基于Wnt/β-Catenin通路探讨胡萝卜苷对多发性骨髓瘤的抑制作用及机制

目的 探讨胡萝卜苷通过调控Wnt/β-Catenin信号通路对多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226和H929的抗肿瘤活性。方法 采用不同浓度的胡萝卜苷处理2种细胞株,CCK-8法检测细胞增殖活力;Annexin V-PE/7-AAD双染流式细胞术检测细胞凋亡水平;Western blotting分析不同浓度的胡萝卜苷处理细胞后β-catenin, p-β-catenin、Wnt5a和Cleaved-Caspase3蛋白水平的变化。结果 与0μg/mL组相比,50~200μg/mL胡萝卜苷作用RPMI 8226细胞和H929细胞48 h后,细胞增殖活性伴随浓度升高而逐渐降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与0μg/mL组相比,不同浓度的胡萝卜苷作用RPMI8226细胞48 h后,50~200μg/mL组的Annexin V阳性细胞比例呈浓度依赖性升高,差异有统计学意义(P<0.05);100~200μg/mL组的7-ADD阳性细胞比例亦呈浓度依赖性升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与0μg/mL组相比,不同浓度的胡萝卜苷作用H929细胞48 h后,100~200μg/mL组Annexin V阳性细胞比例伴随药物浓度升高而逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05);50~200μg/mL组7-ADD阳性细胞比例伴随药物浓度升高亦逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05)。胡萝卜苷处理RPMI 8226细胞株48 h后,与对照组0μg/mL相比较,25~200μg/mL组的p-β-catenin/β-catenin、Wnt5a蛋白表达水平呈下降趋势,150~200μg/mL组的Cleaved-Caspase3蛋白表达水平呈上升趋势,各组差异均有统计学意义(P<0.05)。胡萝卜苷处理H929细胞株48 h后,与对照组0μg/mL相比较,25~200μg/mL组的p-β-catenin/β-catenin蛋白表达水平表现出下降趋势,50~200μg/m L组的Wnt5a蛋白表达水平亦表现出下降趋势,150~200μg/mL组的Cleaved-Caspase3蛋白表达水平表现出上升趋势,各组差异有统计学意义(P<0.05)。结论 胡萝卜苷能抑制人多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226和H929的增殖活性,促进凋亡,其机制可能与Wnt/β-Catenin信号通路的激活有关。

骨髓涂片与骨髓活检的临床应用价值评价

目的进一步提高血液病临床诊断水平。方法回顾性分析262例同时行骨髓涂片和活检切片检查患者的临床资料。按临床拟诊分为三组,1组为临床拟诊再生障碍性贫血(AA)、慢性骨髓增殖性疾病(CMPD)的152例患者,2组为临床拟诊多发性骨髓瘤(MM)、淋巴瘤、骨髓转移癌的23例患者,3组为临床拟诊骨髓增生异常综合征(MDS)、巨幼细胞性贫血(MA)及其他的87例患者。分别计算骨髓涂片与骨髓活检诊断的灵敏度、特异度、漏诊率、误诊率、符合率、阳性预测值、阴性预测值。结果整体病例骨髓活检较骨髓涂片有较高的诊断符合率;1组和2组活检的灵敏度和特异度均高于涂片;3组活检的灵敏度略低于涂片,但特异度明显高于涂片。结论涂片和活检与最终诊断符合率大致相同,涂片具有形态学观察优势,但对结构和定位的观察欠缺;活检能准确观察到造血细胞的结构与定位,但部分细胞的形态较难把握。骨髓涂片检查与骨髓活检联合应用可提高诊断的符合率,减少误诊。

c-myc基因在慢性粒细胞白血病患者中表达的意义

目的探讨c-Myc基因与慢性粒细胞白血病之间的关系。方法应用逆转录聚合酶链式扩增反应(RT-PCR)技术检测30例CML(其中慢性期11例,加速期8例,急变期11例)和10例对照(正常骨髓6例和非恶性血液病4例)骨髓单个核细胞中c-myc基因的表达,分析c-myc基因与CML患者不同临床阶段之间的关系。结果 c-myc基因在CML不同临床分期的表达水平均有所升高,CML慢性期患者和对照组之间的差异无统计学意义(P>0.05),CML加速期和急变期患者c-myc基因表达水平均明显高于慢性期和对照组(P<0.05),CML急变期患者较加速期患者c-myc基因表达水平更高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 c-Myc基因在CML加速期和急变期的表达明显升高,提示c-myc基因高表达可能是CML病情进展与急变的机制之一。c-myc基因表达水平在CML患者病程监测中具有重要意义,甚至可能作为c-myc基因抑制剂应用于CML的依据。

cMyc抑制剂10058-F4诱导白血病THP1细胞凋亡和DNA损伤的机制

目的研究cMyc抑制剂10058-F4对白血病THP1细胞的抑制作用及分子机制。方法体外培养人白血病THP1细胞,加入不同浓度(1、5、10、50、100μmol/L)的cMyc抑制剂10058-F4处理THP1细胞,CCK-8分析药物对细胞生长抑制作用;Calcein/PI和JC-1荧光染色分别检测细胞凋亡和线粒体膜电位的变化;流式细胞仪检测细胞周期;Western blot分析凋亡相关蛋白(Cleaved-Caspase-3、Bax)和DNA损伤应答相关蛋白(pATM和γH2AX)表达。结果不同浓度10058-F4处理THP1细胞后明显抑制细胞的增殖,并呈浓度依赖和时间依赖性;10058-F4呈浓度依赖地诱导THP1细胞凋亡,并且降低线粒体膜电位水平,差异具有统计学意义(P<0.05);10058-F4可诱导THP1细胞发生G2/M期阻滞,上调促凋亡蛋白(Cleaved-Caspase-3和Bax)以及DNA损伤应答相关蛋白(pATM和γH2AX)的表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论cMyc抑制剂10058-F4对白血病THP1细胞具有凋亡诱导作用,可能与其诱导细胞DNA损伤并激活相关信号途径有关。

