小胶质细胞膜伪装的纳米粒用于缺血性脑卒中的治疗

目的:制备一款由小胶质细胞膜(microglia cell membrane,MiCM)伪装和装载相变材料全氟己烷(perfluorohexane,PFH)的多功能脂质体(liposome,Lipid)纳米粒(MiCM@PFH@Lipid),并研究其基本性质,检测特异性靶向卒中后的损伤部位和实现栓塞部位血管再通的能力。方法:采用旋蒸法制备脂质体球载体,通过超声融合法将PFH和MiCM融合至脂质体形成MiCM@PFH@Lipid,透射电镜(transmission electron microscope,TEM)观察纳米粒的形样貌,马尔文粒径分析仪检测纳米粒第1天的粒径分布,和其在第1、3、5、7 d的电位分布,检测其稳定性。Western blot和考马斯亮蓝染色检测MiCM的包被情况,通过2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)、动物行为学测试检测小鼠脑功能状态。结果:表征结果显示,MiCM@PFH@Lipid呈球形,粒径为(234.800±3.143)nm,平均电位为(-33.433±1.550)mV,具有良好的分散性,在7 d内具有较好的稳定性,MiCM成功包被在纳米粒上。小鼠离体荧光结果显示,纳米粒可以快速地在损伤部位蓄积,并且与非靶向组比较差异有统计学意义(P<0.05)。动物行为学实验和脑TTC染色结果显示,MiCM@PFH@Lipid纳米粒可以实现血管再通,恢复部分神经功能(P<0.05)。病理学检查显示,纳米粒治疗后没有对重要脏器造成明显损伤,而血常规检测与正常对照组并未见明显异常(P<0.05)。结论:本实验成功制备了多功能纳米粒MiCM@PFH@Lipid,其可以靶向至缺血性卒中后脑损伤区域并破坏血栓,用于缺血性卒中疾病的治疗。

视神经脊髓炎谱系疾病生物靶向治疗研究进展

视神经脊髓炎谱系疾病(neuromyelitis optica spectrum disorder,NMOSD)是一种自身免疫性中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病,主要侵犯视神经和脊髓,具有高复发、高致残的特点,严重影响了患者的生活质量。在NMOSD的病程管理中,序贯治疗尤为重要。近年来,生物靶向制剂治疗NMOSD较传统免疫抑制剂显示出更好的疗效。本文就目前全球已获批用于治疗NMOSD的3类生物靶向制剂做一评述,包括补体抑制剂、IL-6受体阻断剂和B淋巴细胞耗竭剂,以期为NMOSD的生物靶向制剂治疗提供借鉴与参考。

外泌体在多发性硬化中的研究进展

多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是中枢神经系统炎性自身免疫性疾病,病理过程包括外周炎性细胞损伤血脑屏障内皮细胞,导致血脑屏障通透性增加,进而导致白质脱髓鞘、炎性浸润和轴突破坏等。外泌体由各个细胞分泌,可存在于各种体液中,且含有DNA、RNA、miRNA、蛋白质等信号转导物质,不同细胞来源的外泌体所含物质不同。外泌体作为细胞和细胞之间的信号传导和信息交流物质,其中所含有的miRNA作用于免疫系统,从而对MS的发病和进展有一定的影响。本文将从外泌体在MS的发病机制、诊断及治疗等方面中的作用进行综述。

TNF-α对离体培养的少突胶质细胞和髓鞘生长的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子 (tumornecrosisfactor α ,TNF α)对离体培养的少突胶质细胞及髓鞘的病理作用及己酮可可碱 (Trental)抗TNF α的作用靶点。方法 采用体外器官型组织培养Wistar大鼠小脑组织及免疫细胞化学方法 ,观察髓鞘生长及表达 2′3′ 环核苷酸 3′ 磷酸二酯酶 (2′3′ cyclicnucleotide,3′ phosphodiesterase,CNPase)阳性的少突胶质细胞数。结果 TNF α及TNF α +Trental组髓鞘形成率明显低于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ,TNF α和TNF α +Trental组CNPase阳性细胞数明显较对照组少 (P <0 .0 1 )。结论 TNF α在体外能抑制少突胶质细胞及髓鞘的生长 。

