TLR2对胶质母细胞瘤的预后价值和体外作用

目的探究TCGA数据库中TLR2基因在胶质母细胞瘤(GBM)中的预后价值,并明确该基因对胶质母细胞瘤细胞LN229的体外作用。方法从TCGA数据库中获取169例胶质母细胞瘤患者的临床信息和肿瘤样本的转录组数据,通过Kaplan-Meier生存曲线分析评估TLR2基因在GBM患者中的预后作用。构建TLR2敲减的人胶质母细胞瘤LN229细胞系,通过RT-qPCR和Western Blot验证。通过CCK8、克隆形成、细胞划痕、Transwell小室法,检测敲减TLR2对LN229细胞的增殖、克隆形成、迁移、侵袭能力的影响。结果与正常样本相比,TLR2在GBM患者样本中表达增高。生存分析结果显示,TLR2高表达组患者总生存期显著低于低表达组患者(总生存期中位值333 d vs.402 d,P<0.05)。RT-qPCR和Western Blot结果显示,TLR2敲减的人胶质母细胞瘤LN229细胞系成功构建。与转染si-control的LN229胶质瘤细胞相比,转染si-TLR2的LN229胶质瘤细胞增殖能力明显降低(P<0.05)。与转染si-control的LN229胶质瘤细胞相比,转染si-TLR2的LN229胶质瘤细胞克隆形成数明显降低(P<0.05)。转染si-TLR2的LN229细胞迁移能力明显低于转染si-control的LN229胶质瘤细胞(P<0.05)。转染si-TLR2的LN229细胞侵袭能力明显低于转染si-control的LN229胶质瘤细胞(P<0.05)。结论本研究通过数据挖掘发现TLR2表达与胶质母细胞瘤患者的预后显著相关,通过实验验证敲减TLR2有效抑制LN229细胞的增殖、迁移、侵袭和克隆形成能力,上述发现将为胶质母细胞瘤预后判断和靶向治疗提供新的潜在靶点。

桔梗皂苷D对人骨肉瘤细胞活力、迁移、侵袭、凋亡和细胞周期的影响

目的:明确桔梗皂苷D(platycodin D,PD)对骨肉瘤细胞活力、迁移、侵袭、凋亡和细胞周期的影响并探讨可能机制。方法:MG63和U2OS细胞分别分为对照组和PD(6.25、12.5、25、50和100μmol/L)处理组,CCK-8法检测细胞活力并筛选处理浓度。MG63分为对照(0μmol/L)组和PD(15μmol/L)处理组,U2OS分为对照(0μmol/L)组和PD(25μmol/L)处理组,划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Hoechst 33342染色法观察细胞核形态;流式细胞术分析细胞周期和凋亡率;Western blot实验检测cleaved caspase-3、cleaved PARP、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、p-JNK、B细胞淋巴瘤蛋白2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bcl-2-ssociated X protein,BAX)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、MMP-9、细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、CDK1、cyclin B1、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)和p-ERK的蛋白表达水平;选取MG63进行蛋白质组测序分析。结果:与对照组比较,PD处理后,MG63和U2OS细胞的存活率、划痕愈合率和侵袭细胞数显著下降(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),且细胞出现核浓染、碎裂等现象;MG63和U2OS的细胞周期分布分别在G2/M期和G0/G1期增多;PD处理组BAX、cleaved caspase-3、cleaved PARP和p-JNK/JNK蛋白表达较对照组升高,Bcl-2、MMP-2、MMP-9、CDK4、cyclin D1、CDK1、cyclin B1和p-ERK/ERK蛋白表达较对照组降低(P<0.05)。蛋白质组测序分析显示PD作用与细胞分裂、细胞周期、局部黏附、凋亡及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路等有关。结论:PD抑制骨肉瘤细胞体外的活力、迁移、侵袭,并促进凋亡和周期阻滞,其机制可能与调控MAPK信号通路有关。

