SLC9A3-AS1调控miR-148a-3p/ROCK1信号轴影响肾癌细胞生物学功能

目的检测lncRNA SLC9A3-AS1在肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)组织与肾癌细胞中的表达水平,探讨其促进肾癌细胞恶性生物学行为的机制。方法应用GEPIA2在线软件(http://gepia2.cancer-pku.cn/)分析TCGA数据库中SLC9A3-AS1在ccRCC组织中的表达水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SLC9A3-AS1在不同肾癌细胞系、24例ccRCC组织与癌旁正常肾脏组织中的表达水平;应用细胞增殖/毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和Transwell小室迁移实验检测敲低SLC9A3-AS1表达对肾癌细胞增殖与迁移的影响;应用蛋白质免疫印迹法检测增殖与迁移相关信号通路蛋白的表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证SLC9A3-AS1与miR-148a-3p/ROCK1轴的靶向调控关系。结果GEPIA2软件分析结果显示,相较正常肾脏组织,SLC9A3-AS1在肾透明细胞癌组织中表达显著上调(P<0.01)。qRT-PCR结果显示,相较癌旁正常肾脏组织,SLC9A3-AS1在24例ccRCC组织中表达显著上调(P<0.01);相较永生化肾小管上皮细胞,SLC9A3-AS1在4种肾癌细胞系中表达均显著上调,以786-O细胞最为显著(P<0.01)。干扰SLC9A3-AS1表达,可显著抑制786-O细胞的增殖与迁移能力,上调E-cadherin的蛋白表达水平,而下调N-cadherin、MMP2的蛋白表达水平(均P<0.05);过表达miR-148a-3p可显著抑制786-O细胞的增殖与迁移能力(P<0.01)。双荧光素酶报告基因检测结果表明,SLC9A3-AS1可特异性结合miR-148a-3p,后者进一步靶向结合ROCK1 mRNA的3′UTR区域;过表达miR-148a-3p可明显下调ROCK1 mRNA的表达水平,敲低miR-148a-3p表达则产生相反的效应;敲低SLC9A3-AS1表达可显著下调786-O细胞中ROCK1 mRNA与蛋白的表达水平(P<0.01);下调miR-148a-3p表达可部分逆转SLC9A3-AS1沉默对786-O细胞增殖与迁移的抑制作用(P<0.05)。结论SLC9A3-AS1在ccRCC中通过调控miR-148a-3p/ROCK1轴发挥促癌作用,有望成为ccRCC的一个新的分子标志物。

单子叶植物内生菌多糖抗肿瘤活性的研究

目的:研究单子叶植物内生菌多糖抗肿瘤活性。方法:用单子叶植物内生菌多糖对S-180和H22肝癌荷瘤小鼠进行体内和体外抑瘤实验,单子叶植物内生菌多糖对S-180荷瘤小鼠细胞分裂指数实验。结果:单子叶植物内生菌多糖对小鼠S-180实体瘤和H22小鼠肝癌具有抑制作用(P<0.001);单子叶植物内生菌多糖可干扰肿瘤细胞的细胞周期,抑制其分裂。结论:单子叶植物内生菌多糖具有一定的抗肿瘤活性。

肾脏嗜酸细胞瘤的诊治分析(附三例报告及文献复习)

目的探讨肾脏嗜酸细胞瘤的临床、病理、免疫组化特性、诊治方法及预后,以提高对该病的诊治水平。方法报告经治3例嗜酸细胞瘤患者的临床资料,并结合文献复习进行分析。肿瘤分别位于右肾中上部、左肾上极和左肾肾盂旁,肿瘤大小分别约5.3cm×4.5cm、8.2cm×4.7cm、6.0cm×4.8cm。术前均诊断为肾癌而行肾癌根治术。结果肿瘤边界清楚,切面呈棕黄色,质地均匀,无出血及坏死灶。光镜下肿瘤细胞呈圆形或类圆形,细胞均匀一致,排列呈腺泡状或实性片状,胞质含有许多嗜酸性颗粒,细胞无明显异型性和核分裂相。随访10～35个月,均存活。结论肾脏嗜酸细胞瘤在临床症状、体征及影像学方面无明显特异性表现,确诊须依靠组织病理学检查以及免疫组化等方法。确诊后治疗以保留肾脏手术为宜,因肿瘤中可能含有恶性成分,术后密切随访很重要。

