超顺磁性氧化铁纳米粒子和CM-DiI荧光双标记骨髓间充质干细胞

背景:细胞移植疗效监测取决于有效的标记方法,从而能够对移植细胞进行示踪。超顺磁性氧化铁纳米粒子(superparamagnetic iron oxide,SPIO)是一种较为理想的新型磁共振对比剂,用SPIO标记细胞可实现对移植细胞进行活体示踪。而荧光活性染料CM-DiI无细胞毒性,不影响细胞的生长,适合标记和示踪细胞。目的:观察SPIO及CM-DiI对骨髓间充质干细胞的标记及示踪效果。方法:全骨髓法培养猪骨髓间充质干细胞,用含50mg/L铁浓度的SPIO及CM-DiI标记骨髓间充质干细胞,将双标后的骨髓间充质干细胞经冠状动脉注入猪心肌梗死模型。4周后取心脏组织行冰冻切片观察。结果与结论:SPIO及CM-DiI在体外标记骨髓间充质干细胞效率高,几乎达100%。经冠状动脉移植4周后心肌组织可找到双标记的骨髓间充质干细胞,结果提示SPIO及CM-DiI双标记骨髓间充质干细胞体内示踪效果好。

磁共振活体示踪经冠状动脉骨髓间充质干细胞移植:验证其与病理组织学结果的一致性

背景:目前动物实验及临床研究证明经冠状动脉移植骨髓间充质干细胞可改善心肌梗死后的心脏功能,但骨髓间充质干细胞经冠状动脉移植后能否到达心肌梗死部位仍存在争议。目的:磁共振活体示踪经冠状动脉注射的骨髓间充质干细胞能否到达心肌梗死部位。方法:全骨髓法分离培养猪骨髓间充质干细胞,超顺磁性氧化铁标记后胰酶消化,调整细胞浓度为1010L-1。10只猪均建立心肌梗死模型,造模后1周通过OTW球囊导管经冠状动脉将标记好的骨髓间充质干细胞悬液定向移植至梗死区。普鲁士蓝染色评价细胞标记效率,采用快速梯度回波序列完成长轴位四腔心和二腔心扫描,在以长轴位四腔心和二腔心为定位相,垂直于室间隔获得左心室短轴位图像。结果与结论:超顺磁性氧化铁可安全有效标记骨髓间充质干细胞,经冠状动脉注射的骨髓间充质干细胞能到达心肌梗死区及交界区,磁共振能示踪到超顺磁性氧化铁标记的骨髓间充质干细胞,示踪结果与病理组织学检查一致,且磁共振示踪时间可长达5周。

树突状细胞在动脉粥样硬化中的作用

目前研究认为动脉粥样硬化是一种慢性炎症免疫性疾病。树突状细胞作为功能最强的专职抗原提呈细胞,在动脉粥样硬化中具有重要的作用。成熟的树突状细胞把抗原提呈给T细胞并激活T细胞释放细胞因子参与动脉粥样硬化。现就树突状细胞在动脉粥样硬化中的作用作阐述。

缺血后处理对猪心肌缺血再灌注损伤的影响

目的:观察缺血后处理对猪心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其对炎性细胞因子的影响,并探讨可能的保护机制。方法:滇南小耳猪15只,随机分为假手术组(S组,n=5)、缺血后处理组(IPC组,n=5)和缺血再灌注组(IR组,n=5)。用球囊封堵冠脉建立猪闭胸式心肌梗死动物模型,监测心电及血压,用ELISA法测定缺血前及再灌注2、24h的肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素10(IL-10)的浓度,再灌注72h采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色确定心肌梗死面积。结果:再灌注2h和24h,IPC组和IR组的TNF-α、IL-6和IL-10的浓度均明显高于缺血前基础值(P<0.05);组间比较,再灌注后IPC组TNF-α和IL-6水平均较IR组明显降低(P<0.05),而IL-10值明显增高(P<0.05)。经TTC染色测心肌梗死的面积,S组未发生心肌梗死,IPC组为(10.89±2.02)%,IR组为(23.26±3.13)%,IPC组的心肌梗死面积较IR组明显降低(P<0.05)。结论:缺血后处理可能通过调控炎性细胞因子平衡发挥心肌保护作用。

以球囊封堵法建立猪心肌梗死模型的可行性研究

背景:国外20世纪90年代开始采用球囊封堵建立闭胸式心肌梗死动物模型,但术中室颤及血栓形成等因素降低了制作心肌梗死动物模型的成功率。目前国内建立球囊封堵闭胸式心肌梗死大动物模型的报道较少。目的:应用球囊封堵法建立闭胸式猪心肌梗死模型,探索提高建模成功率的方法。设计、时间及地点:随机对照动物实验,病理观察,于2008-07/2009-05在昆明医学院第一附属医院心内科及昆明医学院病理教研室完成。材料:8～11月龄健康滇南小耳猪15只,体质量19～25kg,随机数字表分为3组:假手术组、缺血再灌注组、缺血后处理组,每组5只。方法:冠脉封堵后和再灌注期预防性静滴利多卡因1.0～2.0mg/kg,以减少恶性心律失常的发生率,使用肝素防治血栓形成,在X射线监控下将球囊导管送至冠状动脉左前降支第一对角支的远端,假手术组只放置球囊至冠状动脉左前降支,不封堵;缺血再灌注组行球囊充气堵闭冠状动脉左前降支60min后撤除球囊;缺血后处理组行球囊充气堵闭冠状动脉左前降支60min后,球囊放气30s,充气30s(循环8次)后撤除球囊。主要观察指标:行冠脉造影、心电图及心肌酶检测评价心肌梗死模型的建立情况。3d后行心肌三氯四氮唑染色及病理学检查验证心肌梗死。结果:假手术组猪全部存活;缺血再灌注组4只成功建立心肌梗死模型,1只死于顽固性室颤;缺血后处理组全部成功建立心肌梗死模型。堵闭左前降支远端后,心电图V1～3导联上ST段抬高,有病理性Q波形成;心肌酶谱演变过程与人体心肌梗死过程基本一致。心肌梗死部位分别位于心尖、左心室前壁、前间隔部。三氯四氮唑染色后正常心肌呈砖红色,梗死区心肌颜色暗淡,呈灰白色;病理学检查显示,梗死区心肌正常结构破坏,胞浆浓缩,染色加深,横纹消失,核浓缩、溶解、碎裂,梗死区内有较多的红细胞,梗死区周围有较多肉芽组织增生及大量炎性细胞浸润。结论:球囊封堵冠脉建立猪闭胸式心肌梗死模型对动物创伤性小,且最为接近临床实际的过程,术中使用利多卡因及肝素防治心律失常及血栓形成是成功建立该模型的有效方法,缺血后处理可能是提高建模成功率的因素之一。

