医科院校中非法医学专业医学生开设《法医学》选修课助力医学生综合素质提升

当前,一些社会热点问题如医闹、暴力伤医、杀医等事件的频发,导致医务工作者身心受损等一些现实问题的出现,结合新医科建设发展的需要,我们对339名选修《法医学》课程并考核合格的本科生以无记名方式进行调查,了解医学生对法医学知识的需求,分析课程建设改革,助力新医科人才培养,帮助医学生在今后的工作中真正实现知识和技能从“学”向“用”的过渡,以期让学生通过学习更好地适应未来岗位和社会需要。

α-鹅膏蕈碱在大鼠体内的毒代动力学与组织分布特征

目的研究α-鹅膏蕈碱在大鼠体内的毒代动力学和组织分布特征。方法SD大鼠ip给予α-鹅膏蕈碱(1.5 mg·kg^(-1)),于给药前和给药后5,10,20,30和45 min及1,1.5,2.5,4和8 h分别采集尾静脉血,采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法测定血液中α-鹅膏蕈碱的浓度,应用DAS 2.0药动学软件,以非房室模型法计算统计矩参数,绘制浓度-时间曲线,拟合毒代动力学参数。依据毒代动力学结果,将18只SD大鼠随机分为3组,分别于给药15和40 min及2.5 h后处死,采集心、肝、脾、肺、肾、全脑、小肠、胃壁和睾丸9种组织样本及左心室动脉血,LC-MS/MS法测定α-鹅膏蕈碱浓度。结果大鼠ip给予α-鹅膏蕈碱后,全血峰浓度(C_(max))为(633±121)μg·L^(-1),消除半衰期(T1/2)为(0.72±0.37)h,达峰时间(T_(max))为(0.52±0.16)h,体内总清除率(CLz)为(1.62±0.26)L·h·kg^(-1),曲线下面积(AUC_(0-t))为(946±183)μg·h·L^(-1),平均滞留时间(MRT0-t)为(1.18±0.17)h,表观分布容积(Vz)为(1.65±0.86)L·kg^(-1)。组织分布研究结果表明,α-鹅膏蕈碱在SD大鼠体内广泛分布,肾中浓度最高,其次是肺、小肠、胃壁、左心室动脉血和肝,心、脾和睾丸等中含量较低,脑中含量极低。α-鹅膏蕈碱吸收消除快,在各组织中15 min即可检出,40 min达峰,2.5 h后浓度低于15 min。结论ip给予α-鹅膏蕈碱在SD大鼠体内吸收消除快,给药后约0.52 h血药浓度达峰值,4 h后不能检出;α-鹅膏蕈碱主要分布在肾,其次为血流丰富的组织及代谢器官,如肺、小肠、胃壁、左心室动脉血和肝等,在心、脾和睾丸等组织含量较低,脑组织含量极低。推测其血脑屏障透过率低,对肾可能具有毒性靶向作用。

三种常用抗凝剂处理血液样本后DNA提取方法探讨

目的:探究血液样本在经过三种常见抗凝剂以不同浓度处理后,适宜的DNA提取方法。方法:使用肝素钠、柠檬酸钠、EDTA-Na2三种抗凝剂以1 mg/ml,2 mg/ml,4 mg/ml,8 mg/ml四种浓度剂量对血液样本进行抗凝处理,分别采用直接扩增法、Chelex-100法和硅珠法三种不同的DNA提取方法提取血液样本中的DNA,随后进行荧光复合扩增及STR自动分型,使用直接计数法对STR分型结果进行评价,并进行统计学分析和结果比较。结果:采用三种提取方法均能提取3种抗凝剂处理的血样中的DNA,并得到不同效果的STR分型。直接扩增法处理抗凝剂浓度为1 mg/ml,2 mg/ml,4 mg/ml的血样时,STR分型结果无显著性差异(P > 0.05),抗凝剂浓度为8 mg/ml时,结果有显著性差异(P 0.05)。结论:在研究的范围内,Chelex-100法和硅珠法提取的血液样本DNA质量不受三种抗凝剂的影响。血液样本经高浓度(≥8 mg/ml)抗凝剂处理后的DNA提取方法,不宜选用直接扩增法。