单子叶植物内生菌多糖抗肿瘤免疫机制的研究

目的:研究单子叶植物内生菌多糖抗肿瘤活性免疫机制。方法:用MTT法检测单子叶内生菌多糖对荷瘤小鼠淋巴细胞上清中TNF-α、IL-2、IL-3活性的影响;用RT-PCR和凝胶图像吸收度分析系统检测IL-2mRNA、IL-3mRNA、TNFmRNA表达的影响。结果:单子叶植物内生菌多糖可提高荷瘤小鼠体内中的TNF、IL-2、IL-3含量显著明显增高(P<0.01或P<0.05)并使荷瘤小鼠巨噬细胞TNFmRNA和淋巴细胞IL-2、IL-3mRNA表达水平明显增强(P<0.05)。结论:单子叶植物内生菌多糖抗肿瘤活性机制可能与增强机体抗肿瘤免疫功能密切相关。

肌源干细胞自体移植治疗压力性尿失禁的可行性研究

目的探讨鼠骨骼肌肌源干细胞(MDC)自体移植在压力性尿失禁治疗中的可行性。方法采用差速贴壁法分离、纯化培养6只雌性大鼠的MDC,体外脂质体介导法转染pEGFP-N1质粒入MDC,转染成功后将筛选的MDC注射于自体膀胱颈和尿道周围,5、15 d处死大鼠切取膀胱及后尿道,组织学检查观察注射组织形态学改善,免疫组化检测GFP蛋白的表达,观察MDC存活情况。结果5、15 d注射部位组织未见明显炎症改变及炎性细胞浸润,局部细胞层数增多,免疫组化显示各时间点大量细胞细胞质内可见棕黄色GFP蛋白表达,且在5、15 d两个时间点GFP阳性细胞数量和染色强度没有明显改变。结论MDC自体膀胱尿道周围注射可持续存活,自体MDC有可能成为治疗压力性尿失禁的一种理想材料。

前列舒通联合盐酸坦索罗辛治疗慢性前列腺炎疗效评价及对血清PSA、NGF、TGF-β的影响

目的:探讨前列舒通联合盐酸坦索罗辛治疗慢性前列腺炎的治疗效果。方法:以100例慢性前列腺炎患者作为研究对象,回顾性分析其临床病例资料,将其分为观察组(52例)与对照组(48例)。其中对照组患者使用盐酸坦索罗辛进行治疗,而观察组患者联合使用前列舒通与盐酸坦索罗辛进行治疗。观察并比较两组患者的治疗效果。结果:(1)治疗前,两组患者NIH-CPSI、VAS、PPI评分差异不显著(P>0.05)。治疗后,观察组患者上述指标值明显低于对照组(P<0.05)。(2)治疗前,两组患者前列腺液炎性因子水平(IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α)差异不显著(P>0.05)。治疗后相比较对照组,观察组患者上述指标值明显更低(P<0.05);(3)治疗前,两组患者血清中CD3^+、CD4^+、CD8^+、CD4^+/CD8^+等T淋巴细胞亚群差异不显著(P>0.05)。治疗后相比较对照组,观察组患者T淋巴细胞亚群水平更优(P<0.05);(4)治疗前,两组患者尿动力学指标水平(MFR、AFR、排尿量)差异不显著(P>0.05)。治疗后,观察组患者上述指标值明显高于对照组(P<0.05);(5)治疗前,两组患者SlgA、白细胞及CTGF水平差异不显著(P>0.05)。治疗后,观察组患者上述指标值明显低于对照组(P<0.05);(6)治疗前,两组患者血清PSA、NGF、TGF-β水平差异不显著(P>0.05)。治疗后,观察组患者上述指标值明显低于对照组(P<0.05);(7)观察组患者临床治疗有效率明显高于对照组(92.31%VS 72.92%,P<0.05)。结论:前列舒通联合盐酸坦索罗辛治疗慢性前列腺炎,能明显减轻患者疼痛,降低机体炎性反应与血清PSA、NGF、TGF-β水平,改善其免疫功能,治疗效果显著。因此,该方法值得在临床上推广与应用。

