咽后隙巨大脂肪瘤伴术中哮喘发作1例

1病例资料患者,男性,58岁,因“发现颈部包块3月”入院。患者诉3月前发现颈部包块,右侧明显,约鹌鹑蛋大小、柔软,未予以重视,近20天感吞咽不适、呼吸不畅,夜间打鼾明显,近2天症状加重,入院前1天于县医院行CT示颈部脂肪瘤可能。病程中,患者生命体征平稳,二便无改变,近期体质量无明显下降。患者有支气管哮喘病史10余年,使用吸入沙美特罗替卡松气雾剂,近2月内发作1次。否认药物过敏史、烟酒史。专科查体:咽后壁偏右侧隆起,触之软,咽腔狭窄。

昆明种系小鼠胚胎干细胞的分离培养及特性鉴定

目的 提高昆明小鼠胚胎干细胞 (ES细胞 )建株的成功率。方法 收集小鼠 3.5d的囊胚培养 ,用小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层 ,形成的ES细胞样集落 ,经两次亚克隆分离培养ES细胞 ;进行相差显微镜观察、碱性磷酸酶染色和体内外分化能力鉴定。结果 获得两个稳定ES细胞集落 ,传至第 11代。ES细胞呈集落样生长 ,碱性磷酸酶染色强阳性 ,体外分化的细胞沿拟胚体外向性生长 ,形态多样 ,在体分化可形成来源于 3个胚层的组织。结论 两次亚克隆法获得的细胞具有ES细胞主要的生物学性状 。

可调式支撑喉镜下声门暴露困难患者的喉显微外科手术

目的探讨支撑喉镜下声门暴露困难患者喉显微外科手术安全有效的方法。方法 2012年7月~2015年6月65例术前评估为声门暴露困难的成年患者中有62例（95.38%）在经支撑喉镜行喉显微外科手术中发生声门暴露困难,其中,声带息肉42例,声带囊肿9例,声带淀粉术变5例,声带重度不典型增生4例,声带高分化鳞癌2例;回顾性分析这62例患者的临床资料,对完成喉显微外科手术的方法进行分析。结果 62例患者术中使用普通支撑喉镜均声门暴露困难,58例（93.55%,58/62）改用可调式电视支撑喉镜顺利完成手术,其中,10例加深麻醉深度配合30°内镜并按压喉体使声门暴露完全完成手术,但有5例患者术后出现不同程度的咽后壁损伤;1例伴小颌畸形的声带广基息肉患者手术未成功,改为表面麻醉电子喉镜下完成手术;1例牙列不齐并装有烤瓷牙的患者及2例声带癌患者改行无气管切开喉裂开术。结论支撑喉镜下声门暴露困难者大部分可通过带内镜的可调式电视支撑喉镜安全有效地暴露声门,部分患者可同时经支撑喉镜侧通道放入30°内镜辅助暴露声门,以完成各类喉显微外科手术。

昆明小鼠胰腺干细胞分离培养及特性鉴定

目的 分离培养昆明小鼠胰腺干细胞并进行鉴定和观察其分化胰岛细胞的能力。方法 用酶消化法分离生后不同时期昆明小鼠胰腺干细胞 ,用细胞角质蛋白 19(Cytokeratin 19,CK19)、胰岛素 (Insulin)和胰高血糖素 (Glucagon)抗体进行免疫细胞化学染色 ,鉴定细胞种类和分化特性。结果 分离初 ,可见少量上皮样细胞存活 ,更换含有生长因子的培养基后 ,可见细胞分裂增殖 ,呈长梭形 ,逐渐形成集落。传代后鉴定呈CK19阳性。高糖诱导分化后 ,细胞形成胰岛样结构 ,免疫细胞化学染色显示大部分细胞胰岛素阳性 ,少数细胞呈胰高血糖素阳性。结论 昆明小鼠胰腺干细胞能在体外培养条件下增殖 ,具有分化形成胰岛 β细胞和α细胞的能力。

