辽宁丹东间日疟原虫裂殖子表面蛋白1等位基因型分析

用套式PCR方法扩增辽宁丹东地区间日疟原虫裂殖子表面蛋白1(MSP-1)基因ICB5-ICB6片段,经PvuⅡ酶切和琼脂糖凝胶电泳,对产物进行序列分析。结果显示,11份镜检确诊的间日疟患者血液标本经套式PCR扩增均出现大小约为470 bp(Sal-1型)或400 bp(Belem型)的特异性片段。经PvuⅡ内切酶消化后,其中5份血样(470 bp),出现120和350 bp酶切片段,为Sal-1型;其余6份血样(400 bp)中,1份出现400 bp片段,为Belem型,1份出现120和280 bp两种酶切片段,为重组Ⅲ型,4份出现120和240 bp两种酶切片段,为朝鲜型。辽宁省丹东地区的间日疟原虫PvMSP-1基因存在3种不同的等位基因型,以Sal-1型和朝鲜型为主,但无不同等位基因型的混合感染。

检测肠道病毒71型RT-LAMP技术的建立及其应用

目的为肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)感染的快速诊断建立一种简捷、敏感、特异的基因检测方法,即逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP)。方法针对EV71VP1基因的8个区域设计6条特异性引物,建立检测该靶序列的RT-LAMP方法,对其特异性及敏感性进行了验证;并对手足口病患者标本进行检测,并与RT-PCR及Real-time PCR方法进行了比较。结果利用RT-LAMP方法能成功检测到EV71VP1基因区,等温条件下60min内即可完成检测,该方法简便快捷、敏感性高、特异性好;其阳性率高于RT-PCR方法(P<0.05),与Real-time PCR结果呈现很好的一致性(P>0.05)。结论 RT-LAMP方法具有灵敏度高,特异性强,操作过程简捷快速,无需特复杂仪器等优点。适用于EV71感染的快速检测及分子流行病学的监测,具有很好的开发应用前景。

2017~2018年辽宁省食品中食源性致病微生物监测结果分析

目的探究辽宁省食品中食源性致病微生物在每个季度的污染及其分布情况。方法2017~2018年辽宁省共采集3477份样品,按照《国家食品污染物和有害因素风险监测工作手册》对食源性致病微生物进行检测分析。结果第一季度中诺如病毒的检出率最高为17.65%,第二季度中蜡样芽胞杆菌的检出率最高为16.92%,第三季度副溶血性弧菌的检出率最高为19.05%,第四季度副溶血性弧菌的检出率最高为12.62%。各卫生指标菌中2017年菌落总数在第二季度的合格率最低为96.10%,大肠菌群计数第二季度的合格率最低为97.03%,大肠埃希氏菌计数第三季度的合格率最低为93.52%;2018年菌落总数在第一季度的合格率最低为91.67%,大肠菌群计数在第三季度的合格率最低为93.48%,大肠埃希氏菌计数第二季度合格率最低为91.67%。结论辽宁省内食品存在食源性致病微生物污染情况,诺如病毒、蜡样芽胞杆菌和副溶血性弧菌的检出率比较高,单核细胞增生李斯特氏菌、阪崎肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、致泻大肠埃希氏菌及弯曲菌均有不同程度的检出;政府相关部门应加强食源性致病微生物的监测,防止食源性疾病和食物中毒事件的发生,保障居民食品安全。

辽宁省首次发现的新布尼亚病毒其培养特性的研究

目的探讨发热伴粒细胞血小板减少综合征布尼亚病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunya-virus,SFTSV)在细胞分离培养时表现的特异性。方法收集发病一周以内发热伴粒细胞血小板减少综合征患者的血液,首先做血清学检测排除汉坦病毒(Hantavirus,HV),然后将样本采用多种细胞培养的方法进行病毒分离。最后采用逆转录(RT-PCR)方法对病毒进行鉴定。结果从我省发热伴出血征候群血液样本分离出病毒12株,经鉴定均为新布尼亚病毒。结论我省东部山区及丘陵地带有新布尼亚病毒流行,其临床症状及体征与肾综合征出血热极为相似。但体外细胞培养及核苷酸序列却存在着明显的差别。

