CAR-T细胞治疗后复发/难治性多发性骨髓瘤患者的临床特征

目的分析嵌合抗原受体T(chimeric antigen receptor,CAR-T)细胞治疗后复发/难治多发性骨髓瘤(relapsed/refractory multiple myeloma,RRMM)患者的临床特征,初步探索此类患者未来可能的治疗策略。方法以2020年1月至2024年6月在首都医科大学附属北京朝阳医院住院治疗的RRMM患者为研究对象,分析CAR-T细胞治疗后复发的临床特征及生存情况。结果共收集14例符合条件的RRMM患者,均接受靶向BCMA的CAR-T细胞治疗,中位无进展生存时间为17个月(范围:3~47个月)。疾病复发进展时,1例仅表现为髓外复发,2例继发浆细胞白血病,11例为髓内复发;7例检查细胞遗传学,其中4例患者存在1个高危基因,1例患者存在2个高危基因。首次挽救治疗中,常用药物包括达雷妥尤单抗(6例)、泊马度胺(5例)、卡非佐米(3例),3例患者入组临床试验。13例患者可评价疗效,总有效率为61.5%(8/13),其中完全缓解率为30.8%(4/13),非常好的部分缓解率为23.1%(3/13)。中位随访时间为15个月(范围:1~32个月),中位无进展生存时间为7个月。截至末次随访,死亡6例,中位总生存期为32个月;1例患者出现第二肿瘤,类型为肺癌。结论接受CAR-T细胞治疗后RRMM患者常见多类药物耐药,挽救治疗疗效及预后不佳。

空间环境对黑色素瘤B16细胞致瘤基因和蛋白质表达的影响

初步探讨了空间环境对黑色素瘤B16细胞致瘤基因和蛋白质表达的影响。选择经第20颗返回式卫星搭载的B16细胞,进行体外和体内实验后,筛选出性状变异明显的空间诱变B16细胞株,检测空间诱变B16细胞基因和蛋白质表达的变化。将筛选出的空间诱变B16细胞接种于C57BL/6小鼠,2周后,处死荷瘤小鼠,取出移植瘤,利用免疫组化方法,检测接种空间诱变B16细胞的荷瘤小鼠移植瘤细胞Melan-A和VEGF蛋白的表达情况;利用RT-PCR方法,检测蛋白质水平上表达变化明显的空间诱变B16细胞melan-a,gp100,bag-3和l-pgds基因的表达情况。与对照细胞相比,1株空间诱变B16细胞荷瘤小鼠移植瘤细胞Melan-A和VEGF蛋白表达明显增加,其他细胞2种蛋白质的表达无明显变化。RT-PCR结果显示:此株细胞的melan-a,gp100和l-pgds基因表达增加,bag-3基因表达降低。空间环境的复合因素可诱导B16细胞基因和蛋白质表达产生变化。

空间环境对黑色素瘤B16细胞体内增殖及免疫原性的影响

初步探讨空间环境对黑色素瘤B16细胞增殖及免疫原性的影响。选择4株经体外实验筛选出生物学性状变异明显的第20颗返回式卫星搭载的空间培养B16细胞,检测其体内增殖能力及免疫原性的变化。将筛选出的4株空间培养B16细胞接种于C57BL/6小鼠,其中一组接种于腹腔,观察荷瘤小鼠生存期;另一组接种于腋下皮肤,检测小鼠出瘤时间。接种至2周时,处死,分离荷瘤小鼠移植瘤和血清。称重荷瘤小鼠移植瘤,观察空间培养B16细胞增殖能力;利用HE染色法观察荷瘤小鼠移植瘤切片细胞形态;采用放射免疫分析法(Radioimmunoassay,RIA)测定荷瘤小鼠血清白介素-2(InterLeukin-2,IL-2)浓度,观察空间培养B16细胞免疫原性变化情况。与对照细胞相比,1株空间培养B16细胞的荷瘤小鼠生存期明显缩短,出瘤时间明显延长。HE结果显示:此株空间培养B16肿瘤组织内有淋巴细胞浸润;RIA结果显示:3株空间培养B16细胞荷瘤小鼠血清IL-2浓度明显增加。空间环境的复合因素可诱导B16细胞增殖能力及免疫原性产生变化。

