冠心病患者外周血单个核细胞Toll样受体4表达的测定及临床意义

目的:观察Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)在冠心病患者外周血单个核细胞(PBMCs)的表达水平,并探讨其与冠状动脉粥样硬化发生发展的关系。方法:流式细胞术检测50例冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)患者及40例健康对照者PBMCs TLR4的表达;生化常规测定所有入选者血脂水平;应用TaqMan荧光探针技术建立实时荧光定量RT-PCR方法,在GeneAmp 5700型检测仪上测定了入选对象PBMCs中TLR4 mRNA的含量。结果:PBMCs的阳性率为(29.5±7.9)%,显著高于健康对照组的阳性率[(23.4±7.7)%,P<0.01];冠心病组TLR4 mRNA的平均拷贝数显著高于健康对照组[(5.3±3.8)×106vs(1.8±1.4)×106,P<0.01];而冠心病血脂正常组和血脂异常组的TLR4阳性率和mRNA平均拷贝数均无明显差异。结论:TLR4主要表达于外周血单个核细胞,在CAD患者中其阳性率升高;CAD患者TLR4 mRNA的含量显著高于健康对照组;TLR4的阳性率和mRNA含量高低与血脂无关;TLR4及其介导的天然免疫应答与动脉粥样硬化的发生发展存在一定的相关性。

IgD型多发性骨髓瘤患者实验室检查结果分析

目的 IgD型多发性骨髓瘤患者临床上较为少见,通过实验室检查,以求发现其特点,避免漏诊。方法分别收集20例本实验室检测到的IgD型I、gG型I、gA型I、gM型多发性骨髓瘤患者的实验室检查结果,分析IgD型与其它较为常见类型的多发性骨髓瘤患者实验室检查结果的异同。结果 IgD型多发性骨髓瘤患者的免疫球蛋白定量结果显示,IgGI、gA和IgM含量均减低者有18例占90%,其余两例3种免疫球蛋白含量处于正常下限。轻链定量发现,20例IgD型多发性骨髓瘤患者有19例为IgD型λ轻链型,占95%,而IgD型κ轻链型仅1例,且20例中有19例是轻链比值异常的。IgD型多发性骨髓瘤患者的血清蛋白电泳阳性率与其余类型无显著差异(P>0.05);免疫固定电泳显示IgD泳道有特异性的抗原抗体沉淀带。结论如实验室检查发现患者免疫球蛋白IgGI、gA和IgM含量均减低、轻链比值异常、血清蛋白电泳出现阳性条带,要高度怀疑其为IgD型多发性骨髓瘤,免疫固定电泳时务必加IgD泳道,以避免IgD型多发性骨髓瘤的漏诊。

血清淀粉样物质A研究进展

血清淀粉样物质A（serum amyloid A,SAA）是组织淀粉样蛋白A的前体物质,属于急性时相蛋白,在组织损伤和炎症反应时升高.近年来,随着对SAA的基因调控、蛋白结构及生物学功能研究的深入,发现SAA对包括急性心肌梗死、移植后急性排斥反应和病毒感染等疾病的早期诊断作用要优于C-反应蛋白（C-response protein,CRP）.SAA的临床应用研究受到学者们的广泛关注,成为新的研究热点.该文主要就SAA超家族的结构、功能以及SAA在临床疾病应用中的研究进展作一综述.

巨噬细胞在动脉粥样硬化中的作用

心脑血管疾病的发病率、病死率日趋上升，动脉粥样硬化（AS）是其病理基础，对于 AS 的发病机制学说众多，目前认为AS 是一种慢性免疫炎性疾病，天然免疫和获得性免疫在 AS的发生和发展中起重要作用。动脉粥样斑块的主要特征包括动脉壁脂质沉积和免疫细胞浸润，而巨噬细胞是首先侵入动脉粥样损伤的炎性细胞，并且是最终形成粥样斑块的主要成分。有关巨噬细胞在 AS 发生、发展各阶段的作用一直是学者们关注的焦点，现就在 AS 各个阶段巨噬细胞所发挥的核心作用，特别是在预测与巨噬细胞相关的心血管事件发生时炎性生物标志物的作用进行综述。