多发性硬化研究的动物模型制备

目的探索实验性变应性脑脊髓炎(experimentalallergicencephalomyelitis,EAE)动物模型的制备,了解其病理改变,为多发性硬化免疫病理机制及实验性治疗的研究提供实验依据。方法采用免疫诱导方法制备EAE模型,利用光镜、电镜观察豚鼠EAE模型的组织学改变。结果至免疫后18d,全部豚鼠均出现EAE临床症状;光镜下见脑实质及蛛网膜下腔小血管充血,血管周围炎性细胞浸润,呈“袖套”状改变。电镜下见髓鞘明显分层、水肿甚至断裂,轴突细胞器消失。结论EAE模型建立方法稳定、可靠;其病理改变为血管周围炎性浸润、白质脱髓鞘。

急性EAE豚鼠脑白质TNF-αmRNA的表达及其实验性治疗

目的 探讨实验性变应性脑脊髓炎(EAE)豚鼠脑白质肿瘤坏死因子(TNF-α)mRNA的表达以及己酮可可碱、培高利特对其表达的影响。方法 采用免疫诱导方法制备EAE豚鼠模型,应用RT-PCR方法检测:EAE豚鼠脑白质TNF-α mRNA的表达。结果 EAE组豚鼠脑白质TNF-α mRNA的表达明显高于对照组(P<0.01),治疗组较EAE组表达下降(P<0.05)。结论 急性EAE豚鼠脑白质TNF-α mRNA的表达上调,与疾病的触发有关,己酮可可碱、培高利特对TNF-α mRNA的表达具有不同程度的抑制作用。

从分子免疫病理学的角度看视神经脊髓炎谱系疾病诊断标准的演变

视神经脊髓炎(optic nerve myelitis,NMO)是区别于多发性硬化(multiple sclerosis,MS)的神经系统炎性脱髓鞘性疾病。由于特异性水通道蛋白-4(aquaporin-4,AQP4)抗体的发现,人们对NMO有了崭新的认识和理解,并提出了视神经脊髓炎谱系疾病(neuromyelitis optica spectrum disorders,NMOSDs)的概念。最近研究发现髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG)作为新的靶抗原,在血清AQP4抗体阴性患者中有很大意义。本研究根据分子免疫病理学的新发现、专家共识结合临床经验解读NMOSDs国际诊断标准,对NMOSDs的诊断和治疗提出一些意见。

急性实验性变应性脑脊髓炎豚鼠脑白质肿瘤坏死因子αmRNA的表达及意义(英文)

背景:研究发现,肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor-alfa,TNF-α)在急性实验性变应性脑脊髓炎(experimentalallergicencephalomyelitis,EAE)的发病机制中起着重要作用,它可以介导少突胶质细胞的凋亡及脱髓鞘,是EAE脑内重要的炎性细胞因子之一。目的:探索EAE豚鼠脑白质TNF-αmRNA的表达以及己酮可可碱、培高利特对其表达的影响。设计:随机对照实验。地点和对象:研究在重庆医科大学附属第一医院神经病学研究所完成,重庆医科大学动物实验中心提供的成年、体质量200～350g豚鼠为研究对象。方法:采用免疫诱导方法制备EAE豚鼠模型,应用RT-PCR方法检测EAE豚鼠脑白质TNF-αmRNA的表达。主要观察指标:①成功制模。②TNF-αmRNA表达的半定量分析。结果:EAE组豚鼠脑白质TNF-αmRNA的表达(1.11±0.06)明显高于对照组(0.32±0.02)(P<0.01),治疗组(0.51±0.03,0.76±0.03)较EAE组表达下降(P<0.05)。结论:急性EAE豚鼠脑白质TNF-αmRNA的表达上调,与疾病的触发有关,己酮可可碱、培高利特对TNF-αmRNA的表达具有不同程度的抑制作用。

