助行康复机器人自适应步态控制方法研究

为了提高助行康复机器人在不同坡度上的稳定性,合理的步态控制方法显得尤为重要。这里以助行康复机器人为研究对象,提出了一种将长短期记忆网络和动态运动基元结合的步行康复机器人自适应步态控制方法。将传感器采集信息与动态运动基元中步态控制项相结合,对参考步态进行调整。同时通过更改动态运动基元的时间项和空间项对步态进行二次调整以适应不同的坡度。通过试验对该控制方法的可用性进行验证。结果表明,该方法可以在(0~20)°斜坡进行自适应步态变换,具有一定的实用价值。

广西H9N2亚型禽流感病毒疫苗候选株的筛选

【目的】筛选出免疫原性更优的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)疫苗候选株用于新型疫苗研发,为加强对H9N2亚型AIV的防控提供技术支持。【方法】以2000—2020年广西地区分离获得的36株H9N2亚型AIV分离株为试验材料,依据HA基因遗传进化分析选择12株不同年份、不同地域及不同宿主来源的H9N2亚型AIV代表株,与目前使用的商品化H9亚型AIV疫苗株(SS株)进行交叉血凝抑制试验(HI)及抗原性分析,根据抗原分析结果选择其中具有不同抗原差异的代表株制备油乳剂灭活疫苗,并分别与商品化H9亚型AIV疫苗(SS株)进行交叉免疫保护试验。【结果】在36株H9N2亚型AIV广西分离株中有31株属于Y280-Like(9.4.1),其中26株属于分支I、5株属于分支II,另外5株属于G1-Like(h9.4.1),与我国常用疫苗株分属于不同进化分支。12株H9N2亚型AIV广西代表性分离株灭活后的HA效价≥7 log2,病毒灭活效果良好,可用于制备油乳剂灭活疫苗,且制备的油乳剂灭活疫苗稳定性和安全性良好。根据交互HI抗体滴度计算出各毒株间的抗原相关值(R),结果发现A/chicken/Guangxi/C227/2015(H9N2)株(简称C227株)与其他毒株的抗原性无明显差异,对应的R在0.72~0.93间波动;疫苗交叉保护试验结果也表明,C227株制备的油乳剂灭活疫苗对不同毒株的免疫保护率均高于80%,且免疫保护效果优于A/chicken/Guangxi/CX/2013(H9N2)株(简称CX13株),说明C227株更适合作为H9N2亚型AIV灭活疫苗的候选株。【结论】基于抗原性分析和免疫原性测定筛选出的A/chicken/Guangxi/C227/2015(H9N2)株对广西地区绝大部分H9N2亚型AIV流行株的免疫保护效果良好,可作为疫苗候选株用于研制新型H9N2亚型AIV疫苗。

Ⅰ群禽腺病毒五邻体基因的克隆及原核表达

根据GenBank中I群禽腺病毒(AAV)基因组序列,设计了1对特异性引物。以CELO毒株基因组DNA为模板,通过PCR扩增出结构蛋白五邻体基因(penton),将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1的EcoR I和Xho I位点,构建了原核表达载体pGEX-penton。将其转化到感受态细胞DH5α中,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,获得了45.9 ku的融合蛋白。用不同的IPTG浓度和时间诱导表达,得出诱导的最佳IPTG浓度为1.5 mmol/L,最佳时间为4 h。用尿素提取包涵体表达产物,得到penton纯化蛋白,浓度为2.98 mg/mL。经Western-bolt分析,该蛋白具有良好的反应原性。

Ⅰ群禽腺病毒Hexon蛋白的截短表达与鉴定

本研究利用PCR方法扩增出Ⅰ群禽腺病毒FAVⅠhexon基因主要抗原区,连接于表达载体pGEX-4T-1中,构建成重组质粒pGEX-hexon,并转化大肠杆菌DH5α,用IPTG诱导表达,对表达的Hexon蛋白进行SDS-PAGE电泳和Western-blot分析。结果显示,试验成功扩增获得hexon基因主要抗原区序列,大小为1020bp。重组蛋白主要以包涵体形式存在,融合蛋白大小为63.1ku,与预测值相符。经Western-blot分析,表明重组蛋白与FAVⅠ的阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性,为FAVⅠ诊断试剂盒的研制奠定基础。

