HER-2免疫组化染色方法及注意事项

研究表明,30%的人类肿瘤中存在表皮生长因子受体-2（HER-2）基因的扩增/过表达,其中20%的浸润性乳腺癌有HER-2基因的扩增/过表达。影响HER-2判读的重要因素是染色方法的标准化和结果判读标准。本文旨在探讨HER-2标准化的IHC染色方法。

免疫组化手工操作与机器制片染色比较

自动免疫组化染色机的问世,不仅使人们从繁琐的手工劳动中解放出来,大大提高了工作效率,同时也使免疫组化染色的质量得到了一定的保障。使用全自动免疫组化染色机,可以有效地保证染色的准确性、可重复性及整体染色的一致性。笔者通过手工操作与机器染色两种染色方式对乳腺癌ER、PR和HER2三种抗体进行比较,探讨两种染色方式对抗体染色结果的影响。

简介全自动免疫组化染色机

免疫组化染色就是用免疫学方法进行组织化学染色,免疫组织化学技术是利用已知的特异性抗体与特异性抗原结合的特点,通过化学反应使标记于特异性抗体上的显色剂显现出颜色,从而在抗原抗体结合部位确定组织、细胞结构的技术。

ARHI在胰腺癌组织中mRNA水平及蛋白表达

目的 研究胰腺癌组织中ARHI的mRNA水平与蛋白表达情况。方法 用单克隆抗体免疫组化及地高辛标记cDNA探针原位杂交的方法，对57例胰腺癌手术切除组织进行ARHI蛋白及mRNA检测，并以正常胰腺组织作对照。结果 ARHI在正常胰腺组织中的免疫组化及原位杂交阳性率分别为84．2%及82．5%；在胰腺癌中两者阳性率均为52．6%，阳性率显著下降（P＜0．01）；ARHI的mRNA与蛋白表达有较好的一致性；此外，在纤维母细胞、平滑肌细胞、血管壁及肠粘膜上皮均可见阳性着色；ARHI的阳性率与癌分化程度及临床分期无关。结论 ARHI在胰腺癌中呈下调性表达，可能是一个抑癌基因；ARHI广泛存在于腺上皮及纤维、平滑肌等细胞中。

SARS患者尸检肺组织的免疫组织化学观察

目的通过对严重急性呼吸综合征(severeacuterespiratorysyndrome,SARS)肺组织病变的免疫组织化学研究,结合组织学观察,探讨SARS肺部病变的特点及发病机制。方法以常规HE染色组织学观察结合CD8、CD20、CD34、LCA、CD56、CD68及AE1/AE3等单克隆抗体免疫组织化学染色,分别观察淋巴细胞、巨噬细胞、肺泡上皮细胞及肺毛细血管等在肺病变中的数目及分布特点,观察肺组织内血管变化、肺泡上皮增生以及机化和纤维化改变,从而分析SARS肺病变的特点。结果从病变早期至早期纤维化,SARS肺组织中毛细血管数目增多,血管分布符合肺泡壁结构轮廓;炎细胞反应表现为淋巴细胞数目下降而巨噬细胞数目显著增多;Ⅱ型肺泡上皮显著增生;在晚期纤维化及实变的肺组织中,血管数目减少,管腔增大,分布分散,失去肺泡壁的结构轮廓。结论SARS肺部病变具有血管反应、渗出、增生及纤维化等特点,其中巨噬细胞渗出可能在发病过程中起关键作用。

头颈部鳞癌人乳头状瘤病毒16/18感染状态与Ki-67、P53表达的关系

目的通过测定人头颈部鳞状细胞癌组织中人乳头状瘤病毒(HPV)16/18感染和Ki-67、P53蛋白的表达,探讨HPV16/18感染和Ki-67、P53蛋白表达的相关性及意义。方法采用荧光定量PCR方法测定头颈部鳞癌患者肿瘤组织中HPV16/18DNA的含量,同时以免疫组织化学方法测定Ki-67、P53蛋白的表达状态。结果 62.8%的患者在头颈部鳞癌组织中检测到HPV16/18DNA,46.15%的患者肿瘤组织表达P53蛋白为阳性。患者肿瘤组织Ki-67的表达在2%～70%。HPV16/18DNA含量与患者的性别、吸烟、饮酒和临床分期无相关性(P>0.05),与病理学分级呈正相关(r=0.350,P=0.001),与Ki-67表达无相关性(P=0.179),与P53表达呈负相关(r=-0.197,P=0.04)。结论头颈部鳞癌的发生可能和HPV16/18感染有关,致病机制涉及P53蛋白的降低表达。

