临床检验形态学教学在线课程的探索与实践

《临床血液学检验》是医学检验技术专业的必修课程,其教学任务是培养学生具备血液系统疾病的临床检验能力和素养,注重对学生实践能力的培养。细胞形态结果是很多疾病诊断的“金标准”,然而形态学的课程内容繁多、课时少、优质教学资源有限,尤其是血细胞形态内容复杂多变,故传统教学模式受到挑战。构建细胞形态学在线课程,一方面通过建设精品课程,提高在线课程的吸引力,扩大优质教育资源的受益面积,使学生积极主动地投入学习当中,提高授课成效。另一方面可拓宽教学时空,学生可随时学习。为了培养医学检验专业学生细胞形态的辨识和血液病的诊断等岗位胜任能力,提高细胞形态学课程的授课成效,文章借助移动教学独特的优势,构建细胞形态学的在线课程教学平台,开展细胞形态学在线课程的教学工作。

他汀类药物代谢相关基因检测在心脑血管疾病个体化用药中的作用

目的探讨他汀类药物代谢相关基因检测在心脑血管疾病患者个体化用药及血脂管理中的作用。方法选取141例心脑血管疾病患者(冠心病72例、脑梗死69例)及70名体检健康者(正常对照组)。检测所有对象血清载脂蛋白A(apo A)、载脂蛋白B(apo B)、载脂蛋白E(apo E)、脂蛋白(a)[Lp(a)]、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、游离脂肪酸(FFA)水平,同时检测他汀类药物代谢相关基因ABCB1(2677G>T)、ABCB1(3435C>T)和SLCO1B1*5(T>C)单核苷酸多态性(SNP)。在72例冠心病患者中选取41例进行他汀类药物治疗前后基因多态性与血脂水平的相关性分析。结果心脑血管疾病组血清TG、HDL-C、apo A、Lp(a)、FFA水平与正常对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);冠心病组血清TG、HDL-C、LDL-C、apo A、Lp(a)、FFA水平与正常对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);脑梗死组血清TG、HDL-C、Lp(a)水平与正常对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其他血脂项目各组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。心脑血管疾病组、脑梗死组、冠心病组的基因分型和基因频率分布一致,均为ABCB1(2677G>T)G等位基因频率高于T等位基因频率、ABCB1(3435C>T)C等位基因频率高于T等位基因频率、SLCO1B1*5(T>C)T等位基因频率高于C等位基因频率。41例冠心病患者采用他汀类药物治疗后,血清TG、TC、LDL-C水平明显低于治疗前(P<0.05),血清HDL-C水平明显高于治疗前(P<0.05)。不同基因型患者对他汀类药物的疗效存在明显差异(P<0.05)。结论心脑血管疾病患者血脂水平异常,同一疾病患者的基因多态性存在明显的个体差异。心脑血管疾病患者的药物基因组学检测对指导他汀类药物临床降脂治疗有重要作用。

骨质疏松症与骨转换标志物的相关性研究

目的探讨骨转换标志物在骨质疏松症患者中的检测意义和应有价值。方法应用双能X线骨密度仪测量脊柱和股骨骨密度(BMD)。根据骨密度值将74例受检者分为正常对照组19例,骨量减少组25例,骨质疏松组30例。同时用电化学发光免疫分析方法测定所有受检者骨转换标志物甲状旁腺素(PTH)、β-胶原特殊序列(β-CTX)、骨钙素(N-MID)和25-羟基维生素D3水平。结果骨质疏松组:β-CTX、N-MID水平与正常对照组、骨量减少组比较差异有统计学意义(P<0.05);PTH、25-羟基维生素D3水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论骨质疏松症患者血清骨代谢标志物水平与骨质疏松存在密切的相关性;血清骨转换标志物β-CTX、N-MID是诊断骨质疏松症、预测骨折风险的理想指标。

