日本血吸虫ATP合酶脂结合蛋白样蛋白基因结构与功能分析

目的 利用生物信息学技术对已登录的日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)中国大陆株 (chinesestrain)新基因 -ATP合酶脂结合蛋白样蛋白 (ATPsynthaselipid -bindingprotein -likeprotein)基因结构和功能进行分析。 方法 使用NCBI ,SAPS ,TMHMM 2 .0 ,PsortII ,Protscale和Scanprosite等软件对新基因的结构和功能进行分析。 结果 通过Internet在线分析和生物信息学软件分析 ,对新基因的结构和功能有了进一步的认识 ,日本血吸虫ATP合酶脂结合蛋白样蛋白基因编码 12 2个氨基酸 ,分子量为 12 .7kDa ,等电点为 9.41,为一跨膜蛋白 ,含有磷酸化位点和烷基化位点。 结论 生物信息学技术有利于日本血吸虫新基因的结构和功能研究。

衡阳地区STD患者病原体检测结果分析

目的了解衡阳地区性传播疾病(STD)患者病原体感染情况及特征。方法淋病奈瑟菌(NG)、解脲脲原体(UU)、人型支原体(MH)采用培养法;沙眼衣原体(CT)、人乳头瘤病毒(HPV)、单纯疱疹病毒(HSV)核酸采用PCR法;梅毒螺旋体(TP)采用RPR、TPPA法,对2 420例可疑STD患者进行检测分析。结果确诊STD 922例,各种病原体阳性检出率为UU(29.6%)>CT(20.8%)>HPV(17.8%)>NG(17.4%)>MH(6.3%)>HSV(4.2%)>TP(3.9%)。结论本组STD患者中UU感染率最高,CT、HPV感染率次之,TP感染率最低。

pEGFP/MOMP真核表达重组体的构建及表达

目的:克隆沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)基因,构建pEGFP/MOMP真核表达重组质粒,为沙眼衣原体核酸疫苗的研制提供依据。方法:用PCR方法从D型Ct基因组中扩增MOMP全基因片段,克隆入真核表达载体pEGFP相应的酶切位点中,阳性重组子经BamHI、KpnI双酶切、PCR扩增及测序鉴定;并经脂质体介导转染HeLa细胞,36h后观察瞬时表达情况。结果:PCR扩增得到约1.2kb的特异性MOMP基因片段;序列测定证实与GenBank登录的D型沙眼衣原体一致;筛选鉴定出真核表达重组体pEGFP/MOMP。结论:成功地构建了pEGFP/MOMP真核表达重组体,并在HeLa细胞中表达了MOMP。

非淋菌性尿道炎患者沙眼衣原体检测和支原体的药物敏感性分析

目的了解衡阳地区非淋菌性尿道炎患者沙眼衣原体（CT）、解脲脲原体（Uu）和人型支原体（Mh）感染情况压支原体药物敏感性，为临床治疗提供参考依据。方法沙眼衣原体的检测采用PCR法，支原体压药敏试验采用本室研制的支原体分离、鉴定、药敏试剂盒。结果631例非淋菌性尿道炎（NGU）患者几种病原体的感染率分别为CT20．9％．Uu38．7％，Mh5．1％，CT＋Uu5．4％，CT＋Mh1．7％，Uu＋Mh4．0％，CT＋Uu＋Mh1.4％。Uu和Mh对9种抗生素敏感性最高的是克拉霉素，其次分别是交沙霉素和司帕沙星，耐药性最高的是罗红霉素，其次是氧氟沙星。结论CT和Uu是非淋菌性尿道炎的重要病原体，建议本地区支原体感染应首选克拉霉素进行抗感染治疗。

湖南省衡阳地区STD患者病原体检测

目的 了解衡阳地区性传播疾病 (STD)患者病原体感染情况。 方法 对 2 4 2 0例可疑STD患者进行检测 :淋病奈瑟菌 (NG)、解脲脲原体 (UU)、人型支原体 (MH)采用培养法 ;沙眼衣原体 (CT)、人乳头瘤病毒 (HPV)、单纯疱疹病毒 (HSV)核酸采用聚合酶链反应 (PCR)法 ;梅毒螺旋体 (TP)采用快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR)和TP -PA法。 结果 STD病原体阳性检出率为 38.1% (92 2 / 2 4 2 0 )。在 92 2例中UU占 2 9.6 % ,CT 2 0 .8% ,HPV 17.8% ,NG 17.4 % ,MH 6 .3% ,HSV 4 .2 % ,TP 3.9%。 结论 衡阳地区STD患者中UU感染率最高 ,CT和HPV次之 。