空间环境对离体动物细胞的影响

空间环境是指远离地球表面的宇宙环境,它与地球表面环境有所不同,处于其中的动物细胞可能受到各种影响。空间环境中的主要因素包括空间辐射、极端温度、高真空、微磁场以及搭载动物细胞的航天器中的特殊环境——微重力环境。其中,对动物细胞影响最大的是空间辐射和微重力环境。空间辐射作用于动物细胞将直接造成其损伤,影响它的结构和功能;空间微重力条件下,动物细胞的结构、增殖和基因及蛋白质表达均发生明显变异,这些变化大多是适应性的,返回地球表面后能够很快恢复正常。

多发性骨髓瘤患者骨病自我管理调查及护理干预实践

目的:探讨多发性骨髓瘤(MM)患者骨病自我管理状况,分析其影响因素,并制定干预对策。方法:以我院临床确诊伴有骨病的321例MM住院患者为研究对象,在患者第一次住院时采用访谈法收集患者骨病相关资料并填写调查表,对调查的结果进行分析,根据分析结果,制订护理对策。患者第二次住院时再次调查同样内容,与第一次住院时调查结果进行比较。结果:多发性骨髓瘤患者骨病患者自我管理能力与年龄、文化程度等因素有关(P<0.01)。经过护理指导后,对骨病的认识程度、药物治疗的依从性及饮食习惯的改变、日常运动等方面均有了明显提高。结论:在对MM伴骨病患者的管理过程中,应结合患者的实际情况为不同层次的患者提供相应的疾病信息,以有针对性地提高患者的自我管理能力,改善健康状况。

多发性骨髓瘤患者血清中VEGF水平的临床意义

本研究探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)与多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)临床分型及疗效的关系,分析其临床意义。用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测76例MM患者血清VEGF浓度,分析其与MM患者年龄、临床分期、分型、疗效的关系。结果表明,与老年组(>65岁)相比,年轻组(≤65岁)患者血清VEGF水平较高,但两者之间无显著差异(P>0.05)。IgG型患者血清VEGF水平最高,轻链型次之,IgA型最低,但各组之间无显著差异(P>0.05)。DS分期Ⅲ期患者血清VEGF水平较Ⅱ期患者有增高趋势,但两者间差异无显著性(P>0.05)。ISS分期Ⅰ期患者VEGF水平较Ⅱ/Ⅲ期患者低,但也未见明显差异(P>0.05)。MM患者经治疗后,获得完全缓解(complete remission,CR)或非常好的部分缓解(very good partial remission,VGPR)的患者VEGF水平较治疗前有所降低,而获得PR以下疗效患者的VEGF水平则较治疗前有所升高。根据VEGF的血清水平(≤150 ng/L)将患者分为2组,2组之间中位生存期(overall survival,OS)存在明显差异(P<0.05),VEGF水平高的患者生存期明显缩短。结论:MM患者血清VEGF水平与患者年龄、分期和分型无明确关系,但与MM患者疗效及生存期具有相关性,是MM患者的危险预后因素。

