实体瘤三级淋巴结构检测与判读

肿瘤的发生过程复杂多变,针对肿瘤的治疗手段不断在发展。免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitors,ICIs)在大量实体瘤中获得了持久反应[1]。然而,并非所有患者均能从中受益,这就需要可靠的生物学标志物来筛选适宜人群和预测免疫治疗疗效。三级淋巴结构(tertiary lymphoid structures,TLSs)是位于肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)中的异位淋巴组织,主要是以聚集成团的B细胞为核心,外周围绕T细胞,形成滤泡样结构。此外,成纤维细胞形成的基质网络提供了TLSs发生的结构支撑,位于外周的高内皮微静脉(high endothelial venules,HEVs)作为一种特化的血管通过招募淋巴细胞聚集提供了TLSs发生的启动基础。树突状细胞(dendritic cells,DCs)、滤泡树突状细胞(follicular dendritic cells,FDCs)、巨噬细胞、中性粒细胞以及浆细胞也分布于TLSs中[2]。不同细胞可被不同的标志物染色,用于TLSs的鉴定和识别。近年国内外的研究结果证实,实体瘤TLSs的形成象征免疫细胞的浸润及对肿瘤杀伤作用的增强,是免疫治疗的重要组成部分,与免疫治疗的疗效和患者预后密切相关[2]。基于其对肿瘤免疫治疗的预测作用,TLSs已成为生物学标志物研究的热点之一,但仍缺乏完善统一的TLSs病理评估方法。因此,亟需提高对TLSs检测与判读的认识,本文将对此进行系统阐述,以增加病理医师在工作实践中的理解与共识。

大肠癌及癌旁组织中Bim、Bax、bcl-2的表达及意义

目的检测Bim、Bax和bcl-2在大肠癌及癌旁组织中的表达情况及其临床意义。方法选择98例大肠癌及相应距癌组织5 cm外的正常组织构建组织芯片,采用SP免疫组化法检测癌及癌旁组织中Bim、Bax、bcl-2基因的表达情况。结果Bim和Bax在大肠癌中的阳性表达率(28.57%,23.47%)明显低于癌旁(98.97%,98.97%)。bcl-2在癌组织的阳性表达率(79.80%)较癌旁(25.51%)高。bcl-2过度表达与大肠癌的浸润深度、淋巴结转移及临床分期有关;Bim表达下降或完全丧失与浸润深度、淋巴结转移及临床分期有关;Bax表达降低与组织分化、淋巴结转移及临床分期有关。相关分析表明Bim与Bax的表达呈正相关,与bcl-2的表达呈负相关。结论Bim、Bax与bcl-2在大肠癌的发生发展中起重要作用。Bim对bcl-2的抑凋亡功能有对抗作用,对Bax的促凋亡功能有协同作用。

胰腺浆液性微囊性腺癌临床病理观察

目的报道1例罕见的胰腺浆液性微囊性腺癌,并结合WHO(2000)胰腺肿瘤病理学和遗传学分类对浆液性微囊性肿瘤进行介绍。方法对1例胰腺浆液性微囊性肿瘤进行临床病理分析及免疫组化观察。结果肿瘤位于胰尾,与脾分界不清,侵及胃壁、脾并与脾动、静脉粘连。肿瘤由大量微小的囊组成,呈海绵状,囊腔内充满蛋白性质的液体,囊内壁衬以单层排列的扁平-立方上皮细胞,胞质透明,核小、圆形,无异型,脾内、脉管周围及胃壁平滑肌间均可见肿瘤浸润。结论浆液性囊腺癌组织学特征与浆液性微囊性腺瘤极其相似,侵袭和转移等恶性生物学行为是其诊断恶性的要点,但其生长缓慢,切除肿瘤治疗效果好。

复发直肠癌切端的细胞增殖动力学分析

目的:对60例直肠癌Dixon术后切端组织的细胞增殖状态进行研究,旨在探讨细胞增殖动力学在Dixon术后复发中的作用。方法:切取石蜡包埋组织,加入二甲苯脱蜡,梯度乙醇脱苯。水化后加入胃蛋白酶消化,过滤后离心,弃上清进行碘化丙啶染色,应用流式细胞术(FCM)对直肠癌组织及切端的DNA指数(DI)、S期细胞百分比(SPF)、细胞增殖指数(PI)进行检测。结果:未复发组切端DI为1.09±0.03,SPF为4.18±1.32,PI为8.69±2.13。复发组切端DI为1.23±0.11,SPF为10.98±3.12,PI为14.13±3.67。经统计学t检验复发组与未复发组切端两组间SPF及PI均可见显著性差异(P<0.01)。结论:细胞增殖动力学可作为大肠癌复发的一个重要因素。手术范围除考虑肠壁内浸润距离外,还应包括切除全部癌周围高增殖活性的粘膜组织。

