基于分子对接的三角帆蚌酪氨酸酶抑制肽筛选及活性评价

【目的】筛选和鉴定三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)珍珠层蛋白酶解产物中的酪氨酸酶抑制肽,为美白肽的研究与开发提供依据。【方法】以三角帆蚌珍珠层粉为原料,基于其蛋白组成特性,采用物理改性和可控酶解技术制备珍珠层活性肽(Peptides from nacre powder,P-NP),通过测定其2,2′-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)和1,1-二苯基-2-苦基肼自由基(DPPH)的清除能力、酪氨酸酶抑制活性以及对紫外线B(UVB)辐照损伤人永生化角质形成细胞(HaCaT)的影响,探究其体外活性。采用液质联用技术(LC-MS/MS)和分子对接技术从P-NP中鉴定并筛选出三角帆蚌酪氨酸酶抑制肽,并进行固相合成和体外活性验证。【结果】P-NP的ABTS和DPPH自由基清除效果较佳,肽质量浓度为1.00、14.00 mg/mL时,两者清除率分别为41.58%和11.23%;P-NP的酪氨酸酶活性抑制能力良好,其半抑制浓度(IC_(50))值为7.51 mg/mL。P-NP质量浓度在83.22μg/mL时,显著提高UVB损伤HaCaT细胞的生长活力(P<0.05)。P-NP经LC-MS/MS鉴定后筛选出相对分子质量集中在500~1000的61条肽序列作为候选肽库,分子对接筛选出3条潜在的酪氨酸酶抑制肽,其主要通过氢键与酪氨酸酶活性中心及其以外的位点相结合,从而达到抑制其活性的作用。其中,Tyr-Pro-Asn-Pro-Tyr(YPNPY)对酪氨酸酶抑制作用最强,IC_(50)为(0.545±0.028)mmol/L,主要抑制类型为竞争型抑制。【结论】三角帆蚌珍珠层活性肽具有良好的清除自由基和酪氨酸酶抑制活性。

红外心率测定技术在香港牡蛎保活运输过程中的应用

心率能反映牡蛎活力水平和生理状态,可作为生命特征指标,用于监测牡蛎的生理代谢水平,本研究为优化香港牡蛎(Crassostrea hongkongensis)保活流通过程中心率测定技术,探究牡蛎保活期间心率的变化,为牡蛎活体流通提供理论依据。以香港牡蛎为研究对象,依据线性数学模型确定牡蛎心脏位置,并基于红外传感器结合PowerLab装置优化红外心率测定技术,探讨了牡蛎活体流通过程暂养盐度波动、线性诱导休眠和贮藏期中对牡蛎心率的影响。结果显示:经6 mm钻孔前处理后,在海水中暂养对牡蛎活力影响较小,第9天存活率仍达100%,且红外测定方法的第2~18 h内心率无显著性差异(P>0.05);个体规格、干露、盐度、温度均显著影响牡蛎的心率(P<0.05),海水贮藏牡蛎经红外技术测定的心率随时间呈显著上升趋势(P<0.05),干露贮藏牡蛎末期心率随时间呈先上升后下降(P<0.05),过度的非生物胁迫时会引起心脏停止搏动现象的产生,可能会对其造成不良影响。研究表明,红外测定技术适用于作为测定牡蛎心率技术,在保活期中心率变化有效反映了牡蛎的生理状态,可采用心率作为牡蛎无水保活的活力测定指标,对研究基于心率为指示牡蛎保活监测体系具有一定参考意义。

