基孔肯雅病毒包膜蛋白E2的全基因合成及原核表达

目的通过对全长基孔肯雅病毒包膜蛋白E2(CHIKV-E2,1～404 aa)及其跨膜疏水区(351～378 aa)缺失突变体E2(1～350 aa)进行原核表达,分析跨膜疏水区对E2蛋白在大肠杆菌中表达的影响。方法利用ExPasy预测软件对E2蛋白跨膜疏水区进行预测分析,根据GenBank数据库中CHIKV-E2氨基酸序列获得其对应的基因序列。结合重叠延伸PCR(OE-PCR)原理设计用于全基因合成的核酸引物对CHIKV-E2全长基因(404 aa)进行体外合成,构建全长E2蛋白及其缺失突变体原核表达质粒,将序列正确的两种重组质粒分别转至E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测重组质粒的表达情况。结果 OE-PCR法成功合成了大小为1 212 bp的编码CHIKV-E2(1～404 aa)蛋白的全长基因,构建了全长E2蛋白及其缺失突变体重组表达质粒pET21b-E2(1～404)和pET21b-E2(1～350),经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE结果显示缺失突变体pET21b-E2(1～350)融合蛋白表达量较pET21b-E2(1～404)有明显提高。结论 E2蛋白跨膜疏水区(351～378 aa)对该蛋白的原核表达具有重要影响,缺失该疏水区的突变体在大肠杆菌中表达量比全长E2蛋白表达量明显提高。

钯(Ⅱ)配合物和氯化锌在DMF中阴极还原的动力学

烯丙基化合物在钯催化下与碳亲核试剂的反应已成为碳一碳键合成的手段.1989年王志勤等研究报导,在DMF溶液中和氯化锌存在下,钯催化醋酸烯丙酯与羰基化合物电化学还原生成高产率的醇.我们对此反应的机理进行了研究,首先用线性电势扫描法确定各电还原反应的还原电势,得出在实验条件下,氯化锌比π-烯丙基钯配合物容易还原。

竹叶内酯的提取及纯化工艺研究

本文探索了竹叶内酯的提取及纯化工艺。首先,以预处理后的竹叶为原料,采用乙醇为提取剂,提取竹叶内酯。以提取率为评价指标,采用单因素试验,确定了乙醇浓度、料液比、提取温度和时间对内酯提取的影响。在此基础上,采用L9(34)正交试验,优化了竹叶内酯的提取工艺条件,其结果为:乙醇浓度40%,液料比15:1,提取温度90℃,提取时间3 h。然后,将浸提液离心,将上清液浓缩后,分别用聚酰胺、DM301、D101、HP-20和AB-8五种树脂进行纯化。以静态吸附率和解吸率为评价指标,考察树脂种类对内酯纯化的影响。结果表明:用聚酰胺纯化时,其对竹叶内酯有较好的吸附率和解吸率,且有利于内酯与黄酮的分离。所以,选择聚酰胺为最佳吸附树脂。然后,将浓缩后的提取液上柱,用20%乙醇洗脱,得到的流出液依次浓缩及冷冻干燥后,获得竹叶提取物,其内酯的得率(按原始竹叶算)和纯度分别为9.44‰和46.2%。

黑米花青素微胶囊制备的工艺研究

目的以黑米花青素为主要原料,开发一种能够顺利到达肠道并在肠道内缓慢释放以发挥花青素益生元功效的微胶囊。方法采用锐孔法,以包埋率为指标,分别以壁芯比、针头孔径、海藻酸钠及CaCl2浓度为因素,采用单因素试验,确定微胶囊的制备条件;在此基础上,采用四因素三水平L9（34）正交试验,优化了该微胶囊的最佳制备工艺;最后,通过微胶囊在胃和肠模拟液中的释放试验,验证该微胶囊的缓释功能。结果微胶囊的最佳制备工艺:壁芯比3:1、针头孔径0.45 mm、海藻酸钠2.0%、CaCl2 2.0%;该微胶囊可以在人胃模拟液中保持4.0 h以上,在人肠模拟液中缓慢释放。结论采用锐孔法制备的花青素微胶囊能够顺利到达肠道缓慢释放,发挥其益生元功效。

