华南地区骨质疏松知识评价问卷的研制过程及条目筛选

目的根据华南地域气候以及人文环境特点,研制用于评价骨质疏松知识的自评问卷。方法建立条目池(包含了63个问题)、编制原始问卷,经过反复的预测试、正式测试及条目分析形成最终问卷。结果 (1)骨质疏松知识评价问卷(osteoporosis knowledge assessment questionnaire,OKAQ)由28个组成,包括7个判断题及21个选择题,涉及骨质疏松相关危险因素(7条)、症状(4条)、日常饮食(5条)、运动(3条)、补钙剂认识(2条)、诊断治疗(5条)、预防跌倒(2条)七个维度。(2)所有题项的鉴别系数D在0.21～0.71之间,平均为0.44。(3)对七个维度得分进行因子分析可抽取出一个公因子,可以认为是"骨质疏松一般知识";相关性矩阵显示七个维度得分与总分之间的相关性(0.54～0.78)明显高于各维度之间的相关性(0.21～0.48)。结论骨质疏松知识评价问卷的建构基本符合理论构想,各个题项具有良好的区分能力以及代表性,达到了编制的要求。

六味地黄丸、金匮肾气丸及健骨二仙丸含药血清对BMSCs成脂、成骨细胞分化相关基因的影响

目的研究补肾方药对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)来源的前脂肪细胞向成骨分化的影响。方法采用全骨髓贴壁法培养BMSCs,用经典化学方法诱导BMSCs为前脂肪细胞,用六味地黄丸、金匮肾气丸和健骨二仙丸含药血清(含量浓度均为10%,分别代表补肾阴、补肾阳和补肾填精方药),干预前脂肪细胞成骨分化过程;采用反转录-实时荧光定量PCR技术(RT-real time qPCR),分别于第6、12和18天,检测成骨分化相关基因RUNX2、ALP、BGP、BMP2、BMP4、SPP1和IGF1 mRNA,及成脂分化相关基因LPL、FABP4和PPARγ mRNA表达水平。结果对于成骨分化相关基因,与对照组比较,第6天各组基因表达无显著变化(2.0>Ratio>0.5);第12天,金匮肾气丸组IGF1和RUNX2 mRNA表达升高较为显著,相对表达量(Ratio)分别为2.97和1.81;第18天,各组IGF1 mRNA表达均显著上升,六味地黄丸组、金匮肾气丸组和健骨二仙丸组Ratio值分别为3.74、12.60和8.35;各组SPP1 mRNA表达也显著升高,Ratio值分别为2.94、3.18和2.62。对于成脂分化相关基因,第6天,六味地黄丸组和金匮肾气丸组FABP4mRNA表达显著下降(Ratio分别为0.47和0.40),其他基因表达均下调,但不显著;第12天和第18天,成脂分化基因表达变化均无显著变化(2.0>Ratio>0.5)。结论成骨分化相关基因在补肾方药作用较晚时间出现表达上调的变化,而成脂分化相关基因在补肾方药作用较早时间即出现表达下调的改变,并且提示补肾阳法促进成骨分化、抑制成脂分化作用更为显著。

续断对成骨细胞增殖、分化、凋亡和细胞周期的影响

在动物实验的基础上 ,探讨续断对成骨细胞增殖、分化、凋亡、细胞周期和 Ⅰ 型前胶原αmRNA表达影响。根据文献方法培养大鼠成骨细胞株UMR 10 6 /0 1,采用3 H Tdr法检测细胞增殖 ,PNPP法、RIA法、茜素红染色法以及定量RT PCR法分别检测碱性磷酸酶活性、骨钙素活性、矿化结节形成和Ⅰ 型胶原αmRNA的表达 ,从而了解续断对成骨细胞增殖、分化的影响 ;FCM法检测细胞周期。结果显示续断中、高剂量能显著促进成骨细胞的增殖、增加碱性磷酸酶的表达及矿化结节形成的数量 ,促进成骨细胞骨钙素和Ⅰ 型前胶原mRNA的表达 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ,和雌激素组比较差异无显著性。续断高剂量组细胞增殖率、S期细胞比率和细胞增殖指数等均显著高于空白对照组 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ,和雌激素组比较差异也无显著性。细胞凋亡率和G0 G1期细胞比率显著低于空白对照组 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 )。表明续断能有效促进成骨细胞的分化、增殖 ,防止成骨细胞凋亡 ,可能是该药促进骨折愈合、防治骨质疏松的机制之一。