输尿管镜钬激光碎石术治疗输尿管上段结石手术中是否联合应用NTrap网篮的疗效比较

目的探讨在输尿管镜钬激光碎石术治疗输尿管上段结石手术中应用NTrap网篮的有效性和安全性。方法分析比较输尿管镜钬激光碎石术治疗输尿管上段结石手术中联合应用NTrap网篮治疗(第1组)以及未联合应用(第2组)的患者的临床资料,对碎石成功率、结石清除率、并发症等进行统计分析。结果一次性治疗成功率第1组为98.5%,第2组为90%;第1组效率商为0.98,第2组为0.9。结论输尿管镜钬激光碎石术治疗输尿管上段结石时应用NTrap网篮可以有效防止结石移位,减少术后残留结石的发生,手术安全可靠。

标准通道和微通道PCNL在不同肾盂压力下治疗感染性肾结石效果的Meta分析

目的:对比分析标准通道(F24~F34)和微通道(F16~F18)经皮肾镜(PCNL)治疗感染性肾结石的效果。方法:在Pub Med、Embase、CNKI、万方等医学数据库,检索PCNL治疗肾结石的临床随机对照试验(RCT),由两位工作者独立提取文献数据,利用Stata 14.0软件对纳入文献进行Meta分析,探索标准通道和微通道的治疗效果。结果:本研究共纳入11篇随机对照试验文献,包括2 152例肾结石病人,Meta分析结果显示低肾盂压力下微通道PCNL(MPCNL)并发症RR=0.63(95%CI:0.63~1.06),术中出血量RR=-0.94(95%CI:-1.29^-0.59);PCNL并发症RR=0.39(95%CI:0.21~0.71),术中出血量RR=-1.48(95%CI:-1.87^-1.08)。结论:低肾盂压力下可以减少术后并发症及术中出血量;但MPCNL的治疗效果(结石清除率及术后并发症发生率)与PCNL比较没有明显的优势。

微创经皮肾镜技术与F-URS治疗老年复杂输尿管上段结石的效果评价

输尿管上段结石是泌尿外科常见的疾病之一,其引起的并发症较多,如输尿管梗阻、肾积水、肾绞痛及感染等,严重影响患者的生活质量[1]。输尿管上段结石的微创手术方法包括经尿道输尿管镜取石术（URL）、体外震波碎石术（ESWL）、腹腔镜输尿管切开取石术（LU）等。复杂性输尿管上段结石常并发结石远端炎性息肉、狭窄、输尿管扭曲,ESWL疗效不明显,URL镜体到达结石所在部位困难。

沉默PKM2增强藤黄酸诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡的敏感性

目的:研究沉默丙酮酸激酶M2型(PKM2)对藤黄酸(GA)诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡的影响,并探讨其潜在的作用机制。方法:设计并合成针对PKM2的3条特异性siRNA及阴性对照siRNA(si-NC)。利用脂质体将PKM2 siRNA和si-NC转染至人前列腺癌PC3细胞并检测PKM2 siRNA的沉默效率。MTT和吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双重染色法分别检测沉默PKM2后GA对PC3细胞生长活性和凋亡的影响。采用实时荧光定量PCR和Western印迹法分别检测c-myc和cyclin D1的mRNA和蛋白表达水平。结果:与si-NC组比较,3条PKM2 siRNA都能够有效下调PKM2的mRNA和蛋白表达水平,其中PKM2 siRNA-1的沉默效率最高。转染PKM2siRNA-1 24 h后,PC3细胞中PKM2 mRNA和蛋白表达水平分别下调70%和85%(P<0.05)。转染PKM2 siRNA-1后给予0.5μmol/L的GA处理24 h,PC3细胞生长活性明显受到抑制(对照组的68%)且凋亡诱导增加,而且c-myc和cyclin D1基因的mRNA和蛋白的表达水平显著下调(c-myc分别为对照组的50%和35%;cyclin D1分别为对照组的60%和20%,P<0.05)。结论:抑制PKM2能够提高GA诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡的敏感性,PKM2可能成为GA治疗前列腺癌的有效增敏靶点。