缺血后处理对减小猪急性心肌梗死面积的作用

目的探讨缺血后处理限制猪心肌梗死范围的作用。方法滇南小耳猪10只,随机分为2个组。实验组(n=5):在X线的监控下,经右股动脉置入冠状动脉球囊导管至左前降支,球囊扩张阻断血流60min,予8次球囊放气30s、充气30s短暂缺血再灌注即缺血后处理;对照组(n=5):不行缺血后处理,直接撤除球囊。测定缺血前、再灌注2h及24h心肌酶学指标。再灌注72h采用2,3,5氯化三苯基氯四氮唑(TTC)染色确定心肌梗死面积。结果再灌注后2h,两组的磷酸肌酸激酶(CK)及乳酸脱氢酶(LDH)较缺血前明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);再灌注后24h,实验组的CK、LDH较对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。病理学检查显示缺血后处理组梗死面积明显小于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论缺血后处理有缩小猪急性心肌梗死面积的保护作用。

右美托咪定应用于硬膜外阻滞时的量效分析

目的分析硬膜外神经阻滞麻醉下不同剂量右美托咪定对患者镇静入睡的量效作用。方法 82例行择期下肢手术患者（ASAⅠ-Ⅱ级）在连续硬膜神经阻滞下（穿刺间隙L2-3,药物为1.00%利多卡因＋0.33%罗哌卡因）分为1组（n=19）、2组（n=22）、3组（n=20）、4组（n=21）,分别泵入右美托咪定0.7、0.8、0.9、1.0μg/kg负荷剂量,每组在30min内泵完,然后改为0.7、0.8、0.9、1.0μg·kg^-1·h^-1的速度持续剂量泵入,如4个组中有患者在不到30min就入睡停止负荷剂量转为该组的持续剂量泵入,手术结束包扎创面时停药。记录30min内患者是否入睡和右美托咪定泵入后的10、30、60、90min 4个时点的平均动脉压、心率。采用Probit法计算右美托咪定50%有效量（ED50）和95%有效量（ED95）及95%CI。结果右美托咪定的ED50和ED95分别为0.65μg/kg（95%CI：0.36-0.73μg/kg）、1.00μg/kg（95%CI：0.90-1.74μg/kg）,它可使心率减慢、血压升高。结论虽然右美托咪定可使心率减慢、血压升高,但在连续硬膜外神经阻滞下静脉给药患者可安静入睡,未出现不适及疼痛。

直接经皮冠状动脉介入治疗联合冠脉内溶栓对急性ST段抬高型心肌梗死患者CTFC的影响

目的探讨直接经皮冠状动脉介入治疗(PPCI)联合冠脉内溶栓治疗对急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者冠脉血流水平的影响。方法选取2019年1月至2020年8月我院收治的STEMI患者85例,分为冠脉内溶栓组(23例)、血栓抽吸组(34例)、球囊扩张组(28例),比较三组手术后校正的TIMI帧数(CTFC)。结果PPCI后冠脉内溶栓组CTFC低于血栓抽吸组和球囊扩张组,方差分析显示组间比较差异有统计学意义(F=5.097,P=0.008),事后检验(SNK)提示冠脉内溶栓组与血栓抽吸组未在同一栏内,差异有统计学意义(P<0.05)。以CTFC为因变量,其他指标为自变量进行Pearson相关性分析提示CTFC与空腹血糖呈正相关,与舒张压、平均动脉压呈负相关,将与CTFC相关的因素进行多元回归分析显示CTFC与舒张压、空腹血糖仍呈相关性,差异有统计学意义。结论通过冠脉内溶栓、适当升高舒张压、改善血糖水平可能会降低CTFC,从而改善STEMI患者PPCI后冠脉灌注。

超顺磁性氧化铁纳米粒子标记骨髓间充质干细胞实验研究

目的:研究不加转染剂,超顺磁性氧化铁纳米粒子(superparamagnetic iron oxide,SPIO)对骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,MSCs)的标记效果。方法:全骨髓法培养猪骨髓间充质干细胞,用50ug/ml铁浓度的SPIO标记MSCs,普鲁士蓝染色鉴定标记效果,流式细胞仪测定标记MSCs的增殖及凋亡,台盼蓝染色检测标记细胞的活力。结果:不加转染剂,SPIO标记MSCs达100%,50ug/ml铁浓度标记对MSCs活力、增殖及凋亡无影响。结论:不加转染剂,50ug/ml铁浓度SPIO可安全、有效的标记MSCs。