第二代杂交捕获法诊断宫颈高度病变的临床评价

目的评价第2代杂交捕获法(HC2)检测13种高危型人乳头瘤病毒(HPV)用于诊断宫颈高度病变的效能。方法利用HC2检测292位妇女宫颈上皮细胞13种高危型HPV感染状况,以组织病理学检测结果为金标准评价HC2诊断宫颈高度病变[≥宫颈上皮内瘤变2级(C IN2)]的效能。结果≥C IN2组妇女13种高危型HPV感染率为95.56%(43/45),<C IN2组为66.40%(164/247),两组间差异有统计学意义(2χ=15.68,P<0.001)。HC2诊断宫颈高度病变的敏感性为95.56%,特异性为33.60%,阳性预测值为20.77%,阴性预测值为97.65%,阳性似然比为1.44,阴性似然比为0.13。受试者工作特征(ROC)曲线分析发现,HC2诊断宫颈高度病变时曲线下面积为0.64,最佳诊断值为3.46 pg/mL,此时方法的敏感性为93.30%,特异性为42.10%。结论宫颈高度病变与13种高危型HPV感染有关。HC2具有较高的敏感性和阴性预测值,但特异性和阳性预测值较低,临床上若用于宫颈高度病变的确诊,应与其他特异性较高的方法结合以提高其准确性。

HC2法在宫颈癌筛查中的应用现状

宫颈癌是一种妇科常见恶性肿瘤,位居妇科恶性肿瘤第二位,是导致女性死亡的主要疾病之一。宫颈癌的发生与许多因素有关,越来越多的调查表明,它的发生与人乳头瘤病毒(HPV)的感染有着密切的关系,将近90%的宫颈癌患者发现有HPV感染,故HPV检测对宫颈癌的预防与早期诊断有着重大的意义。第二代杂交捕获法(HC2)是目前唯一获得美国食品和药品监督管理局(FDA)批准用于临床HPV DNA检测的方法,该方法为半定量法,具有高度的敏感性和重复性,其用于临床检测对预防及早期诊断宫颈癌具有较大意义。

实时PCR和PCR-RDB法检测人乳头瘤病毒的比对研究

目的：比较实时 PCR 法和 PCR-反向点杂交法（PCR-RDB）检测 HPV 的一致性。方法收集109份女性生殖道样本，利用实时 PCR 法和 PCR-RDB 法分别检测 HPV 感染和基因型分布情况，不一致样本采用 PCR-悬浮芯片杂交法复检。结果83.5％（91／109）的样本两种方法结果一致（kappa＝0.671），18例不一致样本 PCR-悬浮芯片杂交法复检显示7例与实时 PCR相符，11例与 PCR-RDB 相符；高、低病毒载量组间 PCR-RDB 法的检测结果差异无统计学意义（χ2＝1.476，P ＝0.224）。结论实时 PCR 和 PCR-RDB 两法用于 HPV 检测一致性一般；HPV 病毒载量在103～108范围内时 PCR-RDB 法的阳性率较稳定。

宫颈病变妇女人乳头瘤病毒感染模式和基因型分布研究

目的研究宫颈病变妇女的人乳头瘤病毒感染模式及基因型分布状况。方法利用PCR-RDB法检测妇女宫颈上皮细胞人乳头瘤病毒感染情况及基因型,TCT技术检测其宫颈病变状况。结果NILM、ASCUS、LSIL、HSIL组的HPV感染率分别为28.81%、68.63%、80.95%和94.12%,4组间差异有统计学意义(x^2=76.23,P<0.01)。单一基因型人乳头瘤病毒感染与多种基因型合并感染比例分别占73.86%(113/153)和24.18%(37/153),4组间差异无统计学意义(x^2=5.70,P=0.127)。HPV16、HPV52和HPV58型为最常见的3种感染类型,其所占比例分别为19.17%(37/193)、17.62%(34/193)和13.47%(26/193)。HSIL组中,HPV16型所占比例最高,与其他3组比较,差异有统计学意义(x^2=0.042,P<0.05)。结论宫颈病变与人乳头瘤病毒感染有关;人乳头瘤病毒感染模式以单一基因型感染为主,合并感染为辅;HPV16为最常见感染类型,其次为HPV52和HPV58型。