膀胱浆细胞样变异型尿路上皮癌临床病理观察和不同分子质量角蛋白的表达

目的探讨膀胱浆细胞样变异型尿路上皮癌的临床病理特征、诊断及不同分子质量细胞角蛋白的表达模式。方法运用光镜、特殊染色及免疫组化染色对1例罕见的浆细胞样变异型尿路上皮癌进行观察并复习文献。结果瘤细胞弥漫分布呈浆细胞样特征，细胞胞质透亮或嗜酸性，核增大、偏位、深染。瘤细胞弥漫浸润黏膜固有层及浅肌层，可见伴随的低级别非浸润性尿路上皮癌成分。特殊染色：瘤细胞AB／PAS（＋）。免疫组化：CK20和CK7（＋＋），CK5／6（-／＋），CK8／18、CK18、CEA、CD138、EMA和AE1／AF3（＋），E-cadherin、p63、CD38、LCA和vimentin（-）。结论浆细胞样变异型尿路上皮癌罕见，其不同分子质量角蛋白的表达存在差异，因其具有浆细胞样特征需与其他肿瘤相鉴别。

人消化道癌裸鼠移植瘤株及体外细胞系的建立

目的 利用裸鼠建立人消化道癌的移植瘤株。利用荷瘤鼠皮下移植瘤组织建立人消化道癌的细胞系。方法 将手术切除的新鲜肿瘤组织剪碎后植入BALB/C裸鼠皮下成瘤。将荷瘤鼠皮下的肿瘤组织取出剪碎后移入培养瓶中,用含15～20％胎牛血清的1640培养基进行培养,建立体外细胞系。结果 建成消化道移植瘤株6株,其中直肠癌2株,结肠癌1株,直肠癌肝转移灶1株,胃癌1株,肝细胞癌1株。建成二例细胞系,分别为直肠癌细胞系(HRC-00)和肝细胞癌细胞系(HHC98)。结论 建成的消化道癌移植瘤株和细胞系均具有人原发癌的结构特点及生物学行为,可作为人消化道癌的体内外研究对象。

肾细胞癌微血管分布形态及定量的病理学研究

用FⅧ相关抗原免疫组化染色观察48例肾细胞癌组织内微血管的四种类型（即包绕型、乳头轴心分布型、海绵样腔隙型及弥漫裂隙型）的分布，并对其进行定量分析。结果表明：随着组织学分级的增高微血管密度增加（P＜0．01），且在组织学Ⅰ级中无弥漫裂隙型分布，而在Ⅲ级中则均为弥漫裂隙型分布。同时结果还提示，肾细胞癌微血管的密度及弥漫裂隙型分布与肾细胞癌其它脏器的血行转移关系密切。

大肠癌p27表达与细胞周期关系的研究

目的 应用流式细胞术(FCM)对60例大肠癌组织的细胞周期进行检测;同时应用免疫组化方法对其进行p27基因蛋白产物检测,以探讨p27表达与细胞增殖之间的关系。方法 应用流式细胞仪FACCS Calibur进行细胞周期检测,PI进行DNA染色,分析采用Modfit LT2.0软件。免疫组化方法为S-P法。结果 p27表达阴性者的SPF明显高于p21表达阳性者的SPF,两者间具有极显著差异。结论 p27表达水平可以作为检测大肠癌增殖活性的指标,证实p27蛋白在高增殖大肠癌细胞中的失表达。

