超声造影、CT增强联合肿瘤标志物AFP、CA199诊断肝癌的临床研究

目的早期筛查和诊断对肝癌患者的治疗和预后具有重要意义。本研究旨在探讨超声造影和增强CT联合肿瘤标志物AFP、CA199在肝癌诊断中的应用价值。方法回顾性分析本院于2020年6月至2022年6月期间收治的肝癌组(n=256)、良性疾病组(n=110)和对照组(n=50)的临床资料。肝癌组和良性疾病组术前行超声造影和增强CT病理诊断,采用电化学发光法检测血清AFP和CA199含量,并绘制ROC曲线。结果超声造影的检出率高于增强CT。肝癌组血清AFP、CA199水平明显高于良性病变组和对照组。ROC曲线显示超声和增强CT联合肿瘤标志物AFP、CA199对肝癌诊断的敏感性、准确性和阴性预测率均显著高于单项检测。结论超声造影联合增强CT、AFP、CA199的联合检测显著提高了肝癌诊断的敏感性和准确性。对肝癌的早期诊断有显著作用,可作为早期筛查的重要手段。

鼻咽癌侯选抑瘤基因BRD7原核表达载体的构建及其表达( 英文)

BRD7基因是一个鼻咽癌侯选抑瘤基因 ,为了构建BRD7基因的原核表达载体并使其在大肠杆菌得到表达 ,设计了带有SalⅠ ,NotⅠ酶切位点的引物 ,以已构建好的质粒 pGEM TEasy/BRD7为模板 ,用PCR扩增出BRD7基因的完整阅读框架 ,并用SalⅠ ,NotⅠ酶切PCR产物和原核表达载体PGEX 4T 2 ,然后用T4DNA连接酶将其连接 ,得到重组表达质粒PGEX 4T 2 /BRD7,经双酶切鉴定和测序验证 ,表达载体构建正确 .重组表达质粒转化感受态大肠杆菌Jm10 5后用IPTG诱导 ,成功表达了一分子质量约为 90ku的融合蛋白 ;37℃诱导 4h后 ,SDS 聚丙烯酰胺凝胶 (PAGE)电泳后 ,经扫描分析该融合蛋白产量占菌体蛋白总量 2 8 4 8% ,蛋白质印迹 (Western blot)证实了该融合蛋白的表达获得成功 .这为BRD7基因的蛋白纯化及抗体制备 ,进一步开展其功能研究奠定了基础 .

新克隆的基因NOR_1对鼻咽癌细胞株HNE_1细胞生长的影响

NOR1是与鼻咽癌密切相关的抑瘤/易感基因候选者之一,将NOR1基因的全长cDNA片段亚克隆至pcDNA3.1(+)的表达载体中,通过脂质体介导转染入鼻咽癌细胞系HNE1,RT-PCR、RNA印迹方法筛选高效表达NOR1的细胞株,并借助细胞生长曲线、软琼脂生长集落形成大小试验、流式细胞仪对转染细胞的生物学行为进行检测.结果发现转染了NOR1基因的HNE1细胞生长速度明显减慢,在软琼脂中的集落形成较对照组明显减小.流式细胞仪分析表明,NOR1可以延缓细胞由G0/G1期进入S期.结果表明NOR1基因可能在抑制鼻咽癌的发生发展中起重要作用,为进一步研究NOR1的功能研究打下基础.

一个与化学因素致鼻咽癌相关的硝基还原酶基因的克隆与鉴定(英文)

在运用cDNAmicroarray分析鼻咽癌细胞系CNE1与正常鼻咽上皮细胞差异表达基因的基础上 ,发现ESTW 95 442在细胞系CNE1中存在明显表达下调 .随后采用生物信息学的方法克隆出了该EST所代表的硝基还原酶基因NOR1(GenBank登录号为AF4 6 2 348) .Northern印迹分析表明 ,该基因在脑、心脏、肺等正常组织中均有 2个转录产物 (1.6kb ,1.2kb) .RT PCR分析显示 ,NOR1基因在鼻咽癌活检组织中也存在表达下调 .但酶活性测定实验表明 ,它在鼻咽癌细胞系CNE1中的活性比正常鼻咽上皮细胞高 .通过基因转染实验发现NOR1基因具有与细菌硝基还原酶NTR相似的功能 ,能够将单功能烷基化试剂 2 硝基苯氮丙啶类化合物CB195 4的第 4位硝基还原成亚硝基从而生成细胞毒性物质 .研究结果表明 。