实验性变应性脑脊髓炎脑白质细胞凋亡的实验性干预研究

目的探索Trental及Pergolide对实验性变应性脑脊髓炎(experimentalallergicencephalomyelitis,EAE)脑白质细胞凋亡的抑制作用,为临床上Trental及Pergolide治疗多发性硬化(multiplesclerosis,MS)提供实验依据。方法免疫诱导法建立豚鼠实验性变应性脑脊髓炎(EAE)模型,TUNEL法原位检测豚鼠脑白质凋亡细胞数。结果正常对照组豚鼠脑白质没有凋亡细胞,EAE豚鼠脑白质凋亡细胞数为106.39±15.28,Trental和Pergolide治疗组豚鼠脑白质凋亡细胞数分别为75.25±8.72和52.87±11.26,较EAE模型组明显减少(P<0.01)。结论脑白质细胞凋亡引起的继发脱髓鞘,是EAE发病机制的一个重要途径,Trental和Pergolide能抑制EAE豚鼠脑白质细胞凋亡,在EAE的实验性治疗中具有神经保护作用。

细胞因子在MS发病机制中的作用

多发性硬化症（MS）是由Tc介导的中枢神经系统脱髓鞘疾病，细胞因子在MS的发生、发展的免疫病理过程中起着重要作用。本文综述了MS中细胞因子的产生、定位、在MS发病机制中的作用以及对其治疗的指导。

多发性硬化病人脑脊液2′3′-环核苷酸3′-磷酸二酯酶的活性及其临床意义

本文应用沉淀比色法测定了31例多发性硬化(MS)病人CSF CNP_(ase)活性,发现其活性明显高于对照组和脑梗塞组,且与病情轻重、近期预后密切相关;20例MS病人的CSF CNP_(ase)活性与髓鞘硷性蛋白(MBP)含量成正相关关系(r=0.80,P<0.01),CNP_(ase)作为髓鞘标志酶。对MS的诊断有临床实用价值。

肢体抖动性短暂性脑缺血发作临床分析

目的通过3例典型患者的病史和辅助检查,结合文献复习,探讨肢体抖动性短暂性脑缺血发作的临床表现及诊断,以提高诊断的准确率。方法采用动态脑电图、超声多普勒、磁共振成像、磁共振动脉血管造影、全脑血管造影等辅助检查,对3例肢体抖动性短暂性脑缺血发作患者进行临床表现、辅助检查及影像学资料分析。结果3例患者均有肢体抖动的临床表现,其中2例曾被误诊为继发性癫痫,给予抗癫痫治疗无效,行全脑血管造影、脑电图等检查。全脑血管造影提示3例颈内动脉系统均存在严重闭塞或狭窄性病变,而发作期脑电图检查未见癫痫波释放。给予抗血小板聚集等药物治疗,但仍偶有发作。2例施行血管内支架植入术后发作完全停止,1例由于血管迂曲明显,手术未获成功,经内科保守治疗症状缓解出院。结论肢体抖动性短暂性脑缺血发作为临床少见短暂性脑缺血发作,其发作形式常表现为发作性、无意识的一侧肢体无力及抖动,和局灶性运动性癫痫发作相似,易误诊为局灶性癫痫。通过脑电图及全脑血管造影等检查可以明确诊断,从而提高对该病诊断的准确率,防止漏诊及误诊。