大米抗性淀粉双酶制备及其结构表征

以大米淀粉为原料,α-淀粉酶与普鲁兰酶为酶解剂,利用单因素试验研究大米抗性淀粉的制备工艺条件;通过抗酶解试验研究了其抗酶解性;采用扫描电子显微镜(SEM)、差示扫描量热仪(DSC)和X-射线衍射(X-RD)表征了大米抗性淀粉的结构。确定最佳工艺条件为:pH 5.5、温度80℃、反应时间40 min、酶α-淀粉用量4 u/g,抗性淀粉得率为45.2%。利用抗酶解试验,通过与单酶法和湿热法制备得到的抗性淀粉相比较,发现双酶法制备的抗性淀粉具有较强的抗酶解性能,24 h时的酶解率为8.02%。DSC、SEM和X-RD分析表明:双酶解法制备所得抗性淀粉具有糊化热性能稳定、空间结构紧密以及结晶度高等特点。表明双酶法制备的大米抗性淀粉抗消化能力强。

均匀球状Fe_3O_4胶体粒子的制备

近年来,有关均匀胶体粒子的制备及其性质的理论研究已经成为一项新兴的研究领域.Fe_3O_4均匀胶体在催化剂、磁性材料、药物等方面具有广泛的用途,尤其值得注意的是其形成过程与钢铁的腐蚀过程极为相似,因此对Fe_3O_4均匀胶体的制备研究还将有助于钢铁腐蚀机理的阐明。Sugimoto和Matrijevic最初将Fe(OH)_2溶胶用氧化剂部分氧化而得到Fe_3O_4均匀胶体,但制备条件苛刻,操作复杂,且为了减小反应容器的大小对升温速率的影响,每次反应液的量只有10ml左右,一次制得的Fe_3O_4均匀胶体量只有约0.02克.本文报导在无防尘设备的简化实验条件下,通过在加液方法、除氧操作以及分离纯化等实验手续的修改后,对Fe_3O_4均匀粒子较大量制作所得到的结果。

人IgMμ链恒定区各肽段的基因合成原核表达及免疫原性分析

目的全基因合成并原核表达免疫球蛋白M的重链(IgMμ链)及其各肽段,与天然的IgM、IgMμ链和IgG进行免疫原性的分析比较,进一步了解IgMμ链恒定区的结构与功能。方法根据GenBank数据库IgMμ链恒定区(CH1-CH4)的cDNA序列并进行必要的大肠杆菌密码子优化,利用重叠延伸PCR(OE-PCR)体外基因合成人IgMμ链恒定区全长(CH1-CH4)及其截断片段CH1-CH2和CH3-CH4。原核表达并纯化相应的3种融合蛋白PET32a-rMμCH1-CH4、PET32a-rMμCH1-CH2和PET32a-rMμCH3-CH4,并分别免疫BALB/c小鼠。同时设天然人IgM、IgMμ链和IgG免疫组为对照。再用ELISA法检测6种血清,分析比较其抗原性及免疫原性。结果利用OE-PCR方法体外成功合成1 359 bp的IgMμ链(CH1-CH4)全长基因、651 bp的IgMμ链CH1CH2和708 bp的IgMμ链CH3CH4,并构建相应原核表达质粒PET32a-rMμ1-4、PET32a-rMμ1-2和PET32a-rMμ3-4,血清ELISA检测结果显示:①IgG免疫原性>IgM>IgMμ链>rMμ1-4>rMμ1-2>rMμ3-4;②IgM免疫的血清与IgG有较强的交叉反应性,IgG免疫的血清与IgM也存在较强的交叉反应性;IgMμ链和重组μ链的各肽段免疫的血清与IgG均无明显的交叉反应性。结论重组的IgMμ链及其各肽段与天然IgMμ链有着相似的免疫原性和特异性,为基因工程得到抗人IgMμ链单克隆抗体奠定了研究基础。