Toll样受体4小干扰RNA表达载体的构建及鉴定筛选

目的构建并筛选到能有效抑制TLR4基因表达的小干扰RNA表达载体,用于研究TLR4基因功能。方法 RNA干扰采用体外构建小干扰RNA表达载体法,将构建好的表达载体转染单核细胞株,分别用流式细胞术和实时荧光定量RT-PCR法检测TLR4蛋白和mRNA表达变化,筛选抑制效率最高的小干扰RNA表达载体。结果成功构建了TLR4小干扰RNA表达载体,并经电泳及测序证实;编号为S8-1的载体转染入细胞后,TLR4阳性率为27.03%,显著低于对照组的35.12%;流式细胞术和实时荧光定量RT-PCR法检测均证实编号为S8-1小干扰RNA表达载体的抑制效率最高,可用于后续实验。结论本实验所构建的编号为S8-1小干扰RNA表达载体可有效抑制TLR4基因表达,小干扰RNA表达载体法能够抑制体外培养细胞株TLR4的表达,可用于研究TLR4基因功能。

肝功能相关酶学检测指标国产诊断试剂的质量比对研究

目的 评价在罗氏MODULAR P-800全自动生化分析仪（简称P-800）上应用国产诊断试剂检测肝功能相关指标的可行性.方法 应用上海复星长征医学科学有限公司和罗氏原装配套试剂,在P-800上同时测定丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、谷氨酰基转移酶（GGT）和碱性磷酸酶（ALP）.评价国产试剂的批内批间精密度、线性范围、抗干扰能力以及与罗氏原装配套试剂进行相关性分析.结果 精密度试验结果表明,国产试剂检测结果批内、批间变异系数（CV）均〈5%;线性范围验证试验表明国产试剂基本达到说明书声称的线性范围;干扰试验表明国产试剂与原装配套试剂的抗干扰能力无明显差异;方法学比对试验结果表明,应用国产试剂和原装配套罗氏试剂同时检测40份临床样本,其检测结果基本一致（P〉0.05）,相关性较好（r〉0.975,b在1.0±0.05之间）.结论 对于该研究涉及的四项肝功能相关酶学诊断指标,应用国产试剂与罗氏原装配套试剂相比,其相关性较好、精密度较高、线性范围达到说明书规定范围,对胆红素和乳糜有较好地抗干扰能力;肝功能相关国产诊断试剂检验结果与罗氏原装配套试剂具有可比性,可替代进口试剂,实现国产化.

免疫固定电泳在多发性骨髓瘤患者实验室诊断中的应用

目的对150例多发性骨髓瘤患者免疫球蛋白定量、血清蛋白电泳和免疫固定电泳结果进行分析，探讨免疫固定电泳在M蛋白血症诊断中的作用。方法免疫球蛋白定量利用免疫散射比浊法，测定免疫球蛋白IgG，IgA，IgM和kappa，lambda轻链的浓度；血清蛋白电泳和免疫固定电泳采用Helena公司的Spire3000全自动电泳仪及扫描仪进行。结果150例多发性骨髓瘤患者有138例血清蛋白电泳有M带，免疫固定电泳150例全部检出M带；分型结果显示以IgGλ型最多（58例，占38．7％）；12例经血清蛋白电泳未检出M带而免疫固定电泳检出M带的患者中，有10例为轻链病患者。结论免疫固定电泳特异度和敏感度较血清蛋白电泳高，对于多发性骨髓瘤的实验室诊断特别是轻链病的诊断具有重要价值。