养血清脑颗粒对大鼠脑缺血再灌注损伤后轴突再生及RGMa表达的影响

目的探讨养血清脑颗粒对大鼠脑缺血再灌注损伤后轴突再生的影响及可能的机制。方法成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠48只,随机分为假手术组、缺血/再灌注组、生理盐水对照组和养血清脑颗粒治疗组。缺血2周后,采用免疫组织化学及Western blot法检测缺血侧脑皮质及海马排斥性导向因子A(repulsive guidance molecular A,RGMa)蛋白的表达,免疫染色神经微丝蛋白200(NF-200)评估轴突生长。术后2、7、14 d和28 d,采用改良的神经功能缺损评分(modified neurological severity score,mNSS)评估大鼠神经功能。结果同缺血/再灌注组相比,养血清脑颗粒治疗组大鼠缺血侧脑皮质和海马RGMa蛋白表达明显降低(P<0.01),NF-200蛋白表达增加(P<0.05),mNSS神经功能评分显著下降(P<0.05)。结论养血清脑颗粒能促进大鼠缺血再灌注损伤后神经功能的恢复,其机制可能与下调RGMa蛋白的表达,促进轴突再生有关。

甲基强的松龙抑制实验性自身免疫性脑脊髓炎IL-23／IL-17轴机制研究

目的探讨甲基强的松龙(methylprednisolone,MP)对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmuneen cephalomyelitis,EAE)新发现的IL-23/IL-17炎性轴发病机制的影响。方法建立Wistar大鼠EAE动物模型,给予糖皮质激素MP和生理盐水预处理建立MP组和EAE组,并设立正常对照组,RT-PCR法检测大鼠脑组织中白介素-12(interleukin-12,IL-12)和白介素-23(interleukin-23,IL-23)亚基IL-23P19、IL-12P40、IL-12P35及白介素-17(interleukin-17,IL-17)前体毒性T细胞相关抗原8(cytotoxic T lymphocyte-associated antigen8,CTLA-8)的mR-NA表达,用ELISA法检测IL-17水平。结果MP组大鼠脑组织中IL-23P19、IL-12P40、IL-12P35及CTLA-8的mR-NA的表达比EAE组低(P<0.05),IL-17水平也低于EAE组(P<0.05),差异均有统计学意义。结论甲基强的松龙能够抑制IL-23/IL-17轴而起到抗炎治疗作用。

马来酸桂哌齐特对大鼠局灶性脑缺血再灌注后白介素-1β、白介素-6的表达及神经功能的影响

目的研究马来酸桂哌齐特(cinepazide maleate,CM)对大鼠急性脑缺血后IL-1β、IL-6的表达及神经功能的影响。方法成年雄性SD大鼠48只,采用随机数字表法分为正常组、假手术组、缺血再灌注组及CM治疗组,在缺血再灌注后第2、7天对脑组织进行HE染色、测定脑组织含水量及采用免疫组化法测定皮质IL-1β、IL-6的表达,并对动物进行神经功能评分。结果脑缺血再灌注后第2天,CM治疗组与缺血再灌注组比较,脑内有较多的神经细胞存活,IL-1β、IL-6的表达被明显抑制(P<0.01),但是CM治疗组脑组织含水量及神经功能评分与缺血再灌注组比较无明显改善(P>0.05)。至缺血再灌注后第7天,缺血再灌注组IL-1β、IL-6的表达较早期有所降低(P<0.01),同时伴随神经功能的改善(P<0.05),CM治疗组的改善更为明显(P<0.01)。结论 CM对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有一定的脑保护作用,其作用机制可能与CM降低脑内IL-1β、IL-6的表达有关。