小鼠胚胎干细胞NT3基因转染后移植对脊髓损伤的恢复作用

目的：由胚胎干细胞分化的神经细胞移植能够在一定程度上恢复脊髓损伤模型动物的功能,此发现使胚胎干细胞成为一种用于移植学研究的重要工具。观察经NT3基因转染修饰的小鼠MESPU35（ES-NT3）胚胎干细胞株移植对脊髓损伤动物脊髓结构和功能重建的恢复效果。方法：实验于2004-09/12在解放军第三军医大学组织胚胎学教研室实验室完成。①材料：清洁级成年Wistar大鼠36只,随机数字表法分为模型对照组、未转染细胞移植组、基因转染细胞移植组,12只/组,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。移植所用MESPU35细胞株和ES-NT3细胞株均由本室冻存。②实验方法：复苏MESPU35和ES-NT3细胞株,采用经典维甲酸4-/4＋法诱导两种胚胎干细胞神经定向分化,收集分化9d后的细胞,调整细胞终浓度至5×10^10L^-1备用。各组大鼠均建立L4脊髓损伤模型,在脊髓完全横断后10min内,基因转染细胞移植组分多点缓慢注入ES-NT3胚胎干细胞悬液,2μL/点,细胞总数约4×10^5个,注射位置为损伤区域白质与灰质交界处;未转染细胞移植组同法注射MESPU35胚胎干细胞悬液,模型对照组注射等量生理盐水。③实验评估：各组大鼠分别于术前、术后即刻、术后15d和30d进行后肢运动功能Tarlov评分检测,分数越低表示运动功能恢复越差。后肢运动功能检测30min后进行斜板实验,检测大鼠抓握和维持姿势能力。微型注射器将25%的辣根过氧化物酶2μL注入大鼠坐骨神经内,2d后取L1～L4脊髓常规冰冻切片,参照Mesulam法进行过氧化物酶逆行追踪。结果：因细菌感染,模型对照组、未转染细胞移植组、基因转染细胞移植组各死亡2只、1只、2只。①后肢运动功能检测：各组大鼠术后即刻后肢运动功能评分为0。术后15d,30d与模型对照组比较,未转染细胞移植组后肢运动功能评分升高（P〈0.01）,但未达到正常水平;基因转染细胞移植组恢复程度最高,后肢运动功能评分基本接近正常水平,明显高于未转染细胞移植组（P〈0.05）。②斜板试验：与后肢运动功能检测结果基本相似。③辣根过氧化物酶逆行追踪情况：模型对照组未见阳性神经元。术后30d基因转染细胞移植组阳性神经元增至最多,脊髓结构恢复情况优于未转染细胞移植组。结论：经NT3基因转染修饰的鼠MESPU35胚胎干细胞向神经定向诱导分化后,移植治疗脊髓损伤大鼠能更好地促进脊髓功能恢复和结构重建。

ES-NT3细胞的神经定向诱导分化

目的了解维甲酸(retinoicacid,RA)对ES NT3细胞的神经诱导分化的影响。方法转染NT3基因后的MESPU35胚胎干细胞(ES NT3细胞),4-/4+法诱导其神经定向分化。结果相差显微镜观察ES NT3细胞诱导分化的神经样细胞拟胚体百分率随分化时相点延长而升高;免疫细胞化学观察ES NT3细胞诱导分化形成的NF200阳性细胞和GFAP阳性细胞的比例随分化时相点延长而升高,二者总和可以达到75%。结论RA诱导ES NT3细胞神经定向分化能够产生高比例神经细胞,提示其可以作为移植治疗神经损伤的供体。

维甲酸对MESPU35胚胎干细胞系神经定向分化的影响

目的 了解维甲酸 (Retinoicacid ,RA)对MESPU3 5胚胎干细胞系诱导分化的影响。方法 小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层 ,培养MESPU3 5细胞系 ,4 4+法诱导其神经定向分化。结果 相差显微镜观察RA诱导MESPU3 5细胞系出现神经样细胞拟胚体百分率随分化时相点和RA浓度升高而升高 ,免疫细胞化学观察分化的NF2 0 0和GFAP阳性细胞随分化时相点和RA浓度升高而增加 ,NF2 0 0阳性细胞由无突起变为多极细胞 ,GFAP阳性细胞突起由短变长 ,最后联结成网状。流式细胞仪检测分化的GFAP、NF2 0 0阳性细胞比例变化与免疫细胞化学结果相符。结论 RA诱导MESPU3 5细胞系神经定向分化的调节以浓度和时间依赖模式进行 。

