着丝粒蛋白U在结直肠癌患者肠组织中的表达情况及临床意义

目的旨在探讨着丝粒蛋白U(centromere protein U,CENPU)在结直肠癌患者肠组织中的表达情况,并结合生物信息学分析其表达水平对结直肠癌患者预后的影响。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)、蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)法以及免疫组织化学染色(immunohistochemistry,IHC)实验验证CENPU在组织中的表达情况。结合患者临床病例资料,通过单因素和多因素Cox回归分析CENPU的表达与结直肠癌患者临床病例参数的相关性;然后通过绘制受试操作者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线和Kaplan-Meier生存曲线,探究CENPU的表达对结直肠癌患者预后的预测作用。最后,通过生物信息学分析CENPU的表达对结直肠癌疾病进展影响的可能分子机制。结果通过qRT-PCR、WB法以及IHC实验均发现,与正常组织比较,CENPU在结直肠癌患者癌组织中表达显著升高。Cox回归分析表明CENPU的表达与患者的年龄和TNM分期显著相关,是影响患者预后的危险因素。Kaplan-Meier生存曲线分析表明:CENPU高表达的结直肠癌患者的生存率显著降低。ROC曲线结果表明:基于CENPU的表达建立的模型具有较高的预测结直肠癌患者预后的能力。生物信息学分析结果表明:CENPI、CENPN、CENPD、CENPK、CENPP、CENPM、CENPQ、CENPH、NDC80以及ITGB3BP这10个基因与CENPU基因具有相互作用关系;CENPU参与DNA修复、MYC/TARGETS/V1以及PI3K/AKT/MTOR等信号通路。结论结直肠癌患者癌组织中高表达的CENPU与患者的不良预后显著相关,提示CENPU有望成为结直肠癌患者早期诊断及预测预后的潜在靶点。

肝癌特异性AFP亚型分离检测法的建立

目的建立聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)结合蛋白印迹(WB)技术分离检测肝癌特异性甲胎蛋白亚型(HS-AFP)方法。方法以自然阶段梯度PAGE分离血清甲胎蛋白(AFP),WB技术检测AFP亚型,摸索研究AFP分离、转膜、呈色检测的实验条件。对82例肝癌、95例良性肝病患者及44例健康献血员的血清AFP亚型进行分离检测,分析肝癌与良性肝病AFP亚型谱型的差别。结果成功建立了血清AFP亚型分离检测法,分离检测出HS-AFP。肝癌患者HS-AFP阳性率为74.4%,显著高于良性肝病组。结论建立的HS-AFP分离检测法有助于肝癌诊断。

阶段梯度胶电泳分离血清甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶同工酶

阶段梯度胶电泳分离血清甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶同工酶肖明兵，张弘，姚登福，朱薇，黄介飞（南通医学院附院，江苏南通２２６００１）关键词甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶，同工酶，电泳，原发性肝癌，血清甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶（Ｇｌｙｃｙｌｏｒｏｌｉｎｅｄｉｐｅｐ...

TRAIL、TRAIL-R在原发性肝癌及其癌旁组织中的表达

目的检测肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其受体在原发性肝癌(PHC)及癌旁组织中的表达。方法收集PHC及癌旁组织各30例,采用半定量RT-PCR方法,对TRAIL及其受体的表达作半定量检测。结果(1)30例癌组织及癌旁组织中均有TRAIL及其死亡受体4(DR4)、死亡受体5(DR5)、“诱骗”受体1,2(DcR1、DcR2)的表达。(2)TRAIL、DcR1及DcR2在癌组织中的表达量较之癌旁组织明显降低(P<0.01),而DR4、DR5的表达量则高于癌旁组织;(3)PHC组织中4种受体之间,DR4及DR5的表达量明显高于DcR1及DcR2,且PHC组织中4种受体间的表达量存在相关性。结论PHC及其癌旁组织中均存在TRAIL及其受体的表达,且有表达量的差异。

