H3N8亚型马流感病毒单克隆抗体的制备及鉴定

以灭活马流感病毒(EIV)A/Equine/Jilin/1/1989(H3N8)为免疫原,免疫Balb/c小鼠,经常规细胞融合后,用血凝抑制试验(HI)和间接ELISA方法筛选获得3株(3C2、5G10和5A10)能稳定分泌H3N8亚型马流感病毒单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株。其中3C2和5G10为IgG2α,5A10为IgM亚类,腹水抗体效价检测显示,3C2和5G10为1∶64 000,5A10为1∶32 000。HI和Western blot结果表明,3株单克隆抗体均为EIV血凝素特异性单克隆抗体。特异性试验结果表明,所获得的mAb不与H7N7亚型马流感病毒、马动脉炎病毒(EAV)、马传染性贫血病毒(EIAV)、马日本脑炎病毒(JEV)发生交叉反应。研究为建立单克隆抗体介导的检测马流感病毒抗原和抗体的血清学方法以及为实现马流感标准化诊断奠定基础。

雏鸡链球菌病的诊断

鸡链球菌病是急性败血性传染病,呈世界范围性分布。1902年美国最先描述了该病的特征,其后德国、苏联等国的鸡和小火鸡均有该病发生,并有暴发性和毁灭性的流行报导。

利用PCR技术检测鸡肉产品中的空肠弯曲杆菌

根据空肠弯曲杆菌旋转酶基因(gyrA gene)的保守序列,设计1对引物,建立了快速检测鸡肉中空肠弯曲杆菌的PCR方法。采用该方法和生化试验对送检的100份鸡肉样品进行检测,结果表明:PCR方法能特异性地扩增出空肠弯曲杆菌192 bp核苷酸片段,其它结肠弯曲杆菌、肠炎沙门氏菌、大肠杆菌、副溶血性弧菌、产气荚膜梭菌、绿脓假单胞菌等均不能获得阳性扩增结果。检测限度为8 cfu/mL。鸡肉肉水、增菌液和纯培养菌落的PCR鉴定结果,阳性率分别为16%、24%和20%,生化鉴定检出率为20%。

牛病毒性腹泻病毒一步法RT-PCR检测方法的建立

根据牛病毒性腹泻/粘膜病病毒5'端非结构蛋白基因序列,设计合成1对特异性引物,建立检测牛病毒性腹泻/粘膜病病毒244 bp片段的RT-PCR一步法。该方法对牛病毒性腹泻/粘膜病病毒NADL、OregonC24V和长春184毒株各标准毒株检测,结果均为阳性。对标准毒株的细胞毒进行检测,其敏感度达0.1 TCID50;而对牛传染性鼻气管炎病毒、猪瘟病毒、牛轮状病毒和牛冠状病毒的细胞培养物进行检测,结果均为阴性。检测460份不同样品,与病毒分离试验比较,符合率100%,证明该方法特异性强,敏感性高。初步结果表明所建立的一步法RT-PCR技术可用于牛病毒性腹泻/粘膜病的检测及流行病学调查。

应用PCR方法检测蜡样芽胞杆菌的研究

采用PCR技术,通过扩增蜡样芽胞杆菌的gyrB基因来实现对蜡样芽胞杆菌的快速检测。结果表明,以gyrB为目的基因设计引物建立的PCR检测方法能特异性地扩增出蜡样芽胞杆菌,且与其他芽胞杆菌菌株均无交叉反应,其检测敏感性可达9 cfu/mL,能够应用于蜡样芽胞杆菌的鉴定。

利用PCR方法检测锦鲤疱疹病毒3个主要靶基因

为建立锦鲤疱疹病毒(KHV)多靶基因PCR检测方法,本实验将KHV接种鲤鱼鳍条细胞,收获病变细胞悬液,提取DNA,根据GenBank中登录的KHV基因序列及出入境检验检疫行业标准推荐的基因(ORF7),设计合成3对特异性引物,针对胸苷激酶基因(TK)、聚合酶基因(Sph)和ORF7基因进行PCR检测。通过优化后的反应体系进行特异性、敏感性试验和样品检测。结果表明:3对引物能够分别特异性扩增出409bp、292bp和484bp片段;敏感性试验表明对TK基因检测的敏感性高于Sph和ORF7基因,其最低检测量为1.9×106copies/μL;采用优化的3个PCR方法对8个有临床症状的样品进行检测,其中3份样品的3个基因PCR扩增结果均为阳性。因此,本研究选取的3个基因均可用于KHV的检测及确证实验。

