四种脱钙液对骨和骨髓组织及结构影响的比较

背景:由于骨和骨髓组织结构非常特殊,在常规的病理制片过程中,要同时显示坚韧质硬的骨组织和含有多种幼稚娇嫩造血细胞的骨髓组织是非常困难的。目的:选择一种既能完全除去骨组织中的钙质,又能保护骨髓组织及细胞结构不受破坏的最佳脱钙液。方法:将含骨髓组织的犬长骨组织随机分4组,同等条件下,14%硝酸甲醛生理盐水溶液;14%硝酸水溶液;20%甲盐酸甲醛生理盐水溶液和20%甲盐酸水溶液4种不同脱钙液脱钙,记录脱钙时间,常规脱水、切片、苏木精-伊红染色,镜下观察,对比4种脱钙液对骨和骨髓组织常规病理切片质量和其苏木精-伊红染色效果。结果与结论:14%硝酸甲醛生理盐水溶液组脱钙能力最强,脱钙最均匀,耗时最短,既能有效完全除去骨皮质中的钙质,又能保护骨髓组织及细胞的形态完好,切片质量和苏木精-伊红染色的效果最佳;14%硝酸水溶液组脱钙液,使骨组织疏松发泡,组织变黄,对组织的损伤大,脱钙不均匀,组织切片不完整,制片质量和苏木精-伊红染色的效果最差;20%甲盐酸甲醛生理盐水溶液组对组织的脱钙能力、损伤程度、制片质量和苏木精-伊红染色效果都比14%硝酸甲醛生理盐水溶液组稍差;20%甲盐酸水溶液组对骨和骨髓组织的损伤小,脱钙效果好,切片质量和苏木精-伊红染色的效果佳,介于20%甲盐酸甲醛生理盐水溶液组和14%硝酸水溶液组之间。结果表明,4种脱钙液对骨和骨髓组织都具有良好的脱钙能力,制片质量及苏木精-伊红染色效果比较,14%硝酸甲醛生理盐水溶液>20%甲盐酸甲醛生理盐水溶液>20%甲盐酸水溶液>14%硝酸水溶液;14%硝酸甲醛生理盐水溶液最适用于临床常规病理制片中骨和骨髓组织的脱钙。

穿刺活检组织常规石蜡和常规冰冻HE制片的比较

目的观察病理穿刺活检组织常规石蜡和常规冰冻制片HE染色效果的异同,提高穿刺活检组织的制片质量。方法取中山大学附属第一医院各手术科送检的病理穿刺活检组织标本(骨和骨髓、乳腺、脂肪)进行处理,每份送检标本均一分为二,一份常规固定脱水包埋切片;一份常规冰冻切片,两份标本切片均常规HE染色,镜下观察阅片并作比较。结果多数穿刺活检组织常规石蜡和常规冰冻切片制成的HE片结构完整,厚薄均匀,染色恰当,形态清晰,无断裂破碎现象,核浆分明,切片平整,定位准确。骨和骨髓穿刺活检组织不宜进行常规冰冻切片,也不能直接进行常规石蜡切片,必须经过脱钙液脱钙才能切片;含脂肪多的乳腺穿刺活检组织和脂肪组织做常规石蜡切片,脱水前必须用纯丙酮脱脂才能切片;而进行常规冰冻切片,组织切片不完整、折叠、破碎、脱落,严重影响制片质量和诊断的正确性。结论大多数病理穿刺活检组织都可以进行常规石蜡和常规冰冻切片,切片HE染色质量良好。