人和羊IgG对噬菌体展示细菌免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库的体外进化筛选

目的使用人和羊不同物种IgG来诱导噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库进行体外分子进化筛选,判断不同的Fc段构像是否具有特异的结合优势,同时探索其优势结合序列的组合特点。方法通过PCR获得金黄色葡萄球菌蛋白A(SpA)的A、B、D、E和链球菌(C和G群)蛋白G(SpG)的B2、B3各单结构域片段,构建由该6个片段随机组合的噬菌体展示文库。再分别使用人和羊IgG对文库进行体外亲和筛选,以期能够获得具有特异优势结合能力的组合分子,并在Phage ELISA的水平上进一步验证筛选结果。结果成功构建了符合进行体外进化筛选要求的噬菌体展示单结合结构域随机组合文库后,经过6轮人IgG诱导筛选,文库的展示片段大小统一为3个结构域组合分子,E-B-B3;经过6轮羊IgG诱导筛选,文库的展示片段大小也统一为4个结构域组合分子,D-A-B3-B3。Phage ELISA进一步验证最终组合序列的对人和羊IgG的结合能力。结论首次得到两种天然SpA、SpG分子中不存在的,且分别特异地与人和羊IgG具有强结合作用的新型组合分子E-B-B3、D-A-B3-B3,在人和羊IgG的纯化和检测具有很大的应用前景。

中国物流业并购绩效的实证研究

随着中国经济的高速发展,国内市场与国际市场的进一步融合,国内物流业并购风起云涌。本文以2003年至2005年发生并购事件的企业为样本,通过对样本企业并购前后的财务指标进行量化分析,运用K均值差异性分析和趋势分析方法,对并购事件对我国物流业经营绩效的影响进行了检验,并提出了相应建议。

高浓度含盐含酸有机废水预处理及膜清洗初试

以聚合氯化铝(PAC)为絮凝剂,结合杂萘联苯聚芳醚砜酮(PPESK)超滤膜技术处理高浓度含盐含酸有机废水,考察了絮凝剂最佳投药量,同时研究超滤膜的清洗恢复情况,主要考察了水力清洗以及不同化学清洗剂和清洗时间的影响下,膜通量的恢复情况,从而确定了最佳的膜清洗方法。结果表明:PAC最佳投加量为100 mg/L,废水絮凝效果最好,COD及SS去除率分别达到30%、90%。EDTA碱液反洗有很好的再生效果,渗透通量恢复率高至98.3%。

蓝莓复合保健饮料的工艺研究

以蓝莓为主要原料,黄精、山药、葛根、枸杞等为辅料,研制出一种具有益肾功效的蓝莓复合保健饮料。首先,以感官评分为指标,通过单因素实验,确定了蓝莓、白砂糖、柠檬酸、黄精、枸杞、葛根、山药的添加量。采用正交试验,研究了主要原辅材料的配比对产品感观品质的影响。最适用量:蓝莓汁12.00%,白砂糖7.00%,柠檬酸0.10%,黄精0.10%,山药0.25%,葛根0.10%,枸杞0.05%。该产品的杀菌温度及时间分别为95℃及10min。研制出营养丰富、风味独特的天然保健饮料,并且具有益肾的功能。

SPSS正交设计在漳州水仙组织培养中的应用

以漳州水仙为材料,采用SPSS正交设计研究了2,4-D、6-BA和KT对漳州水仙褐化率、愈伤诱导率、小球茎诱导率、生根率等的影响。结果表明,2,4-D对水仙的小球茎诱导效果最显著,6-BA和KT对水仙小球茎诱导效果不明显,漳州水仙外层鳞茎最佳诱导培养基为MS+0.2mg/L 6-BA+0.5mg/L 2,4-D+0.1mg/L KT,漳州水仙中层鳞茎最佳诱导培养基为MS+0.5mg/L2,4-D+0.1mg/L KT。