GST-Glypican 3 N端融合蛋白表达载体构建及表达纯化

目的构建人磷酯酰肌醇蛋白聚糖3(Glypican3,GPC3)N端蛋白与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体并进行表达及纯化。方法以重组质粒pcDNA3.1-GPC3N为模板,扩增GPC3 N端基因,产物经纯化回收后与载体PGEX-4T-1连接并转化大肠埃希菌Rosetta,酶切鉴定序列完全正确者诱导表达GST-GPC3 N端融合蛋白,并以谷胱甘肽琼脂糖小珠亲和纯化。结果Glypican 3 N端基因片段成功插入载体PGEX-4T-1,插入位点及碱基序列完全正确,转化Rosetta后,经IPGT诱导成功表达分子质量为64 000的GST-GPC3 N端融合蛋白。结论成功建立了重组GST-GPC3 N端融合蛋白的原核表达载体、表达菌株及诱导表达和纯化的方法,为GPC3 N端融合蛋白的进一步应用打下基础。

肝癌特异性GGT区带的定量检测

肝癌特异性ＧＧＴ区带的定量检测肖明兵，姚登福，黄中伟，黄介飞（南通医学院附属医院消化内科，江苏南通２２６００１）血清ｒ－谷氨酰移换酶（ＧＧＴ，ＥＣ２、３、２、２）具有多条同工酶区带，肝癌特异性区带（ＧＧＴ－Ⅱ）和高分子ＧＧＴ的检出是肝病诊断和鉴别诊断...

肝癌组织及肝癌细胞株中TRAIL受体的检测

目的:检测肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF related apoptosis inducing ligand,TRAIL)受体在原发性肝癌(PHC,简称肝癌)组织及肝癌细胞株HepG2及SMMC7721中的表达,以期选出与肝癌组织中TRAIL受体表达相近的细胞株。方法:收集原发性肝癌组织30例,以常规方法培养人肝癌细胞株HepG2及SMMC7721,以半定量RT-PCR法,对TRAIL受体的表达作半定量检测。结果:30例肝癌组织及HepG2细胞中均有TRAIL受体DR4(deathrecptor4)、DR5、DcR1(decoy receptor1)、DcR2的表达,而SMMC7721细胞中不表达DcR1;半定量结果显示肝癌组织及HepG2中DR4及DR5的表达量明显高于DcR1及DcR2;肝癌组织中4对受体间的表达量存在相关性,HepG2细胞中DR4的表达与DcR1及DcR2间存在相关性。结论:HepG2中TRAIL受体的表达类似于肝癌组织。

腺苷脱氨酶改良测定法

腺苷脱氨酶(Adenosine deaminase,ADA)是广泛分布于人体组织内的核酸分解酶。ADA对肝脏疾病、结核性浆膜炎及伤寒的诊断和鉴别诊断具有重要价值。目前国内ADA测定一般都采用Martinek氏法,该法中有些条件不够稳定,从而影响了测定结果。我们对方法中主要实验条件进行了摸索和改良,既缩短了操作时间,又获得了稳定可靠的实验结果。现报道如下。

血清GPDA同工酶改良测定及其对原发性肝癌的诊断价值

目的：为了改进甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶同工酶的分离效果，提高肝癌特异性GPDA（GPDA-Ⅱ）对原发性肝癌的诊断价值。方法：在原阶段梯度胶电泳分离同工酶方法的基础上，将四层浓度胶（46．2g／L、77.0g／L、92.4g／L、154.0g／L）改为五层（46．2g／L、77．0g／L、92．4g／L、102．7g／L、154．0g／L）。结果：使血清PGDA-Ⅱ在PHC病人中的阳性率由原来的42．2％提高到67．6％，其阳性率与AFP、肿瘤大小无相关性。结论：进一步表明CPDA-Ⅱ正为肝癌又—新的诊断指标，对PHC有特异性诊断价值。