NF-κB在初治急性髓系白血病中的表达与意义

目的应用RT-PCR技术检测NF-κB在初治急性髓系白血病诱导治疗前后表达的情况,研究NF-κB与急性髓性白血病之间的关系,并探讨NF-κB抑制剂用于急性髓系白血病的理论依据。方法应用逆转录聚合酶链式扩增反应(RT-PCR)技术检测初治急性髓系白血病患者诱导治疗前后与对照组骨髓单个核细胞中NF-κB的表达,分析NF-κB与急性髓系白血病之间的关系。结果⑴初治急性髓性白血病患者治疗前的NF-κB表达高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。⑵经诱导治疗后达完全缓解的急性髓系白血病患者,其NF-κB的表达明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。⑶经诱导治疗后未达完全缓解的急性髓系白血病患者,其NF-κB的表达高于对照组与治疗后完全缓解者,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论初治急性髓性白血病NF-κB基因明显升高,提示NF-κB的高表达可能是急性髓系白血病重要的致病因素,而经诱导治疗后未达完全缓解的患者与完全缓解患者之间NF-κB基因表达差异显著,提示NF-κB可能是影响急性髓系白血病诱导治疗效果的重要因素之一。

地塞米松联合大蒜素抑制NCI-H929多发性骨髓瘤侧群细胞增殖的机制研究

目的探讨地塞米松联合大蒜素对NCI-H929多发性骨髓瘤侧群(Side Population,SP)细胞增殖的影响及其作用机制。方法培养NCI-H929细胞,经Hoechst33342染色后分离侧群细胞,将侧群细胞分为正常培养组、地塞米松(20 ng/mL)组、地塞米松(20 ng/mL)+PBS组、地塞米松(20 ng/mL)+大蒜素(10μg/mL)组。CCK8和Western blot实验分别检测地塞米松联合大蒜对侧群细胞增殖以及细胞中Cyclin D1、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和β-catenin蛋白表达的影响。结果各组SP细胞在培养48 h后,与正常培养组相比,地塞米松组、地塞米松+PBS组和地塞米松+大蒜素组细胞的增殖能力均降低,且地塞米松+大蒜素组降低最显著。与正常培养组相比,地塞米松组、地塞米松+PBS组和地塞米松+大蒜素组细胞中Cyclin D1和β-catenin蛋白表达水平均下调,且地塞米松+大蒜素组下调最显著。与正常培养组相比,地塞米松组、地塞米松+PBS组和地塞米松+大蒜素组细胞中Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白表达水平均增加,且地塞米松+大蒜素组增加最显著。结论地塞米松联合大蒜素显著抑制NCI-H929多发性骨髓瘤侧群细胞增殖,可能与通过抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

DJ-1基因在急性髓系白血病中的表达及其临床意义

目的探讨DJ-1基因在非急性早幼粒细胞白血病(APL)的急性髓系白血病(AML)患者骨髓单个核细胞中的表达、临床特征和其对预后的影响。方法收集135例患者骨髓标本,采用实时荧光定量PCR检测DJ-1表达水平,分析其与临床特征及预后的相关性。结果在mRNA水平上,初治组与复发难治组的DJ-1表达水平明显高于正常对照组及缓解组(P<0.01);初治组与复发难治组的DJ-1表达水平无明显差异(P>0.05);缓解组DJ-1表达水平与对照组差异不明显(P>0.05);初治组中DJ-1的水平与白细胞计数高低有关(P<0.01),而与患者的年龄、性别、贫血程度、血小板计数高低、幼稚细胞高低、FAB分型、WHO分型无统计学差异(P>0.05)。结论DJ-1基因在初治及复发难治非APL的AML患者中存在高表达,缓解组表达下降,且初诊患者中DJ-1的表达与患者白细胞高低有相关性。

6-姜辣素对人多发性骨髓瘤细胞的抑制作用及分子机制

目的研究6-姜辣素对人多发性骨髓瘤细胞的抑制作用及分子机制。方法体外培养人多发性骨髓瘤RPMI 8226、ARH77细胞,加入不同浓度(50、100、200、300、400μmol/L)的6-姜辣素处理RPMI 8226、ARH77细胞,CCK-8法测定细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡和周期;qRT-PCR和Western blotting法检测基因和蛋白表达水平。结果6-姜辣素以剂量和时间依赖的方式抑制RPMI8226、ARH77细胞的增殖,并诱导其凋亡,差异有统计学意义(P<0.05);进一步机制研究发现6-姜辣素处理RPMI 8226细胞后,将细胞阻滞在G_(0)/G_(1)期,显著增加Bax mRNA水平,降低Bcl-2 mRNA和c-Myc mRNA的水平(P<0.05);同时显著增加Bax、Cleaved-PARP、Cleaved-caspase3、P53、p-AKT蛋白的表达,而降低Bcl-2蛋白的表达(P<0.05)。结论6-姜辣素可抑制MM细胞增殖及诱导其凋亡,并阻滞细胞周期在G_(0)/G_(1)期,其机制可能与抑制AKT信号通路并通过影响Bcl-2家族蛋白表达以及c-Myc表达受抑等密切有关。