胚胎着床期,正常孕妇外周血IL-16水平明显高于URSA患者,且PRL与IGFBP-1水平高于URSA患者,提示胚胎着床期IL-16水平与子宫内膜蜕膜化水平呈正相关,而随着妊娠的发展IL-16水平与子宫内膜蜕膜化水平呈负相关。丹寿汤可降低URSA患者IL-16水平,促进子宫内膜蜕膜化水平,改善URSA妊娠结局,提高持续妊娠率。

丹寿汤对抗心磷脂抗体致妊娠丢失孕鼠子宫螺旋动脉重铸障碍的影响

目的 探讨丹寿汤对抗心磷脂抗体(ACA)致妊娠丢失孕鼠子宫螺旋动脉重铸障碍的影响。方法 以人ACA标准蛋白液为诱导剂制备ACA阳性孕鼠模型。实验随机均分为空白组、模型组、阳性药组、丹寿汤组。自受孕日起,空白组和模型组给予蒸馏水灌胃,阳性药组给予低分子肝素钙注射液[558 IU/(kg·d)]皮下注射,丹寿汤组给予丹寿汤药液[11.2 g/(kg·d)]灌胃,持续给药15d后处死取材。计算胚胎吸收率,HE染色法观察胎盘组织病理形态,Case Viewer图像分析测量胎盘血管管腔直径与血管密度,ELISA法检测血清白介素-6(IL-6)与血管内皮生长因子(VEGF)水平。结果 与模型组相比,阳性药组和丹寿汤组孕鼠的胚胎和胎盘质量显著增加,胚胎吸收率显著降低,胎盘血管管腔直径和血管密度显著扩增,血清IL-6水平显著降低,且血清VEGF水平显著升高(均P<0.05)。结论 丹寿汤对ACA致妊娠丢失孕鼠有明确保护作用,其机制可能与通过抗炎和促进血管新生改善子宫螺旋动脉重铸障碍有关。

HPLC-MS/MS法同时测定枳壳厚朴汤冻干粉中7个香豆素类成分的含量

目的建立高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法同时测定枳壳厚朴汤冻干粉中异欧前胡素、佛手柑内酯、花椒毒酚、橙皮油素、6',7'-羟基佛手柑素、佛手柑素以及佛手酚7个香豆素类成分含量的方法。方法采用Waters BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm);流动相:乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)梯度洗脱,流速:0.25 m L/min,柱温:35℃,进样量10μL。质谱采用电喷雾离子源(ESI)进行正离子模式检测,多反应监测模式(MRM)用于定量测定。结果 7个香豆素类成分中异欧前胡素在1.01~101.20μg/L(r=0.999 6)范围内呈良好的线性关系,平均回收率为98.42%,RSD为1.88%。佛手柑内酯在5.25~525.00μg/L(r=0.999 8)范围内呈良好的线性关系,平均回收率为99.92%,RSD为1.30%。花椒毒酚在5.06~506.40μg/L(r=0.999 6)范围内呈良好的线性关系,平均回收率为100.40%,RSD为1.76%。橙皮油素在4.96~496.00μg/L(r=0.999 7)范围内呈良好的线性关系,平均回收率为98.65%,RSD为1.80%。6',7'-羟基佛手柑素在4.98~497.80μg/L(r=0.999 9)范围内呈良好的线性关系,平均回收率为101.16%、RSD为1.36%。佛手柑素在0.99~98.60μg/L(r=0.999 6)范围内呈良好的线性关系,平均回收率为102.05%,RSD为1.65%。佛手酚在5.05~505.00μg/L(r=0.999 8)范围内呈良好的线性关系,平均回收率为100.73%,RSD为1.71%。结论所建立的方法快速、灵敏、准确,可用于枳壳厚朴汤冻干粉中异欧前胡素、佛手柑内酯、花椒毒酚、橙皮油素、6',7'-羟基佛手柑素、佛手柑素以及佛手酚7个香豆类成分的含量测定。