Ⅰ群禽腺病毒五邻体蛋白间接ELISA检测方法的建立

为建立一种简便、快速检测Ⅰ群禽腺病毒(FAVI)抗体的间接ELISA方法,以表达和纯化的FAVI五邻体重组蛋白作为抗原,优化反应条件,建立了FAVI间接penton-ELISA抗体检测的方法。抗原最佳包被浓度为1.5μg/孔,最适包被条件为37℃,2h后4℃过夜;血清最佳稀释度为1∶100;酶标二抗的最佳工作浓度为1∶2000;ELISA阴、阳性临界值为0.335。用penton-ELISA方法检测100份鸡血清样品,阳性率为41%。

鸡传染性支气管炎病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立

为建立一种能快速检测鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的方法。根据GenBank中IBV的基因保守序列,设计一套环介导等温扩增(LAMP)特异性引物,建立了IBVRT-LAMP可视化检测方法;该法对IBVRNA最小检测限为10fg,而常规RT-PCR为1pg,灵敏度高于常规PCR法100倍;对其他常见鸡病原体检测结果均为阴性;可通过肉眼观察颜色直接判定结果;本研究建立的IBVRT-LAMP方法简便、快捷、特异、灵敏,且只需一个可控温的水浴锅在1h内即可完成全部反应,更适合基层业务部门及养殖场的检测,为IBV感染的快速检测提供新方法。

H6亚型禽流感病毒的分离鉴定与生物学特性分析

为了解低致病性禽流感病毒(LPAIVs)在广西地区家禽中的流行情况,对广西地区活禽市场的家禽进行LPAIVs流行病学监测,分离鉴定出7株H6亚型禽流感病毒(AIV)。通过在广西地区活禽市场采集家禽咽喉和泄殖腔棉拭子样品,将其接种SPF鸡胚,收集尿囊液进行HA和HI试验,结果显示这7株只与H6亚型AIV的阳性血清发生反应,产生血凝抑制现象,初步鉴定为H6亚型AIV。通过HA和NA基因的克隆与测序鉴定,进一步确定为H6亚型AIV,与NA基因存在5种组合,包括H6N1、H6N2、H6N5、H6N6和H6N8。鸡致病性试验表明分离株可感染但不致死SPF鸡,并通过咽喉和泄殖腔排毒,结合HA裂解位点附近的氨基酸序列,表明所分离到的7株H6亚型AIV符合LPAIV的特征。

Ⅰ群禽腺病毒100K蛋白主要抗原区基因片段的表达及鉴定

利用PCR技术对Ⅰ群禽腺病毒(FAVⅠ)100K蛋白主要抗原区片段进行扩增,得到约1062bp的基因片段;将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1,经测序及序列分析确证其正确插入到表达载体,成功构建重组表达载体pGEX-100K。重组质粒转化大肠杆菌DH5α,用IPTG诱导表达,对表达的蛋白用SDS-PAGE电泳和Western-blot分析。结果表明,100K蛋白主要抗原区基因片段得到良好的表达,表达的蛋白以可溶形式存在,分子质量约为64.5ku,与预测值相符;表达的100K蛋白与FAVⅠ阳性血清发生特异性结合,具有良好的反应原性,为FAVⅠ诊断试剂盒的研制奠定基础。

鸡毒支原体LAMP可视化检测方法的建立

为建立一种鸡毒支原体(MG)的快速检测方法,本研究根据GenBank中MG的基因保守序列,设计1套特异性环介导等温扩增(LAMP)引物,优化反应条件,建立了MG LAMP的可视化检测方法。该方法的敏感性可达10fg/μL,高于常规PCR方法100倍;其特异性好,对其他的鸡常见病原体的检测结果均为阴性。MG LAMP反应只需一个可控温的水浴锅,在1h内完成全部反应,通过肉眼观察颜色直接判定结果。本研究建立的LAMP方法具有灵敏度高、特异性好、操作简便的优点,可用于MG感染的快速检测。