定量RT-PCR测定冠心病患者外周血中Toll样受体4的基因表达水平

目的建立检测人Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)mRNA含量的实时荧光定量RT-PCR的方法,并用来测定冠心病患者外周血单个核细胞(PBMCs)中TLR4的基因表达水平,探讨TLR4基因表达水平与冠状动脉粥样硬化发生发展的关系.方法基于TaqMan荧光探针技术,构建克隆载体pGEM-T-TLR4作为定量模板,建立实时荧光定量RT-PCR方法.在GeneAmp 5700型检测仪上测定了50例冠状动脉粥样硬化性心脏病患者和40名健康对照者外周血中TLR4 mRNA的含量.结果TLR4 mRNA在50例冠心病患者的表达范围为7.7×105～2.3×107拷贝/μg RNA;40名健康对照者的表达范围为9.8×104～5.5×106拷贝/μg RNA,冠心病组TLR4 mRNA的平均拷贝数显著高于健康对照组[(5.3±3.8)×106vs(1.8±1.4)×106;P＜0.01].而冠心病血脂正常组和血脂异常组的TLR4 mRNA平均拷贝数无明显差别[(5.1±4.7)×106 vs(5.4±3.0)×106;P＞0.05].结论成功建立了人TLR4基因表达含量的荧光定量检测方法;冠心病患者TLR4 mRNA的含量显著高于健康对照组,且其含量高低与血脂无关,TLR4及其介导的天然免疫应答与动脉粥样硬化的发生发展存在一定的相关性.

冠心病患者血清中相关自身抗体的检测及临床意义

目的:探讨血清中抗氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)抗体和抗内皮细胞抗体(AECA)这2种自身抗体与冠状动脉粥样硬化的关系。方法:分别用酶联免疫吸附法(ELISA)和间接免疫荧光法(IIF)检测118例冠状动脉硬化性心脏病患者及44名健康对照者血清ox-LDL和AECA水平,同时用生化方法检测其血脂水平。结果:冠心病组血清抗ox-LDL抗体阳性率为32.20%,明显高于正常对照组阳性率6.82%(P=0.001);血清抗内皮细胞抗体阳性率冠心病组为38.14%,健康对照组为13.64%(P=0.002)。在血脂正常的冠心病组中抗ox-LDL抗体阳性率25.00%也高于正常对照组(P=0.045)。结论:血清中上述2种自身抗体阳性率与冠状动脉粥样硬化密切相关,而且抗ox-LDL抗体阳性率与血脂无明显相关性,自身免疫反应是动脉粥样硬化的一种可能的发病机制。

Toll样受体与动脉粥样硬化

动脉粥样硬化是心脑血管疾病的病理基础,其发病机制备受关注但至今尚未阐明,包括天然免疫和获得性免疫在内的免疫机制在动脉粥样硬化中的作用不容忽视。Toll样受体是一类介导天然免疫的受体家族,近年来认为Toll样受体4与动脉粥样硬化的发生发展密切相关。现主要就Toll样受体的结构、分布及配体识别特点,特别是Toll样受体4与动脉粥样硬化的相关性研究作一综述。

原发性肝癌患者血清肿瘤标志物与肿瘤组织中凋亡调节基因表达的关系

目的探讨原发性肝癌患者血清肿瘤标志物与肿瘤组织中凋亡调节基因表达的关系。方法 40例原发性肝癌患者与40例健康者分别纳入观察组和对照组,检测2组受试者的高尔基体蛋白73(GP73)、胸苷激酶(TK1)、Dickkopf1(DKK1)水平,以及肿瘤组织中凋亡调节基因的表达水平。结果观察组患者血清中GP73、TK1、DKK1水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。肝癌组织中凋亡抑制基因Plk1、Livin和Xiap的水平高于癌旁正常组织,促凋亡基因MTS1、Caspase-3、Caspase-8的水平低于癌旁正常组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。血清GP73、TK1、DKK1水平与肝脏组织中Plk1、Livin、Xiap水平呈正相关,与MTS1、Caspase-3、Caspase-8的水平呈负相关。结论原发性肝癌患者血清中GP73、TK1、DKK1水平异常升高,且与肿瘤组织中凋亡调节基因的表达密切相关,是判断原发性肝癌病情的理想指标。

