一株产纤维素酶蜡样芽孢杆菌的分离鉴定及酶学性质初步研究

【目的】筛选高效分泌纤维素酶的细菌,为纤维素资源利用提供理论依据。【方法】以羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为唯一碳源,对通过筛选培养基从森林湿泥样品中分离筛选出的细菌,采用刚果红染色、革兰氏染色和生化特性及16SrDNA进行鉴定,并对菌株产酶性质进行初步研究。【结果】获得一株纤维素酶产生菌L-30,该菌株在pH4.8、50℃条件下的酶活力为4.25 U/mL,经鉴定L-30为蜡样芽孢杆菌。酶学性质研究表明,L-30菌株所产纤维素酶最适反应pH为6.0,最适温度为50℃,该条件下酶活力最高,达4.95 U/mL,该酶对CMC-Na具有较强的分解能力;L-30菌株在最佳生长条件下,于接种后48 h即可达到产酶高峰,L-30菌株的产纤维素酶能力能稳定遗传。【结论】分离到的L-30为一株高产纤维素酶蜡样芽孢杆菌,其酶学性质好,具有进一步开发利用的价值。

植物组织中糖类含量的微波测定技术

采用微波加热代替沸水浴,测定植物组织中的总糖与还原糖的含量.实验结果表明,微波加热具有准确、快速、节能、环保等优点,是测定植物组织中总糖和还原糖含量的快速而准确的方法.

普通高校实验室危险废物处置的现状与对策思考

随着我国高等教育的快速发展,高校实验室特别是化学、生物类实验室的数量和规模不断地增多和扩大,实验室产生的危险废物越来越多,对环境污染的风险也越来越大。通过对我国普通高校实验室产生危险废物的处置现状进行原因分析,提出了对实验室危险废物处置的对策思考。

活性光合细菌对改善水产养殖体系水质状况的作用初探

在鱼虾育苗、养殖,池塘淡水养鱼以及观赏鱼养殖中,使用以牛肉水提取液为主要培养基培养的活菌数大于50亿/mL的活性光合细菌,测定了使用前后水的pH值、COD值、NH3-N、亚硝酸盐、溶解氧等指标,结果表明:与市场出售的光合细菌(活菌数为25亿/mL)相比,活菌数大于50亿/mL活性光合细菌能明显改善水产养殖体系的水质状况。

磷酸锌制备实验的改进探索

采用微波加热法和普通加热法制备磷酸锌,微波法具有更快速方便等特点.

活性光合细菌制剂的强化培养研究

在光照800Lux～1100Lux、温度25℃～32℃的条件下进行活性光合细菌制剂的强化培养研究.结果表明,以牛肉水提取液为主要成份,并辅以无机盐、维生素B族及药效植物提取液的培养基,在3～4天就能培养出活菌数大于50亿/毫升的活性光合细菌制剂,由此证明这种培养基是一种高效、低耗、省时的活性光合细菌制剂的培养方法.

以评估为契机，促进生物专业实验室建设

本文总结了该校以教育部评估工作为契机,进行生物专业实验室建设、规范实验室管理的做法和经验,对专业实验室的建设具有参考价值。

用绿色化学理念改进硫酸亚铁铵制备实验

针对无机化学实验硫酸亚铁铵制备中存在着废气污染及产物一级品率低的问题 ,提出相应的解决办法 ,改进后的制备实验切实可行 。

IBDV荧光定量RT-PCR检测方法的建立及其应用

研究根据传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因序列设计了两条引物,通过RT-PCR技术对IBDV的VP2进行扩增,构建IBDV-VP2的标准品质粒,建立基于IBDV-VP2基因的荧光定量RT-PCR检测(QRT-PCR)技术和标准曲线,并检测该QRT-PCR体系的特异性、灵敏度和重复性,最后将该QRT-PCR体系应用于鸡外周血淋巴细胞(PBLs)中IBDV超强毒株(vvIBDV)复制规律以及临床样品的检测。结果表明,建立的QRT-PCR体系特异性好,不能与NDV、IBV及FAV1等发生反应,敏感度为1.51×101拷贝数/μl,扩增效率达1.018,重复性试验组内变异系数和组间变异系数均小于0.5%;在vvIBDV感染后6 h收获的细胞含病毒基因组拷贝数最高,对IBD疑似病例的检测敏感度高于套式RT-PCR技术。表明建立的反应体系特异、灵敏度高,并具有很好的稳定性,可应用于病毒复制水平的检测和临床样品的检测。