抗人Glypican3 N端融合蛋白单克隆抗体研制及特性鉴定

目的:制备抗人磷脂酰蛋白聚糖3(Glypican3,GPC3)N端蛋白的单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定。方法:以纯化的GPC3 N端融合蛋白免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗人GPC3N端mAb并进行纯化。经Western blot和ELISA方法鉴定其特异性、Ig亚类和效价。结果:获得2株可稳定分泌抗人GPC3N端mAb的杂交瘤细胞株(Ⅲ4B,Ⅻ6C)。两株mAb均为Ig1亚类,其腹水mAb的效价分别为1∶9 600及1∶7 200,均可特异性地识别GPC3蛋白。结论:成功地建立可稳定分泌抗人GPC3N端mAb的杂交瘤细胞株,其分泌的mAb特异性强、效价高。

单抗免疫酶斑点法检测GGT-Ⅱ在肝癌诊断中的价值

背景与目的:肝癌特异性γ-谷氨酰转肽酶同工酶Ⅱ(gamma-glutamyltransferaseisoenzymeⅡ,GGT-Ⅱ)被认为是甲胎蛋白(AFP)以外的最佳肝癌标志物,但目前尚无简便的检测方法。本研究目的是探讨单克隆抗体免疫酶斑点法检测GGT-Ⅱ对肝细胞癌的诊断价值。方法:纯化GGT-Ⅱ同工酶,免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术制备单克隆抗体。采用免疫酶斑点法与电泳法同步检测123例肝癌和164例不同良性肝病患者血清中GGT-Ⅱ。结果:单克隆抗体免疫酶斑点法检测GGT-Ⅱ对肝细胞癌的诊断阳性率(71.5%)与电泳法(76.4%)相比无明显差异。但免疫酶斑点法假阳性率(肝硬化23.7%,慢性肝炎27.1%)高于电泳法(肝硬化10.0%,慢性肝炎8.4%)。结论:单克隆抗体免疫酶斑点法检测GGT-Ⅱ对肝细胞肝癌诊断有一定价值,但诊断特异性有待提高。

核转录因子-κB在大鼠重症急性胰腺炎中的表达

重症急性胰腺炎（SAP）病死率较高，目前尚无特异性治疗措施。近年来研究认为，包括肿瘤坏死因子、白细胞介素、血小板活化因子、磷脂酶A2、花生四烯酸代谢产物、内皮素等细胞因子、趋化因子、黏附分子和诱生型一氧化氮合酶（iNOS）在内的炎症介质上调，参与了SAP的发病及病情进展过程，是导致SAP高病死率的原因之一。已证实核转录因子-κB（NF-κB）在细胞内调控多种炎症介质转录过程中发挥了关键作用，并参与了SAP炎症介质作用的调控。NF-κB通常以由NF-κB／Rel家族组成的同源或异源复合物形式存在，其中最常见的为p65／p50异二聚体，也是其活性的主要形式。’。因此，本实验拟通过研究NF-κBp65在SAP大鼠胰腺组织中的表达，探讨NF-κB在SAP中所起的作用及其可能机制。

胰腺癌患者预后的影响因素分析及其对生存结局的预测价值

目的探讨胰腺癌患者预后的影响因素,并分析其对生存结局的预测价值。方法选择胰腺癌患者200例,收集入院时一般临床因素(性别、年龄、BMI)、肿瘤相关因素(肿瘤部位、c TNM分期、转移情况)及血液指标因素[CEA、CA199、中性粒细胞百分比(NEU)、外周血粒淋比(NLR)、预后营养指数(PNI)、血小板与淋巴细胞比值(PLR)、AST、ALT、总胆红素(TBil)、血清白蛋白(Alb)]及入院后治疗方式。随访3年,比较各因素下患者生存期(OS)。采用Cox比例风险回归模型分析胰腺癌患者预后的影响因素,并评估其对生存结局的预测价值。结果单因素分析显示,年龄、肿瘤部位、c TNM分期、肝转移、淋巴结转移、CEA、CA199、NLR可能与胰腺癌患者预后有关(P均<0.05);Cox比例风险回归模型分析显示,CA199、NLR、肝转移、c TNM分期、入院后治疗方式是胰腺癌患者的独立预后因素(P均<0.05)。c TNM分期、NLR、肝转移及CA199预测胰腺癌患者生存结局的ROC曲线下面积分别为0.808、0.717、0.588、0.531。结论 c TNM分期、NLR、CA199、肝转移及入院后治疗方式是胰腺癌患者预后的独立影响因素;c TNM分期、NLR对预测胰腺癌患者生存结局有较好价值。