自身免疫性肝炎44例分析

目的 探讨自身免疫性肝炎(autoimmunehepatitis,AIH)的免疫学实验诊断特点。方法 观察 44例AIH的临床表现,并分析有关实验室检查资料。结果 本组患者临床症状不典型,肝功能各项指标普遍异常,有 38例患者抗核抗体 (antinuclearantibodies,ANA)阳性, 29例抗平滑肌抗体 (smoothmuscleantibodies,SMA)阳性, 22例抗线粒体抗体 (antimitochondrialantibodies,AMA)阳性(其中 1例M2阳性), 2例抗肝肾微粒体(anti liver/kidneymicrosomalantibodies,anti- LKM)- 1抗体阳性, 4例抗可溶性肝抗原抗体(anti solubleliverantigenantibodies,anti- SLA)阳性。结论 AIH无典型临床症状,患者可以通过自身抗体的检测结合临床表现获得诊断。

原发性胆汁性肝硬化85例实验室检测指标的分析

目的探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)的免疫学实验诊断特点。方法观察85例PBC患者的临床表现,并分析有关实验室检查资料。结果本组患者临床症状不典型。所有患者γ-谷氨酰转移酶(GGT)升高,98.8%(84/85)的患者碱性磷酸酶(ALP)升高,87.1%(74/85)的患者总胆红素(TB il)和结合胆红素(CB il)升高,81.2%(69/85)的患者丙氨酸转氨酶(ALT)、78.8%(67/85)的患者门冬氨酸转氨酶(AST)、52.9%(45/85)的患者球蛋白(GLB)、95.7%(22/23)的患者总胆汁酸(TBA)、84.0%(21/25)的患者高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)升高。自身抗体检测有59例抗核抗体(ANA)阳性(69%),其中32例为核膜型,20例为着丝点型;85例患者抗线粒体抗体(AMA)均为阳性,其中80例(94.1%)AMA M2阳性。结论PBC无典型性临床症状,医生可以通过临床表现结合AMA,尤其是AMA M2的检测结果获得诊断信息。

冠心病患者血清CRP和高半胱氨酸水平观察

目的探讨冠心病(CHD)患者外周血C反应蛋白与高半胱氨酸(Hcy)水平的改变及其临床意义。方法测定108例CHD患者及56例健康体检者血清Hcy及CRP浓度,生化常规测定血脂及其他炎症指标,进行相关性分析。结果CHD组血清Hcy水平为(20.50±6.29)μmol/L,其中AMI组(21.09±9.04)μmol/L,非AMI组(20.30±5.14)μmol/L,均显著高于健康对照组(11.51±2.55)μmol/L(P<0.001),而CHD两组之间无显著性差异;CHD组血清CRP平均为25.23mg/L(0.16～179mg/L),其中AMI组为72.70mg/L(3.57～179mg/L),非AMI组为5.24mg/L(0.16～31.8mg/L),均显著高于健康对照组0.46mg/L(0.16～1.28mg/L)(P<0.001),CHD两组之间有显著性差异(P<0.01)。血清Hcy与WBC、T-Bil、D-Bil、I-Bil呈明显正相关,CRP与WBC、T-Bil、D-Bil、I-Bil呈明显正相关,与LDL-C、apoB100、TBA、Alb呈明显负相关。结论CHD患者血清Hcy和CRP水平明显增高,且与其他炎症指标或血脂呈一定相关性。