鼠疫F1抗体胶体金检测试剂的研制和现场评价

目的为建立鼠疫诊断和监测所需的快速检测F1抗体水平的方法,研制并评价金标检测试剂。方法胶体金标记和实验室检测,14个省17个监测点现场监测中检测了动物和人的血清样本4789份。结果金标检测试剂特异性强,敏感性、稳定性好,现场检测结果与间接血凝方法无差异。结论鼠疫F1抗体胶体金检测试剂可以用于鼠疫病例诊断和动物监测。

2017—2019年辽宁省市售食品中食源性致病菌监测结果分析

目的了解2017—2019年辽宁省市售食品中食源性致病菌的污染及其分布情况。方法2017—2019年辽宁省共采集12类4694份样品,按照《国家食品污染物和有害因素风险监测工作手册》对食源性致病菌进行检测分析。结果4694份样品中各种致病菌的总检出率差异较大,其中蜡样芽胞杆菌的检出率最高为12.78%。不同种类食品中米面制品、婴幼儿奶粉及辅食和水产及其制品中致病菌的检出率较高,分别为15.02%、14.81%、12.46%。不同包装中散装样品的致病菌检出率最高为9.55%,不同抽样场所中网店的致病菌检出率最高为14.06%。结论辽宁省市售食品中存在不同程度的食源性致病菌污染,其中米面制品、婴幼儿奶粉及辅食和水产及其制品受食源性致病菌的污染状况比较严重,监管部门应加大对其监督和管理的力度。

辽宁省2018年食源性金黄色葡萄球菌脉冲场凝胶电泳分子分型及毒力基因的研究

目的了解辽宁省食源性金黄色葡萄球菌的肠毒素分布情况及基因分型特征。方法采用脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)和肠毒素分型方法在不同角度和层次对2018年辽宁省内分离出的18株食源性金黄色葡萄球菌进行肠毒素检测与PFGE同源性分析。结果PCR方法及酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法对肠毒素结果显示,18株菌分别存在SEB、SEC、SED、SEH 4种肠毒素,PFGE聚类分析显示,18株金黄色葡萄球菌相似系数在60.3%~100%之间。结论金黄色葡萄球菌均可以用PFGE和PCR进行分型,都具有较好地分型能力,辨识度高,对菌株有很好的溯源性。

2017-2021年辽宁省市售食品中沙门菌的血清型、分子分型及耐药性分析

目的了解2017-2021年辽宁省市售食品中沙门菌的污染状况、血清型分布、PFGE分子分型特征及耐药特点,为沙门菌感染引起的疾病溯源工作提供科学依据。方法依据GB4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门菌检验》检验方法对收集的样品进行检测及生化实验鉴定,采用玻片凝集法进行血清学实验,利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法对分离到的菌株进行分子分型,使用BioNumerics 7.6软件对PFGE图谱进行聚类分析,采用微量肉汤稀释法进行药物敏感性实验。结果89株沙门菌包含32种血清型,以肠炎沙门菌为主;经XbaⅠ酶切分为81种带型,同源性为47.4%~100%。同一血清型菌株的PFGE带型相似度较高,且出现成簇现象。药物敏感性分析中,89株沙门菌对萘啶酸(NAL)的耐药率最高,为52.8%(47/89),共发现有35种多重耐药谱,多重耐药率为43.8%(39/89)。结论辽宁省食品中沙门菌血清型呈现出多样化趋势,不常见血清型较多,PFGE指纹图谱呈多样性,整体耐药水平较高,多重耐药情况严重,应尽快建立高效的管控机制,加强耐药性监测,避免滥用抗生素。