检测巨细胞病毒(CMV)DNA及其即刻早期抗原、pp65和pp67在肾移植受者术后巨细胞病毒感染早期诊断中的价值

目的探讨检测巨细胞病毒(CMV)DNA及其即刻早期抗原(IE)、巨细胞病毒pp65和pp67抗体对肾移植受者术后巨细胞病毒感染早期诊断的临床应用价值。方法按肾移植术受者术后3个月外周血是否出现CMV抗原,将71例患者分为CMV感染组(56例)和CMV未感染组(15例),肾移植术受者手术前和术后第1个月每周检查1次,第2、3个月每2周检查1次外周血巨细胞病毒pp65和巨细胞病毒pp67、即刻早期抗原(immediate early antigen,IE),巨细胞病毒DNA和IgM、IgG,共8次;以监测与分析评价肾移植术受者手术前后各项指标变化。结果肾移植术前71例肾移植受者PP65、PP67、IE、CMV DNA均为阴性;肾移植术后CMV感染组的pp65、pp67、IE、CMV DNA阳性率分别为67.8%(38/56)、66.1%(37/56)、64.2%(36/56)和48.2%(27/56),CMV未感染组4项指标值分别为0%、0%、13.3%(2/15)、和0%,两组差异均有统计学意义(P均<0.01)。肾移植术后CMV感染组(56例)和CMV未感染组(15例)CMV IgG均为阳性,而IgM阳性率在CMV感染组仅为3.5%(2/56),在CMV未感染组为0%,IgM表达率在CMV感染组和未感染组无统计学差异(P>0.05)。观察期内感染组与未感染组相比,术后CMV pp65,pp67,CMV DNA和IE指标出现阳性的例数及阳性出现的具体时间均有显著性差别(P均<0.01),而IgM和IgG则均无显著性差别(P均>0.05)。结论肾移植术后患者外周血CMV DNA,IE,pp65和pp67抗原检测阳性与其术后巨细胞病毒感染相关。检测CMV DNA、IE、pp65和pp67抗原可能更早更准确反映器官移植术后CMV活动性感染。而CMV IgG和IgM不能作为肾移植后患者CMV感染的诊断指标。

不同的脱钙液在骨组织制片中的比较应用

目的比较不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力的差异,探讨其对HE染色的影响。方法选取50例手术切除的新鲜骨标本,运用4种常用的脱钙液(14%硝酸、10%盐酸、20%甲盐酸和EDTA脱钙液)进行脱钙,比较其脱钙效果和对HE染色的影响。结果不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力、HE染色效果影响有显著区别。结论 14%硝酸脱钙能力最强,用时间最短,染色的效果最差;10%盐酸对骨组织的损伤小,HE染色的效果最好,但用时较长;20%甲盐酸脱钙能力和HE染色效果都介于10%盐酸和EDTA脱钙液之间;EDTA脱钙液脱钙用时最长,对骨组织的损伤最小。

病理HE切片常见的质量问题及处理方法

目的探索病理HE切片常见的质量问题,并提出相应的预防和处理方法,提高HE切片质量。方法回顾性地复习一定时期内本科所有的病理HE玻片,按照病理HE玻片中出现的质量问题进行总结、分析和分类,然后归纳。结果病理HE切片常见的质量问题基本上都是由于病理技术员经验不足、操作不当、责任心不强所造成。结论应加强从业病理技术员的系统而严格的工作培训,病理技术员要积极主动认真地工作,积累工作经验,端正工作态度,寻找出现质量问题的根源,提高HE切片的质量水平。

比较2种常用授精法在体外授精-胚胎移植中的差异

背景:体外授精-胚胎移植技术目前广泛应用于人类助孕,助孕成功率稳步上升,卵子体外授精成功率直接影响到最终的助孕结局。目的:评估微滴法与敞开式授精法这2种常用授精方法在常规体外授精中卵子受精以及胚胎发育方面差异。方法:募集因非男性因素行体外受精助孕的1 175例患者进行了一项随机研究,对比这2种授精方法的有效性。其中573例患者进行了微滴法授精;另外602例患者进行了敞开式授精。然后比较这两种授精方式对卵子授精及胚胎质量的影响。结果与结论:微滴法受精失败率[完全不受精率+低受精率(受精卵子<25%)]比敞开式授精要高(11.9%,3.3%,P<0.001)。然而优质胚胎率、临床妊娠率在两组间差异无显著性意义(P均>0.05)。结果表明敞开式授精法是一种相对简单而且授精失败率低的良好授精方法。但受精是过程复杂,内外影响因素众多,需要进行更细致观察,以确认这两种授精方法在体外授精-胚胎移植中的差异。