健骨二仙丸含药血清对人成骨细胞增殖及细胞周期的影响

目的 :在临床研究和动物实验的基础上 ,进一步探讨健骨二仙丸对成骨细胞增殖和细胞周期的影响。方法 :分离、培养人的原代成骨细胞 ,采用3 H 胸腺嘧啶掺入法和四氮唑蓝法检测细胞增殖 ,流式细胞仪检测细胞周期。结果 :健骨二仙丸中、高剂量组细胞增殖率、S期细胞比率和细胞增殖指数等均显著高于空白对照组 (P <0 0 1,P <0 0 5 ) ,与雌激素组比较差异无显著性。细胞凋亡率和G0 G1期细胞比率显著低于空白对照组 (P <0 0 1,P <0 0 5 )。结论 :健骨二仙丸能有效促进成骨细胞的增殖、分化 。

脐血间充质干细胞的生物学特性及其成骨细胞定向诱导

目的研究人间充质干细胞(MesenchymalStemCells,MSCs)的定向分化为成骨细胞的条件及其成骨活性。方法采用标准FicollHypaque技术分离脐血和成人骨髓MSCs,以地塞米松、β磷酸甘油和维生素C为辅剂定向诱导成骨细胞,碱性磷酸酶、骨矿化结节和I型胶原作为成骨细胞鉴定与活性评价的指标。结果两种MSCs的细胞形态和生物学特性无明显差异。定向成骨细胞诱导后,成骨细胞标志性产物碱性磷酸酶、骨矿化结节和I型胶原均得到了稳定的表达,并显著高于未诱导MSCs。结论脐血和成人骨髓MSCs在适当的条件下均可向成骨细胞定向转化。

“脑还丹”对老龄去势大鼠血清IGF-Ⅰ和血脂水平的影响

为了探讨“脑还丹”防治神经原退行性变的机制 ,本文从血清IGF Ⅰ和血脂的变化观察了该方对老龄去势大鼠 (肾虚模型 )的病理生理影响。结果表明 ,“脑还丹”能显著降低卵巢结扎大鼠LDL c和TC的血清浓度 ,高剂量可显著提高HDL、TG和血清IGF Ⅰ的水平。说明“脑还丹”保护神经原的作用是通过调节血脂及IGF Ⅰ水平等途径实现的。

脐血与骨髓间充质干细胞的成骨细胞定向诱导及其成骨活性比较

目的:研究脐血与成人骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)的定向分化为成骨细胞的条件及其成骨活性,比较两种不同MSCs定向成骨细胞诱导后的成骨活性。方法:采用标准Ficoll-Hypaque技术分离脐血和成人骨髓MSCs,以地塞米松、β-磷酸甘油和维生素C为辅剂定向诱导成骨细胞,碱性磷酸酶、骨矿化结节和I型胶原作为成骨细胞鉴定与活性评价的指标。结果:两种MSCs的细胞形态和生物学特性无明显差异。定向成骨细胞诱导后,成骨细胞标志性产物碱性磷酸酶、骨钙素、上清钙、骨矿化结节和I型胶原均得到了稳定的表达,并显著高于未诱导MSCs,而且两种细胞的成骨活性差异无显著性意义。结论:脐血和成人骨髓MSCs在适当的条件下均可向成骨细胞定向转化,两种细胞均可作为骨组织工程的种子细胞。

“脑还丹”对老龄去势大鼠海马CA3区及皮质神经元超微结构的影响

目的 :采用透射电镜技术观察“脑还丹”对老龄去势大鼠海马CA3区及皮质神经元超微结构变化的影响。方法 :雌性SD大鼠卵巢切除后 7d开始给药 ,180天处死 ,常规灌注、固定、取材、切片、染色 ,观察神经原和突触结构变化。结果 :模型组神经原内线粒体等细胞器出现明显的变性、坏死 ,突触变性并间隙模糊不清 ,脂褐素堆积 ;雌激素组和“脑还丹”组未出现上述改变或改变明显减轻。