外泌体在前列腺癌发展和转移中的作用

目的比较正常人和前列腺患者外周血外泌体的含量,并探究外泌体在前列腺癌发展和转移中的作用。方法利用离心法收集正常人和前列腺癌患者外周血中外泌体并测定外泌体浓度。应用免疫组织化学技术检测前列腺癌组织和癌周正常组织中CD63的表达。MTT和Western blot检测外泌体对前列腺癌细胞增殖活性和外泌体分泌能力的影响。复制前列腺癌肺转移小鼠模型,并检测前列腺癌患者来源的外泌体对前列腺癌细胞肺转移能力的影响。免疫荧光染色检测肺转移癌组织中CD63和Ki-67的表达。结果前列腺癌患者外泌体含量(27.69±11.66)μg/ml高于正常人(7.41±5.2)μg/ml(P<0.05)。伴远处转移的前列腺癌患者外周血中外泌体含量(33.40±10.45)μg/ml高于无远处转移前列腺癌患者(18.17±5.96)μg/ml(P<0.05)。前列腺癌患者外周血外泌体提高前列腺癌细胞的增殖活性和外泌体产量。注射外泌体组裸鼠肺部转移灶数目(16.28±6.94)高于对照组(4.72±2.51)(t=5.265,P=0.000)。结论外泌体提高前列腺细胞增殖活性,促进前列腺癌细胞分泌外泌体,促进前列腺癌细胞肺转移。

抗人转铁蛋白受体单克隆抗体增强姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌的抑制效应

目的检测抗人转铁蛋白受体单克隆抗体(TfR mAb)对雄激素非依赖性前列腺癌细胞生物学行为的影响,了解抗人TfR mAb对姜黄素抗瘤作用的协同效应。方法利用杂交瘤细胞株制备抗人TfR mAb,分别采用CFSE染色、AnnexinⅤ-PI染色和PI染色法流式细胞仪检测抗人TfR mAb对PC-3细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。采用FITC标记的鼠抗人TfR mAb检测姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞表面TfR表达的影响。采用流式细胞仪进一步检测抗人TfR mAb联合姜黄素对PC-3细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果抗人TfR mAb对PC-3细胞增殖、凋亡和细胞周期无明显影响(均P>0.05)。姜黄素能够显著上调雄激素非依赖性前列腺癌细胞表面TfR表达(P<0.05)。抗人TfR mAb可显著增强姜黄素对PC-3细胞凋亡的诱导作用(P<0.05),而不影响姜黄素对PC-3细胞增殖和细胞周期的影响(均P>0.05)。结论姜黄素可导致雄激素非依赖性前列腺癌细胞表面TfR表达增高。抗人TfR mAb单独作用对雄激素非依赖性前列腺癌细胞的生物学行为无显著影响,但抗人TfR mAb可以增强姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞的凋亡效应。