杂交捕获法和PCR-RDB法检测妇女HPV感染的比较

目的探讨HC2法和PCR-RDB法检测妇女HPV感染的异同点。方法利用HC2法和PCR RDB法检测妇女生殖道HPV感染状况,然后进行比较。结果81.14%(400/493)的样本PCR-RDB法和HC2法检测结果一致,两法一致性检验Kappa值为0.63(95%CI,0.57～0.69)。在HC2法RLU/CO<1.00、1.00～9.99、10.00～99.99、100.00～999.99和≥1 000.00的样本中,PCRRDB法13种高危型HPV的检出率依次为1.60%(3/187)、29.85%(20/67)、69.88%(58/83)、86.52%(77/89)和91.04%(61/67),五组间比较,差异有统计学意义(X^2=289.3,P<0.01)。HC2法高危型HPV试剂可与HPV53、66、11、cp8304等基因型发生交叉反应。结论HC2法和PCR-RDB法具有较好的一致性,HC2法存在交叉反应现象,PCR-RDB法难以标准化。

高毒力艰难梭菌的基因型和毒力相关基因检测

目的鉴定莫西沙星耐药的艰难梭菌临床菌株的基因型和毒素相关基因的携带情况。方法 22株莫西沙星耐药的艰难梭菌临床菌株收集自澳大利亚悉尼地区,利用基于荧光毛细管电泳的聚合酶链反应(PCR)-核糖体分型技术对其进行基因分型;利用PCR方法检测其毒素A、B编码基因tcdA、tcdB和二元毒素编码基因cdtA、cdtB;利用PCR-基因测序方法检测毒素调节基因tcdC的基因序列,通过与参考菌株VPI 10463(Genbank收录号:X92982)比对了解其基因突变情况,通过与Genbank中的序列比对确定其序列型。结果 21株菌株为高毒力核糖体型027(RT027),另1株为RT078;22株菌株毒力编码基因均为tcdA+tcdB+cdtA+cdtB+;21株RT027 tcdC序列型为sc1,另1株RT078序列型为WA39,与参考株VPI 10463比较,RT027菌株tcdC序列均出现连续18个核苷酸(nt330-347)的缺失和第117位单核苷酸的缺失,RT078菌株则出现连续39个核苷酸(nt341-379)的缺失和第184位(C>T)的突变。结论高毒力RT027是最常见的莫西沙星耐药的艰难梭菌基因型;高毒力RT027和RT078均携带毒素A、B和二元毒素编码基因,且毒素调节基因tcdC均存在基因突变。

孕妇外周血中胎儿有核红细胞分离和应用研究

无创性产前实验诊断是指利用非侵入性方法获取胎儿细胞或核酸等物质,用于诊断胎儿是否携带遗传性疾病和先天性疾病。与传统羊水穿刺、绒毛膜取样等方法相比,该类方法最大的优势是不会引起孕妇感染、胎儿流产等并发症，因此成为当前研究的热点。现就从孕妇外周血中分离胎儿有核红细胞（fetal nucleated red blood cells，FNRBC）进行产前诊断研究的现状综述如下。

PCR-核糖体分型技术基因分型艰难梭菌

目的调查区域性的艰难梭菌基因型分布和毒素A、B的携带情况。方法 68株艰难梭菌临床菌株收集自悉尼大学韦斯特米德医院,利用PCR-核糖体分型技术进行基因分型,利用PCR方法检测毒素A、B编码基因tcdA、tcdB。结果 68株菌可分为31种核糖体型(RT),最常见的为RT014(19.1%)和RT002(11.8%);94.1%(64株)的菌株tcdA、tcdB均为阳性。结论悉尼地区主要流行的艰难梭菌基因型为RT014和RT002,绝大部分临床菌株均携带毒素A、B。

利用TCT技术和PCR-RDB法筛查宫颈高度病变

目的评价TCT技术、PCR-RDB法检测女性宫颈高度病变的价值。方法利用TCT技术和PCR-RDB法分别检测宫颈上皮细胞病变及HPV感染情况,以组织病理检查结果进行评价。结果 TCT技术检测宫颈高度病变的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为46.2%(95%CI,19.1%～73.3%)、98.0%(95%CI,96.3%～99.7%)、54.5%(95%CI,25.1%～84.0%)和97.2%(95%CI,95.2%～99.3%),PCR-RDB法分别为100.0%(95%CI,100.0%～100.0%)、58.6%(95%CI,52.5%～64.8%)、11.2%(95%CI,5.5%～17.0%)和100.0%(95%CI,100.0%～100.0%),两者联合后分别为100.0%(95%CI,100.0%～100.0%)、98.0%(95%CI,96.2%～99.7%)、77.3%(95%CI,59.8%～94.8%)和100.0%(95%CI,100.0%～100.0%)。结论 TCT技术和PCR-RDB法检测宫颈高度病变具有很好的互补性,两者联合应用对于筛查宫颈高度病变有很高的应用价值。

