204例肺结核患者耐药情况调查与分析

目的 调查肺结核患者对 4种抗结核药物 (S ,H ,R ,E)的耐药情况。方法 对广州市胸科医院 2 0 4例肺结核患者耐药情况进行回顾性调查。结果 2 0 4例肺结核患者中 ,初治患者 14 3例 ,复治患者 6 1例。肺结核患者总耐药率为 4 4 . 7% ;不同年龄组的耐药率差异无显著性 (P >0 . 0 5 ) ;复治患者耐药率 80 . 6 %高于初治患者2 2 4 % (P <0 .0 5 ) ;4种抗结核药物的耐药率由高到低依次为 :H(36 . 2 % ) ,R(31. 9% ) ,S(2 4 .5 % )和E(7. 4 % ) ;初治和复治患者耐 1种、耐 2种、耐 3种及耐 4种药物的耐药率分别是 :6 . 9% ,5 . 2 % ,3 4 % ,6 . 9%和 19. 4 % ,2.7 8% ,8 3% ,2 5 % ,同时对H ,R耐药的MDR -TB发生率为 2 4 . 5 %。结论 临床抗结核药物耐药情况依然严重 ,且耐药趋于对主要一线抗结核药物和对多种药物耐药 ,应加强肺结核病的治疗管理工作 ,积极探索耐药性结核病的治疗和控制的新方案。

巢式PCR法构建人细胞色素P4501A1基因cDNA全长T载体

目的构建含限制性内切酶位点KpnI,XhoI的人细胞色素氧化酶(CYP1A1)基因cDNA全长的pGEM -T载体。方法从培养的MCF-7细胞中抽提总RNA并根据人细胞色素P4501A1(CYP1A1,GeneBank NM- 000499)开放阅读框设计两对引物,采用巢式-PCR方法扩增CYP1A1 mRNA全长,凝胶分离并回收扩增的DNA片断,与T载体连接后转化大肠埃希菌DH5α,挑选3个阳性克隆,扩增培养后抽提重组质粒并进行PCR及酶切鉴定, 再行测序分析。结果重组质粒PCR扩增得到1568 bp的片段,KpnI,XhoI限制性内切酶消化质粒证实目的片断成功插入至载体,测序分析也进一步证明了目的片段与GeneBank中CYP1A1 mRNA的序列同源性为99.9%。结论该实验成功地构建了含CYP1A1基因cDNA全长区域的T载体克隆,巢式-PCR是一种简便、特异、灵敏的方法, 可用于基因的检测和载体的构建。

细胞色素P4501A1-Wt和Asn^(461)、Val^(462)真核表达载体的构建及人胚肺成纤维细胞转染

目的构建能够高效表达细胞色素P4501A1(CYP1A1)蛋白的细胞株,分析不同基因型蛋白表达的差异。方法首先将已经建立的T载体中CYP1A1-Wt和Asn461、Val462的CYP1A1片断重组至pBABE-neo载体上,转染入人胚肺成纤维细胞(HLF),G418筛选获得阳性细胞,Western-Blot检测CYP1A1蛋白的表达,观察细胞形态,生长曲线,恶变性等生物学特性的改变。结果CYP1A1野生型、变异型转染的HLF细胞均能高效表达CYP1A1蛋白,其生物学特性与正常细胞无显著差异,也不属于恶性细胞。结论通过细胞转染和筛选获得了表达CYP1A1蛋白的细胞株。

CYP1A1基因cDNA全长的T载体克隆及序列分析

目的构建含KpnI、XhoI双酶切位点的人细胞色素(CYP1A1)基因cDNA全长的pGEM-T载体,为以后的亚克隆和毒理学研究提供实验材料。方法从培养的人乳腺癌细胞(MCF-7)中抽提总RNA,RT-PCR扩增CYP1A1基因cDNA全长,与pGEM-T载体连接后转化DH5α,筛选阳性克隆,抽提重组质粒并进行PCR及酶切鉴定,再行测序分析。结果重组质粒pGEM-T-1A1 PCR后获得了1 568 bp产物,酶切鉴定证实目的片段成功插入至pGEM-T,测序分析也进一步证明了目的片段与GeneBank中CYP1A1mRNA的序列同源性为99.9%。结论成功地构建了含CYP1A1基因cDNA全长区域的T载体。