USP22 aiRNA通过Mdm2-p53通路抑制膀胱癌耐药细胞株T24/MMC的增殖

目的研究沉默泛素特异肽酶22（USP22）基因对膀胱癌T24丝裂霉素C（mitomycin C,MMC）耐药细胞株（T24/MMC）生长活性的影响,并探讨其可能的作用机制。方法采用MTT法检测不同浓度的MMC（20、40、80、160、320μg/mL）对T24和T24/MMC细胞生长活性的影响。实时荧光定量PCR和Western blot法检测人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1细胞株、T24和T24/MMC细胞中USP22mRNA和蛋白的表达水平。采用非对称性小RNA（aiRNA）干扰技术沉默USP22,MTT法和吖啶橙/溴化乙啶（AO/EB）双重染色法分别检测沉默USP22后MMC对T24细胞、T24/MMC细胞生长活性和凋亡的影响。实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测p53和Mdm2mRNA和蛋白的表达水平。结果采用不同浓度的MMC（20、40、80、160、320μg/mL）处理细胞24h后,T24细胞的生长活性分别为82.4%、68.7%、44.2%、25.4%和4.7%,与未经MMC处理组比较差异均具有统计学意义（均P〈0.05）。然而,0~160μg/mL的MMC对T24/MMC细胞的生长活性无明显影响。与SV-HUC-1细胞比较,USP22在T24及T24/MMC细胞中高表达,且T24/MMC细胞中USP22表达显著高于T24细胞,差异具有统计学意义（P〈0.05）。沉默USP22后,MMC对T24细胞的生长活性抑制作用更显著。且当MMC浓度在20~160μg/mL时,沉默USP22后T24/MMC细胞的生长活性也明显受到抑制,其生长活性分别为85.1%、70.3%、63.2%和47.8%。同时,AO/EB实验结果显示,沉默USP22后给予80μg/mL的MMC处理24h,可诱导T24及T24/MMC细胞凋亡。实时荧光定量PCR和Western blot结果进一步显示,转染USP22aiRNA 24h后,T24/MMC细胞中p53基因的mRNA和蛋白表达水平上调,Mdm2表达水平下调。结论 USP22aiRNA通过调控Mdm2-p53通路增强MMC抑制T24细胞增殖的敏感性,同时也能够逆转T24/MMC对MMC的耐药。

刺五加注射液与茶碱、咖啡因体外对精子运动功能影响的比较研究

目的:比较刺五加注射液与茶碱、咖啡因体外对精子运动功能的影响。方法:由12例弱精子症患者通过手淫获得并经上游优化处理的精子分别与一定浓度的刺五加注射液(10g/L)、咖啡因(7mmol/L)和茶碱(3mmol/L)一起孵化0h、1h、3h后,采用计算机辅助精液分析系统(CASA)检测精子的运动参数(精子活动率、前向性运动百分率、直线运动速度、曲线运动速度)。结果:刺五加注射液在体外能显著提高人精子活动率,前向性运动精子百分率,精子直线运动速度和曲线运动速度,其改善精子运动功能优于茶碱和咖啡因,差异均有显著性(P<0.05)。结论:中药刺五加注射液在体外能显著改善人精子的运动功能。

输尿管镜钬激光碎石术联合应用NTrap网篮治疗输尿管上段结石

目的探讨在输尿管镜钬激光碎石术治疗输尿管上段结石手术中应用NTrap网篮的有效性和安全性。方法分析在输尿管镜下钬激光碎石术中联合应用NTrap网篮治疗53例输尿管上段结石患者的临床资料,对碎石成功率、结石清除率、并发症等进行统计分析。结果一次性碎石成功率94.3%,术后1个月结石清除率98.1%。其中1例发生结石移位,2例因输尿管扭曲无法上镜而改开放手术,2例出现输尿管黏膜损伤,4例术后出现发热。结论输尿管镜钬激光碎石术治疗输尿管上段结石时应用NTrap网篮可以有效防止结石移位,减少术后残留结石的发生,手术安全可靠。

难治性慢性前列腺炎患者精神因素与勃起功能的初步探讨

目的:探讨难治性慢性前列腺炎患者的精神因素与勃起功能。方法:选取未经心理治疗的232例难治性和非难治性慢性前列腺炎患者分别进行NIH慢性前列腺炎症状评分、焦虑、抑郁评分和勃起功能评分并进行对比。结果:难治性慢性前列腺炎患者的NIH慢性前列腺炎症状评分与非难治性患者无显著性差异,难治性慢性前列腺炎患者焦虑和抑郁评分分别高于非难治性患者焦虑和抑郁评分(P<0.01),难治性慢性前列腺炎患者勃起功能明显低于非难治性患者(P<0.01);慢性前列腺炎的焦虑抑郁评分与勃起功能评分有显著性负相关性。结论:难治性慢性前列腺炎患者会存在明显的心理症状,并且在某种程度上影响到其勃起功能。