化学发光微粒免疫分析法检测抗TP抗体的性能评价和应用

目的探讨化学发光微粒免疫分析法(CMIA)检测抗梅毒螺旋体(TP)抗体的性能和S/CO值设定方案。方法采用CMIA检测116例患者的血清抗TP抗体,同时用荧光螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)确认。分别以FTA-ABS检测结果和临床诊断结果作为标准,采用受试者工作特征(ROC)曲线评价CMIA检测抗TP抗体的性能。结果采用CMIA检测116例患者的抗TP抗体,其中有98例S/CO值>1.1、18例S/CO值≤1.1;FTA-ABS检测结果为阳性70例、弱阳性16例、阴性30例;临床诊断结果为阳性58例、阴性58例。ROC曲线分析结果显示,以FTA-ABS结果为标准,CMIA检测抗TP抗体的曲线下面积为0.885,CMIA S/CO值的最佳临界值为3.66,敏感性为95.7%,特异性为80.0%,Youden指数为0.757,当CMIA检测抗TP抗体的阳性预测值≥95%时,S/CO值为4.25;以临床诊断结果为标准,CMIA检测抗TP抗体的曲线下面积为0.944,CMIA S/CO值的最佳临界值为4.25,敏感性为87.9%,特异性为88.5%,Youden指数为0.764。结论 CMIA的敏感性高,无漏诊,有一定的误诊率,适合作为初筛实验。

CD3^+、CD4^+、CD8^+T细胞水平在胃癌患者外周血中的变化

目的探讨T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+比值水平在胃癌患者外周血中的表达及意义。方法采用血液分析仪技术,检测40例胃癌手术前患者(按临床分期为Ⅰ～Ⅱ级组18例,Ⅲ～Ⅳ级组22例)及25名正常对照组外周血CD3+、CD4+、CD8+细胞和CD4+/CD8+比值T细胞水平。结果胃癌患者外周血CD3+、CD4+细胞、CD4+/CD8+比值分别为0.78%±0.35%、0.37%±0.21%、0.61%±0.42%,明显低于正常对照组(P<0.05);胃癌Ⅲ～Ⅳ级组CD3+、CD4+细胞CD4+/CD8+比值分别为0.42%±0.27%、0.21%±0.17%、0.29%±0.25%,明显低于Ⅰ～Ⅱ级组(0.95%±0.35%、0.45%±0.19%、0.76%±0.30%,P<0.05)。结论检测胃癌患者手术前外周血CD3+、CD4+、CD8+细胞和CD4+/CD8+比值T细胞水平,可以初步评估胃癌患者机体免疫状态,也为肿瘤的免疫增强治疗提供了理论依据。

幽门螺杆菌感染患者血清IL-8和TNFα的水平变化及临床意义探讨

目的 监测幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,HP)感染患者血清白细胞介素 8(IL 8)和肿瘤坏死因子α(TNFα)的变化规律 ,探讨HP的致病机制。方法 用胃镜检查尿素酶试验、蛋白印迹法对HP进行定性分析、分组 ,酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测IL 8、TNFα的表达水平。结果 高毒力型HP感染组患者血清IL 8、TNFα水平与低毒力型HP感染组、HP阴性组相比差异有显著性 (P <0 .0 1) ,HP感染者血液IL 8和TNFα呈正相关。结论 高毒力型HP的感染是IL 8和TNFα升高的主要因素 ,表明IL 8和TNFα在胃。

载脂蛋白E及脂蛋白(a)与冠心病的相关性分析

目的研究冠心病(CHD)患者载脂蛋白E(apo E)及脂蛋白(a)[Lp(a)]的变化情况,探讨其与CHD病情严重程度的关系。方法选择经冠状动脉造影确诊的CHD患者229例,其中不稳定型心绞痛(UAP)73例、稳定型心绞痛(SAP)40例、急性心肌梗死(AMI)116例,以健康体检者102名作为正常对照组。检测所有对象血清apo E及Lp(a)水平,同时按照美国纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级标准将CHD患者分为NYHAⅠ~Ⅳ级。CHD危险因素评估采用Logistic回归分析。结果在CHD患者中UAP组、SAP组、AMI组血清Lp(a)水平明显高于正常对照组(P<0.05),UAP组血清apo E水平明显高于正常对照组(P<0.05)。随着NYHA分级的升高,血清Lp(a)及apo E水平逐渐升高,但NYHAⅠ、Ⅱ级间血清apo E水平差异无统计学意义(P>0.05),NYHAⅢ、Ⅳ级间血清Lp(a)水平差异无统计学意义(P>0.05);其他各NYHA分级间血清Lp(a)及apo E水平差异均有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示,apo E及Lp(a)均是CH D的独立危险因素[apo E:比值比(OR)=10.780,95%可信区间(CI)1.437~80.830;Lp(a):OR=4.930,95%CI 1.699~14.280]。结论 CHD患者存在脂类代谢紊乱,并与心功能下降有关。apo E及Lp(a)可能参与了CHD的病变过程。