综合性大学如何加强艺术类专业学风建设浅析

随着艺术类招生规模的扩大,综合性大学对于艺术类教学管理也越来越重视,对于加强艺术类专业学风建设的研究也更重视。本文从艺术生的特点出发,分析了新办艺术类专业的综合性大学,在管理模式、教学资源、师资队伍、艺术氛围、对艺术生的认识的现状对艺术类培养存在的限制进行了分析,并提出了一些加强综合性大学艺术类专业学风的策略。

BC023882基因克隆及其对细胞周期的影响

目的获得基因BC023882全长真核表达载体及检测该基因对培养细胞生长的影响。方法利用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)扩增基因BC023882的编码区序列,克隆到pcDNA3.1(-)/Myc-H is(+)/lac Z真核表达载体中,构建基因BC023882的真核表达载体;脂质体法转染小鼠胚胎成纤维细胞和COS-7细胞,并且通过细胞生长曲线测定和流式细胞仪观察该基因对细胞生长的影响。结果酶切并测序鉴定证明获得的重组子符合基因BC023882的编码序列;转染该基因后细胞增殖减慢,细胞增殖指数减低。结论成功构建了基因BC023882的真核表达载体,并且观察到该基因对细胞生长起到一定的抑制作用。

维甲酸诱导MESPU35胚胎干细胞系定向分化神经细胞的最佳条件(英文)

背景:神经轴突再生是治疗中枢神经系统损伤必须克服的困难之一,包括移植神经干细胞、胚胎干细胞和许旺细胞等在内的细胞移植疗法已取得显著疗效,然而供体细胞不足的瓶颈限制了其发展。目的:观察维甲酸诱导MESPU35胚胎干细胞分化过程,找到其最佳分化为神经细胞的条件。设计:非随机对照实验。单位:解放军第三军医大学组织胚胎学教研室。材料:实验于2000-01/05在解放军第三军医大学基础部组织胚胎学教研室完成。发情期昆明种小鼠18只,雌12只,雄6只,2∶1同笼交配,阴栓检出日记为受孕1d。MESPU35胚胎干细胞株。方法:孕13～16d的小鼠胚胎,去头,胸腹腔脏器及四肢后,制备饲养层细胞。①采用饲养层贴壁培养增殖MESPU35胚胎干细胞,经典4-/4+法(即拟胚体自然生长4d,不加维甲酸,随后4d添加维甲酸诱导形成高比例神经拟胚体的方法)诱导其神经定向分化,不同浓度血清培养拟胚体,相差显微镜观察不同血清浓度下神经样拟胚体并计数。②免疫细胞化学技术观察各个分化时相点(5,9,14d)和不同维甲酸浓度下分化细胞形态学特征,流式细胞仪计数分化神经细胞比例。主要观察指标:①维甲酸诱导MESPU35胚胎干细胞分化后神经拟胚体形成中突起和细胞体长度估计测量。②免疫细胞化学染色分化细胞形态观察及流式细胞仪测量分化细胞比例。结果:①相差显微镜观察发现不同血清浓度对拟胚体形成后神经定向分化有一定影响,血清浓度过高和过低降低了拟胚体神经分化比例,5%血清浓度分化比例高。②免疫细胞化学观察维甲酸诱导MESPU35胚胎干细胞分化形成的NF200阳性细胞和胶质纤维酸性蛋白阳性细胞的比例随分化时相点和维甲酸浓度升高而升高,NF200阳性细胞形态由无突起变为多极细胞,胶质纤维酸性蛋白阳性细胞突起由短变长,最后联结成网状。③流式细胞仪检测分化产生的胶质纤维酸性蛋白、NF200阳性细胞比例变化类似免疫细胞化学。结论:维甲酸配合合适的血清浓度、分化时相点等条件能够诱导MESPU35胚胎干细胞高比例神经分化,其分化调节以浓度依赖模式和时间依赖模式进行。