沙眼衣原体感染与血清中抗精子抗体相互关系的研究

目的 探讨男性不育患者CT感染与血清中AsAb的关系。方法 应用聚合酶链反应(PCR)与ELISA法对177例男性不育患者分别进行CT和AsAb检测。结果 CT阳性者AsAb的阳性率(27.9％)明显高于CT阴性者的AsAb阳性率(8.3％,X2=12.2,P<0.01)。结论 沙眼衣原体感染可增加AsAb的产生,可能与男性不育有关。

慢性前列腺炎患者病原体感染状况的调查

本研究应用PCR与分离培养技术对 16 0 3例慢性前列腺炎 (ChronicProstatitis ,CP)患者的前列腺液进行了病原体的检测。结果显示 :表皮葡萄球菌、Gc、类白喉杆菌、其它细菌、Ct、Uu、Mh、Cd的检出率分别为 4 5.5%、5.1%、7.3%、8.2 %、2 6 .4 %、30 .5%、2 5.1%和 4 .5% ,混合感染率为 2 5.3%。调查结果表明 :表皮葡萄球菌是慢性细菌性前列腺炎的主要病原体 ,而Ct、Uu。

妇康乐杀菌性能的实验观察

妇康乐主要以苦参、石苇、赤芍等中药组成，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌黑色变种芽胞（繁殖体）有较强的杀菌作用。随着作用时间的延长，其杀菌效果也逐渐增强；药液浓度越高。

生殖支原体粘附素蛋白MgPa的表达及其多克隆抗体的制备与纯化

目的:制备并纯化生殖支原体(Mg)粘附素蛋白(MgPa)的多克隆抗体,为进一步探讨MgPa的生物学功能及其在Mg的临床诊断与预防方面的应用提供实验基础。方法:构建原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达生殖支原体粘附素蛋白(rMgPa′),重组蛋白经Western blot鉴定后用Ni-NAT亲和层析柱纯化,然后免疫新西兰兔以制备兔抗rMgPa′血清。用饱和硫酸铵法和溴化氰活化的琼脂糖4B亲和层析柱纯化多克隆抗体,并经Western blot鉴定免疫血清的特异性,用间接ELISA法检测免疫血清的效价。结果:在大肠杆菌中成功表达一分子量约为37kD的6×His-rMgPa′融合蛋白,免疫新西兰兔后获得了相应的多克隆抗体,利用饱和硫酸铵法和亲和层析法纯化后得到具有较高纯度的多克隆抗体,SDS-PAGE分析的结果表明所制备的多克隆抗体分子量约为150kD,Western blot结果表明制备的抗体具有较高的特异性,ELISA结果显示抗体的效价为1∶25600。结论:成功制备了高效价、高特异性的兔抗rMgPa′的多克隆抗体,为进一步研究MgPa的生物学功能、Mg的临床诊断与预防提供了重要的实验基础。

质粒蛋白pORF5在沙眼衣原体感染细胞中的定位及免疫原性研究(英文)

目的分析沙眼衣原体隐蔽性质粒编码的质粒蛋白pORF5在感染细胞中的定位并初步探讨免疫原性特征。方法 PCR扩增pORF5质粒蛋白编码基因,构建原核表达重组体pGEX-6p/pORF5,重组体转化大肠杆菌XL1-blue中诱导表达融合蛋白;融合蛋白经Glutathione Sepharose亲和层析纯化后免疫小鼠,制备单克隆抗体和多克隆抗体,间接免疫荧光技术及免疫印迹鉴定抗体的特异性,并分析pORF5质粒蛋白在感染细胞中的分布特征。采用ELISA方法分析pORF5质粒蛋白的免疫原性。结果 pORF5原核表达重组体成功构建,融合蛋白在大肠杆菌中可溶性表达;pORF5主要分布于宿主细胞胞浆,但也少量分布在EB、RB上;pORF5能与衣原体患者血清及鼠免疫血清发生强烈地免疫反应。结论 pORF5为衣原体分泌蛋白,并具有很强的免疫原性。