传染性腔上囊病病毒与禽腺病毒混合感染的分子鉴定

应用设计的分别针对传染性腔上囊病病毒(IBDV)VP2蛋白基因高变区(vVP2)和Ⅰ群禽腺病毒(FAV)六邻体(hexon)蛋白基因的特异性PCR引物,对临床疑似IBD病例的2只鸡的腔上囊样品和泄殖腔拭子样品分别进行IBDV和FAV的分子检测。结果显示,通过巢式PCR从2份腔上囊样品中均扩增出了471 bp的IBDV vVP2特异性目的片段;SspⅠ和SacⅠ的酶切分析以及序列测定分析证实,该目的片段属超强毒IBDV(very virulent IBDV,vvIBDV)的特征性序列,与常用疫苗株的亲缘关系较远。从2份泄殖腔拭子样品中均扩增出了900 bp的FAV特异性目的片段;序列测定和遗传进化分析表明,该片段在分子水平上属于血清1型FAV(FAV-1)。结果表明,该病例同时感染了vvIBDV和FAV-1。

双载体法固定化黑曲霉发酵产壳聚糖酶的研究

探索玉米芯颗粒吸附、海藻酸钠包埋固定化黑曲霉(Aspergillus niger)孢子的方法以及双载体固定化黑曲霉发酵产壳聚糖酶的条件.实验结果表明,玉米芯颗粒对黑曲霉孢子的吸附容量约为5×107个/克;适宜包埋剂质量分数为1·0%;0·2g玉米芯颗粒经吸附、包埋与增殖预培养成熟的固定化黑曲霉细胞发酵产壳聚糖酶最适pH为5·0,适宜发酵装液量为25mL(250mL三角瓶),28·6℃,132r/min条件下摇床发酵48h产壳聚糖酶活力101·3U/mL.

烟曲霉产壳聚糖酶液体发酵条件研究

以烟曲霉(Aspergillus fumigatus)为出发菌,通过选择适合的培养条件,筛选出产壳聚糖酶的菌株。实验结果表明,烟曲霉是良好的产壳聚糖酶出发菌。烟曲霉液体发酵产壳聚糖酶最适培养基组成为:壳聚糖1%,KH2PO40.06%,尿素0.2%,(NH4)2SO40.1%,MgSO40.012%,20%土豆汁3%,NaCl 0.05%。在pH 5.0、温度28℃、摇床转速120 r/min培养条件下振荡培养3 d,烟曲霉产壳聚糖酶的能力最强,达25.1 U/mL。

北海近岸养殖海域3种弧菌的分离鉴定及耐药性分析

对北海近岸养殖海域的3种弧菌(Vibrio)进行了分离鉴定,并对鉴定的弧菌进行耐药性分析。通过从北海近岸养殖海域随机采集水样,利用TCBS培养基对所采水样进行弧菌的分离和纯化,采用PCR方法和序列分析对弧菌进行鉴定,并对鉴定出的3种弧菌进行了常用抗菌药物耐药性的检测。共分离获得67株疑似弧菌菌株,经鉴定,19株为副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus),4株为霍乱弧菌(Vibrio cholera),4株为河流弧菌(Vibrio fluvialis)。耐药性分析研究表明,19株副溶血性弧菌总体显示对10种常用抗菌药物具有耐药性,其中100%的菌株对四环素、卡那霉素和红霉素表现耐药,94.7%的菌株对氨苄西林耐药、84.1%的菌株对左氧氟沙星和78.9%的菌株对环丙沙星耐药;4株霍乱弧菌和4株河流弧菌对10种抗菌药物的耐药性均较强,但敏感度低,两者对复方新诺明均表现为中介敏感。本研究提示,北海近岸养殖海域中弧菌种类较多,其中以副溶血性弧菌为主,大多对常用抗菌药物具有耐药性,对北海近岸海水养殖疾病防治具有一定的指导意义。

一株产胞外多糖海洋弧菌的分离鉴定及其多糖抗肿瘤活性初步研究

为初步探究广西北部湾海洋细菌所产胞外多糖(Extracellular polysaccharide,EPS)的生物学活性,通过LB-苯胺蓝培养基分离产EPS的海洋细菌,苯酚-硫酸法测定EPS产量,16S r DNA法鉴定多糖产量较高的菌株,通过凝胶渗透色谱测定多糖分子量,红外光谱分析该多糖的结构;最后运用MTT(噻唑蓝)法测定该EPS对Vero细胞的毒性,以及对He La细胞的抑制作用。结果显示,从海水及红树林泥样中共分离获得167株产EPS的海洋细菌,其中一株BHc-09 EPS产量较高,达0.306 mg/m L,通过16S r DNA序列分析鉴定BHc-09为弧菌属,其EPS分子量约为184.5 k D,结构中含有糖醛酸;该胞外多糖对正常Vero细胞无毒性而对肿瘤细胞的生长具有明显的抑制作用。

