群体反应性抗体(PRA)检测——附180例报告

本文研究了群体反应性抗体(PRA)对肾移植的影响,发现PRA 是免疫应答抗体,高PRA 与严重排斥反应强关联,亦是丧失移植肾的重要指征,并讨论了PRA 和CDC 作为HLA 组织配型对肾移植中提高人/肾双存活率的应用意义,证实PRA 比CDC 敏感性高。

HLA-Cw在广东汉族人群中的分布频率及其意义的初步分析

目的 :检测HLA Cw在广东汉族人群的分布频率 ,初步分析该人群中KIR与HLA Cw之间识别方式的特点及意义。方法 :骨髓移植供者 12 2例 ,ACD抗凝血提取DNA ,半量全自动PCR RSSO分型检测Cw。结果 :广东汉族人群HLA Cw基因频率分布由高至低依次为 :Cw 0 3(0 2 371) >Cw 0 7(0 2 15 9) >Cw 0 1(0 175 2 ) >Cw 0 8(0 112 9) >Cw 0 4 (0 0 5 0 5 ) >Cw 14、15(0 0 4 19) >Cw 12 (0 0 376 ) >Cw 0 6 (0 0 333) >Cw 0 5 (0 0 0 82 ) >Cw 16 (0 0 0 4 1)。第一组Cw 0 2 ,0 4 ,0 5 ,0 6识别KIR分子中2DL 2DSI;第二组Cw 0 1,0 3,0 7,0 8识别KIR分子中 2DL2 2DL3;2DS2 2DS3。两组分布频率相比有显著性差异 (P <0 0 1)。结论 :广东汉族人群HLA Cw 0 1,0 3,0 7,0 8出现频率较高 ,其与KIR的识别方式均属第二组。

PCR-RSSO基础上HLA-Ⅰ、Ⅱ基因分型的研究

目的：通过对PCR－DNA技术的分析，探讨人类白细胞抗原（HLA）基因分型方法。方法：采用PCR反向序列特异性寡核苷酸（polymerase chain reaction-reverse sequence specific oligonucleotide,PCR-RSSO)杂交技术，建立改良半量扩增体系全自动HLA－I、Ⅱ等位基因分型方法，进行了635份血液标本HLA－A、B、C、DR、DQ等位基因分型，其中166份DNA同时采用序列特异性引物技术（PCR－SSP）和手工全量扩增体系PCR－RSSO技术。对全自动半量PCR－RSSO、PCR－SSP、手工PCR－RSSO 3种方法做两两比较。结果；全自动半量PCR－RSSO的分型成功率为98．4％（3124／3175），PCR－SSP为98．8％（656／664），手工PCR－RSSO为88．3％（733／830）。经χ^2检验，全自动半量PCR－RSSO与PCR－SSP的分型成功率无统计学差异，与手工PCR－RSSO有显著差异（P＜0．05）。结论：PCR－RSSO可识别HLA－I、Ⅱ共706个等位基因，覆盖WHO命名委员会2000年公布的36个等位基因的75．43％；对706个HLA等位基因的分型均为中－高分辨率，有分辨纯合子等位基因的能力；易长期保存书面的实验原始资料，即杂交条；具有成本低、劳动强度低、省时和DNA消耗量少等优点。PCR－RSSO适合于造血干细胞移植和建立造血干细胞及脐带血干细胞库的组织配型。

高分辨率的快速HLA分型新方法

高分辨率的快速ＨＬＡ分型新方法肖露露张升叶欣马琳雅陈洪涛（广州器官移植配型中心，广州５１００９５）作者简介：肖露露，女，４３岁，副主任医师，主要从事免疫遗传方面的研究免疫血清学技术在研究ＨＬＡ系统多态性的生物学功能、器官移植组织配型等方面发挥重要作用...

抗-MICA抗体在ESRD患者中的表达及其临床意义

目的探讨主要组织相容性复合物I类相关链A(MICA)抗体在终末期肾脏疾病(ESRD)患者中的表达。方法采用液相芯片分析技术和带有11种MICA抗原的荧光微球,对110例ESRD患者进行抗-MICA抗体的检测和抗-MICA抗体的特异性分析。结果在30例PRA阳性患者中抗-MICA抗体(+)的几率为40%(12/30),在80例PRA阴性患者中抗-MICA抗体(+)的几率为17.5%(14/80)。PRA阳性组患者与PRA阴性组患者抗-MICA抗体(+)几率之间呈显著性差异(χ2=6.120,P=0.013)。调查发现,26例MICA抗体(+)血清中表达出11种MICA抗原中的10种抗-MICA抗体特异性,其中,26.92%(7/26)为单特异性抗体,73.08%(19/26)为多特异性抗体。在随后的临床研究中还观察到,3例抗-MICA抗体(+)的患者接受尸体肾移植,术后随访2月,没有发生急性排斥并且移植肾功能良好。结论在PRA阳性患者中抗-MICA抗体(+)的几率亦高,说明抗-MICA抗体(+)的几率与PRA阳性的几率有明显的伴随关联。抗-MICA抗体表现为多特异性,抗-MICA抗体可能包含有IgM和IgG两种免疫球蛋白类型。研究提示,对于这部分ESRD患者未来接受移植替代治疗时,本研究数据将可以作为前瞻性数据提供临床进一步研究MICA与肾移植的关联和影响。