新克隆的硝基还原酶基因NOR_1的表达及其产物的纯化

背景与目的:NOR1是与鼻咽癌密切相关的抑瘤/易感基因候选者之一,本实验旨在构建NOR1基因原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化NOR1基因所编码的蛋白。方法:抽提人鼻咽正常组织中总RNA,利用RT-PCR扩增NOR1基因全长,经BamHⅠ、XhoⅠ双酶切后插入同样经BamHⅠ、XhoⅠ双酶切后的pGEX-4T-2质粒,构建表达载体pGEX-4T-2/NOR1重组表达质粒;转化大肠杆菌Jm105,用异丙基-β-D硫代半乳糖苷(isopropyl-thiogalactoside,IPTG)诱导pGEX-4T-2/NOR1/Jm105表达GST融合蛋白后,采用Westernblot验证,并用GST琼脂糖亲和层析柱对目的蛋白进行纯化。结果:酶切鉴定和测序验证成功地构建了NOR1基因原核表达载体,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdodecylsulphatepolyacrylamidegelelectrophoresis,SDS-PAGE)分析在大肠杆菌Jm105中成功诱导表达了一分子质量约为74kDa的融合蛋白;该融合蛋白存在于细菌裂解液的上清和沉淀中,Westernblot证实表达获得了成功;并利用亲和层析法获得了纯化蛋白。结论:成功获得了高效表达NOR1基因的原核表达产物,通过对该融合蛋白的纯化为它的多抗制备奠定了基础。

X射线照射后鼻咽癌细胞系HNE_1多药耐药基因MDR1的表达研究

目的探讨X射线照射后鼻咽癌细胞系HNE1产生多药耐药的机制。方法利用逆转录PCR检测照射前后HNE1细胞MDR1的基因表达变化,利用Western印迹检测照射前后MDR1基因编码蛋白P-gp的表达变化。结果鼻咽癌细胞系HNE1照射后MDR1基因表达增加,P-gp蛋白表达增加。结论X射线可以诱导鼻咽癌细胞系HNE1 MDR1基因的表达,这可能是照射后鼻咽癌细胞耐药的重要原因之一。

240例婴幼儿血清微量元素测定结果分析

目的:观察婴幼儿血清微量元素含量。方法:用微量检测仪对我院240例门诊及住院婴幼儿血清Zn、Fe、Cu、Ca、Mg5种微量元素进行测定,并做统计学分析。结果:Zn、Fe、Cu、Ca在各个年龄组中的缺乏率都较高,分别为42.5%、42.5%、25.0%、22.5%,Mg在各个年龄组中的含量基本正常;婴儿时期(0～1组)的缺乏率最高,分别为Zn72.2%、Ca50.0%,Cu41.7%。结论:应特别注意婴幼儿时期微量元素的补充。

新基因NOR1对肝癌细胞系HepG2蛋白质表达谱的影响

目的:研究NOR1基因对肝癌细胞系HepG2蛋白质表达谱的影响。方法:将pcDNA3.1(+)/NOR1的表达质粒经脂质体导入HepG2细胞,Northern blot筛选出阳性克隆,通过双向电泳分离过表达NOR1的HepG2细胞内蛋白质,筛选出差异表达的蛋白质点,并进行质谱分析鉴定。结果:鉴定出6种表达上调的蛋白质点,包括锌指蛋白、肿瘤坏死因子受体、酪氨酸蛋白磷酸化受体等,这些蛋白质涉及基因转录、信号转导等肿瘤发生相关事件。结论:NOR1基因可能通过上调这些蛋白参与多种途径影响肝癌的发生发展。