利用PCR技术检测致病性腊样芽孢杆菌的研究

目的:利用PCR技术对致病性蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)进行检测。方法:对致病性蜡样芽孢杆菌溶血素hblA基因序列进行分析设计一对特异引物,通过优化PCR反应条件,来实现对致病蜡样芽孢杆菌的快速检测,结果:该方法具有较强的灵敏性及特异性,能够对肠毒素型腊样芽孢杆菌进行有效的检测,其最低检出限可达9CFU/ml,用PCR技术对食物样品中致病性蜡样芽孢杆菌的检测取得与普通生化检测方法一致的结果。结论:利用PCR技术对食品中蜡样芽孢杆菌的检测较常规的生化检测方法具有省时省力的特点且灵敏性较高,具有较强的实际应用价值。

水貂阿留申病毒部分VP2基因的克隆表达和重组蛋白的免疫学分析

根据GenBank中已发表的水貂阿留申病毒(ADV)VP2基因核苷酸序列设计合成1对特异引物,利用PCR方法扩增ADV国内分离株部分VP2基因片段,将其克隆到原核表达载体pET-28a中。经酶切、PCR扩增和测序分析证实其已正确插入到表达载体中,构建了原核表达载体pET-28a-VP2。阳性重组质粒转化宿主菌BL21,用IPTG进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和免疫印迹分析。结果表明蛋白获得了表达,表达产物的分子质量为21 kD,与理论推测的分子质量一致;在终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导下,5 h时表达量达到高峰;Western blot分析表明表达蛋白能被兔抗水貂抗体所识别,具有相应的抗原性。

黄曲霉毒素B1免疫检测方法的新进展

黄曲霉毒素是迄今发现毒性最强的一类生物毒素,包括AFB1、AFB2、AFB2a、AFG1、AFG2、AFM1、AFM2、AFQ1、AFQ2a等10余种毒素。作者介绍了黄曲霉毒素B1和M1抗体制备和检测方法的研究进展,通过对各种检测方法优缺点的比较分析,得出结论:寻求安全、快速、准确和经济的检测方法已成为黄曲霉毒素研究中亟待解决的任务之一。

牛病毒性腹泻/黏膜病RT-PCR 3种体系的试验研究

根据牛病毒性腹泻/黏膜病病毒5′端非结构蛋白基因序列,设计合成1对特异性引物,建立检测牛病毒性腹泻/黏膜病病毒244 bp片段的RT-PCR 3种体系。该3种体系对牛病毒性腹泻/黏膜病病毒NADL、Oregon C24V和长春184毒株各标准毒株的检测结果均为阳性。对标准毒株的细胞毒进行检测,其敏感度达0.1 TCID50;而对牛传染性鼻气管炎病毒、猪瘟病毒、牛轮状病毒和牛冠状病毒的细胞培养物进行检测,结果均为阴性。证明3种体系方法特异性强,敏感性高。初步结果表明所建立的RT-PCR技术3种体系可用于牛病毒性腹泻/黏膜病的检测及流行病学调查。

应用实时荧光PCR技术检测空肠弯曲菌

目的应用实时荧光PCR技术建立一种特异、敏感的空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)检测方法。方法通过对空肠弯曲菌基因组的保守序列进行分析来设计引物及Taqman探针来实现对空肠弯曲菌的检测。结果该方法具有较强的灵敏性及特异性能够对空肠弯曲菌进行有效的检测,其对空肠弯曲菌增菌液的最低检出限为5CFU/ml而对实际样品的检测限为10CFU/g。结论该方法无需增菌培养过程能够直接对样品进行检验,较常规的生化检测方法省时省力,具有较强的实际应用价值。

进境种鸡雏绿脓杆菌病的诊断

从病死鸡雏的肝、心血等器官内分离到1株细菌,经过培养特性检查、API 20E生化鉴定以及时鸡雏 的致病力试验,确定所分离的菌株为致病性绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)。

应用PCR技术检测空肠弯曲菌及结肠弯曲菌的研究

本研究根据空肠弯曲菌及结肠弯曲菌的16s rRNA基因相同保守序列来设计引物, 建立了一种PCR检测方法,该方法具有较强的特异性及灵敏性,其对空肠弯曲菌及结肠弯曲菌的最低检测限度为5 CFU/mL,它无需增菌培养过程可以直接对样品进行检验,在对鸡肉样品空肠弯曲菌及结肠弯曲菌的检测中取得了较好的效果。

应用PCR技术检测玉米中的禾谷镰刀菌

本实验通过用PCR方法来实现对禾谷镰刀菌的快速检测 ,经对霉变玉米样品、玉米茎腐病组织及玉米穗腐病标本的检测 ,证明该方法是一种高效、灵敏的方法 ,具有重要的实际应用价值。