天狼星红苦味酸染色法和MASSON染色法在显示大鼠肾脏胶原纤维的比较应用

目的比较天狼星红苦味酸染色法和MASSON三色染色法用于大鼠肾脏标本胶原纤维染色的效果。方法建立大鼠单侧输尿管梗阻肾间质纤维化模型,取梗阻侧肾脏标本,行天狼星红染色和MASSON三色染色,图像分析软件测定肾间质胶原面积。结果天狼星红染色和MASSON三色染色都能显示出胶原纤维,两种方法测定胶原面积无显著差异。天狼星红染色标本在偏光显微镜观察能分辨胶原类型。结论天狼星红苦味酸染色法比MASSON三色染色法操作步骤简单,是显示胶原的优良方法。

变应性鼻炎大鼠模型的建立方法

目的:建立有效可行的大鼠变应性鼻炎模型。方法:将雌雄各半、5周~6周龄SPF级SD大鼠20只,随机分成实验组和对照组,每组各10只。应用生理盐水加卵蛋白氢氧化铝溶胶加灭活百日咳杆菌注射大鼠脚掌皮下使其出现致敏现象,继续鼻腔局部致敏,然后观察不同处理组别所致变应性鼻炎大鼠模型的临床症状;通过常规HE染色和甲苯胺蓝染色观察大鼠鼻咽黏膜组织病理学指标的改变,采用叠加量化记分法记分,积分>5分表示造模成功。结果:实验组大鼠出现的症状均与临床相符,经鼻腔局部激发后均能观察到实验组大鼠有搔鼻、喷嚏、流涕等症状;对照组大鼠均无上述症状;所有实验组大鼠和对照组大鼠均无死亡。结论:本实验建立的大鼠变应性鼻炎模型是成功的,方法是可行的,有效的。

LEICA CRYCUT1800型低冷恒温冰冻切片机的使用与维护

LEICA CRYCUT1800型恒温低冷冰冻切片机是由大功率的冷冻机和装有精工轴承与滚柱滑轨REICHERT JUNG 2020型不锈钢切片机相结合为一体的恒温低冷冰冻切片机.制冷温度可达-35℃,切片厚度范围1～40μm.

急冻剂在冷冻切片中的应用

利用急冻剂使临床送检的新鲜标本得到迅速冷却变硬,硬度适中,切片平整,菲薄均匀,细胞无挤压变形,无冰晶形成,冷冻切片质量高,且缩短了制片时间,有利于提高手术中标本送检病理诊断的及时性、准确性,帮助临床医生术中迅速确定手术方案,从而使患者得到有效的诊治。

CD44s、MMP-9、Ki-67的表达与骨肉瘤侵袭、转移、复发的关系

背景及目的:近期研究表明,细胞表面粘附分子CD44和基质金属蛋白酶类(MMPs)在多种肿瘤组织中有高水平表达,且与肿瘤的侵袭转移关系密切;Ki-67是一种细胞增殖核抗原,表示肿瘤细胞的增殖速率;但三者与骨肉瘤的局部侵袭、远处转移及术后是否复发之间的关系尚不清楚,本研究拟探讨细胞表面粘附分子标准型CD44蛋白(CD44s)以及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和细胞增殖核抗原(Ki-67)在骨肉瘤中的表达情况及其与骨肉瘤侵袭、转移、复发的关系。方法:采用免疫组织化学SP法检测了62例骨肉瘤(初发性骨肉瘤51例、复发性骨肉瘤11例,确诊时即伴有肺转移者9例、不伴有肺转移者53例)以及骨纤维结构不良和正常对照组织中CD44s、MMP-9、Ki-67的表达,并根据阳性瘤细胞占肿瘤细胞总数的比率进行半定量量化分析和非参数秩和检验。结果:CD44s、MMP-9、Ki-67在骨肉瘤中的阳性表达率分别为71.0%、75.8%和35.5%,与三种分子在骨良性病变和正常对照组织中的阳性表达率相比,其表达水平显著性升高(P值均小于0.05)。CD44s和MMP-9在初发性和复发性骨肉瘤之间的表达差异无显著性意义,但Ki-67在术后复发的骨肉瘤中的阳性率为81.8%,比初发性骨肉瘤中的阳性率显著性升高。CD44s和Ki-67在伴有肺转移的骨肉瘤中的阳性率分别为88.9%和66.7%。

