中国蒙古族群体mtDNA测序的聚类分析及其法医学意义

目的建立一种既节省模板、又能延长测序长度的m tDNA单倍型（群）分析方法,构建中国蒙古族mtDNA单倍型类型关系树。方法用复合扩增、巢式PCR对201名中国蒙古族m tDNA样本进行D-环区、3010～3460、4640～5204、10171～10659和14478～15204编码区域的测序分析,部份样品进行L3953/H4508等区域的测序;根据其多态界定各样本单倍型并进行聚类分析。结果L15996/H107等巢式PCR扩增产物经测序检验结果互不干扰,其分型以A等东亚人群常见的单倍型（群）为主,包括部份HV、K、J、I和U等欧洲人群优势单倍型（群）,23个单倍群和共53个单倍型全部归为欧亚人群特有的M和N两大类单倍类群并呈巢式聚类。结论本研究选取的测序区域适用于构建我国各民群的m tDNA单倍型（群）;复合扩增、巢式PCR法既节省模板DNA,又延长测序的长度,适用于法医学、考古学研究中的微量样本的检测。

中国云南基诺族、佤族、布朗族3个STR基因座遗传多态性研究及其在法医学中的应用

为了研究 HUMCSF1PO、HUMTPOX和 HUMTHO1基因座在云南省基诺族、佤族和布朗族中的遗传多态性分布及其在法医学中的应用价值 ,采用 PCR扩增和 PAGE变性胶电泳分离技术 ,对三个少数民族 346名无关个体及家系进行了分析 ,并将其应用于法医学实践。在这三个群体中 HU MCSF1PO、HUMTPOX和HUMTHO1基因座分别检出了 7个、8个和 6个等位基因 ,基因型频率分布均符合 Hardy- Weinberg平衡 ,三基因座累计个人识别率在 0 .9889～ 0 .9947之间 ,累计非父排除率为 0 .6 716～ 0 .7497;家系调查证实其等位基因的传递遵循孟德尔遗传规律。并对三个基因座在法医学中的应用价值也作了评价。结果提示三个基因座在三个少数民族中多态性分布较好 ,可用于法医学个人识别和亲权鉴定。

非综合征型多指(趾)致病基因的研究进展

多指是最常见的先天性肢体异常 ,遗传方式多为常染色体显性遗传。迄今为止 ,用连锁分析的方法对多个非综合征型多指 (趾 )畸形家系进行了基因定位和致病基因的突变分析。本文就近年来在多指 (趾 )畸形致病基因研究方面做一综述。

云南18个民族Y染色体双等位基因单倍型频率的主成分分析

世居云南的少数民族中 ,壮、傣、水、布依、布朗、德昂、佤、彝、白、怒、哈尼、傈僳、拉祜、纳西、景颇、阿昌、基诺和独龙 18个民族是由“羌”、“濮”、“越”3大部落群体演化而来 ,是云南的土著居民。利用PCR RFLP方法对这18个土著民族进行Y染色体上 13个双等位基因位点进行基因分型。结果显示 ,不同历史族源的民族群体在Y染色体双等位基因单倍型分布上具有一定的差异 :在百越后裔民族群体中以单倍型H11、H12为主要分布 ;在氐羌后裔民族中以单倍型H5、H6和H8为主要分布 ;在百濮后裔民族群体中主要单倍型分布为H6、H8和H11。进一步主成分分析表明 ,百越后裔民族群体和氐羌后裔民族在主成分图上聚为两组 ,提示父系基因库有不同的来源 。