鼠肝脏癌变过程中GGT及其同工酶的表达与动态变化

本文对化学致癌剂２－ＦＡＡ诱发鼠肝癌过程中，膜结合γ－谷氨酰移换酶（ＧＧＴ）及其同工酶的表达与动态变化进行了研究，Ｗｉｓｔａｒ大鼠经２－ＦＡＡ喂饲后，经病理学及的组织化学证实，在肝脏由癌前病变到癌变过程中，肝细胞大量表达ＧＧＴ并分泌入血。肝组织ＧＧＴ，实验各组均明显高于对照组（Ｐ＜０．０１），接近胎鼠肝ＧＧＴ水平，血中ＧＧＴ呈持续住增加．早期升高速度慢于ＡＤＡ，ＧＳＴ和ＡＬＴ，正常鼠肝及血ＧＧＴ仅为单一区带，肝癌鼠肝与血清ＧＧＴ也呈动态改变，显示正常鼠和胎鼠肝ＧＧＴ的双重特征，研究结果提示鼠肝癌时ＧＧＴ大量表达，且有癌胚性质，且血中同工酶异常区带出现较早，检测其同工酶有助于对鼠肝癌的早期诊断。

血清CA125检测在腹水性质分析中的诊断价值

目的探讨血清CA125检测在腹水性质分析中的诊断价值。方法对14例结核性腹膜炎、10例自发性细菌性腹膜炎、29例肝硬化腹水和44例腹膜转移癌患者血清CA125进行检测,并对59例不伴有腹水的腹腔脏器恶性肿瘤患者和20例健康人进行对照。结果腹水患者血清CA125明显高于正常对照组(P<0·01);不同性质腹水患者之间血清CA125无明显差异(P>0·05);不伴有腹水的腹腔脏器恶性肿瘤(包括卵巢癌)患者血清CA125与正常对照组无明显差异(P>0·05);卵巢癌伴腹膜转移者血清CA125高于其他腹膜转移癌(P<0·05)。结论血清CA125检测,对腹水性质无鉴别诊断价值。血清CA125不是卵巢癌特异性标志物,但可作为卵巢癌腹膜转移的标志。

血管内皮生长因子在胃癌血清中的表达意义

目的:检测胃癌患者术前血清血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)表达水平,探讨VEGF与胃癌临床病理特征的关系及其临床意义.方法:运用酶联免疫黏附法(ELISA)定量检测60例胃癌和15名健康人血清中VEGF的含量.结果:胃癌组血清VEGF表达水平(1047.71±339.47)ng·l-1明显高于健康人组(760.50±111.80)ng·l-1(P<0.01).胃癌组术前血清VEGF水平与肿瘤大小、侵袭程度、TNM分期等密切相关(P<0.05).结论:VEGF可能参与胃癌的发生、发展和转移过程的调控,血清VEGF含量的增强,预示胃癌的转移和预后不良.

瘦素在肝纤维化组织中的表达及其与肝星状细胞活化的关系

目的:探讨瘦素(leptin)在肝纤维化组织中的表达及其与肝纤维化过程中转化生长因子(TGF-β1)以及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的相关性,了解leptin与肝星状细胞(HSC)活化的关系.方法:健康♂SD大鼠40只,随机分成正常对照组和CCl4诱导的肝纤维化模型组.于造模2、4、6wk末分批处死动物,分别采用RT-PCR和Westernblot、免疫组织化学方法联合检测leptin、TGF-β1及α-SMA在肝纤维化组织中的表达.结果:正常对照组肝脏组织中leptin、TGF-β1、α-SMA均有微量表达;CCl4注射2wk后,leptin、TGF-β1、α-SMA表达开始增强,2、4、6wk肝组织中的表达强度呈明显递增趋势(P<0.05).leptin与TGF-β1和α-SMA表达均呈显著相关性(r=0.668,0.570,均P<0.05).结论:leptin的阳性表达随着肝纤维化程度的加重而增强.在肝纤维化过程中leptin可能参与了HSC活化、增殖以及ECM的合成.