中西医结合治疗老年髋部骨折10年回顾

目的回顾分析过去10年（1998～2007）因骨质疏松性髋部骨折住院患者的基本情况与住院费用结构,了解骨质疏松性髋部骨折住院患者基本趋势及其所需要的医疗资源。方法2944例髋部骨折住院患者的基本情况来源于医院病案信息管理系统。采用描述性统计分析等方法,分析年龄50岁以上的患者的一般情况、住院时间与住院费用等。结果过去10年,髋部骨折的患者住院人数逐年增长,每年的女性患者人数均显著高于男性,男女患者总人数比为1∶1.94。患者平均年龄为（76.34±9.51）岁,平均住院天数（22.94±13.17）d。70～79岁与80～89岁年龄段的患者数最多,分别占总人数的38.69%和33.22%。粗隆间骨折与股骨颈骨折的变化表现为：低年龄段（50～79岁）股骨颈骨折显著多于粗隆间骨折,90岁以上粗隆间骨折显著多于股骨颈骨折。住院总费用平均为（2.20±1.51）万元（RMB）,其中粗隆间骨折（2.00±1.47）万元（RMB）,股骨颈骨折为（2.36±11.53）万元（RMB）。住院费用的构成为：治疗费（含内置物的费用）55%,药费23%（中药费11%、西药费12%）,其次为手术费7%,床位费5%与化验费4%。患者的住院总费用与住院天数密切相关,近10年来住院费用是逐年递增的,平均每年增加10.92%。结论老龄化使骨质疏松性髋部骨折逐年增多,所需医疗费用也逐年递增。绝经后骨质疏松及其骨折仍然是今后防治工作的重点。有效控制内置物以及药费是减少髋部骨折占用医疗资源,减轻患者经济负担的有效的途径。

健骨二仙丸介导间充质干细胞的成骨细胞定向诱导及其成骨活性

目的 :研究健骨二仙丸对间充质干细胞 (Mesenchymal Stem Cells,MSCs)成骨细胞定向分化及其成骨活牲的影响。方法 :采用标准 Ficoll-Hypaque技术分离人脐血 MSCs,以地塞米松、β-磷酸甘油和维生素 C为辅剂定向诱导成骨细胞 ,碱性磷酸酶、骨矿化结节、骨钙素及上清钙含量与 型胶原作为成骨细胞鉴定与活性评价的指标。另以健骨二仙丸或健骨二仙丸合地寒米松、β-磷酸甘油与维生素 C为辅剂诱导 ,用正常培养液作为空白对照 ,1 5 d后观测对比上述相关指标。结果 :健骨二仙丸不能单独诱导 MSCs向成骨细胞转化 ,对 MSCs成骨细胞诱导前后的细胞形态无任何影响。定向成骨细胞诱导后 ,健骨二仙丸能显著提高其标志性产物碱性磷酸酶、骨矿化结节和上清钙、骨钙素以及 型胶原的表达。结论 :健骨二仙丸作为补肾益气药能促进 MSCs成骨细胞定向转化 ,提高其成骨活性。