一个新硝基还原酶基因NOR1编码区单核苷酸多态及与鼻咽癌的关联分析

NOR1基因是中南大学湘雅医学院肿瘤研究所克隆的一个鼻咽癌表达下调新基因 ,生物信息学预测NOR1基因含有硝基还原酶结构域 ,该基因可能参与亚硝胺类化学致癌物在体内的代谢过程 ,从而与鼻咽癌的发生密切相关 .通过采用病例 对照的研究方法 ,利用测序技术对 144名鼻咽癌患者和匹配的 144名正常人NOR1基因编码区单核苷酸多态 (codingregionsinglenucleotidepolymorphisms ,cSNPs)进行基因分型 ,关联分析结果显示所检测到的两个cSNPs之间存在连锁不平衡 ,且均与鼻咽癌发病相关 ,两个cSNPs及它们所组成的单倍型相对危险度分别为 1 3 6、 1 64和 1 3 7.两个cSNPs的多态性改变均使NOR1基因编码蛋白一级结构发生了变化 ,这种改变可能影响NOR1基因编码蛋白的结构和功能 .

生物荧光氧化硅纳米颗粒的研制与应用

运用OP-10(壬基酚聚氧乙烯醚)/环己烷/氨水微乳液自组装体系合成了罗丹明B嵌入的荧光氧化硅纳米颗粒.通过电镜检测、光谱分析以及荧光猝灭试验研究了荧光颗粒的特性.将荧光纳米颗粒与培养细胞共培育后,通过激光扫描共聚焦显微镜和流式细胞仪研究了不同时间点细胞内荧光信号和荧光强度.结果表明,合成的荧光氧化硅纳米颗粒粒径小(约20nm),分布均匀,形态规则,表面光滑圆润,发光性质稳定.它可被体外培养细胞有效摄入,并可在培养细胞中检测到较强的荧光信号和较高的荧光强度.这提示生物荧光氧化硅纳米颗粒在细胞生物学、超微化学与免疫检测等领域将具有重要应用前景.

MecA基因在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类抗生素耐药中的作用

目的:探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中MecA基因表达水平对β-内酰胺类抗生素耐药的机制与作用。方法:利用头孢西丁纸片法筛选MRSA,提取MRSA细菌RNA,反转录成cDNA,实时荧光PCR检测MecA基因的表达水平;琼脂稀释法检测MRSA对头孢西丁、苯唑西林、万古霉素、利奈唑胺的最低抑菌浓度。结果:40株MRSA分为低水平耐药组(12株)、中水平耐药组(15株)、高水平耐药组(13株)。MecA基因的表达水平在MRSA低水平耐药组、中水平耐药组、高水平耐药组分别为58.87±30.30,363.37±200.05,1257.72±446.63,MRSA对头孢西丁、苯唑西林的耐药率为100.0%,没有检测到对万古霉素、利奈唑胺耐药的MRSA,但40株MRSA万古霉素的90%的细菌被抑制的浓度(MIC90)为2.0μg/mL。结论:MecA基因的表达水平可能与MRSA对β-内酰胺类抗生素耐药程度相关。

鼻咽癌差异表达基因PROL4特性分析

在正常成人鼻咽与鼻咽癌活检组织之间进行抑制性消减杂交和微阵列 (microarray)杂交 ,获得了鼻咽癌差异表达基因PROL4的全长cDNA序列 ,其GenBank登录号为 :AF5 30 4 72 .该基因包含 5 6 7个核苷酸 ,其编码产物是由 134个氨基酸组成的富含脯氨酸蛋白 .采用RT PCR证实了PROL4基因在鼻咽癌细胞株HNE1和鼻咽癌活检组织中表达下调或缺失 (42 /48) .12种组织RNA印迹显示 :PROL4基因在人骨骼肌、胸腺和肺组织中表达 ,其转录本大小约为 0 6kb ,与所克隆的PROL4基因的cDNA大小一致 .进而通过肿瘤表达谱阵列(cancerprofilingarray)杂交检测了其在乳腺癌、子宫癌、结肠癌、胃癌、卵巢癌、肺癌、肾癌、直肠癌、甲状腺癌、子宫颈癌、前列腺癌、胰腺癌、小肠癌组织及其配对的正常组织的表达状况 .