AFLP技术鉴别罂粟、虞美人和大麻种属差异的初步研究

目的探讨采用AFLP技术检测植物DNA,鉴别罂粟、虞美人和大麻植物种属间差异的方法。方法收集罂粟根、茎、叶、花、果以及虞美人和大麻叶检材,用AxyPrep DNA试剂盒提DNA,经EcoRI/MseI酶切,人工接头及PCR预扩增,用E-ACA/M-CAG、E-ACT/M-CTC、E-ACC/M-CTA、E-ACC/M-CTG、E-AGC/M-CTT、E-AGG/M-CTA6对标记了荧光的选择性引物进行PCR扩增,其产物在的CEQ8000遗传分析仪上检测。结果6对引物分别在罂粟、大麻和虞美人样本中检出27-46、5-20、4-31条扩增片段,种属间存在明显差异;同一罂粟根、茎、叶、花和果的DNA检测结果相同。结论罂粟、虞美人和大麻3种植物的AFLP分析结果显示出的差异性,同一植株不同部位DNA AFLP结果的同一性,有可能用于检测未知植物检材的种属来源。

对法医学相关的DYS549、DYS527和DYS459基因座在男性不育症人群中的缺失、重复调查

位于Y染色体无精症因子区域(Azoospermia factor,AZF)的基因座位点DYS549、DYS527和DYS459在法医学鉴定和家系分析中被广泛应用。但是,在男性不育患者中,DYS549、DYS527和DYS459位点很可能会表现出特殊的基因型,对应用Y染色体短串联重复序列(Y chromosome short tandem repeat,Y-STR)进行个体识别的结果产生干扰。因此,文章应用14个Y-STR基因座复合扩增体系和Y染色体AZFc区DAZ、CDY1基因的拷贝数检测等方法,探讨男性不育症中法医学相关的3个Y-STR基因座的异常分型,对个体识别和家系分析中的DNA检验异常结果提供合理的解释。在240例男性非梗阻性无精、严重少精、先天性双侧输精管缺如(CBVAD)患者中,采用改良的多重PCR体系进行AZF区域微缺失的序列标签位点(Sequence tagged sites,STSs)检测,发现AZF微缺失40例(AZFa:2例;AZFb:2例;AZFc:30例;AZFb+c:6例),AZF的总缺失率为16.67%。应用14 Y-STR复合扩增体系对上述AZF微缺失的阳性患者样本进行检测,发现所有AZFb缺失患者存在DYS549等位基因缺失,AZFc缺失患者存在DYS527、DYS459等位基因缺失,AZFb+c缺失患者存在DYS549、DYS527和DYS459等位基因缺失。在AZF微缺失阴性的不育症患者中,通过检测DAZ、CDY1基因拷贝数发现10例AZFc部分复制的患者(1例为先天性输精管缺如,2例非梗阻性无精症,7例严重少精子症),占所调查不育人群的4.17%。男性不育人群AZF区域3个Y-STR基因座多态性会造成等位基因缺失或者重复,这些异常分型是由于临床遗传缺陷造成的而不是实验偏差。阐明Y-STR在男性不育人群中的异质性可以更好地完善Y-STR数据库和解释STR实验结果。

利用荧光AFLP技术检测罂粟DNA多态性

目的利用荧光AFLP检测技术检测罂粟植物DNA多态性。方法用Axygen公司的AxyPrep DNA试剂盒提取了12株产于缅甸和中国云南省昆明市宜良县罂粟植株的DNA,用EcoRI和MseI对总DNA进行酶切,连接人工接头,预扩增和选择性扩增,其产物在CEQ8000遗传分析系统上检测。结果64对选择性扩增引物中8对引物能得到20条以上的扩增片断,具有高度多态性。结论荧光AFLP技术可用于罂粟DNA多态性的检测。

云南汉族家系Y-STR基因座突变率研究

目的研究Y-filer试剂盒中DYS19等基因座在云南省汉族家系样本中的突变率。方法应用Y-filer试剂盒中的DYS456等16个Y-STR基因座对云南省30个汉族家系爷/孙、叔/侄和兄弟/堂兄弟亲权关系的106份样本进行基因分型检测,对DYS19等基因座分型与家系其他成员不同的样本分别进行了单位点的测序。结果6个(周姓、徐姓、王姓、袁姓、许姓、李姓)不同父系姓氏7例样本的10个Y-STR基因座发生突变,分别是DYS19、DYS385各2例,DYS389I、DYS389Ⅱ、DYS390、DYS458、DYS393、DYS635各1例,总突变率为5.549‰;王姓、袁姓、许姓家系中各有1例样本分别在2个Y-STR基因座上发生了突变。结论男性家系中随机样本Y-STR基因座的突变率高于父子对样本;用Y-STR基因座进行父系亲权鉴定和男性嫌疑人的家系排查时,既使有2个Y-STR基因座分型不同时也不要轻易排除其来源于同一父系家系。