大肠癌细胞增殖动力学与临床病理学研究

目的 应用流式细胞术(FCM)对64例大肠癌的石蜡包埋组织的DNA指数(DI)、S期细胞百分比(SPF)、细胞增殖指数(PI)进行检测,并且对上述三项指标与大肠癌的组织类型、组织分化程度、侵犯深度、转移等临床病理因素的关系进行探讨。方法 应用流式细胞仪FACS Calibur,激发波长为488nm,DNA染色试剂为PI,检测上述参数,分析采用Modfit LT2.0软件。结果 在癌组织分化低的大肠癌组中,上述三项指标均高于高—中分化腺癌组,且具有显著意义(P<0.05,P<0.01)。粘液腺癌的SPF、PI值均高于单纯腺癌组(P<0.01)。在有淋巴结转移的大肠癌中DI增高(P<0.05)。在有血行转移的大肠癌中DI及SPF、PI增高(P<0.05,P<0.01)。结论 用石蜡包埋组织进行DNA倍体及细胞周期分析的回顾性研究,能反应肿瘤的生物学特性,参数DI、SPF、PI能够为大肠癌细胞群体的增殖活性与病理因素之间相关性的研究提供依据。

人直肠癌体外培养细胞系HRC-9698的建立及其生物学特性

目的 利用人直肠癌的裸鼠皮下移植瘤组织在体外建立一人直肠癌细胞系HRC-9696,并对其一般生物学特性进行检测;方法 取人直肠癌裸鼠移植瘤组织将其剪碎后贴入培养瓶底壁上加入含20％胎牛血清的1640培养液建成人直肠癌细胞系HRC-9698,并传代。用光镜和电镜观察细胞形态、超微结构;用细胞计数和MTT方法观察细胞分裂指数、细胞生长曲线、倍增时间;用G显代方法进行遗传学分析;用放射免疫法和免疫组化方法检测CEA分泌和表达;用流式细胞术检测DNA含量和细胞周期分布。结果 HRC-9698贴壁生长形态为多边形及不规整形,核大并可见1-2个核仁;超微结构显示:细胞核大而极不规则,内有明显核仁。胞质内有大量粘液样小泡结构,在不同的细胞中,小泡的大小和数量不等,有些小泡呈极性分布。一般在小泡结构大而多的细胞中,其它细胞器较少,胞质中有较丰富的多聚核糖体(Polyribosomes),在部分细胞中可见发达的高尔基复合体(Golgi complex)。此外,在胞质中还可见少量的上皮细胞特有的张力纤维。细胞表面微绒毛较少,在细胞与细胞之间可见不典型的细胞间连接结构。细胞核分裂指数22‰～24‰,倍增时间为45～48小时。染色体均为异倍体。DNA指数为1.73,细胞周期中增殖期细胞占47.18％。细胞表达并分泌CEA。结论

大肠癌细胞增殖与p16表达关系的研究

目的 应用流式细胞术(FCM)对60例大肠癌组织的S期细胞百分比(SPF)进行检测;应用免疫组化方法对60例大肠癌p16基因产物表达进行检测,探讨p16表达与细胞增殖活性之间的关系。方法 应用流式细胞仪FACCS Calibur,激发波长488um,DNA染色试剂为PI进行检测,分析采用Modfit LT2.0软件。结果 p16表达阴性者的SPF明显高于p16表达阳性者的SPF,两者间具有极显著差异。结论 p16失表达、失活间接促进了大肠癌细胞增殖。p16表达水平可以作为检测大肠癌增殖活性的指标。

肾细胞癌组织内血管分布的形态及定量研究

用F_w相关抗原单克隆抗体进行免疫组化染色,对48例肾细胞癌组织内血管分布密度进行定量分析。结果表明,在不同的组织构型中,随着组织学分级的增高,血管密度增高,组织学Ⅰ级为20.07±11.59个;组织学Ⅱ级为39.47±16.68个;组织学Ⅲ级为69.85±20.70个。每两组间的差异均有极显著意义(P<0.01)。在细胞类型方面,透明细胞癌为37.07±16.58个;颗粒细胞癌为30.64±23.76个;混合细胞型为37.01±28.40个;多形性细胞癌为64.83±15.06个。前三者之间的血管密度无显著差异(P>0.05),而多形性则与前三种类型之间均存在显著差异,(P值分别为<0.05,<0.05,<0.05),这与多形性未分化型肾细胞癌的恶性程度较高相吻合。同时结果提示血管密度与肾细胞癌的其它脏器的血行转移关系密切,可做为肾细胞癌预后的一个重要参考因素。