临床727例次单采血小板输注效果分析

为分析临床单采血小板输注效果及其影响因素,回顾性分析湘雅第三医院2010年9月至2011年5月进行单采血小板输注的254名患者的727例次输注资料,计算血小板计数增高指数(CCI)和血小板回收率(PPR)评价血小板输注效果,统计输注有效率,根据患者病症、输血次数、血型和脾肿大与否分组进行统计学比较。结果表明,727例次输注单采血小板有效456例次,占62.72%,以急性失血性贫血和慢性系统性疾病患者输注效果较为明显,尤其是慢性肾疾病(有效率为94.12%);脾脏肿大影响血小板输注效果(有效率仅为40.35%);血小板输注次数与输注效果呈负相关。结论:脾脏肿大和血小板输注次数是影响输注效果的因素。

产AmpC酶及或产超广谱β-内酰胺酶的阴沟肠杆菌的检测及耐药性研究

目的了解阴沟肠杆菌产AmpC酶或同时产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的临床现状,检测阴沟肠杆菌对常用13种抗生素的耐药性,以指导临床合理选择抗生素。方法采用三维实验确证产AmpC酶和产ESBLs菌株;用纸片扩散法进行耐药性检测。结果分离出阴沟肠杆菌120株,AmpC酶菌株检出率为20.0%(24/120),ESBLs菌株检出率为25.0%(30/120),同时产AmpC酶和ESBLs即SSBL检出率为12.5%(15/120)。阴沟肠杆菌SSBL菌株对左氧氟沙星、头孢吡肟和氨曲南的耐药率高于单产AmpC酶的菌株,差异具有统计学意义(P<0.05);SSBL菌株对亚胺培南、头孢西丁、环丙沙星的耐药率高于ESBLs菌株,差异有统计学意义(P<0.05);SSBL菌株对亚胺培南、头孢吡肟、头孢曲松、环丙沙星的耐药率高于不产AmpC酶及ESBLs即SSBL阴性的菌株,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论AmpC酶和ESBLs是导致阴沟肠杆菌对第3代头孢菌素耐药的重要原因,SSBL菌株的流行增强了此类菌株的耐药性,治疗阴沟肠杆菌感染时应以耐药检测结果为依据,可根据药敏结果考虑选用碳青酶烯类、喹诺酮类抗生素。

BRD7交互作用蛋白基因BRD2、BRD3在鼻咽癌组织中的表达

背景与目的:BRD7基因是通过cDNA代表性差异分析获得的一个鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)密切相关基因。采用酵母双杂交技术,已从人胎脑的cDNA文库中筛选到了两个与BRD7蛋白存在交互作用且包含溴区结构域(bromodomain)的蛋白BRD2、BRD3。本研究的目的在于进一步证实BRD7蛋白与BRD2、BRD3蛋白之间的交互作用,探讨BRD2、BRD3基因在鼻咽癌中的表达和作用模式。方法:将BRD2、BRD3基因分别与BRD7基因共转化酵母Y187后将菌落影印到尼龙膜,X-Gal检测酵母中报告基因LacZ的表达,推断BRD2、BRD3与BRD7蛋白之间的交互作用。RT-PCR方法检测BRD2、BRD3基因在正常鼻咽上皮组织和鼻咽癌活检组织中的差异表达以及在BRD7基因稳定转染的鼻咽癌细胞株(HNE1)中,BRD7基因的重表达对BRD2、BRD3基因表达水平的影响。结果:通过特异性酵母双杂交技术,发现酵母转化子的颜色呈蓝色,进一步证实BRD2、BRD3蛋白能分别与BRD7蛋白发生交互作用。RT-PCR结果显示,在鼻咽癌组织中,BRD2和BRD3基因表达下调或缺失;在BRD7基因稳定转染的HNE1细胞株中,随着BRD7基因表达的增强,BRD2、BRD3基因的表达也存在明显的上调。结论:BRD7蛋白能分别与BRD2、BRD3蛋白发生交互作用,且在mRNA水平存在一定程度的协同表达作用。