广西地区传染性囊病病毒超强毒株的分离鉴定及其VP2基因高变区的序列分析

研究通过鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）接种、琼脂扩散试验、致细胞病变和RT-PCR等方法，成功从广西疑似病鸡的腔上囊组织中获得了8个传染性囊病病毒（IBDV）毒株，分离株可致攻毒鸡发病率100％，死亡率60％～90％；分子特征上，8个分离株VP2高变区在酶切位点和特征性氨基酸上均属于vvIBDV的特征。同源性分析表明，8个分离株之间在核苷酸和氨基酸上的同源性分别为96．8％～99．1％和95．9％～99．3％，与其他参考vvIBDV毒株的同源性分别为94％～97．7％和92．5％～97．3％，而与常用疫苗株Bursine-2、B87（in），变异株GLS，经典强毒株的同源性仅有90％左右。遗传进化树上，8个分离株与国内外参考vvIBDV同处于一个大分支，与疫苗株和经典强毒株的距离较远，8个分离株与中国内地毒株SD1／97的亲缘关系最近。研究表明，广西仍然存在vvIBDV的流行。

光合细菌制剂改良养殖水环境的试验

在鱼、虾育苗池、淡水养殖池以及观赏鱼养殖水体中,采用活菌数大于50亿/mL的光合细菌制剂改良水质,测定了使用前后水的pH、COD、氨氮、亚硝酸盐、溶解氧等指标,结果表明,光合细菌制剂的质量分数越高,改善养殖水体水质的效果越好。

右旋糖酐对草酸脱羧酶的修饰研究

草酸脱羧酶(Oxdc)具有预防和治疗草酸钙结石症的应用前景,为提高其稳定性,改善其应用性能,本文采用高碘酸钠活化右旋糖酐(Dextran)对Oxdc进行化学修饰,并初步优化修饰条件:当高碘酸钠/右旋糖酐质量比为1∶1,右旋糖酐/Oxdc质量比为200∶1,修饰反应6h时,修饰率为93.2%,酶活回收率55.8%。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)和红外光谱(IR)分析结果证明右旋糖酐和草酸脱羧酶成功共价结合。同时,比较纯化的草酸脱羧酶(Oxdc)和右旋糖酐修饰的草酸脱羧酶(Dextran-Oxdc)的部分酶学性质发现,Dextran-Oxdc的最适反应pH、热稳定性及对胰蛋白酶的耐受性都明显提高,说明经过修饰的草酸脱羧酶稳定性显著增强。

西部地区高校生物技术专业微生物学双语教学的探讨

英汉双语教学是我国高等院校教育改革的一项重要内容。剖析了西部高校生物技术专业开展双语教学的必要性以及把微生物学作为双语教学的突破口的可行性。根据西部地方院校自身特点并结合教学实践,初步探索了微生物学双语教学的方法。通过问卷调查的分析,为双语教学在西部地区院校的开展积累了一点经验。

传染性法氏囊病病毒广西流行毒株的分离鉴定及其遗传进化分析

为了解传染性法氏囊病病毒(IBDV)广西流行株的遗传变异规律,本研究通过鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)接种的方法对2006年～2007年间采集自广西各鸡场的疑似传染性法氏囊病(IBD)的病料进行病毒分离,设计针对VP2高变区(vVP2)的引物对分离物通过RT-PCR进行鉴定及序列分析。共分离出9个IBDV毒株,其ELD50在105/0.2mL～106.5/0.2mL之间。分离株vVP2序列通过具有分型意义的酶切位点和关键位点氨基酸分析,证实9个分离株均属于vvIBDV。同源性分析表明,9个分离株之间在核苷酸和氨基酸的同源性分别为97.2%～100%和95.2%～100%,与vvIBDV参考株同源性分别为93.8%～98.2%和92.4%～98.6%,而与常用疫苗株Bursine-2、B87(in),变异株GLS,经典毒株,中等偏强毒力株YL052的同源性仅有90%左右。遗传进化分析发现,分离株与vvIBDV参考株同处于1个大分支,与DV86和OKYM株的亲缘关系最近,与2000年～2005年间广西分离的vvIBDV株距离较远,它们之间形成了明显的分群。研究表明,近2年来广西仍然存在vvIBDV的流行。

单甲氧基聚乙二醇-醛对草酸脱羧酶的修饰

草酸脱羧酶（Oxdc）可用于预防、治疗草酸钙结石症，为了改善其使用性能，该文采用单甲氧基聚乙二醇（mPEG）对Oxdc进行修饰，并对修饰反应条件进行了初步优化，在mPEG一醛／Oxdc摩尔比50：1，pH5．0，37℃反应12h条件下，Oxdc修饰率为50．69％，酶活保持率67．52％。经SDS—PAGE和红外光谱（IR）分析，证明mPEG共价结合于酶蛋白分子上。酶学特性分析发现，热处理后修饰草酸脱羧酶（mPEG．Oxdc）的酶活保持21．6％，而野生草酸脱羧酶（Oxdc）酶活完全丧失；在pH2．0～pH6．0酸性环境下mPEG-Oxdc的酶活相对高于Oxdc；经胰蛋白酶处理，Oxdc相对酶活仅为20．6％，而mPEG—Oxdc保持47．1％。结果表明：mPEG—Oxdc相对于Oxdc，其热稳定性、pH适应性及对胰蛋白酶的耐受性都有所增强。