VRD与VCD方案诱导治疗后序贯自体造血干细胞移植对新诊断的多发性骨髓瘤患者的疗效分析

目的评价硼替佐米+来那度胺+地塞米松(bortezomib-lenalidomide-dexamethasone,VRD)与硼替佐米+环磷酰胺+地塞米松(bortezomib-cyclophosphamide-dexamethasone,VCD)两种诱导治疗方案对接受自体造血干细胞移植(autologous stem cell transplantation,ASCT)的多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者的疗效、干细胞采集和预后的影响。方法回顾性分析首都医科大学附属北京朝阳医院自2010年10月至2019年10月间接受VRD(39例)或VCD(71例)方案诱导治疗后序贯自体外周血干细胞移植、长期随访并且资料完整的110例MM患者的临床数据。对采用两种方案的两组患者进行疗效评估和生存分析。并分析对细胞采集的影响。结果两组患者移植后,缓解深度和二代流式法所测得的微小残留病(minimal residual disease,MRD)阴性率均得到了提高。与移植前相比,VCD组移植后3个月的完全缓解(complete response,CR)/严格意义完全缓解(stringent complete response,sCR)率从39.4%提升至59.1%(P=0.001),MRD阴性率从16.7%提高至41.7%(P=0.003)。而VRD组的CR/sCR率从51.2%提升至67.6%(P=0.008),MRD阴性率也由26.1%提高至47.8%(P=0.059)。具有高危细胞遗传学[t(4;14),t(14;16)和del(17p)]的患者也可达到相似的疗效。在生存时间方面,VCD组的中位无进展生存期(progression-free survival,PFS)与总体生存期(overall survival,OS)分别为72.0个月与98.0个月,而VRD组的中位PFS及OS均尚未达到(PFS:P=0.856;OS:P=0.382)。VRD组采集CD34^(+)细胞数显著低于VCD组(3.52×10^(6)/kg vs 4.65×10^(6)/kg,P=0.046),但两组间动员失败患者数差异无统计学意义。VRD方案诱导治疗超过4个疗程后,采集的CD34^(+)细胞数即有下降趋势,而VCD方案诱导治疗3~6个疗程对CD34^(+)细胞数无明显影响。结论与VCD方案相比,VRD方案诱导治疗能够达到更深层次的缓解,但对生存并无显著影响。VRD方案的诱导治疗疗程数对干细胞的采集数量有一定影响,其采集干细胞前疗程数不宜超过4个。

不同热剂量局部热疗对小鼠黑色素瘤的疗效及其抗肿瘤免疫激发作用的比较研究

目的探讨既能有效杀伤肿瘤细胞又能最大限度激发抗肿瘤免疫的最适热剂量。方法体外实验采用MTT法检测不同热剂量(43℃30min和55℃10min)单次热疗及间隔24、48、72h的两次热疗对肿瘤细胞的杀伤作用。体内实验采用电热光聚焦加热灯对荷瘤小鼠移植瘤进行43℃及55℃局部热疗,观察不同热剂量对荷瘤小鼠的肿瘤生长、T细胞亚群及白细胞介素2(IL-2)的影响。结果体外实验显示热处理各组细胞存活率均明显降低,尤以55℃热疗最为显著。除了间隔72h的43℃两次热疗组外,重复热疗后细胞存活率均明显降低(P=0.000)。体内实验显示,肿瘤局部常规温度热疗(43℃30min)不能有效抑制荷瘤小鼠移植瘤生长,而高热热疗(55℃10min)在持续24天的观察中,与对照组和43℃热疗组相比肿瘤生长被明显抑制(P<0.05),且外周血CD4+T淋巴亚群比例和CD4+/CD8+比值以及IL-2水平均明显升高(P<0.05)。结论高温局部热疗较常规温度热疗更能有效地抑制肿瘤生长,并激发更强的抗肿瘤免疫。

不同临床分期骨髓瘤的C-MYC蛋白和MDSC、Th17细胞与发病的相关性

目的:探究不同临床分期骨髓瘤的C-MYC蛋白和髓系来源的抑制性细胞(myeloid derived suppressor cell,MDSC)、Th17细胞与发病的相关性。方法:选取院内收治的65例多发性骨髓瘤患者作为MM组,另选30名健康者作为对照组。比较2组骨髓组织C-MYC蛋白的阳性表达率和外周血MDSC细胞比例以及Th17细胞比例,分析不同ISS分期MM患者的C-MYC蛋白和MDSC、Th17细胞与发病的相关性,C-MYC蛋白表达情况与MDSC、Th17细胞比例情况及MM临床参数的关系。比较单一与联合诊断的诊断价值。结果:MM组患者骨髓组织中C-MYC蛋白阳性表达率和外周血MDSC与Th17细胞比均显著高于正常对照组(P<0.05);ISSⅠ、Ⅱ、Ⅲ期MM患者CMYC蛋白阳性表达率及MDSC和Th17细胞均呈升高趋势(r=0.432,r=0.401,r=0.351);MM患者的MDSC、Th17细胞比例均与C-MYC蛋白阳性表达率均呈正相关关系(r=0.415,r=0.417);联合诊断的ROC曲线下面积(AUC)均显著大于单一指标诊断(C-MYC蛋白、MDSC细胞、Th17细胞)的ROC曲线下面积(P<0.05);MM患者C-MYC蛋白表达MDSC/Th17细胞比与性别、年龄均无相关性(P>0.05)。结论:MM患者C-MYC蛋白阳性表达率和MDSC、Th17细胞比例均显著升高,并与临床ISS分期呈一定正相关。