结合动态多媒体课件进行医学本科人体胚肥学教学

人体胚胎发生是一个连续复杂的过程，传统的教学手段不利于学生更好地学习人体胚胎学。多媒体课件结合了图，文，具有动态演示效果，可以将人体发生的形态变化清晰地表现出来。我们利用目前已经制作完成的部分进行授课，通过教学评估观察到多媒体课件对人体胚胎学教学有很大帮助，在一定程度上促进了学员们对人体发生过程的认识，提高了学生学习胚胎学的兴趣。

构建具艺术特色团组织生活的思考与实践

现在的高校大学生以90后为主,这一代人生长的环境相比以前都有了质的飞跃,他们的思想具有时代特征,尤其是艺术类团员青年。传统的团组织生活形式比较单调,以单向灌输为主,与艺术类团员青年的特点不相容,难以达到教育效果。本文从团组织生活的重要性、艺术类团组织生活研究现状出发,分析了艺术类团员青年的特点,提出了以艺术类团员青年的专业和兴趣爱好为基础,构建具艺术特色团组织生活。

体外培养神经干细胞分化为类胰岛样组织的研究

目的 观察体外培养的神经干细胞是否可以被诱导分化为类胰岛样组织。方法 体外培养神经干细胞 ,在胰岛素等外源性复合成分 (ITS)诱导分化后 ,分别进行胰腺上皮干细胞特异性标志物CK 19、胰腺 β细胞特异性成分胰岛素和胰腺α细胞特异性成分胰高糖素等的免疫细胞化学染色鉴定。结果 体外培养的神经干细胞经诱导分化 3d后 ,在神经干细胞集落附近可见散在或成群分布的上皮样细胞 ,并呈CK 19免疫阳性反应。继续培养 2～ 4周后 ,上皮样细胞增多 ,细胞圆形或呈鹅卵石样排列 ,进一步增生形成类胰岛样组织 ,其中大多数细胞呈胰岛素免疫反应阳性 ,少数细胞呈胰高糖素免疫反应阳性。结论 体外培养的神经干细胞具有向类胰岛样组织分化的潜能 ,它能分化为胰岛的α细胞和 β细胞。

单味黄芪红花丹参注射液对神经干细胞分化影响的初步研究

目的寻找对神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的增殖、分化和存活有促进作用的单味中药成分,进而确定对NSCs的增殖和分化有影响的中药有效成分。方法本研究筛选了黄芪、红花、丹参3种中药注射液分别刺激培养的NSCs,观察NSCs的分化状态。结果发现黄芪、红花有明显的促进NSCs分化的作用,其中黄芪效果最佳,而丹参却有促进NSCs凋亡的作用,这种作用随着其浓度的升高而加强。结论黄芪、红花对NSCs的分化起积极作用,丹参对NSCs的分化有毒性作用,也可能促进NSCs的凋亡,为进一步从细胞水平和分子水平研究中药的作用机制和NSCs的分化机制提供了依据。

人胚胎大脑皮层神经干细胞的分离培养

目的 为人神经干细胞的基础研究及临床应用提供细胞模型。 方法 采用无血清培养技术 ,分离培养了 10～ 14周人胚大脑皮层细胞 ,并用神经上皮干细胞蛋白 (Nestin)免疫组化鉴定培养细胞 ;5 %胎牛血清诱导其分化 ,神经丝 2 0 0 (NF 2 0 0 )和胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)免疫组化鉴定分化细胞。 结果 获得了大量未分化、呈簇状悬浮生长的神经干细胞团 ,且能被诱导分化成神经元和神经胶质细胞。经传 12代后仍具干细胞特性。 结论 本实验成功地分离培养了人胚胎大脑皮层神经干细胞 ,为神经干细胞的基础研究和临床应用奠定了基础。