乙肝病毒对人精液参数和精子DNA完整性的影响

目的:探讨精液中乙肝病毒存在对精液参数和精子DNA完整性的影响。方法:采用实时荧光定量PCR技术对153例血清乙肝表面抗原阳性患者精液进行乙肝DNA定量检测,采用精子染色质扩散法检测精子DNA损伤指数(DFI),对比分析精液HBV DNA阳性组(A组,n=43)与阴性组(B组,n=110)精液参数包括精液体积、精子浓度、存活率、前向运动精子百分率、平均直线速率(VSL)、平均路径速率(WAP)结果,以及HBV DNA拷贝数与精子DNA损伤指数的关系。结果:乙肝感染者精液HBV DNA检出率为28.1%(43/153);两组年龄、精液体积、精子浓度无统计学差异(P>0.05),A组精子存活率显著低于B组[(51.4±17.1)%vs(58.0±18.8)%,P>0.05],前向运动精子率显著低于B组[(24.5±10.1)%vs(29.6±13.3)%,P>0.05],VSL显著低于B组[(19.9±4.5)μm/s vs(23.7±4.0)μm/s,P<0.01],WAP显著低于B组[(23.4±5.3)μm/s vs(26.5±7.0)μm/s,P<0.01];A组精子DNA碎片指数显著高于B组[(24.2±9.4)%vs(19.3±8.0)%,P<0.01];精液中HBV DNA拷贝数与精子DNA碎片指数呈正相关(r=0.819,P<0.01)。结论:精液中HBV DNA存在对精子数量尚未构成显著影响,但可能改变一些精液参数,包括精子活力和运动速度以及精子DNA完整性,精液中乙肝病毒载量和精子DNA损伤之间呈现病毒载量-效应关系。

孕早中期血清学检测指标联合筛查胎儿唐氏综合征的应用探讨

目的:比较孕妇早中孕血清学联合筛查方案与传统血清学筛查方案,探讨胎儿唐氏综合征联合筛查模式的效率。方法:回顾性选择例行产前检查且有回访结局的孕妇资料,早孕期和中孕期均进行了两个阶段的血清学筛查,早孕筛查采用二联法检测(PAPP-A、Freeβ?hCG),中孕筛查采用三联法检测(AFP、Freeβ?hCG和uE3)。早中孕联合筛查模式采用四联筛查方案,即将孕妇在孕中期三联检测的数据匹配其孕早期检测的数据,联合计算筛查风险值,以羊水染色体核型分析和追踪随访的妊娠结局为金标准做回顾性分析。结果:共计7559例孕妇,早孕筛查或中孕筛查有≥1次高风险孕妇341例,早中孕联合筛查评估的高风险孕妇为157例,联合筛查方案与阶段筛查方案的检出率均为87.5%(14/16),早中孕联合筛查的假阳性率为1.9%(143/7543),传统血清学筛查的假阳性率为4.34%(327/7543),差异有统计学意义(Fisher确切概率法,P<0.001)。结论:早中孕联合筛查与传统的阶段筛查方案相比,检出率一致,但假阳性率明显减低,可有效减少侵入性产前诊断的实施率。

妊娠高血压疾病血脂指标的变化

目的分析妊娠高血压疾病的血脂代谢特点，了解血脂代谢紊乱和妊娠高血压疾病的关系。方法选取孕周为37～41周的健康妊娠孕妇60例（正常妊娠组），妊娠高血压疾病孕妇90例（妊娠高血压疾病组），正常未孕女性60例（未孕组），比较3个组的三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白-胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白-胆固醇（LDL-C）、载脂蛋白-A（Apo-A）、载脂蛋白-B（Apo-B）及脂蛋白a（Lpa）之间的差异。同时将90例妊娠高血压疾病孕妇按病程分级分为妊娠高血压组30例、轻度子痫前期组30例及重度子痫前期组30例共3个组，并比较不同分级的妊娠高血压疾病孕妇血脂的变化，分析血脂异常程度与妊娠高血压疾病严重程度的关系。结果（1）未孕组、正常妊娠组及妊娠高血压疾病组间TC、TG、HDL-L、LDL-L、Apo-A及Apo-B水平差异有统计学意义（P＜0．05）；而3个组间Lpa水平差异无统计学意义（P＞0．05）。（2）在不同病程妊娠高血压疾病中，妊娠高血压组、轻度子痫前期组及重度子痫前期组3个组的TG、LDL-C、Apo-B水平比较差异有统计学意义（P＜0．05），而TC、HDL-L、Apo-A及Lpa各组之间差异无统计学意义（P＞0．05）。结论妊娠高血压疾病的发生可能与孕期血脂代谢紊乱相关，血脂异常程度越高，发生严重妊娠高血压疾病的可能性就越大，故加强血脂监测，早期进行干预并纠正血脂紊乱以保证母婴健康。