二甲双胍对替莫唑胺耐药的胶质母细胞瘤细胞体内、体外抑制作用

目的:探讨二甲双胍对替莫唑胺(temozolomide,TMZ)耐药的胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)的抑制作用及分子机制,为临床应用二甲双胍治疗GBM耐药提供理论依据。方法:CCK-8法检测二甲双胍对耐药细胞化疗敏感性的影响;流式细胞术检测二甲双胍对耐药细胞凋亡率的影响;细胞克隆形成实验、裸鼠成瘤实验、划痕实验、Transwell侵袭实验、神经球形成实验检测二甲双胍对GBM耐药细胞的克隆形成能力、体内成瘤能力、迁移能力、侵袭能力和干细胞特性的影响;采用甘油三脂含量检测试剂盒检测亲代细胞及耐药细胞在二甲双胍给药前后的甘油三脂含量变化;RT-PCR和Western Blot检测亲代细胞及耐药细胞在二甲双胍给药前后的SREBP1基因和蛋白表达的作用,以及二甲双胍对敲减SREBP1的细胞系耐药性的影响。结果:二甲双胍处理可显著增强LN229-R、U251-R对TMZ的敏感性,并提高其对TMZ的凋亡率。二甲双胍可抑制耐药细胞的克隆形成能力、体内成瘤能力、迁移能力、侵袭能力、干细胞特性和甘油三酯含量(P均<0.05)。二甲双胍降低耐药细胞内SREBP1 mRNA和蛋白表达水平(P均<0.05)。敲减SREBP1可部分逆转耐药性(P<0.05),二甲双胍对敲低SREBP1的耐药细胞无作用(P>0.05)。结论:二甲双胍治疗降低GBM耐药细胞系的克隆形成、增殖、迁移、侵袭和肿瘤干细胞特性,提高耐药细胞对TMZ的凋亡率。二甲双胍可能通过抑制SREBP1降低GBM耐药细胞的甘油三酯含量,从而抑制GBM对TMZ的耐药性。

虚实结合的教学模式在生物化学实验教学中的应用

目的:探讨虚实结合的教学模式在生物化学实验教学中的应用效果。方法:选取精神医学本科专业2018级学生156人为对照组,2019级学生149人为试验组,对照组采用传统教学,试验组采用虚实结合的教学模式。结果:试验组的实验课成绩显著高于对照组,试验组90%以上学生自我评价自主学习、综合设计、动手操作、分析问题、批判性思维五方面能力显著提高。结论:虚实结合的实验教学模式既弥补了传统生物化学实验教学的局限性,又有效提高了学生学习质量。

扶正法于线粒体途径抗肿瘤的内在机制初探

线粒体途径从多方面调控肿瘤的发生发展,线粒体与中医脾之间具有一定的相关性,研究发现扶正健脾法可作用于线粒体途径起到抗肿瘤作用。本文通过分析肿瘤、线粒体和扶正法之间的联系,探索中医扶正法于线粒体途径抗肿瘤的内在机制。

新型多金属氧酸盐药物{BiW_(8)O_(30)}对肝癌SK-HEP-1细胞的抑制作用

目的:研究新型多金属氧酸盐药物{BiW_(8)O_(30)}对体外培养的肝癌细胞的作用及其机制。方法:体外培养人肝癌细胞SKHEP-1,实验组分别给予50、100、200、400μmol/L的{BiW_(8)O_(30)}药液,对照组给予正常培养液,培养24和48 h后检测相应指标。采用细胞增殖实验检测细胞存活率并计算{BiW_(8)O_(30)}对SK-HEP-1细胞的半数抑制浓度(IC_(50));细胞集落形成实验检测集落形成数;划痕实验检测划痕愈合率;Transwell实验检测侵袭细胞数变化;荧光染色分析药物对细胞凋亡的影响。结果:与对照组比较,50、100、200、400μmol/L的{BiW_(8)O_(30)}处理24 h后,SK-HEP-1细胞存活率分别降低了29.98%、51.29%、65.81%、83.59%(P<0.01),48 h后分别降低了31.57%、66.23%、81.88%、83.97%(P<0.01);IC_(50)分别为24 h时(102.07±1.38)μmol/L,48 h时(74.68±0.91)μmol/L;50、100、200μmol/L的{BiW_(8)O_(30)}处理2周后,SK-HEP-1细胞的集落形成数分别降低了28.57%、63.27%、90.82%(P<0.01);50、100、200μmol/L的{BiW_(8)O_(30)}处理24 h后,SK-HEP-1细胞的划痕愈合率分别降低了8.47%、70.59%、80.83%(P<0.01),48 h后分别降低了19.56%、65.98%、75.49%(P<0.01);SK-HEP-1的侵袭细胞数在24 h后分别降低了27.74%、45.51%、68.77%(P<0.01),48 h后分别降低了47.03%、72.20%、84.07%(P<0.01)。荧光染色后观察发现{BiW_(8)O_(30)}处理后的肝癌细胞皱缩,细胞核固缩、碎裂,出现凋亡小体。结论:新型多金属氧酸盐药物{BiW_(8)O_(30)}通过抑制肝癌SK-HEP-1细胞的增殖、集落形成、迁移和侵袭能力以及诱导细胞凋亡发挥体外抗肿瘤作用。