肾细胞癌微血管形态特征及P_(21)蛋白的表达

应用免疫组织化学染色方法，观察４８例肾细胞癌组织内的微血管形态特征，并观察肾细胞癌Ｐ２１蛋白的表达水平。结果表明，肾细胞癌组织内的微血管形态分为４种类型（即包绕型、乳头轴心分布型、海绵样腔隙型及弥漫裂隙型），且在组织学Ⅰ级中无弥漫裂隙型分布，在Ⅲ级中则均为弥漫裂隙型分布。结果还提示弥漫裂隙型分布与肾细胞癌其他脏器的血行转移关系密切，对肾细胞癌Ｐ２１蛋白的表达水平的观察结果为阳性，占７７．０８％（３７／４８）。

三维多普勒能量成像检测卵巢肿瘤及其与病理MVD、VEGF表达的相关性研究

目的探讨三维彩色血管能量成像(3D-CPA)术前观察卵巢肿瘤的血流特点与术后病理微血管密度(MVD)及血管内皮生长因子(VEGF)的关系。方法术前应用3D-CPA观察76例卵巢肿瘤的血流信号,判断血管分级并计算肿瘤内血管指数(VI),术后病理标本应用免疫组织化学染色技术检测肿瘤内的MVD及VEGF染色强度,进行相关性分析,评价三维能量多普勒成像的病理基础。结果卵巢癌的VEGF表达强度均显著高于良性上皮性卵巢肿瘤(P<0.05),Ⅲ级血管分型的VEGF染色强度高于Ⅰ、Ⅱ级;卵巢癌的血管分级及VI与MVD有相关性(r=0.84,P<0.005)。结论血管分型、VI可用于术前间接评价肿瘤的血管生成,为卵巢肿瘤的诊断及鉴别诊断提供有价值的信息。

胃肠道间质瘤的免疫组化观察与临床病理意义的研究

目的:探讨胃肠道间质瘤(GIST)的临床病理特点以及CD117、CD34、Desmin、DOG-1、S-100、SMA的表达情况,并分析两者之间的关系。方法:用免疫组化SP法检测62例胃肠道间质瘤组织中CD117、CD34、DOG-1、S-100、SMA的表达情况,分析其与临床病理因素(性别、年龄、生长部位、肿瘤大小、核分裂相、组织学类型)的相关性。结果:62例GIST中极低度危险度13例,低度危险度17例,中度危险度13例,高度危险度19例。62例GIST中CD117阳性(93.55%,58/62),CD34阳性(82.26%,51/62),DOG-1阳性(90.32%,56/62),Desmin阳性(3.23%,2/62),SMA阳性(41.93%,26/62),S-100阳性(19.35%,12/62)。CD34的表达与肿瘤大小以及危险度有关。与DOG-1+/CD117+相比,另外两组(DOG-1+/CD34+,CD117+/CD34+)的共同阳性表达率明显降低。在GIST中,与DOG-1相比,CD117在GISTs的阳性率表达中,没有显著的统计学差异,而CD34则存在统计学差异。结论:DOG-1作为GIST的标志物,在诊断GIST方面,与CD117同样具有较好的特异性和敏感性。同时,CD117、CD34及DOG-1这三个指标对于GISTs的正确诊断以及之后的病人的个体化治疗有着指导意义。

缺氧诱导因子-1α、VEGF在进展期胃癌中的表达及意义

目的揭示进展期胃癌中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达规律,分析其与胃癌临床病理特征的关系,以探讨HIF-1α蛋白在胃癌血管形成中的作用。方法应用免疫组化方法检测50例胃癌组织HIF-1α、VEGF蛋白及微血管密度(MVD)的表达。结果胃癌组织HIF-1α蛋白与VEGF阳性表达率分别为68%(34/50)和62%(31/50),MVD平均计数为23.14±11.58;HIF-1α表达与淋巴结转移有关(P<0.05);VEGF、MVD表达与肿瘤浸润深度(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.05)和PTNM临床分期(P<0.05)密切相关;HIF-1α与VEGF表达密切相关(χ2=4.96,P<0.05);HIF-1α或VEGF表达阳性的MVD值显著高于阴性组(P<0.05)。结论HIF-1α、VEGF是反映胃癌浸润转移等生物学行为的重要指标,HIF-1α诱导VEGF表达从而促进肿瘤血管生成可能参与胃癌的进展。