2019—2021年辽宁省食源性致泻大肠埃希菌分子分型与耐药表型分析

目的了解2019—2021年辽宁省食品中致泻大肠埃希菌的污染状况,对分离出的致泻大肠埃希菌进行分子特征研究及耐药分析,为食源性疾病溯源和临床用药提供科学依据。方法辽宁省内采集包括水果及其制品、肉及其制品、水产品、餐饮食品等1000份样品进行致泻大肠埃希菌分离,对分离出的阳性菌采用脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)进行分子特征分析,应用BioNumeries 7.6软件对菌株间的相似度聚类分析;采用微量肉汤稀释法进行药物敏感性检测。结果从1000份食品中分离出38株致泻大肠埃希菌,检出率为3.8%,其中从肉及肉制品中分离出20株,占52.6%。PFGE聚类结果显示36株肠集聚性大肠埃希菌(enteroaggre-gative Escherichia coli,EAEC)菌被分为35种带型,同源性为60%~100%。药物敏感性结果显示,38株致泻大肠埃希菌呈现30株耐药株,耐药率为78.9%,其中耐药率最高的为四环素,为71.1%(27/38);其次是氨苄西林55.3%(21/38),共发现12种多重耐药谱,多重耐药率为60.5%(23/38)。结论辽宁省致泻大肠埃希菌污染情况较为严重,且来源于肉及肉制品食品的致泻大肠埃希菌耐药情况比较严重,应引起相关部门的注意。

产超广谱β-内酰胺酶沙门氏菌的分布与基因型研究

目的了解不同来源的产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamase,ESBLs)沙门氏菌的分布特征以及耐药特点。方法分离来自食品与食物中毒患者体内的沙门氏菌,用双纸片法筛选产ESBLs沙门氏菌;采用最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)检测14种临床常用抗生素的耐药率。结果食品中分离沙门氏菌89株,食物中毒患者体内分离沙门氏菌77株,其中产ESBLs菌株阳性率为13.3%(22/166)。34株从水产品中分离的沙门氏菌中ESBLs阳性率为5.9%(2/34),55株从肉制品中分离的沙门氏菌中ESBLs阳性率为21.8%(12/55),二者有显著差异(P<0.05,α=4.025);77株从临床样本分离的沙门氏菌中ESBLs阳性率为10.4%。沙门氏菌多重耐药情况严重,平均多重耐药率为42.8%(71/166),产ESBLs沙门氏菌更容易产生交叉耐药,多重耐药率100%,明显高于非产ESBLs多重耐药率34.0%(P<0.05,α=7.011)。22株ESBLs沙门氏菌中,包含TEM基因型5株,CTX-M基因型5株,TEM合并CTX-M双基因型5株,未检出SHV基因型。产ESBLs沙门氏菌对庆大霉素、复方磺胺、环丙沙星、萘啶酸等均表现出较强耐药性,对亚胺培南、头孢西丁敏感。结论产ESBLs沙门氏菌在东北分布较广,基因型以TEM和CTX-M为主,家畜家禽饲养环节抗生素滥用相对严重。ESBLs阳性菌更容易产生多重耐药,对于治疗产ESBLs沙门氏菌引起的感染可以选择亚胺培南、头孢西丁。

辽宁省不同来源沙门氏菌耐药性分析

目的比较辽宁地区食品来源与临床样本来源沙门氏菌的耐药性,了解不同来源沙门氏菌对14种抗生素的耐药情况,分析产生差异的原因。方法用96孔药敏板,对54份食品来源和55份临床样本来源的沙门氏菌进行14种抗生素的耐药性检测,通过SPSS统计学软件计算,同时通过PCR方法对携带耐药基因的整合子目的片段进行扩增,检测2种来源沙门氏菌Ⅰ类整合子携带情况,分析其对多重耐药产生的意义。结果 2种来源沙门氏菌对喹诺酮类抗生素—环丙沙星的耐药率有显著差异(食品耐药率高于临床样本:χ2=13.615,P=0.001<0.05);2种来源沙门氏菌对β-内酰胺类抗生素-头孢噻肟和氨苄西林耐药率有显著差异(临床样本耐药率高于食品样本:头孢噻肟χ2=4.813, P=0.028<0.05;氨苄西林χ2=9.653, P=0.002<0.05);二者多重耐药率有显著差异(临床样本多重耐药率高于食品样本:χ2=4.012,P=0.045<0.05)。二者整合子携带率分别为食品样本22.22%、临床样本29.09%。结论耐药性的产生与不同环境压力诱导、自身滥用抗生素的习惯有关,也与Ⅰ类整合子的介导密切相关,研究结果对环境以及临床抗生素的应用具有指导意义,以期为进一步探索整合子所携带的耐药基因以及它传递的影响因素提供实验依据。