重组腺病毒载体Ad-LMP-1的构建及其转染MSC后成骨活性

【目的】快速构建大鼠LIM矿化蛋白-1基因重组腺病毒载体,转染MSC,探讨LMP-1基因对MSC成骨分化和成骨活性的影响。【方法】从大鼠成骨细胞内提取总RNA,并设计LMP-1特异性引物进行RT-PCR,获取LMP-1基因后利用Invitrogen公司的TOPO定向克隆技术创建入门克隆pENTR/D-LMP-1。转化TOP10细菌后,挑取阳性克隆摇菌提取质粒,入门克隆再与表达载体pAD/CMV/V5-DEST进行同源重组反应得到病毒载体pAD/CMV/V5-LMP-1,转化细菌后挑选阳性克隆摇菌提取重组病毒质粒,用PacI内切酶线性化后用转染293A细胞后得到重组腺病毒载体。以腺病毒为载体,将大鼠LMP-1基因体外转染于3代大鼠MSC细胞内,检测LMP-1基因在MSC细胞的表达,分别观察转染后实验组与对照组I型胶原、碱性磷酸酶、骨钙素表达变化以及骨钙结节的形成情况,评价LMP-1基因的成骨能力。【结果】成功获取大鼠LMP-1基因,入门质粒与病毒表达质粒经过酶切鉴定以及测序验证。LMP-1基因能在MSC中高效表达,转然后MSC的I型胶原,碱性磷酸酶、骨钙素的表达明显增强,骨钙结节形成增多。【结论】利用Gateway技术构建LMP-1重组腺病毒载体相对简单,可快捷获得的pAd-LMP-1。pAd-LMP-1转染MSC后,LMP-1基因能促进MSC向成骨细胞分化,增强其成骨作用。

健骨二仙丸对成骨细胞分化及IGF-ImRNA表达的影响

目的 :在临床研究和动物实验的基础上 ,进一步探讨健骨二仙丸对成骨细胞分化的影响及其作用机制。方法 :分离、培养人的原代成骨细胞 ,采用 PNPP法、RIA法、茜素红染色法以及定量 RT-PCR法分别检测碱性磷酸酶活性、骨钙素含量、矿化结节形成和 型前胶原 m RNA的表达 ,从而了解健骨二仙丸对成骨细胞分化的影响。定量 RT-PCR和 Northern印迹杂交等方法交观察成骨细胞胰岛素样生长因子 ( insulin-like growth factor-I) IGF-Im RNA的表达。结果 :健骨二仙丸中、高剂量能显著增加碱性磷酸酶的活性 ,及矿化结节形成的数量 ,促进成骨细胞骨钙素的释放 ( P<0 .0 1 ,P<0 .0 5 ) ,与雌激素 (倍美力 )组比较差异无显著性。显著增加成骨细胞 型前胶原 m RNA和 IGF-Im RNA的表达。结论 :健骨二仙丸促进成骨细胞 IGF- m RNA的表达 ,从而进一步促进成骨细胞的增殖、分化 ,改善成骨细胞功能 ,调节骨重建偶联。表明健骨二仙丸不仅能增加成骨细胞胶原蛋白地合成 ,而且能促进非胶原蛋白地表达。促进骨的形成是健骨二仙丸作用的主要机制。

五灵脂萃取物对实验性胃溃疡及胃酸分泌的作用

五灵脂（简称ＷＬＺ）经加工后萃取出４个部分：ＷＬＺ－Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ，用Ｓｈａｙ模型和利血平模型研究五灵脂保护胃粘膜作用的有效成分及其作用机制。实验结果：ＷＬＺ－Ｂ组的胃液量、胃酸酸度和总分泌量均少于空白对照组（Ｐ＜０．０１），而且存在量效关系；两种模型ＷＬＺ－Ｂ组的粘膜损伤指数均小于空白对照组（Ｐ＜０．０１）。表明ＷＬＺ－Ｂ具有抑制胃酸分泌，保护胃粘膜，预防实验性胃溃疡的作用。

健骨二仙丸对去势大鼠骨量和血脂的影响

目的 :观察健骨二仙丸和倍美力对去势大鼠骨量和血脂等指标的影响。方法 :1 2月龄雌性 SD大鼠随机分为空白对照组 ( OVX)、雌激素对照组 ( OVX+E)、健骨二仙丸 1、2组 ( OVX+J1、J2 ) ,卵巢切除后 7天开始给药 ,4月后第二次检测骨量 ,6月处死大鼠检测血脂、ALP、Ga和 P。结果 :空白对照组实验后骨量显著减少 ,雌激素对照 (倍美力 )组和健骨二仙丸组的骨量显著高于空白对照组 ;雌激素对照组和健骨二仙丸 2组血浆总胆固醇 ( TC)显著低于空白对照组 ;雌激素对照组甘油三脂 ( TG)、高密度脂蛋白 ( HDL-h)较空白对照组显著升高 ,健骨二仙丸 1组 TC、TG及 HDL与空白对照组比较无显著性差异 ;雌激素对照组和健骨二仙丸2组 TC和低密度脂蛋白 ( LDL-c)较空白对照组显著降低。结论 :健骨二仙丸可有效防止卵巢切除大鼠骨量的丢失而不会导致血脂的升高 ,可有效防治骨质疏松。