基于ESTIMATE算法探究TCGA数据库免疫相关基因在乳腺癌中的预后价值

目的根据ESTIMATE算法探究TCGA数据库中免疫相关基因在乳腺癌中的预后价值。方法从TCGA数据库获取606例乳腺癌患者的临床信息和肿瘤样本的转录组数据,采用edgeR方法对转录组数据进行差异表达分析,通过ESTIMATE算法筛选出基于免疫分数或间质分数高低分组的差异表达基因;使用R软件绘制差异表达基因的聚类分析热图;使用韦恩图对基于免疫分数和间质分数得到的差异表达基因进行交集分析;运用STRING数据库,搜索并预测表达显著差异基因编码蛋白质之间的相互作用;通过单因素Cox回归分析评估差异表达基因的预后作用;运用DAVID数据库对差异表达基因进行GO富集分析以及KEGG通路富集分析。结果生存分析结果显示,高免疫分数组患者的总生存期中位值943天,而低分组患者总生存期中位值860天,显著高分组患者总生存期显著高于低分组患者(P<0.05);而间质分数与乳腺癌患者总生存期之间无差异(P>0.05)。进一步对免疫分数高分组和低分组患者表达上调的951个差异表达基因进行生存分析,发现160个基因与乳腺癌患者的总生存期显著相关;对上述160个基因进行蛋白质互作分析,富集出与乳腺癌患者总生存率呈正相关的CTLA4、CD8A、CD19、CD27、CD2、IL2、GZMB、IL2RB、CD3E、CD40LG等基因。对上述160个基因进行GO富集和KEGG通路分析,结果显示免疫功能相关信号通路T细胞受体信号通路、造血细胞系、T细胞活化等通路显著富集。结论本研究发现160个具有预后价值的免疫分数相关基因,免疫分数与乳腺癌患者的总生存期、预后改善相关,将为乳腺癌预后判断和靶向治疗提供新的潜在靶点。

基于转录组数据挖掘乳腺癌预后生物标志物

目的筛选肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)中预后相关免疫基因并解析其在乳腺癌中的预后价值。方法获取癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库1086例乳腺癌样本和145例正常样本的转录组数据和临床信息,排除无随访资料或随访时间<1 d的137例样本后采用ESTIMATE算法计算免疫评分和基质评分;根据免疫评分和基质评分(高分组vs.低分组)筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs);通过DEGs构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,探究乳腺癌DEGs中的核心基因;通过单基因批量生存分析,明确核心基因与乳腺癌患者总生存期的相关性;通过RT-qPCR实验对数据库分析结果进行mRNA水平验证。结果与N0期比较,N1期的患者免疫评分降低;与StageⅠ期比较,StageⅡ期、Ⅲ期患者免疫评分降低。Kaplan-Meier结果显示,与免疫评分低分组比较,高分组患者总生存期延长。筛选出免疫评分(高分组vs.低分组)相关的200个DEGs。基因本体论(gene ontology,GO)分析和京都基因与基因组百科全书数据库(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析筛选出T细胞激活、激活免疫反应、MHCⅡ类蛋白复合物、T细胞受体信号通路等免疫相关通路。蛋白质互作(potein-protein interaction,PPI)分析找到Degree值排名前15的核心(hub)基因,单基因批量生存分析从中筛选出9个与乳腺癌预后显著相关的基因。RT-qPCR实验结果显示,与恶性程度较低的乳腺癌细胞相比,上述9个基因在恶性程度较高的三阴性乳腺癌细胞中表达水平下降。基因组富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)显示,免疫相关基因HLA-DRA的高表达水平与乳腺癌、雌激素信号通路显著相关。结论乳腺癌肿瘤微环境中免疫评分高的患者总生存期显著延长。免疫相关基因HLA-DRA可能是预测乳腺癌患者预后的潜在生物标志物。