原发性高血压病人脑动脉血流动力学改变的特征分析

目的:探讨高血压病患者脑血管血流动力学改变,为高血压病脑卒中的预防提供临床依据。方法:从参与健康体检人群中随机筛选2025人分为高血压病组892例,对照组1133例,其中高血压组按是否合并糖代谢和脂代谢紊乱再分为3个亚组。对研究对象进行病史、内外科、抽血等检查及颈部TCD检测,分析高血压不同时期、不同年龄段和合并不同代谢紊乱的收缩期血流速度(Systolic velocity,Vs)、舒张期血流速度(Diastolic velocity,Vd)、平均血流速度(Mean velocity,Vm)、阻力指数(Resistant index,RI)、搏动指数(Pulsatility index,PI)5个指标。结果:(1)原发性高血压病患者基底动脉Vs、Vm、Vd显著降低(P<0.01),大脑中动脉Vd降低表现(P<0.05),各期RI和PI值较正常组均有升高(P<0.01)。(2)高血压合并糖代谢紊乱组脑血流动力学改变最明显,Vm、Vd、RI、PI与其余各组均有差异。合并高脂血症组与单纯高血压组差异不明显。(3)青年高血压病患者TCD异常率为34.5%,以脑血管痉挛为主(69.2%);老年高血压病患者TCD异常率79.0%,以动脉硬化为主(51.3%)。结论:原发性高血压可引起脑血管多种血流动力学改变,以基底动脉较为敏感,监测指标中以RI和PI最为敏感。TCD能较好反映原发性高血压病患者脑血管血流动力学改变及病变严重程度,其结果受年龄、血糖及血脂代谢紊乱等多种因素影响。

米诺环素对大鼠脑缺血再灌注损伤后学习记忆能力及海马神经元PSD-95蛋白表达的影响

目的:探讨静脉用低剂量米诺环素对局灶性脑缺血再灌注大鼠认知功能障碍及缺血侧海马生长相关蛋白-43(growth associated protein-43,GAP-43)和突触后致密物质-95(postsynaptic density 95,PSD-95)表达的影响。方法:采用线栓法建立Sprague-Dawley大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型,将45只雄性大鼠随机分为假手术组、模型组及米诺环素组(n=15)。分别采用免疫组织化学及免疫印迹法检测术后2周大鼠缺血侧海马GAP-43和PSD-95蛋白的表达,Morris水迷宫实验评价大鼠的行为学改变。结果:同假手术组相比,模型组大鼠缺血侧海马GAP-43(0.49±0.03)和PSD-95(0.92±0.04)表达明显增高(P=0.000);大鼠逃避潜伏期明显延长[(44.2±10.0)s],穿过原平台次数(2.6±0.9)和在目标象限探索时间百分率明显降低[(19.2±2.1)%,P=0.000)]。同模型组相比,尾静脉给予3 mg/kg米诺环素治疗后,大鼠缺血侧海马GAP-43(0.72±0.05)表达明显增加,PSD-95表达降低(0.67±0.05,P=0.000),大鼠逃避潜伏期明显缩短[(30.8±7.6)s,P=0.020]、穿过原平台次数(4.4±1.1,P=0.012)和在目标象限探索时间百分率明显增加[(30.4±2.7)%,P=0.000)]。结论:低剂量米诺环素能显著改善脑缺血再灌注后大鼠学习记忆能力,其机制可能与上调GAP-43和下调PSD-95表达有关。

