新城疫病毒致Hep-2肿瘤细胞死亡方式的研究

目的研究新城疫病毒弱毒株致Hep-2肿瘤细胞死亡方式及其作用机制。方法应用AO/EB染色、电子显微镜观察、DCFA染色测定细胞内活性氧水平及罗丹明123染色法测定细胞线粒体膜电位等方法分析新城疫病毒弱毒株致Hep-2肿瘤细胞的死亡方式及途径。结果新城疫病毒弱毒株感染能够导致Hep-2肿瘤细胞浓缩,被AO/EB浓染,细胞核缩小,染色质边集。FACS细胞周期分析显示,感染后的Hep-2肿瘤细胞72 h出现二倍体亚峰,G1期细胞凋亡率为8.59%,电子显微镜观察显示,肿瘤细胞核染色质边集、浓缩,细胞核呈固缩状,呈现典型的凋亡形态。另外,细胞内活性氧水平上升,线粒体膜电位下降。结论新城疫病毒弱毒株主要通过细胞内线粒体途径诱导肿瘤细胞凋亡,从而发挥其抑瘤作用。

半完壁式乳突病变切除鼓室成形术在中耳后天原发性胆脂瘤治疗中的应用

目的:研究半完壁式乳突病变切除鼓室成形术治疗中耳后天原发性胆脂瘤的疗效。方法:行半完壁式乳突病变切除鼓室成形术治疗中耳后天原发性胆脂瘤21例,同期行开放式乳突切开鼓室成形术治疗中耳后天原发性胆脂瘤28例,两组进行对照研究。结果:平均干耳时间:半完壁式(18.0±1.7)d,开放式为(21.0±3.0)d,差异有统计学意义。随访6～18个月,半完壁式术后外耳道形态和功能正常,外耳道无结痂及分泌物,无胆脂瘤复发。半完壁式和开放式术后气骨导差分别为(21.7±5.6)dBHL和(27.0±7.0)dBHL,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论:半完壁式乳突病变切除鼓室成形术治疗中耳后天原发性胆脂瘤,术后干耳快,有利于去除病灶,听力改善满意,值得推广。

经鼻内窥镜下鼻甲外移术联合Nd:YAG激光插入法治疗慢性鼻炎

目的 :探讨对保守治疗无效的慢性鼻炎的一种微创手术治疗方法 :经鼻内窥镜下鼻甲外移术联合Nd :YAG激光插入法。方法 :采用经鼻内窥镜下鼻甲外移术联合Nd :YAG激光插入法治疗对保守治疗无效的慢性鼻炎 84例。治疗前后采用糖精试验评定鼻粘膜纤毛功能。结果 :经 1至 3年随访 ,总有效率达 10 0 %。无并发症发生。治疗前后粘液纤毛传输速率差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :该术式视野清晰 ,操作简单 ,术后反应轻 ,病人痛苦小 ,门诊即可完成 ,疗效极佳 ,是一种对鼻粘膜纤毛功能无损伤的治疗慢性鼻炎的微创手术方法 ,值得推广应用。

抗人喉癌单克隆抗体的制备及其特性研究

采用Ｂ淋巴细胞杂交瘤技术制备抗人喉鳞状细胞癌单克隆抗体（ＭｃＡｂ），经筛选得到４株分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株，全部收集到腹水型ＭｃＡｂ，并检测其特异性及生物学特性。结果该ＭｃＡｂ能与标准喉癌细胞株抗原特异性结合，抗体滴度≥１：１２８０倍，且能特异性地检测喉癌患者癌组织中的喉癌抗原；此ＭｃＡｂ纯度高，分子量在１００～２００ｋＤ之间。单克隆杂交瘤细胞染色体均为多倍体。

新城疫病毒对Hep-2肿瘤细胞的抑制效应

目的探讨新城疫病毒(newcastlediseasevirus,NDV)对Hep-2肿瘤细胞的杀伤效应及其免疫刺激作用。方法采用考马斯亮兰染色法观察NDV感染对Hep-2肿瘤细胞细胞骨架的影响。运用甲基噻唑基四唑(methylthiazolyltetrazolium,MTT)染色法检测NDV感染致Hep-2肿瘤细胞死亡的杀伤率。通过免疫荧光结合流式细胞仪(flowcytometer,FCM)检测Hep-2肿瘤细胞表面主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(majorhistocompabilitycomplexclassImolecules,MHC-I)的表达情况。另外,分离人外周血淋巴细胞(peripheralbloodmononuclearcells,PBMC)作为效应细胞,以NDV感染的Hep-2肿瘤细胞作为靶细胞,同时设空白细胞对照,通过特异性细胞毒T淋巴细胞实验,探讨NDV所介导的抑瘤作用。结果NDV可致Hep-2肿瘤细胞的细胞骨架发生改变,对体外培养Hep-2肿瘤细胞的杀伤率达77.7%,可上调其表面MHC-I类分子的表达,并且能够刺激增强人外周血淋巴细胞中肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocyte,CTL)活性,杀伤率为23.54%。结论NDV可有效杀伤Hep-2肿瘤细胞,并刺激产生特异性抗肿瘤免疫反应。