云南泸西汉族17个Y-STR基因座多态性及遗传关系分析

调查云南泸西县汉族群体17个Y-STR基因座的多态性分布,探讨其群体遗传学及法医学应用价值。应用AmpFSTRYfiler荧光标记复合扩增系统扩增156名汉族无关男性个体的17个Y-STR基因座,用ABI3100遗传分析仪进行基因检测,计算等位基因及单倍型频率,并结合已公开发表的国内外其他16个群体的遗传学资料,分析各群体间的遗传距离。云南泸西汉族男性群体中,共观察到154种单倍型,其中152种为仅观察到1次的单倍型,2种单倍型观察到2次,单倍型多样性(HD)值为0.9998,基因多样性(GD)值在0.3901(DYS437)—0.9632(DYS385a/b)。17个群体遗传距离分析提示,国内人群云南泸西汉族与湖南汉族的遗传距离最小(0.005),与闽南汉族的遗传距离最大(0.035);在中国周边群体中,云南泸西汉族与新加坡华人的遗传距离最小(0.015),与日本人和马来西亚印度人群的遗传距离最大(0.060)。结果表明,17个Y-STR基因座在云南泸西汉族中具有较高的遗传多态性,适用当地的法医学应用。与其他民族群体的遗传多样性比较,对了解各群体的起源、迁徙及相互关系有重要意义。

指甲游离缘的核DNA分型研究

为探讨指甲游离缘核DNA分型的可行性,采集无关个体指甲游离缘样本10份,分别以不同消化体系,采用有机法、Chelex-100法,有机法结合Chelex-100法等3种方法提取指甲游离缘核DNA,AmpFlSTR IdentifierTM试剂盒复合扩增,ABI PRISM3130自动遗传分析仪检测分析。结果显示:与对照血样比较,有机法结合Chelex-100法提取的样本核DNA均获得满意的STR分型,有机法提取的样本核DNA可以进行STR分型,但部分样本图谱峰值不均衡,Chelex-100法提取的样本核DNA不能分型或出现较多等位基因缺失。提示指甲游离缘可以进行成功地核DNA的分型,有机法和有机法结合Chelex-100法提取的DNA质量都可成功检测,其中以有机法结合Chelex-100法提取DNA的检测成功率最高。

游离缘指甲DNA检验1例

在法医日常检案中，指甲DNA检验需要拔取整枚指甲，消化指甲的甲体或甲根部分才能得到满意的DNA检验结果。甲体的前部DNA分型效果差，因此指甲的游离缘（free margin of nail），即指甲前缘延伸到离开甲床的部分，通常不作为核DNA检验的样本。本例在处理一起抛尸粪池尸体时，以剪下的指甲游离缘作为检验对象，经有机法结合Chelex法提取DNA．取得了满意的STR分型。

以口腔粘膜细胞为对照检测异基因造血干细胞移植后嵌合状态

目的:探讨以口腔粘膜细胞DNA代表移植前基因状态的可行性,解决缺乏移植前样本病例嵌合状态的检测问题.方法:对2例接受异基因造血干细胞移植术病例,采集供者、受者移植术前外周血、受者移植术后外周血和口腔粘膜拭子,以PCR-STR技术对各样本进行DNA分析,对比移植前后基因分型变化判断嵌合状态,比较受者移植术前外周血和移植术后口腔粘膜拭子基因分型的异同.结果:2病例移植后受者外周血的PCR-STR基因分型与供者一致,呈完全的供者嵌合状态;受者移植后的口腔粘膜细胞基因分型与移植前外周血的基因分型一致.结论:口腔粘膜细胞的DNA样本可以代表受者移植前的基因状态,在实践中可以用口腔粘膜细胞代替移植前的受者样本进行嵌合状态的检测.