空间环境对恶性黑色素瘤B16细胞间通讯功能的影响

观察空间诱变后恶性黑色素瘤B16细胞株的细胞间通讯功能及细胞间黏附能力的变化,并探讨可能的机理。应用细胞低温长期生存系统,将B16细胞株搭载于“第20颗返回式卫星”,返地后单克隆化,从得到的110株单克隆空间诱变B16细胞株中随机选取6株,编号为39#～44#,常规培养6代后和对照细胞株同时做MTT和FCM,检测细胞增殖和周期分布;用划痕标记染料示踪技术检测细胞间通讯功能;将有变异的细胞接种C57BL/6J小鼠,免疫组化观测CD31蛋白的表达量。初步筛选出两株(39#、44#)变化比较明显的细胞株,44#细胞增殖能力降低、G1期分布增加、细胞间通讯功能增强、CD31蛋白表达增强;39#细胞增殖能力升高、G1期分布减少、细胞间通讯功能减弱、CD31蛋白表达减少。空间环境的作用使体外培养肿瘤细胞产生多向变异,有可能筛选出有意义的细胞株做进一步的研究。

空间诱变肿瘤细胞的初步实验

目的利用空间环境诱变细胞 ,探索肿瘤免疫治疗新途径。方法将肿瘤细胞无源搭载于神舟 4号飞船与第 18颗返回式卫星 ,分别经 7d和 18d的空间飞行 ,回收后对一些生理特征进行了初步研究。结果搭载于神舟 4号飞船的肿瘤细胞经单克隆化后 ,获得诱变细胞 2 3 82株 ,第 18颗返回式卫星搭载 4株肿瘤细胞 ,但仅存活 1株B16细胞。与地面对照组相比 ,空间诱变肿瘤细胞生长速度减慢 ,细胞因子分泌改变。结论空间环境可影响肿瘤细胞的生理特征 ,而且细胞存活的数量有与搭载时间长短呈负相关的趋势。

小鼠黑色素瘤B16细胞空间无源搭载条件的筛选

目的筛选小鼠黑色素瘤B16细胞无源搭载的最佳条件。方法将小鼠黑色素瘤B16细胞纯化后接种在微载体上 ,按不同细胞浓度、血清浓度、微载体量和温度分组。 3 3d后 ,Giemsa染色 ,光境下观察 ,计算细胞存活率。结果细胞存活率 8%和10 %的两组为最佳条件。利用所选条件 ,将细胞搭载于第 2 0颗返回式卫星 ,空间飞行 18d ,细胞返回后 ,经单克隆化 ,获得 110株单克隆细胞 ,存活率为 1 1%。结论筛选出B16细胞无源搭载的最佳条件 ,实际空间飞行表明细胞在空间中的存活时间和生存率满意。

空间环境中丹参酚酸B镁对人主动脉内皮细胞的保护作用

探讨中药丹参酸B镁在空间环境下对接种低温细胞生存系统中人主动脉内皮细胞的作用,为预防空间环境对宇航员心血管功能的损伤提供依据。将人主动脉内皮细胞加入丹参酚酸B镁接种于低温细胞生存系统中,搭载于第22颗返回式卫星。经过18d空间飞行,将回收卫星返回后的细胞进行第17,24,30d光镜照相,Giemsa染色及细胞计数。结果显示:加药组的细胞在形态上及增殖数目上均优于对照组,表明丹参酚酸B镁能够改善空间环境中人主动脉内皮细胞的生存状况,减轻宇宙射线、微重力、微磁场对细胞的损伤程度。

鬼臼乙叉甙对肺癌A549细胞生长特性及Fas/FasL表达的影响

目的:研究Vp16对人肺腺癌A549细胞生长特性及Fas/FasL表达的影响。方法:用MTT法检测细胞增殖特性,FCM观察细胞周期及凋亡,RT-PCR测定mRNA表达的变化。结果:Vp16以时间和剂量依赖方式作用于A549细胞的增殖;不同浓度的Vp16作用A549细胞,使其阻断在不同的细胞周期,且均能明显下调FasL的mRNA的表达(P<0.05),而对FasmRNA的表达差异无显著性意义(P>0.05)。结论:Vp16直接作用A549细胞主要引起细胞坏死,Vp16可能通过下调FasL的mRNA的表达,防止肿瘤细胞免疫逃逸,该结果为临床合理联合用药提供了实验依据。