GSTM1和GSTT1基因多态性与噪声性听力损失易感性的关系

目的探讨GSTM1和GSTT1基因多态性与噪声性听力损失易感性的关系。方法采用病例对照研究方法和多重聚合酶链反应(PCR)技术检测听损组123(118)例和对照组123(114)例的GSTM1和GSTT1基因缺失型频率,以2检验检测听损组和对照组基因型频率的差异。结果GSTM1基因在听损组和正常组的缺失率分别为69.1%和56.1%,差异具有统计学意义(P<0.05)。GSTM1(-)基因型携带者发生噪声性听力损失的危险性是携带GSTM1(+)基因型者的1.75倍。GSTT1基因在听损组和正常组的缺失率为50.8%和57.9%,差异没有统计学意义(P>0.05)。联合分析表明,携带GSTM1(-)和GSTT1(-)基因型者发生噪声性听力损失的危险性虽稍高于携带GSTM1(+)和GSTT1(+)基因型者(OR=1.11,2=0.16,P>0.05),但差异无统计学意义,由此认为GSTM1和GSTT1基因之间可能不存在联合作用。结论GSTM1基因缺失可能是发生噪声性听力损失的易感因素之一。

三氯乙烯对接触工人神经行为功能影响的初步研究

目的 了解三氯乙烯 (TCE)低浓度、长时间的暴露条件下对暴露人群的早期影响。方法 运用WHO推荐的神经行为功能测试组合 (WHO NCTB)对我国南方某市一区 65名TCE作业工人及 115名对照工人进行了神经行为功能测试 ,同时测定研究对象尿中TCE的代谢产物三氯乙酸 (TCA)的含量。结果 接触工人车间空气中TCE平均浓度为90 8mg/m3,接触工人班后尿TCA平均值为 5 2 1mg/g肌酐 ;接触组NCTB测试项目中数字译码、简单反应时的标准差、优势手提转敏捷度、目标追踪错误数及总数得分显著差于对照组。通过等级相关分析 ,发现接触组班后尿TCA水平与目标追踪正确数、总数呈显著负相关 ;与情感问卷中困惑 迷茫项、目标追踪错误数呈显著正相关。结论 长时间接触较低浓度TCE早期可对暴露者神经行为功能产生明显影响 ,主要表现在短时记忆力、注意力降低 ,手运动速度下降 ,手 眼运动协调性和稳定性差 ,并有一定的消极情感状态改变 ;尿TCA水平与以上改变呈一定的剂量

乡镇企业环境污染对人群健康的影响

[目的 ]探讨乡镇企业环境污染对人群健康影响。 [方法 ]于 1 994～ 1 996年对顺德市某乡镇企业集中区(A镇 )进行环境监测和人群健康的流行病学研究 ,并与对照区 (B镇 )进行比较。 [结果 ] A镇乡镇企业污染与 B镇差异不显著。两镇人群急性病和慢性病发病率与室内外环境污染有一定关系。 1 994～ 1 996年 A镇人群标化死亡率均低于 B镇 (P>0 .0 5) ,1 995年和 1 996年 A镇标化减寿率均低于 B镇 (P>0 .0 5)。 [结论 ]乡镇企业集中区人群健康水平较高 。

钙黏素23基因多态性与噪声性听力损失易感性关系研究

目的探讨钙黏素23(CDH23)基因多态性与噪声性听力损失易感性关系。方法采用病例对照研究方法对254名接触噪声工人进行研究,聚合酶链反应-限制性片断长度多态性方法检测CDH23基因单核苷酸多态性位点rs1227049和rs1227051的多态性。结果rs1227049位点在听损组CC、CG和GG基因型频率分别为39.4%、15.0%和45.6%,等位基因C和G的频率分别为46.9%和53.1%;对照组3种基因型的频率分别为51.2%、19.7%和29.1%,等位基因C和G的频率分别为60.9%和39.1%。rs1227051位点在听损组TT、CT和CC基因型频率分别为82.7%、17.3%和0,等位基因T和C的频率分别为91.3%和8.7%。对照组3种基因型的频率分别为89.0%、11.0%和0,等位基因T和C的频率分别为87.0%和13.0%。两位点的基因型分布及其等位基因频率在听损组和对照组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。采用多因素Logistic回归分析对个体间年龄、工龄和累积噪声暴露量等因素进行校正后,也未发现两个单核苷酸位点任一基因型的改变会引起噪声性听力损失的危险度有显著性提高(P>0.05)。结论本研究还不能认为CDH23基因rs1227049和rs1227051两个单核苷酸多态性位点是噪声性听力损失易感性的危险因素。