鸡毒支原体弱毒F株与强毒株二重荧光定量PCR鉴别检测方法的建立

研究根据基因库中鸡毒支原体(MG)S6毒株和F株的基因保守序列,设计了2对特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针,对反应条件和试剂浓度进行优化,建立能鉴别鸡毒支原体(MG)强、弱毒株的二重荧光定量PCR检测方法,与其它禽类呼吸道病原体无交叉反应,对MG模板的灵敏度检测限为10拷贝/μL,对MG强弱毒模板以不同的浓度进行组合,仍可有效地检测到毒株,批内和批间重复变异系数小,特异性强、灵敏度高、稳定性好。研究建立的二重荧光定量PCR方法可用于MG强、弱毒株的鉴别检测,为该病的防控与净化提供良好工具。

血清4型禽腺病毒penton蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

【目的】制备和鉴定血清4型禽腺病毒(FAdV-4)五邻体(penton)蛋白单克隆抗体,为深入探究penton蛋白在FAdV-4感染致病机制中的作用及为抗原检测试剂研发提供抗体材料。【方法】以原核表达的FAdV-4 penton重组蛋白免疫6~8周雌性BALB/c小白鼠,加强免疫3次后,取鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,通过penton-酶联免疫吸附剂测定(ELISA)和FAdV4 virus-ELISA方法分别筛选阳性杂交瘤细胞株,对筛选出的单克隆抗体杂交瘤细胞株进行亚类鉴定、特异性和广谱性鉴定及间接免疫荧光和稳定性试验。【结果】亚类鉴定结果表明,筛选获得7株能稳定分泌抗FAdV-4 penton蛋白的杂交瘤细胞株(1D11、2B3、2C4、2C9、6B3、8F12和8G11),其轻链均为Kappa链,重链3株为IgG1,4株为IgG2b;特异性检测结果表明,7株单克隆抗体只与FAdV-4反应,不与其他11种血清型FAdV及NDV、ARV、EDSV和IBV等常见禽病病原体发生交叉反应;广谱性鉴定结果表明,7株单克隆抗体均可与19株FAdV-4分离株结合,广谱性好;间接免疫荧光试验结果表明,7株单克隆抗体均与感染FAdV-4的鸡胚肝细胞(CEL)结合,出现明亮的绿色荧光。对筛选出的3株单克隆抗体(6B3、8F12和8G11)进行稳定性检测,发现其稳定性良好。【结论】通过单克隆抗体制备和鉴定获得3株与FAdV-4蛋白结合效果较好并具有特异性和广谱性的FAdV-4 penton蛋白杂交瘤细胞株(6B3、8F12和8G11),能稳定分泌penton蛋白单克隆抗体,为深入研究penton蛋白在FAdV-4感染致病机制中的作用提供单抗,为FAdV-4抗原检测试剂的研发打下基础。

Ⅰ群禽腺病毒33K基因的原核表达与鉴定

33K蛋白是Ⅰ群禽腺病毒(fowl adenovirus groupⅠ,FAVⅠ)的非结构蛋白,在感染的过程中起重要作用。为了构建原核表达载体pGEX-33K作为诊断抗原,本研究根据GenBank中FAVⅠ33K基因序列,设计1对特异性引物。用PCR方法扩增目的片段,将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建了重组质粒pGEX-33K。将其转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,pGEX-33K表达的分子量为36.7KD,表达产物主要以可溶性的形式存在于菌体中;最佳IPTG诱导浓度为0.75mmol/L,最佳诱导时间为4h;经Western Blot鉴定,pGEX-33K重组蛋白可与FAVⅠ阳性血清发生特异性反应,为FAVⅠ抗体ELISA鉴别诊断试剂盒的研究奠定基础。

职业院校大学生创新创业能力“五位一体”培养模式研究

职业院校大学生创新创业能力培养的关键在于建立政府与行业部门、职业院校、项目教学、专业教育与创新创业教育内容相结合、社会资源融合互通的"五位一体"培养模式,其践行路径为:以学习为主要标准,实现人才的分层次选拔;以实践为依托,实现知识的活学活用;以竞赛为载体,提升团队合作能力;以制度和文化为支撑,将示范和辐射相结合,有效提升大学生创新创业能力。

