机器视觉在LED芯片外观检测系统中的应用

机器视觉系统通过对芯片外观进行图像检测处理能迅速判断出外观缺陷的位置及其类型,有效克服了传统人工目检方式造成芯片外观部分缺陷的漏检问题,提高了缺陷检测效率。本文利用基于机器视觉的芯片外观检测系统,针对红黄和蓝绿两种发光颜色不同的LED芯片产品在生产制造过程中出现的外观缺陷进行自动检测,实验表明机器视觉检测系统对于芯片的外观缺陷检测有很好的效果。通过输出数据和晶圆图的方式可以快速地判断出缺陷类型,利用加严卡控标准对TS0408产品同轴花斑缺陷检测的异常率从4.61%上升至25.69%,提升了21.08%。

HuR基因的慢病毒干扰载体构建及其病毒包装

目的构建人HuR基因慢病毒干扰载体和基因敲低细胞株,为揭示C/EBPβ3’UTR RNA与HuR蛋白相互作用抑制肝癌细胞增殖的分子机制奠定基础。方法根据shRNA设计原则设计人HuR基因的shRNA序列,用化学合成法合成shDNA序列,以LV10(pGLVU6/RFP/Puro)为载体骨架,构建慢病毒干扰载体LV10-HuR,并与慢病毒包装辅助载体(pLP1、pLP2和pLP/VSVG)共转染HEK293T细胞,收集病毒液纯化后感染SMMC-7721细胞并用嘌呤霉素杀死未感染的肝癌细胞,荧光显微镜下挑取单克隆红色荧光细胞集落,扩大培养后通过Western blot验证肝癌细胞内源性HuR蛋白表达。结果经DNA测序鉴定,LV10-HuR正是所需的慢病毒干扰载体。通过共转染获得的重组慢病毒颗粒感染的肝癌细胞在荧光显微镜下显示红色荧光。嘌呤霉素筛选和单克隆细胞集落挑取获得显示红色荧光细胞株,western blot证明稳转细胞内源性HuR基因表达下降,证明LV10-HuR慢病毒干扰载体可以抑制肝癌细胞内源性HuR基因表达。结论成功构建慢病毒干扰载体LV10-HuR,包装出有活性的重组慢病毒颗粒,建立HuR基因敲低肝癌细胞株。

血清sPD-1和sPD-L1对类风湿关节炎的诊断价值及其与疾病活动度的相关性

目的探讨可溶性程序性死亡受体1(sPD-1)和可溶性程序性死亡配体1(sPD-L1)对类风湿关节炎(RA)的诊断价值及其与患者疾病活动度的相关性。方法100例RA患者据RA疾病活动评分(DAS28-3)分为缓解期组(n=50,DAS28-3<2.6分)和活动期组(n=50,DAS28-3≥2.6分)、同时选取健康体检者50例作为正常对照组,采集2组RA患者入院次日和正常对照组受检者体检当日清晨空腹外周静脉血,采用酶联免疫法(ELISA)检测3组受试者血清sPD-1和sPD-L1表达,采用全自动血液细胞分析仪和全自动血沉分析仪分别检测3组受试者全血白细胞(WBC)计数和血沉(ESR),采用全自动生化分析仪检测3组受试者血清类风湿因子(RF)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)及血清肌酐(SCr)水平,采用全自动电化学发光分析仪检测3组受试者血清C反应蛋白(CRP);采用Pearson相关系数分析RA患者血清sPD-1、sPD-L1与ESR、CRP、DAS28-3的相关性,采用受试者工作特征曲线(ROC)计算曲线下面积(AUC)来评估sPD-1、sPD-L1对RA的诊断价值及疾病活动度的预测价值。结果RA患者血清sPD-1水平明显高于正常对照组,其中活动期组高于缓解期组,差异均有统计学意义(P<0.05);RA患者血清sPD-1分别与ESR(r=0.743,P<0.001)、CRP(r=0.672,P<0.001)、DAS28-3(r=0.946,P<0.001)均呈正相关;ROC结果显示,sPD-1对RA的诊断价值最大,AUC为0.904、最佳截断值为305.56μg/L,RF的诊断价值次之,2项指标与抗CCP抗体比较差异均有统计学意义(P<0.001);sPD-1对RA病情活动度的预测价值最高,AUC为0.974、最佳截断值为370.75μg/L,抗CCP抗体的预测价值次之,2项指标与RF比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论血清sPD-1可作为一种新的RA血清学辅助诊断指标和预测病情活动的评估指标。