复发性流产患者种植窗期血清雌、孕激素水平和子宫内膜端粒酶的表达

目的:分析复发性流产(RSA)患者种植窗期血清雌、孕激素水平和子宫内膜端粒酶的表达,探讨RSA病理生理学机制。方法:选择2014年6月—2015年3月在深圳市宝安区妇幼保健院就诊的RSA患者32例及正常妊娠女性25例作为研究对象,采用宫腔镜检查、化学发光法、免疫组化法和实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法,分别检测种植窗期宫腔及子宫内膜形态、血清雌二醇(E_2)、孕酮(P)水平以及子宫内膜中端粒酶含量。结果:1RSA患者中,宫腔镜下表现为差型子宫内膜者(腺体开口小或内膜血管呈点状或片状分布,严重者内膜呈鸡蛋壳状,未见明显血管及腺体)占56.3%,腺体与间质反应不同步者占40.6%;在正常妊娠组中,表现为佳型子宫内膜者(腺体开口大,极度扩张呈指环状,且内膜血管丰富呈网状分布)占84%,腺体与间质反应同步者占88%,2组比较差异有统计学意义(均P<0.05)。2种植窗期端粒酶活性与E_2/P比值呈线性相关(r=0.947 5),RSA组种植窗期子宫内膜端粒酶活性较正常妊娠组明显增强(P<0.05)。32组种植窗期子宫内膜端粒酶在腺上皮细胞及间质细胞均有表达,在腺上皮细胞中表达差异无统计学意义(P>0.05),在间质细胞中RSA组较正常妊娠组增强(P<0.05)。结论:1种植窗期宫腔镜下子宫内膜形态有助于了解及初步判定RSA患者子宫内膜容受性,为查找病因提供依据。2种植窗期子宫内膜端粒酶活性失调可能与RSA有关。3种植窗期检测血清雌、孕激素及子宫内膜端粒酶活性有助于评价RSA患者的子宫内膜容受性,从而为改善及治疗RSA提供依据。

深圳地区女性生殖道HPV感染及基因型结果分析

目的：研究深圳市宝安区女性人乳头瘤病毒（HPV）感染情况，以及不同年龄段 HPV 阳性率和各亚型的分布情况。方法采用聚合酶链式反应-反向斑点杂交法（PCR-RDB）对2011年1月至2012年12月在深圳市宝安区妇幼保健院就诊的患者（2627例）进行23种 HPV 基因分型检测。结果2627例样本中 HPV 阳性率为23．94％（629例）。其中单一低危型感染占15．10％，以 HPV43型为主；单一高危型感染占55．17％，以 HPV52、HPV16、HPV58型为主；混合感染占29．73％。15～＜21岁、21～＜31岁、31～＜41岁、41～50岁与＞50岁年龄组 HPV 感染率分别为50．0％、24．7％、20．8％、25．8％、42．1％，差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论深圳市宝安地区 HPV 感染率为23．94％，基因型分布以 HPV 52、16、58、43型为主，15～20岁年龄段感染率高于其他年龄段。