方格星虫体壁明胶的理化特征及功能特性分析

以方格星虫为原料,分析体壁明胶(Sipunculus nudus body gelatine,SNBG)的结构与功能特性。热水法提取SNBG,分析其氨基酸组成,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法、质谱法、紫外光谱法、傅里叶红外光谱、扫描电子显微镜等对SNBG结构进行表征;通过测定SNBG的等电点、热变性温度、乳化活性指数(emulsifying activity index,EAI)、乳化稳定性指数(emulsion stability index,ESI)、起泡能力(foam capacity,FC)、泡沫稳定性(foam stability,FS)和持油性(oil holding capacity,OHC)研究其功能特性,并测定其DPPH自由基清除率与抑制酪氨酸酶活力。结果表明,热水提取SNBG富含甘氨酸(22.41%)、脯氨酸(6.62%)和疏水性氨基酸(27.89%),具有Ⅰ型胶原的亚基结构,且产生更多的小分子肽,纤维网状结构较少,出现不规则孔隙,形成光滑片状结构交联;光谱结果显示,SNBG在230 nm处有最大的紫外吸收峰,具有部分三螺旋结构,热水提取过程中大部分解折叠为α螺旋和无规则卷曲结构;此外,SNBG的热变性温度为42.70℃,等电点为4.37;10 mg/mL的SNBG,pH值为6时,EAI、ESI、FC、FS和OHC分别为99 m^(2)/g、40 min、60%、5.88%和12.67 g/g;SNBG在1~5 mg/mL质量浓度范围内,抗氧化活性与抑制酪氨酸酶活力呈浓度依赖关系,并且5 mg/mL的SNBG对DPPH自由基清除率和酪氨酸酶抑制率分别为30.46%和78.61%。综上所述,SNBG部分三螺旋结构解旋以光滑片状结构交联,具有抗氧化和抑制酪氨酸酶活力且功能特性较好,该研究可为SNBG在食品及化妆品领域的应用提供理论依据。

温度波动对模拟冷链过程牡蛎肉鲜度品质和微生物生长的影响

【目的】探究牡蛎(Ostreidae)肉流通过程中温度波动对其鲜度品质以及微生物生长规律的影响,为牡蛎肉从微生物层面开发保鲜和冷链物流技术提供理论参考。【方法】分析牡蛎肉在模拟冷链与断链两种流通方式下的pH值、持水力、质构、总挥发性盐基氮(TVB-N)、丙二醛(MDA)和菌落总数的变化趋势,并对所有流通节点的样品进行微生物的16S V3-V4区高通量测序,通过序列信息和Alpha多样性指数、物种组成解析牡蛎肉在流通过程中的微生物生长规律。【结果】在0~192 h内随着流通时间的延长,牡蛎肉的菌落总数、TVB-N与MDA含量逐渐升高,pH值、持水力与质构特性逐渐降低。冷链组鲜度品质在流通96 h后均显著优于断链组(P<0.05)。Alpha多样性分析结果表明,冷链组样品在所有流通节点的Ace、Chao、Shannon指数普遍低于断链组,说明断链组样品的微生物丰富度和微生物多样性高于冷链组;样品在流通过程中微生物群落组成结果表明,在门水平上,假单胞菌门的物种丰富度在两种流通方式下均维持在较高的水平,特别是断链组在流通192 h后高达73.54%;在属水平上,冷链组优势菌属为多毛目菌属(Pleomorphochaeta),在192 h时相对丰度达到49.66%。断链组优势菌属为气单胞菌属(Aeromonas),在流通192 h后相对丰度达75.42%。【结论】流通期间经历多个温度变化节点的断链组鲜度品质劣变速度高于冷链组样品,说明温度波动与牡蛎肉鲜度品质劣变密切相关;多毛目菌属和气单胞菌属分别是牡蛎肉全程冷链和断链流通腐败过程中的优势菌属,本研究可为牡蛎肉冷链物流运输体系温度设定及靶向抑菌保鲜技术开发提供参考。

牡蛎肽对帕罗西汀致雄性小鼠性功能障碍的作用效果及潜在机制

牡蛎肽(Oyster peptide,OP)具有多种生物活性,然而,其对男性性功能障碍的作用效果仍知之甚少。以牡蛎肽为研究对象,探讨其对男性性功能障碍的作用效果及其潜在机制。每天灌胃帕罗西汀(Paroxetine,PRX)构建雄性小鼠性功能障碍模型,同时灌胃牡蛎肽(500 mg·kg^(−1)),持续28 d。结果表明:与模型(PRX)组小鼠相比,牡蛎肽可显著提高雄性小鼠的性能力(P<0.05),恢复血清性激素水平(P<0.01),提高阴茎组织一氧化氮(NO)含量(P<0.01)、环磷酸鸟苷(cGMP)含量(P<0.05),和一氧化氮合酶(NOS)活性(P<0.05),并降低磷酸二酯酶-5(PDE-5)活性(P<0.01);同时,牡蛎肽可增强睾丸标志性酶活性(P<0.05)和抗氧化能力(P<0.01),改善精子质量。此外,HE染色结果显示:牡蛎肽可恢复小鼠睾丸生精小管内生精细胞的数量与形态,减少生精小管空泡化现象。综上所述,牡蛎肽可有效减缓PRX导致的雄性小鼠性功能障碍,推测其对男性性功能障碍具有潜在的保护作用。