检测实验室标准方法管理存在的问题及解决对策探讨

检测标准是实验室质量管理体系技术要素中一个重要环节,本文就目前检测实验室标准方法管理中存在的问题进行了分析,并为解决这些问题,探讨了一些解决对策供实验室参考。

短串联重复序列的研究及应用

STR是当前应用最广泛的 DNA遗传标记 ,本综述对 STR的特点、发展历史、筛选和检测、在各学科的应用。

生物素标记探针检测外周血白细胞端粒长度的应用研究

目的建立生物素标记测定端粒DNA长度的方法,探讨其法医学应用价值.方法基因组DNA经RsaI和HinfI限制性内切酶消化,0.8%琼脂糖凝胶电泳,Southern印迹转移,以5'末端生物素标记寡核苷酸(TTAGGG)3为探针进行杂交,化学发光检测DNA谱带,与DNA标准分子量比较计算端粒长度.结果通过严格控制印迹转移条件、探针的工作浓度、杂交温度等主要影响因素,获得了比较好的杂交条带.结论生物素标记探针检测端粒DNA长度方法稳定、可靠,无放射污染,杂交信号明显.

质量管理知识和理念引入法医本科生教学实践的探索与思考

本文着眼于法医学本科学生的教学内容改革,阐述了法医本科生教学实践活动中引入质量管理知识和质量管理理念的重要性,对法医本科生引入质量管理知识和质量管理理念的教学实践活动方式以及培养高素质的法医学实用型人才的教学内容改革进行了全新的探索与思考。

云南人群1199例亲子鉴定案件基因突变分析

目的 观察和分析PowerPlex~21 System试剂盒20个短串联重复序列（STR）基因座在云南人群亲子鉴定中的突变现象。方法 采用PowerPlex~21 System试剂盒对1 199例结论为“肯定”的亲子鉴定案件进行基因分型,对基因座存在不符合遗传规律者,判断突变等位基因类型及来源,分析基因座突变率及特点。结果1 199例亲子鉴定中,共观察到39例突变,其中38例有1个STR基因座发生突变,2个STR基因座同时突变的观察到1例。在被研究的20个常染色体STR基因座中17个基因座观察到基因突变现象,突变率在0~0.29%之间,父源与母源突变比为2.8∶1。结论 获得了云南人群20个常染色体STR基因座的突变率,本结果不仅为司法鉴定服务案件中突变情况下的亲权指数计算提供了数据支持,而且为法医学遗传标记的选择提供了客观依据。

云南汉族人群20个常染色体STR基因座遗传多态性

目的研究云南汉族群体20个常染色体基因座的遗传多态性.方法采用Power PlexR21 System试剂盒,对1085例云南汉族无关个体20个常染色体基因座（D3S1358、D1S1656、D6S1043、D13S317、Penta E、D16S539、D18S51、D2S1338、CSF1PO、Penta D、TH01、v WA、D21S11、D7S820、D5S818、TPOX、D8S1179、D12S391、D19S433、FGA）进行复合扩增,用AB 3130自动遗传分析仪进行扩增产物的电泳分离,用Genemapper ID v3.2软件进行STR基因分型分析,用Modified-Powerstates软件进行法医学遗传学参数统计分析以及Hardy-Weinberg平衡检验.结果在1085例云南汉族人群中,除TH01和TPOX基因座,其余STR基因座的均具有高度遗传多态性,杂合度（H）分布在0.6130-0.8743之间,随机匹配率（PM）分布在0.0179-0.2030之间,个体识别力（DP）在0.7970-0.9821之间,非父排除率（PE）在0.3067-0.7432之间,父权指数（PI）在1.2919-3.9766之间,多态性息含量（PIC）在0.5598-0.8958之间.基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律.结论这20个常染色体基因座在云南汉族人群中具有较高的多态性和较好的个体识别能力,能满足法医学个体识别和亲权鉴定的需要.