苯醌致HL-60细胞增殖方法的研究

目的建立引起该细胞增殖的方法,为以后进一步研究染毒后细胞内结构与功能的变化提供方法基础。方法用苯醌对人早幼细胞系HL-60进行染毒,取对数生长期的HL-60细胞,用不同浓度的苯醌进行染毒,行台盼蓝拒染法测细胞生存率,Alamar blue法测细胞增殖率,流式细胞技术测细胞周期分布。结果苯醌浓度为3μmol/L的剂量组HL-60细胞存活率无明显改变,且增殖率最高,细胞进入S期的比例[(48.23±1.37)%]高于对照组[(42.47±0.45)%]。结论用3μmol/L的苯醌染毒HL-60细胞,可引起该细胞明显增殖。

白花蛇舌草总黄酮对鼻咽癌细胞株CNE1增殖和凋亡的影响

目的:探讨白花蛇舌草总黄酮(FOD)对鼻咽癌细胞株CNE1的增殖和凋亡的影响。方法:体外培养鼻咽癌细胞株CNE1,使用不同质量浓度的FOD作用24、48 h,分别使用CCK-8测定法检测细胞存活率,Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡的情况。结果:FOD对鼻咽癌细胞株CNE1具有抑制增殖作用,24 h的半数抑制量(IC50)为(27.0±2.5)mg/L,48 h的IC50为(12.1±1.3)mg/L,在一定质量浓度范围内,呈剂量-效应关系和时间-效应关系。FOD可诱导CNE1细胞凋亡,存在剂量-效应关系和时间-效应关系。结论:FOD对鼻咽癌细胞株CNE1有显著的抑制增殖作用,作用机制可能与诱导细胞凋亡有关。

苯及同系物接触者Ⅰ、Ⅱ相代谢酶基因多态性与CYP1A1酶活性关系研究

目的研究职业性接触苯系物与Ⅰ、Ⅱ相代谢酶CYP1A1、CYP2E1、GSTT1和GSTM1基因多态性对CYP1A1酶活性的影响。方法以52例广东省某公司苯系物接触者为接触组,以38例未接触苯系物的"正常人"为对照组,抽提外周血淋巴细胞,Ⅰ、Ⅱ相代谢酶基因多态性检测用PCR和PCR-RLCP方法,CYP1A1酶活性用EROD酶活性表示。结果与对照组比较,苯系物接触组CYP1A1酶活性显著高于对照组(P<0.01),但无性别差异。苯接触组中不同Ⅰ、Ⅱ相代谢酶CYP1A1、CYP2E1、GSTT1和GSTM1基因多态性CYP1A1酶活性差异无统计学意义。结论苯作业工人外周血CYP1A1酶的活性受到苯接触的诱导作用,但并未发现受Ⅰ、Ⅱ相代谢酶CYP1A1、CYP2E1、GSTT1和GSTM1基因多态性的影响。

ERK1/2和P38信号通路在瘦素诱导巨噬细胞TNF-α表达中的作用

【目的】研究瘦素(leptin)诱导小鼠腹腔巨噬细胞(PM)分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响,以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在这一过程中的作用。【方法】体外培养小鼠PMs,按瘦素不同浓度和/或MAPK特异性抑制剂PD98059、U0126、SB203580、SP600125进行分组。分别收集培养细胞和上清液,用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定培养上清中TNF-α水平,用蛋白印迹(Westernblot)方法测定细胞内p-ERK1/2、p-p38,以及p-JNK的表达水平,用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)测定TNF-αmRNA的表达。【结果】瘦素能够剂量依赖性的诱导小鼠PM产生TNF-α,在瘦素质量浓度为75ng/mL时TNF-α表达至峰值,是对照组的6.6倍。瘦素可以活化ERK1/2和p38MAPK信号转导通路,瘦素处理组的p-ERK1、p-ERK2、p-p38表达水平分别是对照组的2.3、2.4和2.6倍。ERK1/2的特异性抑制剂PD98059、U0126和p38的特异抑制剂SB203580能够分别抑制瘦素引起的ERK1/2、p38蛋白磷酸化以及TNF-αmRNA增加,两者的联合作用可以强烈抑制TNF-αmRNA的表达,而JNK信号转导途径与瘦素诱导PM表达TNF-α无关。【结论】瘦素在小鼠PM中通过同时活化ERK1/2、p38MAPK信号转导通路而诱导细胞产生TNF-α。