B型钠尿肽水平对心力衰竭诊断价值的探讨

目的探讨B型钠尿肽（BNP）在心力衰竭（简称心衰）患者中的检测意义和应用价值。方法选取32例心衰患者、34例非心衰的心脏病患者、32名正常对照组，用酶联免疫方法定量检测血清BNP水平。结果心衰组BNP水平与非心衰组、正常对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）；随着心功能分级级数的增高，BNP水平逐渐升高，Ⅳ级组与Ⅰ～Ⅱ级组、Ⅲ级组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。心衰组治疗后BNP水平与治疗前比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论测定血清BNP水平有助于心衰患者诊断、病情严重程度和预后的判断。

载脂蛋白E基因缺失促进不成熟髓系细胞的增殖和向单核细胞的极化

目的研究载脂蛋白E（ApoE）对小鼠骨髓来源的CD11b^＋Gr-1^＋髓系细胞增殖和分化的影响,阐述ApoE基因敲除小鼠（ApoE-/-）致动脉粥样硬化敏感的炎症相关新机制。方法 6-8周龄的ApoE-/-小鼠和C57/B6野生型小鼠,采用流式细胞术分析骨髓、脾脏和外周血中CD11b^＋Gr-1^＋髓系细胞、CD11b＋Gr-1-单核细胞和CD11b-Gr-1＋粒细胞的百分比的变化。应用定量RT-PCR和免疫荧光染色,鉴定ApoE基因和蛋白在CD11b^＋Gr-1^＋髓系细胞的表达。从骨髓分选CD11b^＋Gr-1^＋髓系细胞,体外培养24 h,流式细胞术分析ApoE基因缺失对髓系细胞周期改变的作用。结果 （1）ApoE基因缺失显著增加ApoE-/-小鼠外周血CD11b^＋Gr-1^＋髓系细胞和CD11b＋Gr-1-单核细胞;（2）ApoE基因缺失促进ApoE-/-小鼠脾脏和骨髓中CD11b^＋Gr-1^＋不成熟髓系细胞的增殖;（3）定量RT-PCR和免疫荧光染色证实ApoE在CD11b^＋Gr-1^＋髓系细胞有较高水平的表达;（4）ApoE基因缺失可以促进CD11b^＋Gr-1^＋细胞周期自G1期进入S期。结论ApoE基因缺失显著增加ApoE-/-小鼠脾脏和骨髓中CD11b^＋Gr-1^＋不成熟髓系细胞的增殖、巨噬细胞分化和动员。ApoE基因缺失促进CD11b^＋Gr-1^＋髓系细胞增殖与其促进细胞周期进入S期有关。

幽门螺杆菌感染及其毒力因子和胃十二指肠疾病关系的研究

目的 探讨幽门螺杆菌 (Hp)感染病人中Hp细胞毒相关蛋白 (CagA)、细胞空泡毒素 (VacA)抗体在胃十二指肠疾病的比例 ,并评估不同类型幽门螺杆菌感染对胃窦粘膜炎症程度的影响。方法 应用免疫印迹法测定Hp感染者病人体内的CagA、VacA抗体。 结果 73%的Hp感染者病人中出现CagA抗体 ,6 1%Hp感染者病人中出现VacA抗体。CagA抗体和VacA抗体在各疾病之间差异无显著性 (P >0 .0 5 )。在胃溃疡、十二指肠溃疡和复合性溃疡三类病人中 ,具CagA和VacA双阳性的比例较CagA和VacA双阴性的比例差异有显著性 (P <0 .0 5 )。胃窦萎缩病变在CagA和VacA双阳性的病人中比CagA和VacA双阴性的病人严重 (P <0 .0 5 )。 结论 具有高毒力因子 (CagA和VacA)的Hp是胃肠疾病病人感染的常见菌株 ,具有CagA和VacA的Hp可能在诱导胃粘膜发展到萎缩病变过程中起重要作用。