长链非编码RNA CCAT2对肝癌细胞增殖和侵袭迁移能力的影响及其机制探讨

目的观察长链非编码RNA CCAT2(lncRNA CCAT2)对肝细胞癌(HCC)细胞增殖和侵袭迁移能力的影响,并探讨其机制。方法将对数生长期的HCC细胞Hep G2随机分为A、B、C组,采用Lipofectamine3000分别瞬时转染对照质粒、小干扰RNA质粒(si-CCAT2)、si-CCAT2+多梳蛋白EZH2过表达质粒。采用Real-time PCR法检测细胞中的lncRNA CCAT2、EZH2 mRNA,Western blotting法检测细胞中的EZH2蛋白,MTT法观察培养24、48、72、96 h细胞增殖能力(OD490),细胞划痕及Transwell实验分别观察细胞的迁移、侵袭能力。结果与A组比较,B组细胞中lncRNA CCAT2和EZH2的mRNA和蛋白表达水平均下降(P均<0.05);与B组比较,C组胞中EZH2的mRNA和蛋白表达水平均增加(P均<0.05)。与A组同时点比较,B组细胞增殖的OD490值降低(P均<0.05);与B组同时点比较,C组细胞增殖的OD490值升高(P均<0.05)。与A组比较,B组细胞划痕愈合百分比、穿膜细胞数均下降(P均<0.05);与B组比较,C组细胞划痕愈合百分比、穿膜细胞数均增加(P均<0.05)。结论 lncRNA CCAT2可通过上调EZH2的表达促进HCC细胞的增殖、侵袭和迁移,进而促进HCC的发生发展。

β-榄香烯对2-乙酰氨基芴诱发实验性鼠肝癌的影响

目的：研究β－榄香烯对2－乙酰氨基芴(2－AAF）诱发实验性鼠肝癌的干预效应，并探讨其对c－myc、c－erbB－2和血管内皮生长因子(VEGF）等蛋白表达的影响。方法：以2－AAF喂饲SD大鼠，制备肝癌模型，予以不同剂量榄香烯乳腹腔内注射，观察肿瘤生成状况，并测定c－myc、c－erbB－2和VEGF蛋白的表达。结果：小剂量榄香烯乳(5mg／kg）干预组发生肝癌结节数较其他组少；c－myc、c－erbB－2和VEGF在正常对照组均为阴性，而增生结节或癌结节均为阳性，其表达水平与榄香烯乳用量无关。结论：小剂量β－榄香烯对2－AAF诱发的实验性鼠肝癌有一定阻抑作用，但不是通过调控c－myc、 c－erbB－2和VEGF等基因蛋白实现的。

基于脑肠轴研究电针联合药物治疗UC的作用机制——附31例临床资料

目的:观察电针联合柳氮磺胺吡啶(SASP)治疗溃疡性结肠炎(UC)的疗效,并基于脑肠轴的作用探讨电针对UC的疗效机制。方法:62例UC患者随机分为观察组和对照组各31例,对照组单予SASP治疗,观察组给予电针联合SASP治疗,疗程均为8周。比较2组有效率、不良反应及血清促肾上腺皮质激素(ACTH)水平。结果:观察组总有效率(93.5%)明显高于对照组(71.0%),而不良反应发生率(25.8%)与对照组(29.0%)比较无明显差异。治疗前2组患者反映受脑肠轴影响的ACTH水平一致,治疗后均明显下降。结论:电针联合SASP治疗UC疗效增强,其机制可能是通过调节脑肠轴引起血ACTH等物质水平变化而对UC发挥了治疗作用。