沙眼衣原体pORF8质粒蛋白克隆表达与定位

目的克隆表达沙眼衣原体pORF8质粒蛋白,并在衣原体感染细胞中对其进行定位分析。方法 PCR法扩增pORF8基因,并将其定向插入pGEX-6p载体构建原核表达重组体pGEX-6p/pORF8,重组体转化E.coli XL1Blue后经IPTG诱导表达pORF8融合蛋白,融合蛋白经Glutathione Sepharose亲和层析纯化后免疫Balb/C鼠,制备pORF8多克隆抗体;应用免疫荧光试验对pORF8质粒蛋白进行定位。结果 pORF8基因全长为744 bp,编码247个氨基酸残基,pGEX-6p/pORF8在大肠杆菌中表达相对分子质量约为54 000的GST-pORF8融合蛋白,间接免疫荧光实验结果显示pORF8在感染细胞中的表达模式与主要外膜蛋白基本一致,而与衣原体蛋白酶样活性因子分布模式不同。结论 pORF8质粒蛋白定位于衣原体菌体上,为衣原体菌体蛋白。该研究为进一步研究该蛋白的结构功能、阐明Ct的致病机制奠定了基础。

沙眼衣原体pORF5质粒蛋白激活NALP3炎性复合体诱导THP-细胞产生IL-1β和IL-18

目的:探讨沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)pORF5质粒蛋白对IL-1β和IL-18等促炎性细胞因子的诱生作用,并初步分析其分子机制。方法:用0、3、6、12、24、36μg/ml不同浓度的pORF5蛋白刺激THP-1细胞,并于0、8、16、24、36 h收集上清及细胞,ELISA检测IL-1β和IL-18的含量;Realtime-PCR检测NALP3炎性复合体mRNA表达水平,Western blot鉴定Caspase-1活化状态;分别用NALP3 siRNA、ASC siRNA转染THP-1细胞24 h或用Caspase-1特异性抑制剂(Z-YVADFMK)预处理THP-1细胞30 min后,再用24μg/ml的pORF5质粒蛋白刺激THP-1细胞24 h,ELISA分析各处理因素对IL-1β和IL-18产生的影响。结果:pORF5质粒蛋白以浓度依赖的方式刺激THP-1细胞产生IL-1β和IL-18。当pORF5质粒蛋白浓度为24μg/ml时,IL-1β和IL-18的表达水平最高,分别为491 pg/ml、186 pg/ml;同时pORF5质粒蛋白以时间依赖的方式刺激THP-1细胞产生IL-1β和IL-18,两者分别在24 h和16 h达到峰值。pORF5质粒蛋白可增强THP-1细胞NALP3、ASC和Caspase-1 mRNA的表达,促进Caspase-1的活化;NALP3-siRNA、ASC-siRNA及Caspase-1抑制剂处理组IL-1β和IL-18的产生水平均显著低于对照组(P<0.05)。结论:pORF5质粒蛋白通过激活NALP3炎性复合体诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18。

分层次开放实验室 优化实验课程体系 提高医学生科研创新能力

分析传统病原生物学实验教学弊端,阐述了实验课程对医学生科研创新能力培养的重要性。以省级示范实验室建设为依托,充分利用现有实验教学资源,优化实验课程体系,分层次开放实验室,拓展实验教学内容,创新实验教学手段,促进医学生实验课程教学改革,培养学生创新意识和科研能力,积极探索新型科研创新型医学人才的培养模式。

改革医学微生物学实验教学 培养创新型医学人才

医学微生物学实验准备工作质量的高低与实验教学效果有密切的关系。本文对实验技术人员自身素质、实验准备计划的制定、实验预做、实验技术人员和实验带教教师的关系、实验方法改革、实验准备模式等方面进行了改革和探索，为提高实验教学质量，培养医学生创新能力提供参考和借鉴。

GFP-hDaxx融合蛋白在真核细胞中的表达与鉴定

目的构建GFP—hDaxx融合蛋白真核表达载体pEGFP/hDaxx,并在HeLa细胞中表达,为进一步研究hDaxx在细胞凋亡、病毒感染中的作用提供实验基础。方法 用T4DNA连接酶将hDaxx亚克隆入载体pEGFP,筛选阳性克隆。将质粒pEGFP/hDaxx转染HeLa细胞,Western—Blotting鉴定表达产物,荧光显微镜观察GFP—hDaxx融合蛋白在细胞内的定位。结果成功构建了GFP—hDaxx融合蛋白真核表达载体pEGFP/hDaxx,GFP—hDaxx融合蛋白成功表达并定位HeLa细胞核。结论GFP—hDaxx融合蛋白成功地在真核细胞表达并定位于细胞核。