仔猪大肠杆菌病的防治

从本省４个县（市）６４窝具有典型大肠杆菌病症状的仔猪粪便中，分离出６１株ＥＴＥＣ，经鉴定主要为Ｋ８８（３４／６１），其次是Ｋ９９（１１／６１）和Ｋ９１（８／６１）；用含Ｋ８８－ＬＴＢ的双价工程菌苗免疫１６６头母猪所产１５８８头仔猪，３０日龄内腹泻发病率为１０．９１％，对照组为５５．４２％；扩大试验免疫组发病率（１．７２％），也大大低于对照调查组的发病率（６．８％）；用该菌苗二次免疫优于一次免疫（仔猪发病率分别为：１０．９６％和３２．５１％），差异极显著（Ｐ＜０．０１）；用微生态制剂促菌生预防该病后发病率为２．４５％，对照组为１１．６２％，且试验组比对照组２８日龄时个体增重高０．６ｋｇ；证明促菌生对防治大肠杆菌病有较大的潜力。本试验用四种药物进行了治疗对比试验，痢菌净治愈率为７７．３７％、链霉素为９５．７％、庆大霉素复合剂为９６．８％、促菌为生８２．９６％。用痢菌净治疗免疫母猪所产病仔猪２５７头，治疗２３５头，治疗率为９１．４３％。通过本试验我们认为。

不同源性H5亚型禽流感病毒株HA基因序列分析

本研究对1株鹅源和一株鸽源的H5N1亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因进行扩增、克隆和序列分析。结果表明,所扩增的片段长均为1 707 bp,包含完整的开放阅读框架,编码568个氨基酸;该毒株有7个潜在糖基化位点;在HA裂解位点附近有6个碱性氨基酸序列插入。两毒株间核苷酸与氨基酸的同源性均为96.7%。该毒株与参考毒株的序列比较分析结果表明:核苷酸同源率分别为95.3%￣99%;氨基酸同源率分别为95.1%￣99.3%。

吉林省黄牛猝死症的防治

１９９２年吉林地区舒兰、磐石、桦甸等市县黄牛猝死零散发生，后逐渐蔓延，到１９９７年１２月份，全省已有８个市、地、州的２９个县市区，２１８个乡镇有该病发生，累计死亡黄牛９７８１头，直接经济损失达３０００万元以上，现报道如下：１流行病学调查１．１流行区域...

鸡肉中单核细胞增生李斯特氏菌的分离与鉴定

对从长春地区某一肉鸡屠宰加工厂扦取的１５２ 个冻鸡肉样品进行的单核细胞增生李斯特氏菌分析，对分离菌株用ＡＰＩＬｉｓｔｅｒｉａ 试剂盒及其他方法进行了鉴定。经检验，１５２ 个样品中有１６ 个样品（１０ ．５ ％ ） 为单核细胞增生李斯特氏菌阳性，另有８７ 个（５７ ．２ ％ ） 为Ｌ．ｉｎｎｏｃｕａ ， Ｌ．ｗｅｌｓｃｈｉｍｅｒｉ 和Ｌ．ｇｒａｙ 阳性。为了比较ＯＸＡ 和ＰＡＬＣＡＭ 这２ 种选择培养基的单核细胞增生李斯特氏菌的分离效果，在进行细菌分离时同时选用了这２ 种培养基，用ＯＸＡ 从１５２ 个样品的１６ 个（１０ ．５ ％ ） 中分离出单核细胞增生李斯特氏菌，用ＰＡＬＣＡＭ 从１５２ 个样品的１２ 个（７ ．９ ％ ） 中分离出单核细胞增生李斯特氏菌，表明在ＯＸＡ 和ＰＡＬＣＡＭ 这２ 种分离培养基中，ＯＸＡ 的分离效果更好些。

黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备与鉴定

[目的]为黄曲霉毒素类生物毒素研究提供试验参考。[方法]黄曲霉毒素B1与人血清白蛋白耦联后免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行细胞融合,通过阳性株的筛选和克隆等步骤,制备了3株稳定分泌抗黄曲霉毒素B1的单克隆抗体,用酶联免疫吸附试验测定抗体的效价和特异性。[结果]成功地筛选出能够分泌抗黄曲霉毒素B1的单克隆抗体杂交瘤细胞株,制备出对黄曲霉毒素B1具有高亲合力、高特异性的单克隆抗体。[结论]为鲜奶及奶粉的快速筛检提供了技术支持。