云南汉族痤疮与CYP11α基因微卫星多态性相互关系的研究

目的研究雄激素相关基因CYP11α基因多态性与云南汉族痤疮发病危险性的关系,从分子遗传学角度探讨痤疮的发病机制。方法对206例云南汉族痤疮患者和200例健康对照者外周血的DNA样本采用PCR-genescan法检测CYP11α基因的tttta微卫星多态性位点,同时对两组患者的多态性位点基因型分布频率进行比较。结果男性重型痤疮中215-和215+基因型频率(59%,41%),与男性对照组(40.1%,59.1%)相比差异有显著性(P<0.05),但在女性痤疮组以及男性轻型痤疮组中这两种基因型频率分布与各自对照组相比未发现差异(P>0.05)。结论CYP11α基因的tttta微卫星重复多态性与云南汉族男性重型痤疮相关,CYP11α基因215-基因型可能是男性重型痤疮的遗传易感因素之一。

云南省哈尼族高血压患病情况调查分析

目的 了解云南省哈尼族高血压流行现状和和人群血压水平。方法 从 2 0 0 2 0 5 -2 0 0 3 0 5 ,按照全国 1991高血压抽样调查工作手册的要求 ,对云南红河州红河县 ,元阳县 ,绿春县的≥15岁的 382 8名哈尼族居民 ,采用标准化调查方法 ,在严格质控下进行血压测定及相关调查。结果 在调查中共发现了 5 36例哈尼族高血压患者。哈尼族高血压患病粗率为 14 .0 0 % ,标化患病率为12 .6 6 %。收缩压和舒张压均值 :男性 12 0 16mmHg、76 .98mmHg ,女性 112 .6 1mmHg、72 .2 4mmHg ,均高于 1991年全国高血压普查的结果。高血压患病率男性高于女性 ,35岁后患病率增幅较快。结论 少数民族的高血压患病率也随之增加 ,对少数民族地区的高血压进行预防和控制是必要的。

白族群体间的Y染色体和线粒体DNA多态性的分析

从父系和母系基因库水平上,研究不同分布地区白族群体之间的遗传结构的异同,并对其族源以及本民族群体之间的微进化关系进行初步的探讨。利用PCR RFLP方法对云南白族和湖南白族及云南的傣族、布依族、独龙族、怒族、阿昌族和湖南土家族共8个群体进行14个线粒体多态位点和Y染色体上的13个双等位基因位点进行基因分型。统计单倍型,在SPSS软件上进行主成分分析。结果显示,两个白族群体在Y染色体双等位基因单倍型分布上差异不大,以H6、H8为主要单倍型分布;在线粒体单倍群分布上,两个白族群体则差异显著,单倍群D、B、M8在湖南白族中的分布频率比云南白族高的多,而在云南白族中M 、G、F的频率则比湖南白族高。对Y染色体单倍型分布频率进行主成分分析表明两个白族群体聚在一起,整体上和其他北方起源的群体聚成一组;而对线粒体的单倍群分布频率分析显示湖南白族接近湖南汉族和土家族,而云南白族则接近云南怒族和阿昌族。两个白族群体在父系遗传结构上相近,表明他们具有共同的父系族源;而母系遗传结构上的差异,可能与历史上迁到湖南的白族先民主要为男性军士,流寓到当地后与汉、土家等民族女子通婚所致。