丝瓜伤流液的化学组成及体外抗氧化活性的研究

本文研究了丝瓜伤流液的化学组成及其体外抗氧化活性。首先,分析其富含主要化学物质的含量,通过GC-MS分析其小分子有机物质的组成及含量,并分析温度及浓度对其清除DPPH与?OH的能力及总还原能力的影响,确定其体外抗氧化活性。结果表明:丝瓜伤流液的pH为6.42,固形物为0.4 g/L,总酸(以柠檬酸计)为7.86 mg/L,无机盐为0.32 g/L,总糖为11.213 mg/L,多糖为4.054 µg/L。还原糖、蛋白质、游离氨基酸均未检测出;含有4种烷类,4种酮类,3种醛类,3种酚类,3种胺类和1种酸类物质;丝瓜伤流液的原液对?OH及DPPH清除率最高,分别为63.4%、46.7%;在4℃的条件下,其对?OH及DPPH清除能力及还原能力最强。综合分析,冷藏的丝瓜伤流液原液具有较强的体外抗氧化能力。

纯牛奶中18碳TFA及9c,11t-CLA含量的测定研究

为了精确测量出纯牛奶中18碳TFA及9c,11t-CLA的含量,本实验通过毛细管气相色谱法,并采用内标法,对纯牛奶进行了检测,结果显示,纯牛奶中18碳脂肪酸的质量百分比约为35·43%,18碳TFA的质量百分比约为2·27%,而其中C18:1-11t的质量百分比达到1·28%,占所有18碳TFA的一半以上,约为56·36%,同时,牛奶中C18:2-9c,11t的质量百分比只为0·11%,其含量远少于TFA。

牢利齿口嚼片的制备及药效学试验

牢利齿是一种防治龋齿和牙周炎的新药。通过体外、体内药效学试验，证实牢利齿对１２．５×１０８／ｍｌ以下各种致龋菌有明显的抑制作用，并有显著的降低动物龋齿患病率的效果。药物回收率为９６．１％（ｎ＝５），咀嚼后药物利用率＞５４，４％即可达到牢利齿预期疗效。

抗病毒合剂的制备及药效学观察

本文采用醇提与水煎煮双重提取抗病毒合剂中有效成分．并用薄层层析法测定了合剂中活性成分─—靛玉红的含量，作为本品质量的指标；观察了该制剂对内毒素发热家兔的影响。

异烟肼在水溶液中阳极氧化的动力学

异烟肼在水溶液中阳极氧化的动力学章萍萍（中国药科大学无机化学教研室，南京２１０００９）关键词异烟肼；阳极氧化；电极过程动力学异烟肼（４－吡啶甲酰肼，Ｃ６Ｈ７Ｎ３Ｏ）对结核杆菌有良好的抗菌作用。它疗效较好，用量较小，毒性相对较低，易为病人所接受。异烟肼...

利用多元策略 促进口语发展

《语文课程标准》指出：小学生应当“具有日常口语交际的基本能力，在各种交际活动中，学会倾听、表达与交流，初步学会文明地进行人际沟通和社会交往，发展合作精神”。发展口语是素质教育的重要内容，是语文教学义不容辞的职责。口语交际能力要求除了具备听话、说话的能力外，还要有交往能力、待人处事能力等。作为语文教师，应当认真分析当前口语教学的症结所在，寻求对策，加强训练，切实提高学生的口语表达能力。

货币政策的股票市场传导机制简述

股票市场价格作为重要的资产价格之一，是判断我国经济形势“晴雨表”的重要指标，并且随着我国股票市场规模的日益增大，股票市场价格与宏观经济的关系也愈来愈紧密。在分析贷币政策变化对股票市场的影响机制上，本文从货币供应量和利率这两个货币中介指标入手，分别阐述了其对股票毒场价格的影响。

报业集团内部授权制度的完善问题

自经济全球化后,市场竞争越来越激烈,竞争环境也变的更加复杂,报业集团在竞争中面临的压力越来越大。为了避免国企好大喜功,在报业经济上重数量轻质量,以及下属公司提供虚假信息,对利润进行虚假调整,从而导致高层在决策上出现失误,应当加强对报业企业的内部控制,建立一套科学的监督机制。