人型支原体和解脲脲原体对氟喹诺酮类药物的敏感性研究

目的 探讨人型支原体和解脲脲原体对氟喹诺酮类药物的敏感性，指导临床合理用药。方法 采用微量肉汤稀释法测定人型支原体和解脲脲原体对6种氟喹诺酮类药物的敏感性。结果 司帕沙星和加替沙星对人型支原体和解脲脲原体具有良好的抑菌活性，其MIC50分别为0．03125、0．25mg／L和0．25、0．50mg／L。左氧氟沙星和氧氟沙星对两种支原体的MIC50均分别为1．0、2．0mg/L。诺氟沙星对两种支原体的活性较差，MICl卯分别为16．0、32．0mg／L。环丙沙星对人型支原体的MIC50为2．0mg／L，而对解脲脲原体的MIC50则为8．0mg／L。结论 氟喹诺酮类药物新品种司帕沙星、加替沙星和左氧氟沙星的抗Mh和抗Uu活性强于环丙沙星和氧氟沙星等老一代氟喹诺酮类药物，本结果可为选择氟喹诺酮类药物治疗泌尿生殖道支原体感染提供实验依据。

hDaxx与12型腺病毒E1B 55KD癌蛋白在体内外的结合反应

目的 研究 12型腺病毒 (Adenovirus12 ,Ad12 ) E1B5 5 KD癌蛋白 (Ad12 E1B5 5 KD)打破 h Daxx与急性早幼粒细胞性白血病蛋白 (promyelocytic leukemia protein,PML)在细胞核共定位的机制。 方法 构建 h Daxx原核细胞表达质粒 p QE30 / h Daxx,并在大肠杆菌 (E.coli) BL2 1中诱导表达 ,用镍—氮基三乙酸 (Ni- NTA)琼脂糖加以纯化。通过体内外共免疫沉淀反应 ,Western blot方法研究 h Daxx与 Ad12 E1B5 5 KD直接结合反应。 结果 质粒 p QE30 / h Daxx在E.coli BL2 1中成功诱导表达了 h Daxx,其 N端有 6个组氨酸分子附着 (6 His- h Daxx)。Western blot结果显示 h Daxx在体内外与 Ad12 E1B5 5 KD发生直接结合反应。 结论 表达并获得纯化的 6 His- h Daxx,h Daxx能在体内外与 Ad12 E1B5 5 KD直接结合。

hDaxx及其删除突变体在原核细胞中的表达与鉴定

目的 将人Daxx(humanDaxx ,hDaxx)及其 6种删除突变体 (△hDaxx)在原核细胞大肠杆菌BL2 1(E .coli)中表达 ,以便在体外探索hDaxx的生物学活性。方法 用PCR方法从Hela细胞cDNAs文库中扩增全序列hDaxxcDNA ,利用载体pQE3x构建了hDaxx及其△hDaxx质粒 ,通过异丙基 - β -D -硫代半乳糖苷(IPTG)诱导E .coli表达相应蛋白质 ,并将其纯化。结果 IPTG能诱导hDaxx及其△hDaxx在E .coli中表达 ,表达产物纯化率达 85 %以上。结论 hDaxx及其 6种△hDaxx能在E .coli中表达。

衡阳地区梅毒螺旋体基因分型的实验研究

目的了解衡阳地区梅毒螺旋体(TP)的分子亚型的分布,为梅毒螺旋体感染分子流行病学研究提供实验依据。方法收集衡阳地区疑似硬下疳的标本52例,经TP polA PCR筛选后,阳性者用PCR扩增各标本中TP的ARP和TPR基因,酶切TPR基因扩增产物,分析各TP菌株ARP基因长度和TPR基因的限制性片段长度多态性(RFLP),进行分型。结果TP polAPCR阳性者43例,可用于分型者38例,分为10个亚型,其中14d亚型有16例,其它亚型包括10d(2)、12a(2)、12g(1)、13d(4)、14a(3)、14b(2)、14f(2)、15d(5)、16d(1)。结论衡阳地区存在TP的多亚型,且以14d亚型为主(42.1%)。

腺病毒12型E1B55kD蛋白增强hDaxx转录抑制活性

目的 研究腺病毒 1 2型E1B 5 5kD蛋白 (Ad1 2E1B)对hDaxx转录调控的影响作用。方法 利用酵母双杂交法分析hDaxx与Ad1 2E1B的相互作用 ;共免疫沉淀试验和Westernblotting测定两种蛋白质在细胞内外的结合反应 ;通过虫荧光素酶报道基因系统 ,分析hDaxx对其转录活性的影响。结果hDaxx在细胞内外直接与Ad1 2E1B结合 ,并与全序列Ad1 2E1B发生相互作用 ;Ad1 2E1B显著增加hDaxx的转录抑制活性 (P <0 .0 1 )。结论 Ad1 2E1B与hDaxx相互作用并增强hDaxx的转录抑制活性。