基于PERK/ATF4/CHOP信号通路探讨瑞香素对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的影响

目的探讨瑞香素(daphnetin,DAP)对人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RA-FLS)的作用及其与内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)PERK/ATF4/CHOP信号通路的关系。方法RA-FLS细胞培养,免疫荧光法检查波形蛋白(vimentin)和CD68对细胞进行鉴定;CCK-8检测(0、5、10、20、30、40、50、60、70)mg·L^(-1) DAP对RA-FLS细胞增殖活性的影响,根据增殖活性将实验分为空白组(Blank)、低剂量组(L-DAP)、中剂量组(M-DAP)、高剂量组(H-DAP)以及高剂量+抑制剂4-PBA组(H-DAP+4-PBA);ELISA检测TNF-α、IL-6水平;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell及划痕实验检测细胞侵袭及迁移能力,Western blot检测细胞中与内质网应激相关蛋白GRP78、PERK、p-PERK、ATF4、CHOP、Caspase-12、C-caspase-12、Bcl-2表达。结果CCK-8结果显示,与0 mg·L^(-1) DAP组比较,20~70 mg·L^(-1) DAP中各组增殖活性均差异具有显著性(P<0.05),组间比较后0、20、40、60 mg·L^(-1) DAP对应的细胞增殖率差异具有统计学意义(P<0.05),以此浓度分别作为空白、低剂量、中剂量、高剂量组以及高剂量+4-PBA实验分组依据;DAP可成浓度依耐性抑制RA-FLS细胞炎症因子IL-6、TNF-α释放,减弱细胞侵袭能力,促进细胞凋亡,上调PERK、p-PERK、ATF4、GRP78、CHOP及Caspase-12及C-caspase-12蛋白表达,降低抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平。另一组实验证明,高剂量DAP+4-PBA可上调IL-6、TNF-α表达以及细胞侵袭,抑制细胞凋亡及ERS相关蛋白表达。结论DAP可通过激活PERK/ATF4/CHOP信号通路调节相关炎症因子分泌,抑制RA-FLS细胞增殖及侵袭,诱导细胞凋亡,有望成为治疗RA的潜在途径。

瑞香素对人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡的影响及其与内质网应激的关系

目的探讨瑞香素(DAP)对人类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(FLS)凋亡的影响及其与内质网应激(ERS)的关系。方法取对数增长期人RA-FLS细胞,分别用0、10、20、30、40、50、60及70 mg/L DAP处理24 h,采用细胞增殖计数试剂盒(CCK-8)检测RA-FLS细胞存活率;选择0、20、40及60 mg/L DAP处理RA-FLS细胞,采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用细胞免疫荧光方法检测0和20 mg/L DAP组RA-FLS中蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、磷酰化-PERK(p-PERK)及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶12(Caspase-12)蛋白表达;采用Western blot方法检测蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、激活转录因子4(ATF4)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶12(Caspase-12)及B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白表达。结果与0 mg/L DAP组相比,人RA-FLS细胞增殖活性随DAP浓度增加而降低(P<0.05),细胞凋亡率随DAP浓度增加而增大(P<0.05);20 mg/L DAP组人RA-FLS细胞中PERK、GRP78及Caspase-12荧光强度高于0 mg/L DAP组;与0 mg/L DAP组比较,20、40及60 mg/L DAP组人RA-FLS细胞PERK、p-PERK、GRP78、CHOP及Caspase-12蛋白表达均增加(P<0.05),但Bcl-2表达降低(P<0.05)。结论DAP可抑制人RA-FLS细胞增殖并促进细胞凋亡发生,其机制可能与ERS的激活有关。