喉癌及癌旁组织中脂质过氧化物及超氧化物歧化酶的研究

本文应用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法对３２例喉癌及癌旁组织，１２例正常喉组织中自由基清除酶———超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性和自由基代谢产物过氧化脂质（ＬＰＯ）含量测定。检测结果表明，喉癌组织中ＳＯＤ活性及ＬＰＯ含量均高于癌旁组织及正常对照组，统计学处理Ｐ＜０．０１，差异非常显著，故认为喉癌的发生与自由基的关系较为密切。

会厌下移一期重建声门治疗声门癌

本文报道用会厌下移一期重建声门术（Ｔｕｃｋｅｒ术）治疗双声带受侵犯的声门癌３１例，结果证明此手术不仅能彻底切除肿瘤，而且能有效的保存喉的发声、呼吸和吞咽保护功能，３年生存率８１．５％（２２／２７），降低了致残率及复发率，改善了患者的生存质量，故认为该术式是治疗双声带受侵的声门癌的一种较理想术式，值得推广使用。

间接喉镜下Nd:YAG激光治疗会厌囊肿疗效观察

目的:观察间接喉镜下利用Nd:YAG激光治疗会厌囊肿的疗效。方法:在间接喉镜下采用自制的弯形激光切割器切除会厌囊168例。结果:经1年随访,无一例复发,总有效率达100%。结论:该手术操作简单,术中出血少,术后不易复发,病人痛苦小,是治疗会厌囊肿的一种较为理想的手术方法,值得推广使用。

新城疫病毒对肿瘤细胞的杀伤及其作用机制研究

目的探讨新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)对肿瘤细胞的抑制机制及其体内抑瘤作用。方法采用基因组电泳法观察NDV感染对Hep-2肿瘤细胞基因组的影响。运用SDS-PAGE、Western blot等方法检测NDV感染对Hep-2肿瘤细胞内p53及Bcl-2蛋白表达量的影响。通过间接免疫荧光法检测NDV感染后其新城疫病毒HN基因在Hep-2肿瘤细胞表面的表达情况。另外,构建C57/BL小鼠荷H22模型,瘤内注射NDV,观察其对实体肿瘤的抑制作用,探讨NDV在动物模型体内所介导的抑瘤作用。结果NDV可致Hep-2肿瘤细胞的基因组断裂,电泳呈梯状条带。NDV感染能够上调p53的表达,且不影响Bcl-2蛋白的含量。间接免疫荧光实验显示,NDV感染Hep-2肿瘤细胞后可在其表面表达大量新城疫病毒HN蛋白。动物实验结果说明,NDV可抑制实体肿瘤生长。结论NDV可诱导Hep-2肿瘤细胞凋亡,且不受Bcl-2的影响;能够有效抑制体内实体肿瘤的生长。

抗人喉癌单克隆抗体轻链可变区基因的克隆

目的分离抗人喉癌单克隆抗体LC9-G5轻链可变区(light chain variable region,VL)基因,并测定分析其核苷酸序列。方法使用PCR方法体外扩增抗人喉癌单克隆抗体LC9-G5 VL基因,将其克隆入PMD18-T载体,重组子测序,将其序列使用数据库NCBI和Kabat进行分析。结果这段序列与小鼠卵巢癌抗体VL基因的同源性为99%,基因全长336 bp,属于小鼠免疫球蛋白轻链第Ⅱ亚类,该VL基因序列已被Gene Bank收录,收录号为U60463。结论该基因为抗人喉癌单克隆抗体LC9-G5轻链可变区基因。

喉癌组织及血清中六种酶的定量分析

本文应用 Abbott ABA-100 型生化自动分析仪对手术切除之喉癌组织及喉癌患者血清进行了六种酶的定量分析,结果表明,组织中 GPT、LDH、ALP 三种酶活性明显高于对照组(正常喉组织),经统计学处理差异非常显著,而血清中只有 LDH 活力升高,P<0.05,其他几种酶活力与对照组(献血员血清)相比无显著性差异.提示手术过程中的安全缘组织的各种酶活力测定,将成为判断预后和手术效果观察的客观指标.