AEG-1和MMP-9在上皮性卵巢癌组织中的表达及其临床相关性和病理特征

目的研究星形胶质细胞上调基因-1（AEG-1）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在上皮性卵巢组织中的表达情况、病理特征及其临床意义，为卵巢恶性肿瘤的发病原因、转移机制提供一定的理论依据。方法本研究主要通过免疫组化SP法检测病变卵巢组织，其中包括19例上皮性卵巢良性肿瘤、25例上皮性卵巢交界性肿瘤和112例上皮性卵巢恶性肿瘤中AEG-1和MMP-9的表达情况，进一步分析上皮性卵巢病变组织的相关临床和病理特征与AEG-1和MMP-9阳性表达率之间的关系。结果在卵巢癌和卵巢交界性肿瘤中AEG—1和MMP-9的阳性表达率要显著高于卵巢良性肿瘤（P〈0．01）。其中AEG—1在上皮性卵巢肿瘤组织中的阳性表达率与患者的年龄和病理类型无统计学差异（P〉0．05），而与组织分级、临床分期、淋巴结转移等有统计学差异（P〈0．05），其中卵巢肿瘤组织的分化程度低、分期晚和淋巴结转移者，AEG-1和MMP-9阳性表达率高。在卵巢恶性肿瘤中，AEG-1与MMP-9阳性表达呈显著正相关。结论AEG-1和MMP-9在上皮性卵巢癌的发生、发展中起重要的作用，可作为判断卵巢癌恶性程度、病情进展的重要指标，联合检测用于指导临床诊断有重要的意义。

Twist蛋白在胃癌中的表达及其意义

目的观察上皮-间质转化因子Twist在胃癌中的表达情况及其与病人预后的关系。方法采用免疫组化S-P法检测59例胃癌组织和15例正常胃黏膜组织中Twist蛋白的表达。结果59例胃癌组织和15例正常黏膜中Twist阳性率分别为74.6%(44/59)和0%,Twist蛋白在胃癌组织中的表达水平与病人的年龄、性别、肿瘤的大小及组织的分化程度无关。但与胃癌组织的浸润深度、淋巴结的转移情况、肿瘤的分期以及病人的五年生存情况具有显著相关性。随着胃癌组织浸润深度的加深,Twist蛋白染色阳性率逐渐上升,Twist阳性率增高提示预后不良。结论Twist蛋白的表达与胃癌侵袭转移有相关关系,并与多种临床病理因素相关,可为胃癌侵袭转移的研究和病人的预后判断提供有价值的参考。

Twist在胃癌黏膜组织的表达及在上皮间质转化中的作用

目的:观察上皮间质转化因子Twist在胃癌中的表达情况以及与胃癌恶性生物学行为的相关性。方法:采用免疫组化SP法检测59例胃癌组织中Twist,上皮源性标记物E-cadherin,间叶源性标记物Vimentin的表达,并分析与各临床病理因素之间的关系。结果:59例胃癌组织中Twist阳性表达率为74.6%(44/59),29例观察到E-cadherin表达的降低,同时7例观察到Vimentin表达上调。Twist的表达与淋巴结转移密切相关(P<0.05);而且Twist表达与E-cadherin表达降低(P<0.05)和Vimentin的表达上调(P<0.05)之间都存在相关性。结论:Twist可能通过调控上皮间质转化从而在胃癌的侵袭转移过程中发挥作用。

同种异体移植瘤在不同组织微环境中生物学行为的差异及机制

目的 分析不同的组织微环境对同种异体移植瘤生物学行为的影响因素,并探讨基质金属蛋白酶和转化生长因子β1 与移植瘤生物学行为的关系。方法 应用常规HE染色观察不同移植瘤的生物学行为表现,并应用免疫组化的方法分别检测两种瘤组织中MMP 2,MMP 9 及TGF β1 的表达情况。结果 ①不同的组织微环境同种异体移植瘤生物学行为有明显差别,皮下转移瘤表现为明显的膨胀性生长;腹腔转移瘤表现为显著的浸润性生长;②MMP 2 及MMP 9 的表达:皮下转移瘤两者均为阴性;腹腔转移瘤可见MMP 2及MMP 9阳性表达;③TGF β1 的表达:皮下转移瘤可见TGF β1 的间质型表达;腹腔转移瘤可见TGF β1 的胞浆型表达。结论 不同组织环境对同种移植瘤的浸润及转移有影响,MMP 2、MMP 9及TGF 表达可能是其中的因素之一。