健康教育对出院高血压病人遵医行为影响的研究

目的 :为了解出院高血压病人的遵医行为及健康教育对出院高血压病人遵医行为的影响。方法 :将 2 0 0 1年 2月— 2 0 0 1年12月曾在我院心血管内科住院的高血压病人 10 0例随机分为实验组与对照组 ,对实验组病人进行系统的健康教育。 6个月后对两组病人遵医率及血压控制达标率进行调查。结果 :实验组病人遵医率及血压达标率明显高于对照组 (P <0 .0 1)。结论 :对出院高血压病人实施跟踪随访及健康教育 。

人胰腺癌组织中DPC4/Smad4、p21^(wafI)、p16蛋白表达的检测

背景与目的:近一半的胰腺癌存在DPC4/Smad4失活,使肿瘤细胞增殖的抑制作用丧失;p21waf1是Smad4调控的下游靶基因,而DPC4和p16基因在胰腺癌的发生中可能有协同作用。本研究拟通过研究DPC4/Smad4、p21wafI、p16蛋白在人胰腺癌中的表达情况,探讨三者之间的关系及它们在胰腺癌中的可能作用机制。方法:用免疫组化技术检测56例石蜡包埋人胰腺癌组织Smad4、p21wafI、p16的蛋白表达情况;用原位杂交、免疫组化技术、Westernblot检测5株人胰腺腺癌细胞系中DPC4/Smad4的mRNA和蛋白表达情况。结果:石蜡包埋人胰腺癌组织免疫组化显示Smad4、p21wafI和p16阳性率分别为58.93%、48.21%和42.86%,对应癌旁非癌胰腺组织阳性率分别为89.29%、87.5%和76.79%;P3、P4、P7人胰腺腺癌细胞系DPC4/Smad4的原位杂交、免疫组化及Westernblot均为阳性,而P1、P2均为阴性。统计学分析显示胰腺癌及癌旁非癌胰腺之间3种蛋白表达均有显著性差异(P<0.05),胰腺癌中Smad4与p21wafI表达之间有一定相关性(P<0.05),Smad4与p16表达之间有一定相关性(P<0.05),但p21wafI与p16表达之间无显著相关(P>0.05)。结论:胰腺癌与正常胰腺相比,Smad4、p21wafI、p16蛋白表达明显下降,其改变在胰腺癌的发生发展中可能起重要作用。

fascin蛋白在结、直肠腺瘤和癌中的表达及意义

目的探讨fascin蛋白在结、直肠腺瘤和癌中的表达及其临床病理意义。方法用免疫组化方法检测41例结、直肠癌,38例腺瘤及20例正常上皮中fascin蛋白的表达。肿瘤细胞染色>5%的病例定为阳性。结果41例结、直肠癌中有17例(41·5%)表达,而且fascin蛋白的表达和浆膜侵犯(P=0·005)、肿瘤分级(P=0·002)、TNM分期(P=0·011)、淋巴结转移(P=0·011)、p53表达(P=0·047)及Ki-67表达(P=0·034)等因素相关,与年龄、性别、组织学类型无关。27例中、重度异型增生腺瘤中仅3例(11·1%)表达,11例轻度异型增生腺瘤及正常上皮均不表达。结论在结、直肠癌的多步发生过程中,fascin蛋白表达看来是一迟发事件,通常在癌中表达,并与肿瘤侵袭和转移相关,有可能成为新的治疗靶点。

MMP2、MMP9、Galectin-3、CK19、及Ret在甲状腺滤泡型肿瘤中的表达

目的 探讨MMP2、MMP9、Galectin 3、CK19和Ret在甲状腺良、恶性滤泡型肿瘤中的表达情况 ,以及其在病理诊断中的价值。方法 运用免疫组化方法检测 35例甲状腺滤泡癌、36例甲状腺腺瘤MMP2、MMP9、Galectin 3、CK19和Ret的表达情况。结果 MMP2和MMP9在甲状腺滤泡癌表达阳性率为 10 0 % ,而在甲状腺腺瘤中表达分别为 2 7.8%及 4 7.2 % ,二者在良、恶性肿瘤的表达差异极显著 (P <0 .0 1)。Galectin 3表达阳性率分别为 4 8.6 %及13.9% (P <0.0 5 )。CK19在甲状腺滤泡癌中阳性有所增高 ,但与腺瘤比较表达无差异。Ret几乎不在甲状腺滤泡型肿瘤中表达。同时观察 15例甲状腺滤泡癌癌旁组织 ,5种蛋白均不表达或表达甚少。结论 MMP2、MMP9及Galectin-3在恶性甲状腺滤泡型肿瘤中的表达高于良性 ,可能三者与促进甲状腺滤泡型肿瘤的浸润机制有关 ,其免疫组化染色虽无绝对特异性 。