联合应用凋亡素基因、新城疫病毒HN基因及IL-18基因对黑色素瘤的抑制效应研究

以前的研究结果表明，来自于鸡贫血病毒的凋亡素基因、来自于鸡新城疫病毒的HN基因和IL-18基因具有不同的抗肿瘤效应，但上述基因抗肿瘤的机制不同，本研究在双启动子真核表达质粒pIRES中的CMV启动子下游插入凋亡素基因，IRES启动子下游插入IL-18HN嵌合基因，构建能同时表达三种基因的真核表达质粒pIRVP3IL-18HN。复制C57BL／6小鼠荷黑色素瘤模型，并将质脂体包裹的重组质粒进行瘤内注射，共注射3次，每次100μg质粒，拟观察凋亡素、新城疫病毒HN基因和IL-18基因以核酸疫苗的形式联合应用对小鼠黑色素瘤的抑制效应。结果显示pVIL-18HN、pVlL-18和pVVP3IL-18均有抑制肿瘤作用，但pIRVP3IL-18HN组抑瘤率高于pVIL-18HN组、pVIL-18VP3组、pVIL-18组和Hanks液对照组。研究结果提示，上述3种基因联合应用具有协同抑瘤效应。

新城疫病毒HN基因诱导人肺癌细胞SPC-A1凋亡的作用机制

为了探索新城疫病毒血凝素神经氨酸酶(HN)基因对人肺癌细胞SPC-A1的作用及机制,将含有HN基因的重组质粒pVHN经脂质体介导转染人肺癌细胞SPC-A1,通过MTT方法检测细胞活力;采用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色分析肿瘤细胞凋亡;罗丹明123和DCFA染色测定线粒体跨膜电位(ΔΨm)和活性氧水平变化;流式细胞仪分析MHC-Ⅰ分子表达;底物染色反应检测caspase-3活性.结果重组质粒pVHN转染人肺癌细胞SPC-A148h后,细胞活力明显降低;AO/EB染色可见明显的细胞凋亡形态学变化;与空质粒对照相比,线粒体ΔΨm下降(P<0·01),活性氧水平升高(P<0·05);细胞表面MHC-Ⅰ分子表达上调(P>0·05);caspase-3活性增强(P<0·01).以上结果提示,新城疫病毒HN基因能够上调SPC-A1细胞表面MHC-Ⅰ分子表达,并通过上调ROS水平,下调线粒体ΔΨm,进而激活caspase-3,最终诱导人肺癌细胞凋亡.

局部糖皮质激素联合氦氖激光对急性化脓性中耳炎的疗效观察

目的:观察局部糖皮质激素联合氦氖激光治疗急性化脓性中耳炎的临床疗效。方法:将临床确诊的81例(81耳)急性化脓性中耳炎患者随机分成实验组和对照组。其中,实验组(40例)在给予左氧氟沙星滴耳液5ml+与布地奈德混悬液2ml混合均匀后滴耳的同时配合氦氖激光局部照射及全身抗生素治疗;对照组(41例)则仅给予左氧氟沙星滴耳液滴耳并联合氦氖激光局部照射及全身抗生素(同实验组)治疗。10日为一疗程,观察两组疗效。结果:1、实验组总有效率为95%,对照组总有效率为82.8%,两组间有统计学意义。2、两组治愈时间分别是7.6±1.5天和10.6±1.6天,经统计学分析,两组间有统计学意义(P<0.05)。结论:局部糖皮质激素联合氦氖激光治疗急性化脓性中耳炎较常规治疗方法有更好的疗效,且可明显缩短病程。该治疗方法简单可行,疗效高,值得推广和应用。

鸡贫血病毒VP3基因与人IL-18基因的共表达对人肝癌细胞BEL-7402的作用

目的利用凋亡素和IL18基因的抗肿瘤优势,设计构建共表达凋亡素和hIL-18基因的真核重组子,检测其在体外对人肝癌细胞BEL7402的作用效果,旨在探索新的肿瘤基因治疗方法。方法将凋亡素VP3基因与hIL-18基因一同克隆到真核表达载体pVAX1上,构建重组质粒pVVP3IL-18,经脂质体介导,转染人肝癌细胞BEL7402,AO/EB染色,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法和流式细胞仪分别分析凋亡细胞的形态学变化、DNA断裂情况和不同细胞周期的DNA含量变化,透射电镜分析凋亡细胞超微结构变化。结果随着转染时间的延长,重组质粒pVVP3IL18所表达的目的蛋白对BEL7402细胞的杀伤作用逐渐增强,作用48h,形态学观察表明BEL7402细胞发生明显的凋亡,凋亡率可达(56.5±11.9)%,并且大部分细胞为TUNEL阳性着色,流式细胞术分析可见明显的亚二倍体凋亡峰,透射电镜观察可见细胞核固缩、染色质聚集等典型的凋亡超微结构变化。结论联合应用凋亡素与hIL18基因,在体外对人肝癌细胞BEL7402具有明显的凋亡诱导作用。