骨肉瘤中HIF-1α、VEGF、p53表达与血管生成和预后的关系

目的 检测缺氧诱导因子 1α(HIF 1α)及VEGF、p5 3、CD34在骨肉瘤的表达 ,探讨其与缺氧情况下骨肉瘤血管生成和预后的关系。方法 采用免疫组织化学S P法检测 4 6例有完整随访资料的骨肉瘤病例中HIF 1α、VEGF、p5 3、CD34的表达。用Spearman分析各指标间的相关性 ,并结合临床资料进行生存曲线分析。结果 4 6例骨肉瘤标本中有 14例 (30 4 % )表达HIF 1α ;HIF 1α表达组VEGF、p5 3表达强度及术后转移率均高于HIF 1α不表达组 ;HIF 1α表达组患者术后 1年生存率及总生存率均显著低于HIF 1α不表达组。HIF 1α表达与VEGF、p5 3表达之间存在显著相关性 ;HIF 1α表达与微血管密度(MVD)之间无相关性。结论骨肉瘤组织中存在HIF 1α的过表达 ,HIF 1部分地参与了骨肉瘤的演进 ,HIF 1通过调节VEGF的表达在骨肉瘤血管生成中发挥着重要作用 ;HIF 1和p5 3缺失或突变可能协同参与了缺氧对骨肉瘤肿瘤细胞的调节 ,HIF 1α表达与骨肉瘤的不良预后密切相关 。

CD138对不孕合并慢性子宫内膜炎的诊断价值及其相关因素分析

【目的】探讨CD138免疫组化在慢性子宫内膜炎(CE)诊断中的作用,及助孕患者合并CE的高危因素。【方法】选取93例检查证实为正常宫腔形态,准备行助孕治疗的患者为研究对象,取子宫内膜组织进行常规HE染色和CD138免疫组化染色,同时收集患者病史、跟踪其生殖预后。【结果】1CE的检出率:CD138免疫组化高于HE染色(27.96%vs 26.89%,P<0.05);2妊娠率:CD138阳性患者(7.7%)比CD138阴性患者(31.3%)低(P=0.017);3单因素分析结果表明既往有月经淋漓不尽史、人流史及合并有输卵管堵塞等与CE有一定联系(P<0.05),Logistic回归分析结果证实月经淋漓不尽(P=0.014,OR=5.394,95%CI1.405-20.699),既往人流史(P=0.029,OR=3.194,95%CI1.125-9.073)、输卵管堵塞(P=0.028,OR=3.274,95%CI1.139-9.415)是CD138阳性的独立危险因素。【结论】CD138免疫组化可提高CE诊断率,既往淋漓不尽病史、人流史输卵管堵塞病史是慢性子宫内膜炎的高危因素,应建议其进行CD138免疫组化检测。