幽门螺杆菌感染、p53基因突变与胃癌的相关性研究

目的 研究幽门螺杆菌及其毒力因子、p53基因突变与胃癌之间的关系。方法 应用酶联免疫吸附测定 (EL ISA)、免疫印迹法、聚合酶链反应 -单链构象多态性分析 (PCR-SSCP)法 ,分析 3 0例胃癌及 3 0例胃炎患者的血清抗幽门螺杆菌 Ig G抗体 (Hp-Ig G)、幽门螺杆菌 (Hp)的细胞毒素相关蛋白 (Cag A)和空泡细胞毒素 (Vac A)及胃癌病人胃黏膜 p53基因第 5～ 8外显子的突变情况。结果 p53基因突变在胃癌中的比例较高 ,胃癌组中 Hp-Ig G阳性率尤其是 Cag A阳性的 Hp均显著高于胃炎组。结论 Hp(尤以 Cag A阳性者 )感染增加了胃癌的发病风险 ,Hp可能导致 p53基因突变 ,是胃癌发生的重要原因。

LDLR缺失促进CD11b^+ Ly6C^+单核细胞的分化和CD11c^+树突状细胞的成熟

目的研究低密度脂蛋白受体敲除(LDLR^(-/-))对小鼠CD11b^+髓系免疫细胞增殖和分化的影响,探索异常免疫细胞反应在动脉粥样硬化发生中的炎症相关新机制。方法 6~8周龄的LDLR^(-/-)小鼠和对照野生型(WT)C57小鼠分别给予普通饮食和高脂饲养12周。采用流式细胞术分析外周血、脾脏和骨髓中免疫细胞亚群,尤其是CD11b^+Gr-1^+髓系免疫细胞、CD11b^+Ly6C+单核巨噬细胞和CD11b^+CD11c^+树突状细胞表达情况,同时检测Lin^-Sca-1^-CD34^+c Kit^+共同髓系祖细胞(CMP)在LDLR^(-/-)小鼠骨髓内表达情况。最后应用^(125)I标记anti-CD11b作为分子探针,在体无创监测LDLR^(-/-)小鼠主动脉粥样硬化斑块的炎症微环境。结果 (1)在普通饮食和高脂饲养状态下,LDLR缺失均可显著增加LDLR^(-/-)小鼠外周血和脾脏内CD11b^+和CD11b^+Gr-1^+髓系细胞的表达。(2)LDLR^(-/-)小鼠外周血和肝脏中CD11b^+Ly6C^+单核巨噬细胞的表达增加;CD11b^+CD11c^+树突状细胞在LDLR^(-/-)小鼠脾脏中的表达增加。(3)普通饮食状态下,CMP的百分比在LDLR^(-/-)小鼠骨髓中较WT小鼠增加,但在高脂饲养时减少。(4)以CD11b为炎症分子靶标,可用SPECT/CT实时监测LDLR^(-/-)小鼠动脉粥样斑块。结论 LDLR缺失显著增加CD11b^+Gr-1^+髓系免疫细胞的增殖和动员,促进LDLR^(-/-)小鼠单核巨噬细胞的分化和树突状细胞的成熟。以CD11b^+髓系细胞为靶标,可以在体监测动脉粥样斑块的炎症微环境。