醒后卒中的临床特点及早期预后研究

目的探讨醒后卒中的临床特点及早期预后情况。方法前瞻性、连续性纳入2017年4月至9月所有入住重庆医科大学附属第一医院神经内科发病3 d以内的274例急性缺血性卒中患者,根据发病时间是否明确分为醒后卒中组与非醒后卒中组,随访发病90 d改良Rankin量表(mRS)评分,将醒后卒中患者分为预后良好组(mRS评分0～1分)及预后不良组(mRS评分≥2分),分析醒后卒中的临床特点、预后情况及影响早期预后的因素。收集所有患者人口学及基线临床资料、影像学特点、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分、急性卒中治疗Org10172试验(TOAST)卒中病因分型。采用单因素分析比较醒后卒中组与非醒后卒中组以及醒后卒中患者预后良好组与预后不良组间各因素的差异,采用多元Logistic回归方程分析醒后卒中早期预后不良的独立危险因素。结果 274例急性缺血性卒中患者中,醒后卒中70例(25.5%),其中47例预后良好,23例预后不良。单因素分析显示,醒后卒中与非醒后卒中的危险因素、病情严重程度、TOAST病因分型及90 d预后差异均无统计学意义(均P>0.05),醒后卒中组血清白蛋白水平明显高于非醒后卒中组(P<0.05)。醒后卒中患者预后良好组与预后不良组患者间入院NIHSS评分、入院NIHSS评分≥5分、入院GCS评分差异均有统计学意义(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,入院NIHSS评分≥5分(OR=7.042,95%CI:1.770～28.013,P<0.05)是醒后卒中早期预后不良的独立危险因素。结论醒后卒中与非醒后卒中具有相似的危险因素、疾病严重程度、TOAST卒中病因学分型及早期预后,入院NIHSS评分≥5分是醒后卒中早期预后不良的独立危险因素。

过表达Fibulin-5对大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的保护作用

目的探讨过表达Fibulin-5对大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的保护作用及其可能的机制。方法将112只成年雄性SD大鼠分成4组:假手术组(S)、脑缺血组(I/R)、脑缺血加过表达Fibulin-5腺病毒载体干预组(I/R+AdFBLN)以及脑缺血加空腺病毒载体干预组(I/R+Ad-HK)。大鼠在大脑中动脉阻塞前7 d接受腺病毒注射,再灌注后24 h,采用Western blot、RT-PCR和免疫荧光检测各组大鼠脑组织Fibulin-5和紧密连接蛋白occludin的表达;伊文思蓝漏出评估血脑屏障的通透性;TTC染色检测脑梗死体积并进行神经功能缺损评分。结果脑缺血再灌注24 h,与S组比较,I/R组大鼠伊文思蓝明显漏出(P<0.01),伴有紧密连接蛋白occludin表达降低(P<0.01)。I/R+Ad-FBLN组Fibulin-5的mRNA水平和蛋白水平明显高于其他3组(P<0.01),伊文思蓝漏出明显减少(P<0.01),occludin的表达明显增高(P<0.01),TTC梗死灶明显缩小(P<0.01),神经功能缺损明显减轻(P<0.01)。而I/R+Ad-HK组与I/R组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论过表达Fibulin-5减轻大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的损害,Fibulin-5促进紧密连接蛋白occludin的表达可能是其保护作用的机制之一。

养血清脑颗粒对缺血/再灌注大鼠脑炎性因子表达和轴突再生的影响

目的:探讨养血清脑颗粒对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤后皮质核因子-κBp65(nuclear factor-κBp65,NF-κBp65)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、神经微丝蛋白-200(neurofilament protein-200,NF-200)的表达及神经功能的影响。方法:72只健康的成年雄性SD大鼠,随机分为假手术组(S组)、缺血/再灌注组(I/R组),生理盐水对照组(I/R+C组)和养血清脑颗粒治疗组(I/R+YXQ组)。在缺血/再灌注后第2天及第2周,分别采用免疫组织化学法观察NF-κBp65,IL-6,NF-200的表达,West-ern blot法检测缺血脑组织NF-κBp65蛋白的表达,楼梯测试评估大鼠的神经功能。结果:缺血/再灌注后第2天,I/R组大鼠缺血侧皮质NF-κBp65,IL-6表达明显增高(P<0.001),NF-200表达显著降低(P<0.001),同I/R组相比,I/R+YXQ组NF-κBp65,IL-6表达降低(P<0.001);缺血/再灌注后第2周,同I/R组相比,I/R+YXQ组NF-200表达增加(P<0.001),神经功能评分无明显改善(P=0.178)。结论:养血清脑颗粒可能通过减轻局灶性脑缺血/再灌注损伤后皮质神经元的炎症反应,从而促进轴突相关蛋白的表达,改善神经功能。