骨巨细胞瘤基质金属蛋白酶系统的表达及其与复发的关系

目的:研究骨巨细胞瘤组织中基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinaseMMP2,MMP9)及其特异性抑制剂金属蛋白酶组织抑制物-1和金属蛋白酶组织抑制物-2(tissueinhibitorsofmetalloproteinaseTIMP1和TIMP2)和尿激酶型纤溶蛋白酶原激活物(urokinasetypeplasminogenactivatoruPA)的表达与肿瘤复发的关系。方法:用免疫组化法和原位杂交法检测45例骨巨细胞瘤组织中MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2和uPA蛋白和RNA的表达,计算MMP2/TIMP2和MMP9/TIMP1的比值,对比肿瘤复发组和非复发组的差异。结果:骨巨细胞瘤组织有高水平的MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2和uPA表达,但与肿瘤的形态分级无关。复发组MMP2、MMP9和MMP2/TIMP2、MMP9/TIMP1比值以及uPA表达均比非复发组明显增高。高水平MMP2、MMP9、MMP2/TIMP2、MMP9/TIMP1表达的病例复发时间较早,复发风险较高。结论:骨巨细胞瘤的复发与基质金属蛋白酶和酶激活物表达增高,酶抑制剂表达减低相关。

骨肉瘤中Rb、p16、CDK_4、cyclinD_1蛋白的表达及其意义

目的：探讨骨肉瘤中Ｒｂ、ｐ１６、ＣＤＫ_４、ｃｙｃｌｉｎＤ_１的蛋白表达、相互关系及其意义。方法：应用免疫组化方法对４０例骨肉瘤组织中ＲＢ、ｐ１６、ＣＤＫ_４、ｃｙｃｌｉｎＤ１的蛋白表达状况进行检测。结果：４０例骨肉瘤Ｒｂ、ｐ１６蛋白表达缺失分别为７２.５％（２９／４０）和２２.５％（９／４０）；１１例ｐＲｂ阳性的骨肉瘤中８例ｐ１６阴性，２９例ｐＲｂ阴性的骨肉瘤中２８例ｐｌ６阳性；５２.５％（２１／４０）的骨肉瘤中存在ＣＤＫ_４的过表达，１１例ｐＲｂ阳性的骨肉瘤８例ＣＤＫ_４蛋白呈过表达，３削弱阳性 ；３例 ｐＲｂ、ｐ１６均阳性的骨肉瘤 ＣＤＫ４导过表达；骨肉瘤中 ｐＲｂ， ｐ１６， ＣＤＫ_４的总异常率达１００％；４０例骨肉瘤中未检出ｃｙｃｌｉｎＤ_１蛋白的过表达。结论：（１）Ｒｂ蛋白的缺失。ＣＤＫ_４蛋白的过表达是骨肉瘤中的常见事件（２）骨肉瘤中ｐ１６与ｐＲｂ的表达呈负相关；（３）Ｒｂ蛋白阳性的骨肉瘤，ｐ１６蛋白的缺失及／或ＣＤＫ４蛋白的过表达，可能在ｐＲｂ的过度磷酸化而失活以致骨肉瘤失控地增生中起着重要作用；（４）ｐ１６－ＣＤＫ_４－ｐＲｂ通路的异常与骨肉瘤的发生密切相关。

NF-κB及IL-1ra在胃癌中的表达及其意义

【目的】探讨NF-κB及IL-1ra在胃癌中的表达及其意义。【方法】通过组织芯片,采用免疫组织化学方法(LSAB法)检测核因子-κB(NF-κB)和抗炎因子白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)在359例胃癌组织中的表达情况。【结果】NF-κB在伴发淋巴结转移、处于TNMⅢ+Ⅳ期、组织学分化较低的胃癌患者中的表达水平分别为80.2%、80.0%、79.2%;IL-1ra在原发灶癌直径≤3cm、早期癌、无淋巴结转移和处于TNMⅠ+Ⅱ期的胃癌患者中表达水平分别为61.7%、75.0%、66.4%、61.9%;NF-κB表达阴性的胃癌患者5年生存率高于阳性患者(P=0.036);伴IL-1ra阳性表达的NF-κB阴性表达患者生存率高于其它组别患者(P=0.021)。【结论】NF-κB的表达水平可以作为胃癌预后不良的指标;IL-1ra可能是延缓胃癌恶性发展的保护因素,但尚需进一步的研究证实。