红光理疗对感染期耳前瘘管摘除术后切口愈合的疗效观察

目的:观察红光理疗对感染期耳前瘘管术后切口愈合的疗效。方法:对44例感染期耳前瘘管摘除术后患者(44耳),将其随机分成两组,一组为红光理疗组,另一组为对照组。红光理疗组(实验组)在常规治疗的基础上,每日1次行切口处红光理疗,每次15分钟;对照组则不给予红光理疗。观察两组切口愈合时间。结果:红光理疗组患者切口平均愈合时间为8.68±0.63天,常规治疗组(对照组)切口平均愈合时间为12±0.74天。两组经统计学t检验,P<0.05,差异有统计学意义,结论:红光理疗可以明显促进感染期耳前瘘管术后切口愈合。

表达新城疫病毒HN基因重组鸡痘病毒的构建及其抑瘤作用

目的：构建表达新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)HN基因的重组鸡痘病毒vFVHN,探讨vFVHN对体外培养人肝癌细胞SMMC7721的抑制作用和对小鼠荷肝癌模型的体内抑瘤效果。方法：以野生型鸡痘病毒(fowl poxvirus,FPV)282 E4株为载体,构建表达新城疫病毒HN基因的重组鸡痘病毒vFVHN。采用5-溴-2-脱氧尿苷(5-bromo-2-deoxyribouri- dine,BrdU)加压法筛选重组体,并通过RT-PCR和Western blot等方法对其进行鉴定。采用噻唑蓝(methylthiazoletetrazolium,MTT)染色法检测vFVHN对人肝癌细胞SMMC7721的杀伤率,并通过检测抑瘤率观察其在C57BL/6小鼠荷肝癌模型的抑瘤效果。结果：成功构建重组鸡痘病毒vFVHN,其对SMMC7721细胞的杀伤率为43．37%,对C57BL/6小鼠肝癌模型的抑瘤率为20．65%。结论：重组鸡痘病毒vFVHN可有效杀伤体外培养的人肝癌细胞SMMC7721,并对C57BL/6小鼠荷肝癌模型体内的实体肿瘤有一定抑制作用。

利咽灵对慢性咽炎大鼠治疗作用的实验研究

目的:研究利咽灵颗粒对慢性咽炎的治疗作用。方法:建立大鼠慢性咽炎模型,连续灌胃给药7 d。观察利咽灵颗粒对慢性咽炎大鼠咽部组织病理形态学、前列腺素(PGE_2)、白细胞介素-1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子(TNF-α)含量的影响;观察利咽灵颗粒对大鼠全血黏度、血浆黏度的影响。采用角叉菜胶致大鼠足肿胀和琼脂肉芽增生方法,观察其抗炎作用。结果:与模型组比较,利咽灵颗粒可明显降低大鼠咽部组织中的PGE_2、IL-1β与TNF-α水平(P<0.05或P<0.01);可明显降低血液黏度和血浆黏度(P<0.05或P<0.01);改善模型大鼠咽部组织病理形态学(P<0.05或P<0.01)。与空白对照组比较,能抑制角叉菜胶所致大鼠足肿胀率、减轻琼脂肉芽肿质量(P<0.05或P<0.01)。结论:利咽灵颗粒对大鼠慢性咽炎有较好的治疗和修复作用。其可能通过抑制炎症组织细胞释放PGE_2、IL-1β和TNF-α,改善局部血液流变起到治疗作用。

穴位注射联合红光照射治疗突发性耳聋的疗效观察

目的:观察穴位注射联合红光照射治疗突发性耳聋的疗效。方法:将突发性耳聋患者88例(89耳)随机分成实验组和对照组,实验组44例(45耳),对照组为44例(44耳)。对照组常规应用金纳多、三磷酸腺苷及地塞米松等药物,10日为一疗程。实验组在对照组的基础上,于耳门、听宫、听会三穴行局部注射,同时联合患侧耳部红光照射,隔日1次,疗程结束后观察两组疗效。结果:实验组总有效率82.2%;对照组总有效率63.6%。经统计学分析,两组有统计学意义(P<0.05)。结论:穴位注射联合红光照射较单纯药物治疗突发性耳聋的效果更好。

慢性鼻前庭炎的激光治疗

探讨应用Nd:YAG激光治疗顽固性慢性鼻前庭炎。方法:采用Nd:YAG激光鼻前庭照射、凝固,治疗顽固性慢性鼻前庭炎,随访2-9年。结果:31例病人中,5例失访;11例反复发作者中仅有一例2年后复发,再次Nd-YAG激光治疗。治疗随访的26例病人,至今病变无再复发。结论:Nd-YAG激光治疗顽固性慢性鼻前庭炎是非常有效的方法。