代谢活化系统在人细胞转化模型中的应用

【目的】探讨不同的代谢活化系统在人细胞转化模型中潜在的应用价值。【方法】在永生化人肝细胞L02中导入第12密码子突变的H-RAS癌基因(L02-R细胞),使其处于恶性转化前的易感状态。选择具有代表性的间接致癌物黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)作用于永生化和转化前期细胞株,采用三种代谢系统:高表达代谢酶P450 CYP1A2,低剂量底物诱导和加入经典的大鼠S9代谢辅助系统,通过软琼脂克隆形成试验和裸鼠皮下成瘤试验来比较在不同的代谢活化系统下,间接致癌物诱导细胞转化的效能。【结果】蛋白印迹验证H-Ras稳定高表达的转基因细胞株构建成功。通过Ames试验,蛋白印记和CYP1A2酶活性等方法比较三种代谢系统酶活性。在未加代谢系统的条件下,经AFB1染毒后第17周L02-R细胞发生转化,而对照组细胞L02-V在染毒20周未能发生转化。而加入S9代谢系统时,AFB1诱导L02-R细胞在第8周发生转化,比未加代谢系统缩短了9周;经低剂量0.1μmol/LAFB1诱导和高表达CYP1A2均使L02-R的转化间期缩短6周,于第11周发生转化。【结论】三种代谢系统都能够促进间接致癌物AFB1的代谢活化,缩短细胞转化的时间,提高细胞转化效率。与传统的S9代谢活化系统相比,低剂量诱导作为新的代谢活化的方法在细胞转化试验中有着良好的应用前景。

三氯乙烯作业工人神经行为功能的研究

目的 了解三氯乙烯职业接触对作业工人的神经行为功能的影响。方法 世界卫生组织 (WHO)推荐的神经行为功能测试组合 (WHO -NCTB)。结果 本调查研究了 6 5名三氯乙烯(TCE)作业工人和 115名对照 ;接触人群车间空气TCE平均浓度为 90 8mg/m3,接触工人班后尿二氯乙酸(TCA)平均值为 5 2 1mg/L·肌酐 ;多因素分析后发现 :接触组工人NCTB测试项目中数字译码、简单反应时的标准差、非利手提转敏捷度、目标追踪错误数及总数得分显著差于对照组 ;等级相关分析表明 :接触组工人班后尿TCA水平与目标追踪正确数、总数呈显著负相关 ,与情感问卷中困惑—迷茫项、目标追踪错误数呈显著正相关。结论 长时间接触较低浓度TCE作业工人早期即可对其神经行为功能产生明显影响 ,主要表现在短时记忆力、注意力降低 ,手运动速度下降 ,手—眼运动协调性和稳定性差 ,并有一定的消极情感状态改变 ;

白花蛇舌草提取物对鼻咽癌细胞株CNE1的毒性及其机制

目的:探讨白花蛇舌草提取物对鼻咽癌细胞株CNE1的细胞毒性及其机制。方法:体外培养鼻咽癌细胞株CNE1,分别用不同浓度的白花蛇舌草水溶性提取物、脂溶性提取物和多糖提取物作用24、48 h,通过CCK-8法检测细胞存活率。分别用不同质量浓度的脂溶性提取物作用24、48 h,用Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡的情况。结果:3种白花蛇舌草提取物对鼻咽癌细胞株CNE1均有增殖抑制的作用,在一定的浓度范围内,呈剂量-效应关系,并存在时间-效应关系。3种提取物中,脂溶性提取物对鼻咽癌细胞株CNE1毒性最大,水溶性提取物次之,组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。脂溶性提取物可诱导鼻咽癌细胞株CNE1凋亡,存在剂量-效应关系和时间-效应关系。结论:白花蛇舌草对鼻咽癌细胞株CNE1有显著的增殖抑制作用,其中以亲脂类提取物的作用最为明显,作用机制可能与诱导细胞凋亡有关。