肝硬化大鼠肝癌细胞原位种植瘤模型的建立

目的:探讨硬化肝脏促进CBRH-7919大鼠肝癌细胞原位种植瘤形成的可能及其机制。方法:30只Wistar大鼠随机分成A、B2组,即正常肝脏组和硬化肝脏组。肝硬化大鼠通过口服二乙基亚硝胺(DENA)溶液诱导。在2组大鼠肝脏上原位种植CBRH7919的种植瘤,观察肝癌原位种植瘤形成率和病理情况。在种植肿瘤的同时切取小部分肝脏,免疫组化的方法检测转化生长因子β1(TGF-β1)、磷酸化Smad2、Smad4和Smad7蛋白的表达,半定量RT-PCR检测Smad4mRNA的表达。结果:CBRH-7919细胞在硬化肝脏上原位种植的成功率为53.3%(8/15),呈现类似人类肝细胞癌的病理特点,而正常肝脏的原位种植成功率为0%。正常肝脏内TGF-β1和Smad4极少表达,但有较多磷酸化Smad2的表达,也可见Smad7的少量表达;而硬化肝脏内TGF-β1、Smad4和Smad7的表达明显增多,而磷酸化Smad2的表达较正常显著减少。结论:肝硬化可以促进大鼠肝癌原位种植瘤的生长,提高模型制作的成功率,其机制可能与硬化肝脏内磷酸化Smad2表达的减少,而TGF-β1、Smad4和Smad7表达的增加有关。

肾移植及骨髓移植受者术后巨细胞病毒早早期抗原的检测

背景:肾移植及骨髓移植后,随着免疫抑制剂的应用,潜伏的巨细胞病毒都将被激活。因此早期准确诊断巨细胞病毒感染具有重要的意义,及时而有效地控制巨细胞病毒感染的关键是在血液中迅速、定量地检测到巨细胞病毒的复制。目的:检测肾移植及骨髓移植受者术后的巨细胞病毒早早期抗原,探讨其临床诊断价值。方法:采用免疫组织化学方法对1215例肾移植及骨髓移植受者外周血白细胞巨细胞病毒活动性感染的早早期抗原进行检测。结果与结论:巨细胞病毒早早期抗原指数阳性492例(占40.0%),早早期抗原指数阴性723例(占60.0%),巨细胞病毒抗体IgG明显升高318例(占26.0%),巨细胞病毒抗体IgM90例(占7.0%)。巨细胞病毒抗原血症检测技术对于巨细胞病毒活动性感染的诊断具有高度的灵敏性和特异性,同时对巨细胞病毒的发生还具有重要的预测意义,是一种经济可行的诊断方法。

临床影像学联合组织病理大切片在胃肠间质瘤术后化疗的意义和价值

目的进行组织病理学大切片,参照术前CT和MIR影像学资料,比较鉴别诊断胃肠间质瘤,为术后化疗和预后提供理论依据。方法收集10例常规HE染色和免疫组化CD117、CD34、SMA和S-100染色确诊为胃肠间质瘤患者的离体手术大体标本制作组织病理学大切片,常规HE染色,对比CT和MIR影像结果,观察分析胃肠道间质瘤的情况。所有离体组织的断端距离肿物至少2cm,沿肿物最大直径切开,留取1cm厚组织,保持肿物的完整。结果胃肠间质瘤组织病理学大切片制片效果良好,可以清楚观察肿瘤的全貌和大小、每10HPF核分裂象个数、肿瘤的浸润程度、肿瘤的坏死以及肿瘤的包裹情况,参考术前的CT和MIR影像学资料,进一步全面了解胃肠道间质瘤,为临床治疗服务。结论胃肠间质瘤组织病理学大切片比常规病理切片更全面、更具体地反映肿瘤的情况,能明确肿瘤大小,最大程度反映肿瘤的的全貌、浸润程度、坏死情况和每10HPF核分裂象个数,对胃肠间质瘤患者的预后评估及后续化疗制定有效的方案,为患者服务。