Ⅰ群禽腺病毒间接100K-ELISA检测方法的建立

为了建立一种Ⅰ群禽腺病毒(FAVⅠ)感染的抗体间接ELISA检测方法,试验以FAVⅠ100K重组蛋白作为包被抗原,优化间接ELISA反应条件,建立了FAVⅠ感染产生抗体的间接100K-ELISA检测方法,检测FAVⅠ活病毒感染血清和灭活苗免疫血清各50份。结果表明:经优化筛选的最佳反应条件如下,包被抗原浓度为5.4μg/mL,包被条件为37℃作用1 h加4℃过夜,5%脱脂奶封闭1 h,血清稀释度为1∶100,作用时间为60 min,酶标二抗的最佳浓度为1∶3 000,作用时间为45 min。该方法的阴性、阳性临界值为0.345。96%感染动物血清检测结果为阳性,而98%灭活苗免疫动物血清检测结果为阴性。说明研究建立的100K-ELISA方法特异性强、灵敏度高、重复性好。

舰船电子设备的抗强冲击试验分析

采用传统方法分析抗强冲击试验对设备质量研究较为单一,造成分析结果不准确。依据高强度冲击特点对舰船电子设备抗强冲击试验进行分析,可提高分析结果精准度。根据高强度冲击特点,将设备质量分为3个等级,并在这3个等级下对轻量级、中量级和水下爆炸等冲击行为进行试验研究,根据研究结果获取舰船电子设备抗强冲击程度。通过试验分析结果可知,依据高强度冲击特点试验分析方法结果较为准确,最高可达到89%,为舰船电子设备安装提供支持。

当代工笔花鸟画中宋代花鸟画构图技巧的延续和发展

工笔花鸟画在中国的历史非常悠久,从战国开始就有它的踪影,而工笔花鸟画的鼎盛时期应该是在宋代,当时宋徽宗的提倡,成就"宣和画院"的辉煌时期。构图技巧是工笔画中比较重要的一个步骤,了解宋代花鸟画构图特点和技巧,对当代工笔花鸟画的延续和发展有非常重要的作用。

中国画花鸟画的“意写观”的辨析

花鸟画是中国画的一种,主要以花、鸟、虫等为描绘对象。花鸟画的画法有工笔、写意、兼工带写三种,工笔花鸟画通过线条勾勒所描绘的对象,再分层着色,当然也有没骨画法,即不用线条勾勒,用直接着色的方式进行绘画创作;写意花鸟画主要利用水墨或色墨,采用简练概括的手法来描绘对象;工笔和写意两种技法相互结合称为兼工带写。中国花鸟画集中体现了国人与审美客体中自然生物的审美关系,具备较强的抒情性,能在一定程度上体现时代精神、间接地反映社会实践生活,具有鲜明的特点。花鸟画经过漫长的历史发展,积累了非常丰富的创作经验,是世界艺术格局中非常璀璨的明珠。本文对中国花鸟画的"意写观"展开了探析,希望能为花鸟画的研究提供借鉴。

电子通信工程设备抗干扰接地策略

本文将以抗干扰接地作为讨论点,把握与结合电子通信工程设备实际情况,提出设备抗干扰接地思路,希望能够更好的发挥电子通信工程的机制,满足工程需要、行业需求。

中国大专高校工笔花鸟画教学的有效方法研究

作为中国传统文化的代表,工笔花鸟画不仅在中国文化领域有着重要地位,在我国高等院校中也是传承中国传统文化的重要课程。然而,对于怎样提高工笔花鸟画教学效果,更好地让学生传承我国这一传统文化,不同的学者存在不同的看法。文章基于为高等专科学校的工笔花鸟画教学提供更有效的教学方法的目的,在深入分析了中国工笔花鸟画的特点之后,提出了相应可实践的教学方法,并就高校工笔画教学中的最重要方面——写生展开论述。

浅谈中国古代工笔花鸟画体现的中国画构图

构图在我国传统绘画中被称为经营位置或布局、章法,好的构图能够影响绘画作品的艺术感染力、节奏以及气韵,其和审美表现相互影响、共同发展。中国历代画家在艺术创作实践过程中总结出的构图方法,构成了中国画独具特色的构图程式法则,且中国构图讲究法度的严谨性,还要求绘画的艺术性与审美性有效结合。笔者通过研究、分析不同时期的中国古代工笔花鸟画的构图,总结提炼了中国古代工笔花鸟画中构图的基本程式,以期运用在自己的绘画创作中。