Her2/neu基因定量检测方法的建立

目的建立人Her2／neu基因mRNA荧光定量检测方法，评价该方法的准确性及稳定性。方法基于TaqMan荧光探针技术，构建克隆载体pGEM—T—Her2／neu作为定量模板，通过荧光强度达到一定阈值时的循环数来定量起始模板，以建立实时荧光定量RT—PCR方法；并且在GeneAmp 5700型检测仪上测定10例经免疫组织化学法证实Her2／neu表达卅的乳腺癌组织标本，同时对最大值及最小值重复测量。结果Her2／neu动态检测范围为10^3～10^7拷贝／ugRNA（r≥0．996），内参β-actin的动态检测范围为10^3～10^8拷贝／ugRNA（r〉0.998）。10例检测癌组织的Her2／neu表达范围为6．6×10^4～4．7×10^6拷贝／ug，最大值10次重复测量值为（4．65±0．55）×10^6拷贝／μg，最小值10次重复测量值为（7.36±0.75）×10^4拷贝／μg。结论成功建立人Her2／neu基因表达RT—PCR检测方法，具有较高的准确性和稳定性，可用于检测Her2／neu基因表达水平，为进一步应用于乳腺癌预后判断及术后治疗方案的选择奠定了基础。

细胞外基质蛋白1在乳腺癌组织和细胞株中的表达及其意义

目的:探讨细胞外基质蛋白1(extracellular matrix protein1,ECM1)在乳腺癌组织和细胞株中的表达及其意义。方法:应用免疫组织化学和免疫细胞化学EnVision法检测乳腺癌手术切除标本中乳腺组织(正常组织和癌组织)和恶性程度不同的乳腺癌细胞株(MCF-7、Sk-Br-3和MDA-435)中ECM1的表达,并比较正常乳腺组织和乳腺癌组织、淋巴结转移和未转移乳腺癌之间的ECM1表达差异。Western blotting检测确定ECM1亚型蛋白。结果:ECM1的表达在正常乳腺组织中阳性率为8.7%(2/23),在乳腺癌组织中阳性率为60.4%(29/48);其中乳腺癌淋巴结未转移者为38.5%(10/26),淋巴结转移者为86.4%(19/22)。统计分析表明,ECM1的表达在乳腺癌组织中高于正常组织(P<0.01),在转移性乳腺癌中高于非转移性乳腺癌(P<0.01)。恶性程度低的乳腺癌细胞株MCF-7、Sk-Br-3中不表达ECM1,而恶性程度较高的MDA-435细胞株中高表达ECM1。乳腺癌细胞中高表达的ECM1蛋白主要是相对分子质量为68000的ECM1a亚型。结论:ECM1(主要为ECM1a亚型)在乳腺癌组织和恶性程度高的乳腺癌细胞中过表达,并且与乳腺癌的淋巴结转移相关。

自身免疫性肝病148例临床特点分析

目的分析自身免疫性肝病(autoimmune liver diseases,ALDS)的临床、生化及自身抗体特点。方法分析我院1996年-2005年148例ALDS患者其中自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)患者52例,原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosi,PBC)患者96例的临床表现,并分析有关实验室检查资料。结果两组患者临床症状均不典型,肝功能各项指标普遍异常,AIH组以ALT升高更为明显,而PBC组患者ALP和GGT升高更为显著(P<0.01)。在自身抗体检测情况两组有极大的差异。AIH患者主要以高效价的抗核抗体(antinuclear antibodies,ANA)(44/52)和/或抗平滑肌抗体(antismooth muscle antibodies)(35/52)为主,此外,尚有9.6%(5/52)和3.8%(2/52)的AHI患者出现抗可溶性肝抗原抗体(auti-soluble liver antigen autoantibdies,抗SLA)和抗肝/肾微粒体(liver/kidney microsomal,LKM)抗体阳性。PBC组以抗线粒体抗体(mitahondrial anto-antibodies,AMA)阳性(99.0%)为主,93.8%的患者AMAM2阳性。结论AIH及PBC的诊断可结合临床、生化、自身抗体检查的结果,其中自身抗体的检测尤为重要。