肾球旁细胞瘤2例临床病理探讨

目的分析肾球旁细胞瘤的临床病理特征,探讨其生物学行为及预后因素。方法采用光镜和免疫组化方法,结合临床资料对比研究2例肾球旁细胞瘤的临床病理特点。结果 2例肾球旁细胞瘤患者均为男性,年龄分别为46岁和9岁,有高血压症状;均行肾部分切除术,术后随访1～6个月,无复发或转移。肿瘤位于肾皮质,直径2 cm,界清。例1具有典型的良性肾球旁细胞瘤特征,即瘤组织实性、片状分布,细胞呈圆形,大小较一致,胞质淡染或弱嗜酸性,胞核呈圆形或椭圆形,染色质细腻,缺乏核分裂;间质毛细血管和血窦丰富,透明变性的厚壁血管呈簇状分布。例2则由椭圆形、多角形、梭形及带状细胞构成,核异型性明显,核分裂8～10个/10HPF,可见病理性核分裂;部分区域呈席纹状或旋涡状生长。免疫组化示肿瘤细胞vimentin和CD34弥漫强(+),SMA不同程度(+);例1和例2的Ki-67指数分别为<1%和20%。结论肾球旁细胞瘤是一种良性肿瘤,少部分病例为恶性潜能未定。提示恶性潜能的临床病理指标包括血管或包膜浸润、肿瘤体积大、高核分裂象及年长或年幼患者。明显核异型对预后的影响尚不确定。

原发性心滑膜肉瘤4例临床病理分析

目的报道4例原发性心滑膜肉瘤，并总结分析此类疾病的临床病理特征。方法通过光镜、免疫组化及荧光原位杂交技术（FISH）分析其临床病理特征及免疫组化特点。结果本组4例心滑膜肉瘤年龄22～52岁，平均41岁；男女之比为1：3，均无滑膜肉瘤病史。1例有吸烟史。4例肿瘤最大径6～24cm，平均12．5cm；2例肿瘤位于心包，1例位于心房，1例位于心室。均行肿瘤局部切除术。镜下检查3例为单相型滑膜肉瘤，1例为双相型滑膜肉瘤。4例随访1天～24个月，3例死亡，1例存活。免疫组化：4例AEl／AE3、EMA、vimentin和bcl-2均（＋），3例CD99（＋），3例calponin（＋），1例S-100散在（＋）；4例desmin、SMA、CD34和calretinin均（-）；Ki一67阳性指数5％～35％，平均18％。结论原发性心滑膜肉瘤比较少见，诊断应首先排除转移性。单相型滑膜肉瘤较双相型多见，心包为最常见部位。原发性心滑膜肉瘤预后较差，特别是心包滑膜肉瘤预后极差，术后放、化疗有助于延长生存时间。

细针穿刺诊断甲状腺朗格汉斯细胞组织细胞增生症细胞病理学探讨

目的探讨细针穿刺诊断甲状腺朗格汉斯细胞组织细胞增生症（LCH）的细胞病理学特点及鉴别诊断要点。方法对4例甲状腺LCH的细针穿刺进行常规涂片并观察细胞学特点、沉渣包埋及免疫组化标记,对其中3例行BRAF V600E突变检测。结果 4例均为男性,发病年龄8~40岁,均为系统性LCH累及甲状腺,其中1例合并甲状腺乳头状癌。涂片见大量单个散在或松散聚集的组织细胞,细胞核略增大,核膜不规则,可见明显纵行核沟,核仁不明显,核分裂象少见。背景中嗜酸性粒细胞数量不等。免疫组化示肿瘤细胞S-100、CD1a和CD68（＋）,TTF-1和AE1/AE3（-）。基因突变检测BRAF V600E突变（-）。结论甲状腺LCH少见,临床表现不典型,细胞学形态易混淆,术前诊断难度高。诊断与鉴别诊断的关键在于对该疾病的认识及免疫组化的应用。