空间诱变致成瘤性减弱的B16细胞株形态学观察

观察动物接种实验致瘤性显著减弱的空间诱变小鼠黑色素瘤B16细胞株的细胞形态、细胞骨架和表面结构与对照细胞株的差异。分别使用激光共聚焦显微镜观察筛选所得阳性细胞株与对照细胞株,以及用荧光素标记的鬼笔环肽染色,观察细胞骨架的异同。应用原子力显微镜(AFM)对筛选所得阳性细胞株和对照细胞株分别成像,观察空间诱变细胞株与对照组细胞株所得图像的差异。激光共聚焦显微镜观察结果显示,从空间诱变细胞株中筛选出的8#细胞株的细胞骨架荧光较对照组增强,细胞骨架纤维比对照组粗大。AFM图像显示,8#细胞株分泌的纤维粘连蛋白的纤维形态和分布与对照组细胞有较大差异,其纤维较为扁平、走行弯曲或呈轻度迂曲状;对照组细胞纤维呈山脊状、放射状,源自细胞伪足部细胞膜。在8#细胞株图像中有少量“孔洞”样结构,而在对照组细胞中未观察到类似结构。

新型低温细胞生存系统用于太空无源搭载可行性分析

目的:探讨新型低温细胞生存系统用于太空无源搭载的可行性。方法:小鼠黑色素瘤B16细胞在低温细胞生存系统培养26天,利用光镜、MTT法、FCM观察细胞的生理特性;荷瘤小鼠观察致瘤性及对免疫系统的影响。结果:新型低温系统使细胞生理特性有一些改变,此变化是可逆的;对细胞的形态、致瘤性及免疫系统没有显著影响。结论:此系统是目前最简单、易行的无源搭载装置,适合于研究空间生物学效应。

国产硼替佐米(昕泰■)治疗多发性骨髓瘤的临床疗效及安全性

目的评价以国产硼替佐米(昕泰■)为基础的方案治疗多发性骨髓瘤的临床疗效和安全性。方法选择在首都医科大学附属北京朝阳医院接受以国产硼替佐米(昕泰■)为基础方案治疗的多发性骨髓瘤患者为研究对象,分析患者的临床疗效及不良反应发生情况。结果本研究共纳入117例多发性骨髓瘤患者,其中新诊断80例,复发/难治37例。中位治疗4个疗程(范围:1~11个),总有效率(ORR)为72.6%(85/117),其中新诊断多发性骨髓瘤患者ORR为91.3%(73/80),复发/难治多发性骨髓瘤患者的ORR为32.4%(12/37)。不良反应均以1~2级为主,其中血液学不良反应主要为白细胞减少和血小板减少,发生率分别为35.0%(41/117)和32.5%(38/117);非血液学不良反应主要为周围神经病变和胃肠道反应,发生率分别为32.5%(38/117)和53.0%(62/117)。结论国产硼替佐米(昕泰■)适宜用于新诊断多发性骨髓瘤患者一线治疗,疗效和耐受性良好,长期疗效尚需进一步随访,但复发/难治多发性骨髓瘤患者的临床疗效欠佳。

空间环境对恶性黑色素瘤血管生成拟态的影响

观察空间诱变后恶性黑色素瘤B16细胞株的在小鼠体内肿瘤组织中血管生成拟态数目的改变,并探讨可能的机理。应用细胞低温长期生存系统,将B16细胞株搭载于中国第20号返回式卫星,返地后单克隆化,从得到的110株单克隆空间诱变B16细胞株中随机选取7株,编号为38#～44#,常规培养6代后和对照细胞株在荧光倒置显微镜下观察肿瘤细胞的形态;同时采用MTT(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,又称噻唑蓝)法,检测细胞增殖情况,将增殖差异较大的39#和44#细胞株接皮下种于C57BL/6J小鼠,两周后颈椎脱臼法处死小鼠,取出瘤体,经福尔马林固定后,采用CD31和PAS套染的方法观测肿瘤组织血管生成拟态的情况,并推测其与肿瘤生长速度和转移可能关系。