人胰腺干细胞的体外分离培养、鉴定和分化特性

目的 体外分离培养人胰腺干细胞 ,进行鉴定并初步观察其分化为胰岛内分泌细胞的能力。方法 用酶消化法从人胎儿胰腺分离胰腺干细胞 ,培养并传代 ,应用胰腺干细胞特异性标志物CK 19、胰岛 β细胞特异性成分胰岛素和α细胞特异性成分胰高血糖素的抗体进行免疫细胞化学染色鉴定细胞种类和分化特性。结果 分离培养的人胎儿胰腺干细胞呈梭形 ,最初 1周生长较慢 ,以后增殖较快 ,约培养 3周后即可传代培养。传代细胞约生长 2周即可再次传代 ,免疫细胞化学染色显示细胞呈CK 19免疫阳性反应。经诱导分化后 ,细胞形成类胰岛样组织 ,此时免疫细胞化学染色显示部分细胞呈胰岛素免疫阳性反应 ,少数细胞呈胰高糖素免疫阳性反应。结论 人胰腺干细胞能在体外培养条件下快速增殖 ,并具有多向分化潜能 ,能分化形成胰岛

氯乙烯诱导小鼠胚胎神经管发育畸形的研究

目的观察孕早期不同剂量氯乙烯(VC)染毒后胎鼠神经系统发育以及神经上皮细胞增殖和凋亡的变化情况,明确VC对神经系统发育的致畸作用。方法将孕鼠21只按完全随机设计分组法分为实验组和对照组,实验组分别用不同剂量的VC对孕6.5 d的小鼠进行腹腔染毒,对照组注射花生油,均于E12.5取胚胎。观察胎鼠的表观发育情况,计算胚胎畸形率以及神经系统异常的发生率。运用PCNA免疫组织化学技术和TUNEL染色技术检测并观察神经管上皮细胞的增殖及其凋亡的变化。结果①中剂量VC组胎鼠活胎率下降,活胎中畸胎发生率高达51%,其中神经管畸形发生率占40%,与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);高剂量VC组胎鼠活胎率仅占55%,活胎中畸胎率明显增高占71%,其中神经管畸形发生率占50%,与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。②中剂量和高剂量VC组胚胎神经管上皮厚薄不一致;高剂量组神经管多数呈明显未闭合状,神经管周围的间充质细胞肿胀,轮廓不清。③正常小鼠神经管神经上皮内可见PCNA阳性细胞与TUNEL阳性细胞分布;实验组各型阳性细胞分布与对照组相似,但随着染毒剂量的增加,PCNA阳性细胞表达减少,而TUNEL阳性细胞表达增多。结论孕早期一定剂量氯乙烯染毒可导致胚胎畸形率升高,神经管畸形率也相应上升。氯乙烯主要可抑制神经上皮细胞的增殖,诱导细胞凋亡发生增多,导致增殖与凋亡比例失调。

青年教员带好组织学实习教学之我见

年青教员在组织学实习的教学过程中，往往显得经验不足，不能适应和顺利完成教学任务。除了教学心理不成熟和知识欠缺之外，笔者认为最重要的因素是教师与学员之间缺少心理沟通。笔者作为年轻教员，在组织学实习的教学实践中有几点体会。首先，与学员初次见面时较为详细的介绍自己，并请同学们用英语自我介绍。不但能和他们交流感情，而且可以增强自信心。其次，提问对答过程的形式应不落俗套。自己在课前准备些诸如“粉刺形成的组织学基础是什么”之类的常识性小问题，课中穿插提问，提高了学员的学习兴趣。再次，一些难以区分的概念如“胶原纤维，肌原纤维，神经原纤维等”和专业英语的记忆方法，让同学们用自己的学习经验办墙报和黑板报列表作图进行对比，同学们深刻地理解和记忆了专业知识。另外，笔者还经常利用实习结束时，给学员们讲我们教研室的科研工作方向以及先进科技方法如原位杂交、激光共聚焦显微镜、膜片钳等，这些知识使同学们学习组织学积极性大大提高。通过实习教学的这些锻炼，笔者的教学心理渐渐趋向成熟，学员们也更好学到了组织学的知识。