颗粒溶素在原发性胆汁性肝硬化患者外周血中的表达及临床意义

目的:探讨颗粒溶素(granulysin,GNLY)在原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血中的表达及其与PBC发生发展的关系。方法:实时荧光定量RT-PCR(FQ-PCR)方法检测60例PBC患者外周血单个核细胞(PBMC)中GNLY mRNA的表达,并以健康人群(n=60)和乙型肝炎后肝硬化患者(n=60)作为对照。ELISA法检测各组研究对象血清中GNLY蛋白水平,并比较不同疾病分期PBC患者的表达差异。应用统计学软件分析PBC患者血清GNLY蛋白水平与GNLY mRNA表达、疾病分期及肝功能指标间的相关性。结果:PBC患者外周血GNLY mRNA的平均拷贝数显著高于健康对照[(2.7±2.5)×108vs(3.0±1.9)×107,P<0.01]和乙型肝炎后肝硬化患者[(4.7±3.6)×105,P<0.001]。PBC患者血清中的GNLY蛋白水平(ng/ml)显著高于健康对照(15.48±3.24vs4.76±2.32,P<0.01)和乙型肝炎后肝硬化患者(2.57±1.84,P<0.01)。血清中GNLY蛋白水平在早期和晚期PBC患者之间差异显著(P<0.01)。PBC患者血清中GNLY蛋白水平与GNLY mRNA表达呈正相关,与血清GGT、ALP的浓度呈正相关(P<0.01)。结论:PBC患者PBMC中GNLY mRNA表达和血清中GNLY蛋白含量显著高于健康人群及乙型肝炎后肝硬化患者;血清GNLY蛋白水平与PBC的发生发展存在一定的关联性,对其的检测有助于临床对PBC病情的监控。

四聚体技术检测原发性胆汁性肝硬化患者血循环中抗原特异性T细胞

目的：定量检测原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者体内抗原特异性T淋巴细胞含量，探讨其在PBC发病机制中的作用。方法：采用四聚体技术检测15例HLA-A＊0201阳性（A2^＋）PBC患者外周血单个核细胞（PBMC）经抗原肽诱导生长的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）中PDC-E2 159～167aa与PDC—E2 165～174aa特异性CD8^＋T细胞频率，以A＊0201阴性（A2^-）PBC患者与A2^＋的其他慢性肝病和健康自愿者为对照组：结果：在A2^＋PBC患者PDC-E2 159～167aa与PDC-E2165～174aa诱导的CTL中可检测到其相应的四聚体／CD8^＋细胞，平均频率分别为0．42%±0．24％（0．17％～1．08％）、0．27%±0．17%（0．05％～0．56％），各对照组的四聚体阳性细胞频率均低于0．1％，差异非常显著（P〈0．001）；A2^＋PBC组中PDC-E2 159～167aa特异性的CTL频率与PDC—E2 165～174aa特异性的CTL无显著性差异（P〉0．05）：处于临床Ⅰ、Ⅱ期的A2^＋PBC患者中CD8^＋特异性CTL频率均较Ⅲ期的要高（P〈0．05）：PDC—E2159～167aa特异性CTL与PDC—E2165～174aa特异性CTL频率在抗．PDC阳性PBC组和抗．PDC阴性组之间均无显著性差异（P〉0．05）：结论：HLA—A＊0201限制性的PDC-E2159～167aa和PDC-E2165～174aa特异性CD8^＋CTL在PBC疾病进展中起重要作用，抗线粒体抗体阴性或抗-PDC阴性PBC患者与阳性患者可能有着相似的T细胞介导的免疫发病机制。

原发性胆汁性肝硬化患者血清中Th17相关细胞因子的表达

目的:观察原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者血清中Th17分化相关细胞因子(IL-1β、IL-6、IL-17、IL-23、TGF-β)的变化,探讨Th17细胞在PBC发病过程中的作用。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法比较PBC患者(n=78)、乙型肝炎后肝硬化患者(PHC,n=30),健康对照(HC,n=60)血清中Th17分化相关细胞因子含量。结果:与HC组相比,PBC患者血清IL-1β、IL-6、IL-17A和IL-23水平显著升高(P<0.05),而TGF-β水平差异无统计学意义;与PHC组相比,PBC患者血清IL-1β、IL-6和TGF-β水平显著降低,而IL-17和IL-23水平显著升高(P<0.05)。结论:PBC患者处于慢性炎症状态,Th17细胞可能在PBC的发病和发展过程中发挥着重要的作用。