一氧化氮、一氧化氮合成酶、超氧化物歧化酶与脑出血相互关系的探讨

目的 监测脑出血患者不同时间段的血清一氧化氮(NO)、一氧化氮合成酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)的水平,探讨NO、NOS与SOD在脑出血的病理生理过程.方法 选取60例脑出血住院患者,采用化学比色法测定患者入院1～3 d、4～7 d、14 d的血清NO、NOS和SOD浓度.结果 脑出血患者发病初期NO、NOS水平明显升高(P＜0.01),4～7 d开始下降,并呈进行性下降趋势.SOD水平4～7 d明显升高(P＜0.01),并且持续至2周.NO、NOS和SOD持续高水平的患者预后较差.结论 脑出血患者体内NO、NOS和SOD含量发生了明显的变化,其变化趋势和变化程度与患者病情和预后有直接相关性,证实NO、NOS和SOD参与了脑出血的病理生理过程,提示通过测定血清中NO、NOS和SOD含量可以判断脑出血患者的病情和预后.

临床检验形态学教学的微课堂设计与应用评价

细胞形态结果是很多疾病诊断的金标准,然而形态学的教学尤其是实习生教学一直是教学中最薄弱的环节。以视频为主要载体,记录教师在课堂内外教学过程的“微课”,不仅占用很有限的教学资源,还充分利用优质师资并能发挥移动教学独特的优势,开展具有针对性的教学。本研究通过分组研究比较检验专业的学生在网络环境下的移动教学与传统教学两种不同模式的学习效果,科学评价微课堂实际成效,从而探讨其在临床实习生带教中的应用价值。

胃癌P53基因突变与微卫星DNA不稳定性关系的研究

目的：探讨胃癌P53基因突变与微卫星DNA不稳定性的变化及其相互关系。方法：应用银染PCR-聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染技术检测28例内镜活检组织标本，检测P53基因第5～8外显子基因突变及第2、17号染色体的2个位点的MSI的情况。结果：MSI总检出率为32．1％(9／28)，中．高分化腺癌MSI阳性率为60％，显著高于低分化腺癌16．7％(P<0．05)。Ⅰ—Ⅱ期MSI阳性检出率(60％)显著高于Ⅲ-Ⅳ期(16．7%)(P<0．05)。P53基因总突变率为60．7％，P53基因在淋巴结转移组中的突变率(84．6％)明显高于无转移组的突变率(40%)(P<0．05)。P53基因突变组中，MSI检出率(35．3％)较无突变组(27．3％)有增高趋势，但两者无显著性差异(P>0．05)。结论：P53基因突变与MSI可能分别代表了胃癌病变过程中的不同分子病理学机理，MSI可能是胃癌发生过程中的早期标志，而P53突变在胃癌的发生中较普遍，并且与胃癌发生转移有关。两者不同程度地反映胃癌的细胞生物学恶性行为，这对临床分析胃癌的预后可能有参考意义。

蛋白芯片检测系统在幽门螺旋杆菌诊断中的应用

目的 考察幽门螺旋杆菌蛋白芯片检测系统及试剂的临床应用前景。方法 应用幽门螺旋杆菌蛋白芯片检测系统检测体检人群和经内窥镜检查和病理镜检确诊的阳性血清标本和阴性血清标本 ,同时用蛋白印迹法、ELISA作对照。结果 体检人群中 ,蛋白芯片法检测与蛋白印迹法检测结果比较其符合率可达 85 % ,其灵敏度和特异性分别为 89%和 78%。在经内窥镜检查和病理镜检确诊的阳性血清标本中 ,用蛋白芯片法检测阳性检出率为 67% ,明显高于蛋白印迹法检出的阳性率 ( 62 % ) ,而其符合率可高达89% ,其灵敏度和特异性分别为 91 .1 %和 75 .6%。蛋白芯片法与蛋白印迹法的阳性检出率无明显差异且高于 ELISA检测法 ,具有比蛋白印迹法检测更高的灵敏度。结论 蛋白芯片检测系统检测幽门螺旋杆菌具有操作简便快捷、灵敏度高和成本低廉的优势 ,是一种值得推广的新型检测技术。