鼻咽癌表达下调基因NASG3'UTR可变剪接分析及其在多种肿瘤中的表达

背景与目的:采用抑制性消减杂交技术已分离获得了人鼻咽组织特异性基因NASG。本研究对人鼻咽组织特异性表达且在鼻咽癌表达下调的NASG基因3'非编码区(untranslatedregion,UTR)的可变剪接进行分析,并考察NASG基因在多种肿瘤组织中的表达。方法:在NASG基因3'UTR存在可变剪接部位的两端设计引物进行RT-PCR扩增,分离扩增产物并测序。用RT-PCR检测NASG基因在鼻咽癌中的表达,采用了肿瘤表达谱阵列(cancerprofilingarray)杂交分析NASG基因在多种肿瘤组织的表达状况。结果:NASG基因3'UTR存在3种剪接产物,NASG基因在71%的鼻咽癌活检组织中表达下调,25%的肺癌组织中表达上调,而在其他肿瘤及其配对的正常组织未见明显表达。结论:NASG基因3'UTR存在3种剪接产物,NASG基因的表达异常是鼻咽癌和肺癌发生、发展过程中重要的分子事件。

NOR_1基因对HepG2细胞白介素-8水平的影响

目的探讨NOR1基因对HepG2细胞IL-8水平的影响。方法将NOR1基因通过脂质体转染入HepG2细胞后,抽提细胞总RNA,运用RT-PCR检测IL-8mRNA的水平,用ELISA检测细胞培养上清液IL-8的表达水平。结果细胞培养上清液IL-8蛋白水平,转染NOR1基因组明显高于空白组和对照组(P<0.01);而转染NOR1基因组与转染空质粒组IL-8mRNA的表达水平无显著差异(P>0.05);结论NOR1基因诱导HepG2细胞IL-8蛋白水平表达增高。

肝移植术后细菌性感染的病原学特征

目的:分析肝移植术后感染的主要病原菌及病原菌的耐药特征。方法:分析肝移植术后感染的主要病原菌,运用三维试验检测主要革兰阴性杆菌的超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamase,ESBLs)、AmpC酶等产生情况与变化,以头孢硝基噻吩显色法、琼脂稀释法检测肠球菌的β-内酰胺酶和Van基因。结果:肝移植术后感染主要病原菌为粪肠球菌(15.0%)、阴沟肠杆菌(13.9%)、真菌(13.3%)、大肠杆菌(10.7%)。阴沟肠杆菌和大肠杆菌的ESBLs酶检出率分别为32.4%和36.8%;AmpC酶的检出率为33.8%和10.5%,粪肠球菌和屎肠球菌的Van基因检出率分别是VanA7.5%和11.1%,VanB3.8%和7.4%,VanC1.3%和0。结论:肝移植术后以肠源性感染为主,产ESBLs与AmpC酶是肝移植术后革兰阴性杆菌耐药的主要机制,耐万古霉素的肠球菌在肝移植术后的检出率增高应引起临床重视。

重症监护室内鲍曼不动杆菌随机扩增DNA多态性分型研究

目的 建立鲍曼不动杆菌随机扩增 DNA多态性 (RAPD)分型技术 ,以用于临床菌种鉴定及流行病学调查。方法 收集 6个月内从 ICU内分离出的 14株鲍曼不动杆菌 ,提取 DNA后进行 RAPD分型 ;同时进行生物学分型和抗生素敏感性实验。结果 14株菌株被分为 5种 RAPD型 ,其中有 5株属于同一种类型 (A型 ) ,有 6株属于另外同一种类型 (B型 ) ,其他 3株分别属于另 3种不同类型 (C、D、E型 ) ;而生物学分型只有两种类型 (生物型1、9) ;抗生素敏感性实验表明 14株菌株均为仅对亚胺培南 /西司他丁 (泰能 )、头孢哌酮 /舒巴坦 (舒普深 )等少数几种抗生素敏感的多重耐药菌株。结论 ICU内存在鲍曼不动杆菌暴发流行 ,RAPD分型技术分型率高、分辨力强、简便快速 。