实时PCR和颗粒凝集法检测儿童呼吸道肺炎支原体感染

目的分析呼吸道感染儿童中肺炎支原体的感染情况,比较肺炎支原体核酸(MP-DNA)和抗体(MP-Ab)检测结果。方法收集2011年深圳市宝安区妇幼保健院儿科门诊及住院呼吸道感染患者2 781例,利用实时荧光PCR和颗粒凝集法分别检测MP-DNA和MP-Ab。利用McNemar's和Kappa检验比较两种方法检测结果;利用χ2检验比较不同季节和年龄段儿童肺炎支原体感染率。结果①MP-Ab阳性率(19.17%)明显高于MP-DNA(5.57%)(χ2=257.0,P<0.001),两法间的一致性较差(kappa=0.115;95%CI,0.076～0.154);②MP-Ab滴度为<1∶40、1∶40、1∶80、1∶160及≥1∶320组中MP-DNA的阳性率分别为4.2%、6.2%、9.2%、10.0%及22.2%,差异有统计学差异(χ2=99.48,P<0.001);③儿童MP冬季的感染率(31.01%)明显高于其它三季(P<0.001)。④不同年龄段患儿MP感染率存在差异(χ2=378.209,P<0.001),≥6岁年龄段最高(59.66%)。结论①MP-Ab检测MP感染的阳性率高于MP-DNA,MP-DNA的阳性率随抗体滴度的增高而增加;②儿童肺炎支原体感染有季节性及年龄段差异。

人乳头瘤病毒基因分型方法的建立和应用

目的建立一种简便快捷、灵敏度高、经济实用的人乳头瘤病毒(HPV)基因分型的低密度基因芯片技术,并对该方法进行评价。方法用低密度基因芯片技术对355例疑似HPV感染女患者检测HPV并分型;用杂交捕获Ⅱ代(HCⅡ)法进行评价,并用该法对珠江三角洲地区的730例标本进行HPV分型检测。结果355例疑似样本中,低密度基因芯片技术和HCⅡ法分别检出211例(59.4%)和222例(62.5%)阳性标本,符合率达94.1%(334/355)。低密度基因芯片技术共检测出15种常见高危型和5种低危型,其中16、52、58、56型检出率较高。结论低密度基因芯片技术能具体分型和检测混合感染,HPV检测与细胞学检测结合,对宫颈癌筛查有重要意义。

α地中海贫血不同基因型携带(患)者红细胞参数的差异性研究

目的:探讨α地中海贫血(简称地贫)不同基因型携带(患)者红细胞参数的差异性。方法:回顾性分析深圳市宝安区妇幼保健院2012~2016年确诊的1610例女性α地贫携带(患)者红细胞参数,对照组为1849例非地贫健康妇女。采用PCR-反向斑点杂交法检测3种非缺失型α地贫,采用Gap-PCR凝胶电泳法检测3种缺失型α地贫,采用Beckman Coulter LH750血细胞分析仪测定红细胞数量(RBC)、血红蛋白浓度(Hb)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)和平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)。结果:对照组、静止型α地贫、标准型α地贫和HbH病Hb、MCV、MCH和MCHC依次递减(P<0.05);对照组、静止型α地贫和标准型α地贫RBC依次增高(P<0.05),但HbH病RBC数量较标准型α地贫降低(P<0.05)。静止型α地贫α^(QS)α/组较其它4型(α^(CS)α/、α^(WS)α/、-α^(3.7)/和-α^(4.2)/)RBC增高(P<0.05),MCV和MCH降低(P<0.05)。标准型α地贫α~0-杂合组RBC比α^+-纯合或双重杂合组增高(P<0.05),MCV和MCH降低(P<0.05)。HbH病α^(WS)α/--^(SEA)、-α^(3.7)/--^(SEA)或-α^(4.2)/--^(SEA)、α^(CS)α/--^(SEA)或α^(QS)α/--^(SEA)3组Hb依次降低(P<0.05),-α^(3.7)/--^(SEA)或-α^(4.2)/--^(SEA)组MCV和MCH比其他两组降低(P<0.05),α^(CS)α/--^(SEA)或α^(QS)α/--^(SEA)组RBC比其它两组降低(P<0.05)。结论:α地贫携带(患)者随着缺失或突变基因数量的增加,Hb、MCV、MHC和MCHC降低,RBC增高,但部分严重贫血的基因型RBC会降低;各组内不同基因型红细胞参数变化各有特点,突变型引起的贫血重于缺失型,但α^(WS)α/--^(SEA)型贫血轻于其他类型HbH病。