丹东市散发霍乱病例病原学特征及与水体和海(水)产品霍乱弧菌污染间的关系

目的探讨丹东市2004-2005年散发霍乱病例病原学特征以及与水体和海(水)产品检出霍乱弧菌的关系。方法采用血清学和分子生物学相结合的方法,研究不同血清型、噬菌体—生物型霍乱弧菌生化特性、分子分型、聚类分析以及肠毒素基因携带情况。结果所有噬菌体—生物型为流行株(1b、1d)的霍乱弧菌均为产毒株,肠毒素基因携带率100%,非流行株均不携带肠毒素基因;PFGE分子分型及聚类分析表明病患分离株与水体及海(水)产品分离株之间存在高度遗传相关性。结论丹东地区霍乱弧菌致病力较强,水体及海(水)产品霍乱弧菌污染是导致霍乱发病的关键,且已形成污染—感染的恶性循环。不良卫生习惯和饮食习惯以及忽视就诊,加剧了这一循环,也在很大程度上为霍乱防制和治疗带来了困难。

辽宁地区沙门菌整合子与耐药相关性研究

目的及时掌握辽宁地区沙门菌整合子的分布以及对常用抗菌药物的耐药情况,获取沙门菌整合子与耐药性的相关性,从而为临床用药及治疗提供指导。方法本文对来源于食品以及病患的149株沙门菌,利用PCR扩增的方法,进行整合子类别的筛选,并将扩增的整合子基因盒进行基因测序,同时通过药敏板测定(耐药性实验)对沙门菌与15种临床常用抗菌药物的耐药相关性进行研究。结果149株沙门菌中未发现第II类、第III类整合子,检出第I类整合子的菌株50株,I类整合子阳性率为33.6%。50株整合子阳性菌株中25株携带耐药基因盒,片段范围从1500~1800 bp。测序结果表明,其中22株整合子携带dfrA17-aadA5基因盒,2株携带dfrA12-aadA2基因盒,1株首次检出罕见耐药基因盒linG。根据整合子携带情况不同,对15种抗菌药物的耐药率进行对比分析,结果显示整合子阳性菌对9种抗菌药物的耐药率显著高于整合子阴性菌(P<0.01),分别为氨苄西林、四环素、氯霉素、头孢噻肟、头孢唑林、庆大霉素、复方磺胺甲恶唑、阿奇霉素和环丙沙星。辽宁地区沙门菌多重耐药率达50.3%。结论I类整合子在沙门菌中分布广泛,抗性基因表型与耐药结果相一致,整合子的携带与沙门菌多重耐药率高度相关。沙门菌对亚胺培南和头孢西丁保持高敏感率,可以用于对常规抗菌药物耐药的沙门菌的治疗。

辽宁省市售禽肉中沙门氏菌的污染状况及其MLST分型与耐药性分析

【背景】沙门氏菌(Salmonella)是重要的人畜共患病原菌,可通过禽类及其产品传播给人类,对人类健康造成威胁。了解市售禽肉中沙门氏菌病原学特征及耐药情况,对公共卫生具有重要意义。【目的】了解2022年辽宁省市售禽肉中沙门氏菌的污染状况、血清型分布、药物敏感性及分子流行特征情况,探讨不同血清型与多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)、耐药性之间的关系。【方法】依据GB4789.4―2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》检验方法对收集的样品进行检测及生化实验鉴定,采用玻片凝集法进行血清学实验,用微量肉汤法对菌株进行药物敏感性试验,使用BioNumerics7.6软件对药敏结果、MLST分型结果进行分析。【结果】53株沙门氏菌包含11种血清型,以肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)为主。药物敏感性分析中,沙门氏菌对萘啶酸(nalidixic acid,NAL)的耐药率最高,为92.5%(49/53),共发现有25种多重耐药谱,总耐药率为66.0%(35/53),在耐药基因分析中,四环素类耐药基因tetC携带率最高为45.3%(24/53)。根据7种管家基因的序列沙门氏菌被分为10个ST型别和1个未分型型别。【结论】辽宁省市售禽肉沙门氏菌的污染率较为严重,血清型多样化,整体耐药水平较高,多重耐药情况严重,应加强对禽类规范化养殖。