电子行业职业性噪声所致疾病负担的归因研究

目的评估电子行业归因于职业性噪声的疾病负担,为职业性噪声健康危害评价提供新思路。方法收集纯音测听、血压测量和心电图检查结果,分级评定累积噪声暴露量(cumulative noise expo-sure,CNE),用Logistic回归分析法探索疾病发生风险,用反事实分析法评估归因疾病负担。结果听力损失检出率、高血压患病率和心电图异常率分别为29.79%、11.29%和17.12%。CNE=85~94 d B(A)?年和CNE=95~104 d B(A)?年作业工人听力损失的OR分别为1.83和2.63,心电图异常的OR分别为1.49和2.40,CNE与高血压的相关性无统计学意义(P>0.05)。听力损失和心电图异常的人群归因分值分别为28.39%和23.04%,归因疾病负担分别为8.46%和3.94%。其中,CNE=85~94 d B(A)?年作业工人听力损失和心电图异常的归因危险度百分比分别为37.11%和28.57%,归因疾病负担分别为12.98%和5.25%;CNE=95~104 d B(A)?年作业工人的归因危险度百分比分别为50.74%和50.50%,归因疾病负担分别为25.69%和12.79%。结论职业性噪声增加听力损失和心电图异常的发生风险,未发现增加高血压的发生风险;职业性噪声为电子行业作业工人带来沉重的疾病负担,应该引起全社会高度关注。

苯中毒工人外周血白细胞聚腺苷二磷酸核糖聚合酶活力研究

目的探讨苯中毒工人外周血白细胞聚腺苷二磷酸核糖聚合酶〔poly(ADP-ribose)polymerase,PARP〕活力。方法分别用比色法和放射性标记方法测定42名苯中毒工人外周血白细胞PARP活力。结果比色法检测显示:苯中毒组外周血白细胞PARP活力为(7.79±2.09)×106U/L,高于对照组(6.40±1.64)×106U/L,差异有统计学意义(P=0.009);男性和女性工人的PARP活力差异没有统计学意义(P=0.390)。放射性标记方法检测显示:苯中毒组外周血白细胞PARP活力为(835.07±285.88)μmol.min-1.L-1,高于对照组(609.90±113.60)μmol.min-1.L-1(P=0.026),差异有统计学意义;男性和女性工人PARP活力差异也没有统计学意义(P=0.990);另外还显示苯中毒工人外周血白细胞PARP活力与工龄无显著相关性(r=-0.14,P=0.408)。结论不同方法检测均显示苯中毒人群外周血白细胞PARP活力比对照组的高,外周血白细胞PARP活力在苯中毒人群的健康监护中是值得重视的指标。

线粒体DNA缺失与噪声性听力损失关系的分析

目的探讨mtDNA4977缺失与噪声性听力损失关系。方法采用病例对照研究方法对157名接噪工人进行调查,调查其噪声暴露及听力情况,并将其分两组,听损组79人、正常组78人,用巢式PCR技术分别检测两组的mtDNA4977缺失情况,以χ2检验进行组间基因缺失频率的比较。结果听损组和正常组间年龄、噪声暴露强度和累积噪声暴露量比较差异均有统计学意义(均P<0.05),两组mtDNA4977缺失率均为94.9%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论未发现携带mtDNA4977缺失基因型的个体能提高对噪声性听力损失的易感性。

P4501A1基因Thr^(461)→Asn^(461)及Ile^(462)→Val^(462)突变载体的构建

目的构建P4501A1基因cDNAThr461→Asn461及Ile462→Val462突变载体,为进一步研究CYP1A1的功能和致癌机制奠定基础。方法根据人CYP1A1基因(GeneBankNM-000499)cDNA序列设计通用引物Pm3/Pm4和突变引物Pt15/Pt16;Pt17/Pt18,内含酶切位点和突变位点,先用Pm3/Pt16,Pm3/Pt18组成两对引物,以pGEM-T-CYP1A1质粒为模板进行第一轮扩增,获得上游1397bp片断,再用Pt15/Pm4,Pt17/Pm4组成两对引物以10ngpGEM-T-CYP1A1质粒为模板进行第二轮扩增,得到下游177bp片断。然后用Pm3/Pm4做引物以第一、第二轮扩增产物为模板进行第三轮扩增,获得的1·5kb扩增产物用1%琼脂糖凝胶分离并回收纯化,将纯化的PCR产物与pMD-T载体连接后转化大肠埃希菌DHα5感受态细胞,挑单克隆扩增、质粒抽提后进行酶切和测序鉴定。结果三轮PCR扩增得到的1·5kb片断,经内切酶BamHI和SalI消化和T7p和SP6通用引物进行双向测序,证实克隆的目的片段与GeneBank中人CYP1A1基因cDNA的序列同源性为99·9%,且包含两个设计的突变位点Asn461、Val462。结论本实验成功地构建了含突变位点Asn461、Val462的CYP1A1基因cDNA的片断。