老年男性冠心病患者血液中一氧化氮、一氧化氮合酶及超氧化歧酶水平临床分析

目的观察老年男性冠心病患者血液中一氧化氮(NO),一氧化氮合酶(NOS),超氧化歧酶(SOD)水平及冠心病心衰的关系,探讨NO,NOS及SOD在老年人与冠心病心衰时血液中含量变化。方法对171例老年男性人群检测血清中NO,NOS及SOD含量,冠心病组67例,对照组104例。结果男性血液中NO,NOS,SOD含量与年龄无显著性差异(P>0·05),冠心病组与对照组血清中NO,NOS含量有显著性差异(P<0·05),SOD含量与对照组无明显差异(P>0·05)。而在冠心病组中,心功能三级患者血清中NO,NOS含量显著高于二级患者(P<0·05),但是SOD含量却显著低于二级患者(P<0·05)。结论1.男性人群血液中NO,NOS及SOD含量与年龄无明显差异(P<0·05),2.老年男性冠心病患者血清NO、NOS的含量与对照组有显著性差异(P<0·05),SOD含量与对照组无明显差异(P>0·05)。3.冠心病患者NO、NOS及SOD水平与心功能不全程度呈特异性变化。

临床实验室自动化系统的运行评估

目的通过临床实验室自动化系统运行核心数据的分析评估，探讨实验室自动化系统的优势与持续优化。方法收集2017年1月至4月上海交通大学医学院附属同仁医院检验科生化组和免疫组的运行数据。（1）采集自动化系统运行前后，仪器启动、标本检测的初始时间进行分析比较。（2）标本签收、检测、报告审核时间运行数据分析。（3）选取自动化系统运行前2个月、运行以来2个月标本的周转时间（TAT）数据，分析标本TAT的运行情况；针对流水线中传染病项目的短板，采取优先吸样后，流水线TAT的改善情况分析。（4）通过自动化系统血清用量的评估，探讨减少抽血管子数的可行性分析；实验室自动化系统的优劣势分析以及持续改进的措施。结果（1）仪器启动提前，标本检测初始时间前移0.5 h。（2）轨道物流的投入运行，标本集中发送到实验室，签收时间集中在早晨7∶25，标本签收时间较以往效率大幅提高，随之标本的检测、报告审核时间也相应前移，平均前移2～2.5 h。（3）实验室自动化系统运行2个月以来数据显示样本TAT缩短，生化项目平均缩短2 h，免疫项目平均缩短4 h，且TAT呈现逐步缩短的趋势；传染病项目优先吸样后，流水线的TAT呈现明显改观，TAT平均减少了40 min。（4）线上生化65个项目的血清用量总计为500 μl（包括死腔量），免疫28个项目的血清用量总计为1 495 μl，线上项目血清用量总计为2 000 μl，患者较之前平均减少3管。另外，仍然需要线下设备进行项目补充；传染病项目由于方法学的差异导致前后数据的一个衔接期；流水线线上生化模块和免疫模块并联设备的成倍增加，模块之间的比对和质量控制提出了更高的要求，规范的质量体系建设有助于该类问题的防范。结论通过流水线系统运行的数据分析，评估其运行的情况，使得许多指标实现量化，并提供优化可能，同时结合线下设备检测的项目补充，实验室效率明显提高，尤其是在数据积累增加下，自动审核功能的实现将使得临床实验室自动化系统优势更加显著。

疫情背景下《实验诊断学》全网课的实践总结和体会

实验诊断学是当今发展最为迅速的医学应用学科之一,随着内容的不断丰富及其作用在诊断中的增强,越来越成为各类医学专业学生的必修课程。因为该学科兼具理论知识点众多和应用技术方法学繁多的显著特性,传统教学模式已经开始受到挑战。尤其这次疫情背景下要求采取全网课模式,更增添了课程的教学难度。为此,本文就此次课前的精心备课、互评;课中的师生联网互动;课后的作业点评以及见习期视频的录制等关键节点所采取措施进行了回顾和总结,希望全网课模式不仅可以实现"停课不停教"的目的,而且可以实现教学计划和教学效果的双保证,为拓展实验诊断学网课教学提供经验。