海藻糖在冷冻罗非鱼鱼糜中的抗冻作用研究

以盐溶性蛋白的溶解度、肌原纤维蛋白Ca2+-ATPase活性以及凝胶性能的变化为指标,初步探讨了海藻糖在罗非鱼鱼糜的冷冻加工及冻藏过程中对蛋白质变性的影响。结果表明,冷藏8周后,添加5%和10%海藻糖组鱼糜的盐溶性蛋白含量分别比对照组高出28.02%和33.31%;Ca2+-ATPase的活性保持分别比对照高出26%和22%;凝胶强度分别比对照高37.75%和42.82%。结论:添加5%以上的海藻糖能有效地抑制冷冻罗非鱼鱼糜冻藏过程中的蛋白质变性,减缓凝胶强度的降低,提高鱼糜制品的品质。

牡蛎肉的醒酒作用机理初探

以小鼠血清中乙醇浓度为指标,对牡蛎肉中含有的蛋白质、糖原以及牛磺酸等生理活性成分的醒酒效果进行了初步探讨,旨在阐明牡蛎肉的醒酒作用机理。实验结果表明,牡蛎肉中的糖原和牛磺酸均具有明显的醒酒效果,最佳醒酒效果的剂量分别为0.8、0.05 mg/ml,与阳性对照组比较,小鼠血清的乙醇浓度分别下降了49.4%和43.74%;牡蛎肉蛋白质无醒酒作用,糖原和牛磺酸为牡蛎肉醒酒作用的主要有效成分。

文蛤在低温有水保活过程中的主要营养成分变化

为解决贝类产品在运输、储藏和销售过程中容易死亡的问题,以文蛤为研究对象,分别在5℃、10℃、15℃和20℃下进行有水保活,测定其存活率与主要营养成分的变化情况。结果表明,在5℃下,保活效果最好,第11天存活率达95%。在不同温度下的保活过程中,乳酸含量呈上升趋势,糖原、粗脂肪、粗脂肪含量均呈下降趋势。文蛤在5℃下保活10 d,粗蛋白、粗脂肪和糖原含量分别下降16.5%、13.0%和63.1%,乳酸含量上升了125.3%。

金针菇子实体多糖成分的初步研究

初步探讨了金针菇子实体多糖成分的分离与纯化。采用热水抽提、三氯乙酸法脱蛋白、乙醇沉淀获得金针菇子实体粗多糖,然后经DEAE Cellulose阴离子交换柱(B2O74-型)进行分离纯化。结果表明,金针菇粗多糖是一个以葡聚糖为主、由数个多糖组分构成的混合多糖。

桃金娘果实多糖的构造研究(I)

对新鲜和自然干燥后桃金娘的果实中的水溶性多糖进行了分离和化学构造初步研究。结果表明桃金娘多糖是木聚糖、阿拉伯半乳聚糖(AG)或者阿拉伯半乳聚糖糖蛋白(AGP)和果胶等构成的混合多糖。通过鲜果与干果实验数据的比较,其水溶性多糖的构成以及各组分含量均有明显变化。水溶性多糖分离纯化所得到的H3和H4组分的构成单糖分析表明,它们可能是含有较多毛发区域(鼠李半乳糖醛酸聚糖为主链)的果胶多糖。

我国医疗卫生领域高层次专业人才建设存在的问题与对策

加强高层次卫生专业人才建设,促进医学科技进步与医疗卫生服务水平提高,是我国深化卫生改革发展的迫切要求。我国目前面临卫生领域高层次人才数量不足、结构不合理、政府对卫生人才培养投入不足、培养方案滞后等问题。为了推动我国高层次卫生专业人才队伍建设,建议明确目标,制定高层次卫生人才发展规划;增加投入,设立"全国卫生系统高层次人才培养计划"专项;推进管理制度创新,努力营造有利于高层次人才培养与发展的环境;深化人事制度改革,完善高层次人才培养工作的体制和机制。

菲律宾蛤仔净化技术初步研究

采用紫外线制备无菌海水对菲律宾蛤仔进行净化处理,以细菌总数和大肠菌群为指标,探讨影响菲律宾蛤仔净化效果的几个关键因素。结果表明,在20℃条件下,菲律宾蛤仔净化的最佳工艺条件为:贝水比1∶15、海水流量1.5×10-5m3/s、净化处理时间为16h,细菌总数和大肠菌群指标符合海水贝类卫生标准(GB2744-1996)。