卵巢巧克力囊肿自发破裂致急腹症临床特点分析

目的探讨卵巢巧克力囊肿自发破裂的误诊原因、治疗及复发,提高卵巢巧克力囊肿破裂的诊断率.方法研究65例卵巢巧克力囊肿自发破裂患者的临床特点、诊断及治疗方法,以195例未破裂患者作为对照进行回顾性分析.结果卵巢巧克力囊肿破裂组较未破裂组年龄、痛经发生率、术前确诊率、腹腔镜手术率及术后复发率等差异有统计学意义(P<0.05);囊肿大小、手术范围等差异无统计学意义(P>0.05);卵巢巧克力囊肿破裂时,子宫直肠窝内穿刺大多(21/24)能抽出具有特征性的暗褐色咖啡样液体.结论卵巢巧克力囊肿破裂50%以上患者无痛经史,误诊率高,正确诊断的关键在于对本病的认识,后穹窿穿刺出暗褐色咖啡样液体有助于诊断.本病一旦确诊多需手术治疗,手术范围应根据病变范围、患者年龄及生育要求等全面考虑后决定.

一起云南不明原因猝死案件中4种野生菌的细胞毒性

目的探究一起云南不明原因猝死(Yunnan sudden unexplained death,YNSUD)案件中涉及的4种野生菌的细胞毒性,为YNSUD的防治提供实验依据。方法采集事件发生家庭食用过的4种野生菌,通过专家辨认和基因测序鉴定种属。运用超声波萃取法提取4种野生菌的生品浸膏干预HEK293细胞,然后用细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)筛选出有明显细胞毒性的野生菌。将筛选出的野生菌再分别制成生品、熬煮和熬煮后酶解3种浸膏,所得3种浸膏以不同浓度干预HEK293细胞,用CCK-8与乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)检测法联合检测细胞毒性,并用倒置相差显微镜观察细胞形态。结果4种野生菌分别为粉黄黄肉牛肝菌(Butyriboletus roseoflavus)、美味牛肝菌(Boletus edulis)、变绿红菇(Rus⁃sula virescens)和隐花青鹅膏(Amanita manginiana)。仅在隐花青鹅膏中发现细胞毒性,其生品浸膏在质量浓度为0.1 mg/mL时显示出细胞毒性,熬煮浸膏和熬煮后酶解浸膏分别在质量浓度为0.4 mg/mL和0.7 mg/mL时有明显细胞毒性。除数量明显减少外,隐花青鹅膏提取物干预后的HEK293细胞还表现出突触增多及折光性差等改变。结论该起YNSUD案件涉及的野生菌中,隐花青鹅膏的提取物具有明显细胞毒性,通过熬煮和酶解两种工艺可以降低其部分毒性,但不能完全灭毒,食用该菌具有一定的安全隐患,隐花青鹅膏可能是导致该起YNSUD案件的原因之一。

云南白族人群13个快速突变(RM)Y-STR基因座多态性研究

目的调查分析13个RMY—STR基因座等位基因频率及多态性分布.方法采用PCR复合扩增和ABI 3100遗传分析仪,检测白族110例无关个体13个RM Y-STR位点遗传多态性分布.结果在DYS570、DYS576、DYS518、DYS526、DYS626、DYS627、DYS449、DYS547、DYS612、DYF387S1、DYF399S1、DYF403S1和DYF404S1等13个RM Y-STR基因座中,基因多态性（GD）分布在0.7262（DYS526 A）~0.8711（DYF403S1 A）之间.由13个RMY-STR基因座组成的单倍型系统中单倍型有110种,单倍型多样性为1.结论上述13个RMY-STR基因座组成的单倍型系统在白族群体中具有很高的遗传多态性,在法医学的个人识别鉴定中有重要应用价值.

法医物证学课程内容和方法改革建设总结

法医物证学是法医学专业的一门主干学科.随着科学技术的日新月异,需要我们对课程进行不断的改进.近年来,法医物证学教研室不断加强师资队伍建设、改革教学内容、教学方法及教学手段,实现理论课程多媒体授课、案例教学以及实验课每个学生独立操作完成的教学模式.