Survivin在人结直肠腺瘤和腺癌组织中的表达

目的研究Survivin(SVV)在人结直肠腺瘤和腺癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学方法检测90例结直肠腺瘤、25例结直肠腺瘤伴重度不典型增生和108例结直肠腺癌组织中SVV、P53和Bcl-2的表达情况。结果SVV在结直肠腺管状腺瘤、绒毛状腺瘤、绒毛腺管状腺瘤等结直肠腺瘤组织中的表达率分别为30%(12/40)、40.9%(9/22)和35.8%(10/28),3组间差异无显著性(P>0.05)。SVV在绒毛腺管状腺瘤组织伴重度不典型增生组织,DukesA、B、C期结直肠腺癌组织中的表达率分别为68%(17/25)、75%(27/36)、81.3%(26/32)和95%(38/40),均明显高于结直肠腺瘤各组(P<0.05)。P53和Bcl-2在上述各组病例组织中的表达差异均无显著性(P>0.05)。SVV的高表达与Bcl-2和P53表达无相关性(P=0.487,P=0.437)。结论SVV在结直肠癌发生早期即有表达异常,可能与结直肠腺瘤癌变具有一定关系。SVV表达对结直肠腺瘤和腺癌的鉴别诊断具有一定意义。

人乳腺珠蛋白在乳腺癌中的表达

目的探讨人乳腺珠蛋白(mammaglobin A,MGA)在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化EnVision法检测MGA在87例原发性乳腺癌及其癌旁乳腺组织、20例转移性乳腺癌中的表达,并观察其与临床病理指标的关系。结果MGA在87例原发癌和癌旁乳腺组织的阳性率分别为70.1%和74.7%(P>0.05),但原发癌中强阳性者显著高于癌旁乳腺(P<0.01)。MGA的表达与淋巴结转移、ER和PR状态有显著相关性(P<0.05)。MGA在原发或转移癌的不同年龄组、组织学类型、组织学分级、TNM分期、c-erbB-2中的表达差异均不显著。结论MGA表达于原发和转移乳腺癌,可用于临床病理辅助诊断。MGA表达与腋窝淋巴结、ER和PR状态相关,可用于辅助判断预后。

母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤5例临床病理分析

目的探讨母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤的临床病理学特征。方法应用光镜及免疫组化法观察5例母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤的组织学特点及免疫表型,并复习相关文献。结果 5例中3例为男性,2例为女性,年龄分别为53、72、40、14及15岁。5例病变均以皮肤斑块或结节为首发表现,并均累及骨髓,其中1例累及淋巴结。皮肤病变显示肿瘤细胞在真皮弥漫分布,不累及表皮。肿瘤细胞中等大小,核圆形或椭圆形,染色质细腻。5例均表达CD56、CD123、CD43,3例表达CD4;5例均不表达CD8、Td T及EBER。5例均行化疗,1例死亡,2例放弃治疗后失访,2例健在。结论母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤是一种罕见的肿瘤,具有独特的临床病理特点,诊断依靠病理组织学及部分辅助方法。

胸腔积液诊断间变性大细胞淋巴瘤细胞病理学探讨

目的报道1例胸腔积液诊断间变性大细胞淋巴瘤并进行文献复习,以加强对淋巴瘤细胞学诊断的认识。方法胸腔积液常规细胞学涂片、沉渣包埋,结合免疫组化染色及T细胞受体基因重排,从细胞学角度明确诊断间变性大细胞淋巴瘤。结果胸腔积液涂片中细胞丰富,可见大量散在分布的肿瘤细胞有3种:单核、双核和多核细胞;单核淋巴细胞核浆比高,核呈肾形,核仁明显;多核细胞核排列成花环状或马蹄形,可见多个核仁;双核细胞类似霍奇金淋巴瘤中的R-S细胞。肿瘤细胞胞质丰富,嗜酸性,胞质内可见空泡。背景可见小的成熟淋巴细胞及间皮细胞。沉渣包埋免疫组化示CD30、ALK、CD68、granzyme B和CD4(+),CD15和MUM1(-);散在瘤细胞CD5(+),CD3、CD8和CD20、CK5/6、calretinin和pan-CK(-)。颈部淋巴结活检证实为间变性大细胞淋巴瘤。T细胞受体基因重排为(-)。结论胸腔积液诊断间变性大细胞淋巴瘤少见,难度高。诊断对免疫组化的依赖程度较高。