健骨二仙丸对去势大鼠骨结构和血清 IGF-Ⅰ的影响

目的 :观察健骨二仙丸对去势大鼠骨结构和血清胰岛素样生长因子 1 ( IGF- )水平等指标的影响。方法 :1 2月龄雌性 SD大鼠随机分为空白对照组 ( OVX)、雌激素对照组 ( OVX+ E)、健骨二仙丸 1、2组( OVX+ J1、J2 ) ,卵巢切除后 7天开始给药 ,6月处死大鼠检测血清 IGF- 水平、股骨干重、灰重和骨钙含量 ,骨矿化率等。结果 :OVX+ J1、J2组血清 IGF- 水平显著高于 OVX组和 OVX+ E组。 OVX+ J1、J2组、OVX+ E组股骨干重、灰重、骨钙含量和骨矿化率显著高于 OVX组。 OVX组骨小梁明显稀少 ,同样倍数下骨小梁的连接中断点多 ,骨小梁明显变细 ,间距加宽 ,甚至在部分区域出现断裂或较大的空白区域。 OVX+ J1、J2组和 OVX+ E组骨小梁排列密集 ,互相连接成网状 ,骨小梁厚度大 ,其间距小 ,且三组间无明显差异 ;结论 :健骨二仙丸具有抑制骨吸收 ,防止骨丢失 ,维持骨组织的正常结构和力学特性的作用 ,其作用机制可能与提高血清IGF-

健骨二仙丸含药血清对成骨细胞分化及Ⅰ型前胶原mRNA表达的影响

目的:在临床研究和动物实验的基础上,进一步探讨健骨二仙丸对成骨细胞分化的影响。方法:分离、培养人的原代成骨细胞,采用 PNPP 法、RIA 法、茜素红染色法以及定量 RT-PCR 之法分别检测碱性磷酸酶活性、骨钙素含量、矿化结节形成和Ⅰ型前胶原 mRNA 的表达,从而了解健骨二仙丸对成骨细胞分化的影响。结果:健骨二仙丸中、高剂量能显著增加碱性磷酸酶的活性及矿化结节形成的数量,促进成骨细胞骨钙素和Ⅰ型前胶原 mRNA 的表达(P<0.01,P<0.05),与雌激素(倍美力)组比较差异无显著性。结论:健骨二仙丸能有效促进成骨细胞的分化。

黄芪建中汤治疗自汗临证体悟

黄芪建中汤源自《金匮要略·血痹虚劳病脉证并治》[1]。虚劳里急,诸不足,黄芪建中汤主之（于小建中汤内,加黄芪一两半,余依上法。气短胸满者加生姜;腹满者,去枣,加茯苓一两半;及疗肺虚损不足,补气加半夏三两）。功效：温中补虚,和里缓急。小建中汤源自《金匮要略·血痹虚劳病脉证并治》[1]。虚劳里急,悸,衄,腹中痛,梦失精,四肢酸疼,手足烦热,咽干口燥,小建中汤主之。桂枝三两,甘草三两（炙）,芍药六两,生姜三两,胶饴（饴糖）一升。上六味,以水七味,

独活寄生汤治疗老年性腰膝疼痛临证体悟

独活寄生汤来源于《备急千金要方》卷八：＂治腰背痛,独活寄生汤。夫腰背痛者,皆犹肾气虚弱,卧冷湿地当风所得也,不时速治,喜流入脚膝,为偏枯冷痹缓弱疼重,或腰痛挛脚重痹,宜急服此方。＂组成：独活三两,桑寄生、杜仲、牛膝、细辛、秦艽、茯苓、肉桂心、防风、川芎、人参、甘草、当归、芍药、干地黄各二两。十五味,咀,以水一斗,煮取三升,分三服,温身勿冷也。