云南傣族与广西侗族18个STR基因座的遗传多态性

目的调查云南傣族和广西侗族无关个体18个STR基因座(D18S51、D21S11、D3S1358、FGA、D8S1179、v WA、CSF1PO、D16S539、D7S820、D13S317、D5S818、D2S1338、D19S433、D12S391、TPOX、TH01、Penta E和D6S1043)的遗传多态性并研究其法医学应用价值。方法采用DNA TyperTM19试剂盒对100名云南傣族和70名广西侗族的无关个体血样进行复合扩增,用遗传分析仪3130XL对扩增产物检测,用Gene Mapper ID v3.2软件进行基因分型,并计算群体遗传学参数。结果在100名云南傣族和70名广西侗族的无关个体中,云南傣族共发现185种等位基因,广西侗族共发现162种等位基因。傣族单个等位基因频率分布在0.005-0.600、侗族在0.007-0.493;傣族与侗族累计个人识别能力均大于99.999 999 999 999 999 999 99%。结论这18个STR基因座在云南傣族和广西侗族地区具有高度多态性,可满足对这两个群体的个体识别和亲权鉴定。

云南汉族D_1S_(80)位点基因频率分布调查

采用ＰＣＲ技术、小型聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳银染检测法，对１６９例云南汉族进行了Ｄ１Ｓ８０位点的ＶＮＴＲ扩增片段长度多态性（Ａｍｐ－ＦＬＰ）分析，发现了１８个等位基因，５１种基因型，其分布符合Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｎｂｅｒｇ定律．片断大小分布于４００～７５０ｂｐ之间，基因频率为０．００３０～０．２６３３．杂合度为８７％，个人识别能力为０．９５８６，对９个家系的相关个体分析符合孟德尔定律．

多手段联合亲子鉴定1例

1案例 某地公安机关送检一案件中可疑父母血样和死者（男性）肋软骨，要求进行亲子鉴定：用Chelex-100法提取可疑父母血样和死者肋软骨DNA．分别用美国AB公司Identifile^TM。试剂盒、Yfile^TM试剂盒和北京基点认知技术有限公司Goldeneye^TM 16BTDNA身份鉴定试剂盒复合扩增，扩增产物用3100遗传分析仪进行电泳分离，得到STR分型结果：

DYS389II基因座在家系样本中分型异常的分析

Y—STR（short tandem repeat）基因座是遗传学、法医学和系谱学研究中重要的遗传标记，商品化的Y—filer试剂盒同步检测DYS389Ⅱ等17个Y—STR基因座，具有高度的多态性，但文献报道Y—STR的突变率较高，且单一基因座的突变就可导致整条Y染色体单倍型的改变。

姓氏与Y染色体基因家谱学研究进展

在中国两千多年的封建统治中，形成了一种“男性才能担当家族传宗接代重任”的封建思想。但是，现代文明社会已经逐渐摒弃这种“重男轻女”的封建思想，男女平等才是当今世界的主流。然而，从遗传学角度看Y 染色体遵循严格的父系遗传方式，使得父系亲缘关系传递存在一定的“传宗接代”意义。

D_1S_(80),P_(33.6)位点扩增片段长度多态性在法医学中的应用

用ＰＣＲ技术、小型垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染显色法，分析血痕、精斑、混合斑中的Ｄ１Ｓ８０，Ｐ３３．６ＶＮＴＲ位点的扩增片段长度多态性（ＡｍｐＦＬＰ），获得了满意的结果将该方法运用于案件的鉴定。

云南汉族人群ApoB位点扩增片段长度多态性分析

采用ＰＣＲ方法对云南汉族人群的ＡｐｏＢ位点进行了Ａｍｐ—ＦＬＰ分析，检出１２个等位基因，２６种基因型．扩增片段长度分布于６００～１１００ｂｐ之间，等位基因频率范围为０．００３９～０．４６４８，杂合度为６６．４１％，ＤＰ值为０．８６１０．研究结果表明，ＡｐｏＢ位点在云南汉族人群中具有高度多态性分布，在法医学及其他学科领域里均具有较高的应用价值．此外，本研究建立的ＰＣＲ实验方法将有利于在基层部门推广应用．