地中海贫血携带(患)者基因型分布及HbA_2参数特征

目的分析地中海贫血(简称地贫)携带(患)者基因型分布及血红蛋白(Hb)A_2的参数特征。方法回顾分析2 194例α-地贫和970例β-地贫女性携带(患)者的基因型分布以及其中1 438例α-地贫和646例β-地贫携带(患)者HbA_2的水平。选取1 629名非地贫健康女性,作为对照组。结果α-地贫组分为静止型组(740例)、标准型组(1 400例)和HbH病组(54例)。静止型组有5种基因型,以-α3.7/αα和-α4.2/αα为主;标准型组有9种基因型,以--SEA/αα为主;HbH病组有5种基因型,以-α3.7/--SEA为主。对照组、静止型组、标准型组和HbH病组的HbA_2水平依次降低(P<0.05),但对照组与静止型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。β-地贫组分为βE-地贫组(26例)、β+-地贫组(400例)和β0-地贫组(544例),βE-地贫组只有βCD26/βN 1种基因型;β+-地贫组有4种基因型,以βIVS-Ⅱ-654/βN和β-28/βN为主;β0-地贫组有8种基因型,以βCD41-42/βN和βCD17/βN为主。对照组、β+-地贫组、β0-地贫组和βE-地贫组的HbA_2水平依次升高(P<0.05)。结论 HbA_2对β-地贫和HbH病的筛查参考价值较大,遗传咨询中应同时结合血常规检测结果进行分析,从而避免静止型、标准型的漏检。

地中海贫血实验室筛查指标评价

目的探讨多项实验室指标用于筛查地中海贫血(简称地贫)基因携带者的临床应用价值。方法选取在深圳市宝安区妇幼保健院体检、婚检和产检的人员1 373例,对其均进行血常规血细胞分析、血红蛋白成份分析和地贫基因诊断。以基因诊断为金标准,对已明确诊断的α-地贫组548例、β-地贫组248例、α-合并β-地贫组33例和非地贫组544例,进行红细胞参数[红细胞数量(red blood cell count,RBC)、血红蛋白(hemoglobin,HB)含量、红细胞压积(hematocrit,HCT)、平均红细胞体积(mean corpuscular volume,MCV)、平均血红蛋白含量(mean corpuscular hemoglobin,MCH)、平均血红蛋白浓度(mean corpuscular hemoglobin concentration,MCHC)和血红蛋白A2(hemoglobin A2,Hb A2)含量]比较;计算MCV、MCH和Hb A23项血液学指标联合筛查结果的灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值。结果地贫组与非地贫组比较,地贫组HB、HCT、MCV、MCH和MCHC均减低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与非地贫组相比较,β地贫组Hb A2值明显升高(P<0.05)。MCV与MCH 2项平行联合筛查地贫的灵敏度及特异度分别为94.0%和82.9%;MCV、MCH和Hb A2-HPLC 3项平行联合筛查地贫的灵敏度及特异度为97.7%和39.2%。结论 Hb A2定量分析是筛查β-地贫极有价值的实验室指标,但对于筛查α-地贫敏感性较差,漏检率高。MCV、MCH两者平行联合或与Hb A2-HPLC三者平行联合筛查有较高的检测灵敏度,但特异度不甚理想。因此在进行地贫筛查时,需综合分析实验室各项指标,以降低漏诊率。

多重PCR和反向线点杂交技术快速检测鲍曼不动杆菌21个主动外排基因及临床应用

目的建立一种新的多重PCR和反向线点杂交技术(mPCR-RLB)快速同时检测鲍曼不动杆菌21个主动外排基因的方法并评价其临床应用价值。方法根据GenBank中收录的多重耐药鲍曼不动杆菌AYE株5个外排泵蛋白基因家族,选取其中21个基因(4个来自MFS家族,13个来自RND家族,2个来自MATE家族,1个来自SMR家族,1个来自ABC家族)。设计22对引物及寡核苷酸探针(1对鲍曼不动杆菌通用引物及探针),mPCR同时扩增22个目的基因,PCR产物再与固定在尼龙膜上的特异性寡核苷酸探针反向线点杂交,同时检测上述22个基因。用该法对40株经过鉴定的鲍曼不动杆菌进行检测。结果除cmlA5和cmlA基因未检出阳性外,其余19个外排泵基因均呈阳性。除第16号菌株外排泵基因检测阴性外,其余39株鲍曼不动杆菌临床株携带外排泵基因数量从5～18个不等。外排系统在多重耐药菌株及相对敏感菌株中均有分布。11个外排泵基因在多重耐药鲍曼不动杆菌菌株中阳性率明显高于敏感株,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论建立的mPCR-RLB技术可快速同时检测鲍曼不动杆菌多个外排泵基因,短时间内明确菌株携带外排泵基因情况,对明确其多重耐药性的发生机制、避免药物成为外排泵对象、找到更有效的特异外排系统抑制剂均有重要意义。