辽宁省汉城型汉坦病毒基因亚型分析

目的分析辽宁省汉城型汉坦病毒(HV)的基因亚型及其分布情况。方法收集辽宁省内主要肾综合征出血热(HFRS)流行地区的鼠肺和病人血清标本,采用间接免疫荧光法(IFA)检测鼠肺中HV抗原,应用HV特异性引物以RT-PCR方法扩增标本中M和S基因片段的特异性核苷酸序列,测序后与已知病毒序列进行比较分析,构建系统发生树,以明确其型别和亚型及其地理分布情况。结果辽宁省HFRS疫区褐家鼠携带的病毒均为汉城型病毒(SEOV);对鼠肺及病人携带HV的部分M片段及部分S片段进行核苷酸序列分析表明,发现SEOV的同源性较高,变异较小,稳定性较高,而且地理位置相近地区基因组核苷酸序列的同源性很高(>98.8%),具有小范围的地理聚集现象。结论辽宁省流行的SEOV均为S3亚型,基因亚型分布比较单一。

2016-2017年辽宁省沙门菌耐药菌谱与分子分型

目的分析2016-2017年辽宁省沙门菌分离株的耐药特性与脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型特征,为沙门菌引起的食源性疾病暴发、防控及抗生素使用提供参考数据。方法对分离的54株沙门菌进行血清分型和药物敏感试验。根据PulseNet沙门菌标准PFGE分型技术,选取全部菌株进行PFGE分子分型分析,应用BioNumerics软件对菌株条带进行分析,确定菌株间的特征及相关性。结果 54株沙门菌血清型居首位的是肠炎沙门菌,占46.30%;其次是鼠伤寒沙门菌,占24.07%;共分为10个血清型。对13种抗生素的耐药分析显示多重耐药菌株为36株,占66.7%,其中耐3～5种的13株(24.1%),耐6～8种的13株(24.1%),耐9～11种的10株(18.5%)。54株沙门菌经聚类分析获得36种带型,相似度区间为49.7%～100.0%。结论辽宁省沙门菌分离株多重耐药状况比较严重,相同血清型其PFGE带型相似度相对较高,同时具有较显著的优势带型特点;而且发现同一PFGE型菌株的耐药谱相对比较接近。

辽宁省海鱼异尖线虫感染调查及分子鉴定

目的了解辽宁省市售海洋鱼类异尖线虫感染情况,并对异尖线虫Ⅲ期幼虫进行分子鉴定,确定感染异尖线虫虫种。方法采用直接剖检法从市售海鱼中检出异尖线虫Ⅲ期幼虫后,在显微镜下观察形态进行初步鉴定;提取异尖线虫虫体总DNA,采用通用引物扩增异尖线虫核糖体DNA内转录间隔区(ITS)序列,并对其ITS1和ITS2序列进行序列比对和进化分析。结果采集222份市售海鱼样品进行剖检,共有70份检出异尖线虫幼虫,检出率为31.53%,其中小黄花鱼和带鱼的检出率较高,感染度最高为233条/份。测序结果经序列比对和进化分析,结果显示检出的异尖线虫幼虫分别为异尖线虫属和宫脂线虫属的5种异尖线虫,包括简单异尖线虫(Anisakis simplex)、派氏异尖线虫(Anisakis pegreffii)、典型异尖线虫(Anisakis typical)、内弯宫脂线虫(Hysterothylcaium aduncum)和厦门宫脂线虫(Hysterothylacium amoyense)。结论辽宁省市售海洋鱼类异尖线虫感染情况较严重,且感染的异尖线虫种类多样,其感染优势种为派氏异尖线虫。

辽宁省间日疟原虫环子孢子蛋白基因型分析

目的探讨辽宁省间日疟原虫环子孢子蛋白(CSP)的基因型与地理分布。方法采集镜检确诊的间日疟患者血样15份,Chelex-100离子交换法提取DNA,进行单管-套式PCR扩增,根据琼脂糖凝胶电泳结果判定环子孢子蛋白(CSP)基因型别。结果 12份本地感染间日疟血液标本中6份鉴定为PV-Ⅰ型温带族虫株(占50.00%),6份鉴定为PV-Ⅰ型温带族和PV-Ⅱ型混合虫株(占50.00%);3例输入性间日疟病例中PV-Ⅰ型热带族和温带族各1例,PV-Ⅰ型温带族和PV-Ⅱ型虫株混合感染1例。结论目前辽宁省间日疟原虫存在2种CSP基因型,即PV-Ⅰ型温带族虫株和温带族、PV-Ⅱ型混合感染虫株,无热带族虫株。