金花茶叶药用保健成分提取新工艺研究

目的探讨采用酶解处理结合超声波振荡处理对金花茶叶药用保健成分浸出率的作用效果。方法以茶多酚和总皂甙作为浸出指标,通过正交实验,确定从金花茶叶中提取药用保健成分的最佳提取工艺条件。结果最佳组合为超声波频率为25kHz,提取温度85℃,提取时间90min;中试生产的实际效果表明,新工艺与现行的生产工艺相比,茶多酚、总黄酮和总皂甙的浸提率分别提高了17.3%、13.2%和9.3%,抽提工序时间缩短了2h。

我国医疗卫生领域高职称与高学历人才培养状况分析

利用2005年全国卫生人力资源基本信息调查数据,描述分析了我国医疗卫生领域高职称、高学历人才的科研、留学、培训等状况,发现我国高职称、高学历卫生人才科研资助力度不足、海外留学背景较少、后续教育工作有待进一步提高,分析原因并提出相应的政策措施,以期为加强我国高层次卫生人才培养提供依据。

枸杞子阿拉伯半乳糖聚糖糖蛋白的微细构造研究(I)

对从枸杞子水溶性粗多糖中分离出来的一种主要阿拉伯半乳糖聚糖糖蛋白Cp-2-B的微细构造进行了研究.通过高碘酸氧化和缓和Smith分解,从分解产物中分离出一个分子量为1.8万的半乳糖聚糖 (Cp-2-B-SD)。 甲基化分析和GC-MS分析结果表明Cp-2-B-SD为典型的梳状构造:它的主链是由(1→3)结合的半乳糖残基组成,其中约30%的半乳糖残基带有取代基。另外,还通过蛋白质水解酶反应以及阿拉伯半乳糖聚糖糖蛋白(AGP)与β-galactosylYariv试剂的特有免疫反应等手段,探讨了Cp-2-B的微细构造特征。

红甜椒、枸杞复合蔬菜汁饮料的研制

以红甜椒、枸杞为原料,研制出了一种营养丰富的新型复合蔬菜汁饮料。在实验研究过程中,运用超声波处理和酶解工艺提高原料的出汁率,通过正交实验,筛选出了该工艺生产复合蔬菜饮料的最佳配方,并对一些影响产品组织状态和风味的因素进行了探讨。

喉癌颈部淋巴结微转移与早期复发及预后关系探讨

目的分析pN0喉鳞状细胞癌患者颈部淋巴结微转移与早期复发和预后的相关性。方法收集本院2005年7月～2009年4月诊治的喉鳞状细胞癌患者中行颈廓清术后经常规病理学HE染色切片检查pN0癌病例31例的临床及病理资料;石蜡包埋的颈廓清术淋巴结标本行半连续切片HE染色,经多名有经验的病理科医师重新阅片,证实有无微转移灶。采用χ2检验分析微转移与早期复发的相关性,Kaplan-Meier曲线用于描述有无微转移两组患者的无瘤生存(disease-free survival)曲线分布。结果全部31例418枚淋巴结蜡块标本中发现微转移8例,除年龄、分化程度外的各临床病理因素与微转移之间均无相关性,微转移与早期复发之间无相关性(P>0.05)。Kaplan-Meier曲线用于描述有、无微转移两组患者的无瘤生存(disease-free survival)曲线分布,两组患者的无瘤生存率无明显分离趋势(P>0.05)。结论本研究表明pN0喉鳞型细胞癌患者中,颈淋巴结中微转移灶的存在与复发和预后无关。

枸杞子阿拉伯聚糖的提纯分离及其构造特征研究

对枸杞子水溶性粗多糖进行了分离提纯和化学构造研究。除了已经报道过的4种糖蛋白AGP(Arabinogalactan-protein:Cp-1-C,Cp-1-D,Cp-2-B和Hp-2-C)外,还得到了一种均一的阿拉伯聚糖(Hp-0-A,分子量23,000)。运用甲基化分析及其NMR技术确定了其主要构造特征。

净化菲律宾蛤仔低温保活及其主要营养成分变化

净化后的菲律宾蛤仔分别在不同条件下进行保活,测其存活率与主要化学成分的变化,结果表明,3℃下,多层湿布保活效果最好,11天后的存活率为98%,在保活过程中糖原、粗脂肪含量均呈下降趋势,分别下降了16.39和0.56%,乳酸呈上升趋势,上升了4.12mmol/L。