脑微出血预测颅内出血的研究进展

脑微出血（cerebralmicrobleeds，CMBs）作为脑小血管疾病的一种影像学表现，广泛存在于脑血管疾病、阿尔茨海默病、血管认知障碍患者以及正常老年人群中。CMBs是微观的病理变化，反映了小血管周围含铁血黄素的沉积状态，合并CMBs的患者是否更容易发生出血性脑血管病，如脑出血或者急性脑梗死后的出血转化，以及是否增加抗血小板、抗凝及溶栓治疗的风险仍不明确，这也是近年来研究的热点之一。随着MRI技术的发展，CMBs越来越受到神经科学界的关注。现就CMBs及其相关临床问题的研究现状综述如下。

肾移植术后受者高PRA介导超急性排斥反应

为探讨群体反应性抗体（Penalreactiveantibody，PRA）对肾移植的独立影响，对9例移植受者术后PRA及其与超急排斥性反应和预后进行关联调查，发现术后PRA明显升高，接受供肾HLA（Humanleucocyteantigen）配合≤3个抗原的受者升值均＞34％，8／9例发生超急性排斥反应和移植肾无功能，2／9例死于排斥并发症；接受供肾HLA配合5个的1例受者PRA升值15％，无排斥反应，说明HLA配合差的移植和输血均可导致高PRA，但是前者PRA高幅＞34％。研究揭示，PRA作为HLA体液免疫性抗体诱导移植物超急性排斥反应，术后PRA检测有助早期识别严重排斥反应。

HLA-ⅠⅡ类抗原一步分型新方法

为了使HLA组织配到适应我国器官移植的高速进展，采用磁球技术和单抗试剂建立起可在1．5h完成HLA－Ⅰ、Ⅱ类抗原一步分型的新方法。研究证明，与传统的传统柱6hHLA分型方法相比，新方法具有简单快速的优势，可以替代传统技术。

血液深低温保存的研究

1972年Meryman首次报道深低温下复方甘油保存血液和红细胞，能够延长血液使用寿命［1］。本文进行了预先去除甘油的保存方法研究，细胞回收率＞80％，并具有洗涤次数少，溶血速率低，冻存空间小，适宜长期大量保存血液的优势。

高PRA介导肾移植后延迟性超急排斥反应

目的:了解HLA-A、B、DR、DQ表现型为纯合子的终末期肾脏疾病患者的PRA水平,并研究其与肾移植预后的关系。方法:对2006年8月至2007年8月间在我院登记等待首次肾移植的438例终末期肾脏疾病患者HLA、PRA情况以及其中1例PRA65的HLA纯合子患者肾移植效果进行分析。HLA基因分型采用PCR-SSP技术,PRA、抗体强度及抗体特异性分析采用ELISA技术,数据统计采用SPSS11.5统计软件。结果:438例患者中有HLA纯合子12例,杂合子426例;12例纯合子中PRA阳性者6例,阳性率50,平均HLA抗体强度为55,广泛致敏率达100;426例杂合子中PRA阳性者65例,阳性率15.26,平均HLA抗体强度为28,广泛致敏率为40;纯合子与杂合子之间的PRA阳性率、平均HLA抗体强度和广泛致敏率相比差异均有统计学意义(P<0.05),纯合子高PRA的风险大(OR=5.29,95CI:1.67～16.70);1例PRA65的纯合子患者术前经血浆置换、蛋白免疫吸附、静滴丙种球蛋白治疗使PRA降低至阴性,在舒莱免疫诱导下行尸体肾移植术,供受者HLA抗原2个错配,术后移植肾功能逐渐恢复,第3天开始PRA呈阳性并逐渐升高,伴随临床逐渐出现尿少、血压升高、移植肾区疼痛等排斥反应征象,血清肌酐逐渐升高,移植肾B超见动脉阻力指数逐渐升高,提示急性排斥反应,采用术前有效清除HLA抗体的所有方法再次治疗无效,于术后第36天因移植物失功行移植肾切除。结论:HLA纯合子产生高PRA的风险大;文中1例PRA阳性的HLA纯合子早期移植肾功能恢复随后出现不可逆排斥反应致移植肾失功的情况,提示近年来随着各种有效清除HLA抗体的治疗方法不断用于临床导致了抗体介导的延迟性超急排斥反应(AMDR)的出现从而使移植肾失功;高PRA患者行肾移植术需高度慎重,应尽可能避开受者PRA峰值时的全部抗体谱来选择供体。

预先去甘油冷冻红细胞临床输注效果的观察

为探索血液的深低温长期保存的效果，采用预先去甘油的方法在－75℃保存的冷冻血进行临床输血效果的观察，经内外妇儿科的15例患者的输血过程和输血后各项生化指标检测均符合美国AABB的安全和有效标准。表明该细胞保存方法及临床输液效果均能够达到输血治疗目的，可在自体输血、稀有血型输血工作中推广应用。

习惯性流产免疫治疗中HLA封闭抗体的变化

本文调查了６８例不明原因的习惯性流产的妇女，发现病人普遍缺乏封闭抗体，抗丈夫白细胞抗体（ＡＰＬＡ）阳性率８．３３％，远远低于正常孕妇对照组的３４％；但是，６２例在接受ＨＬＡ免疫后ＡＰＬＡ阳性率提高到３７．１％，其中３５例成功分娩健康的婴儿。研究说明ＡＰＬＡ可以作为免疫治疗效果及疾病转归的观察指标。

HLA—B^＊27高分辨等位基因在1606例疑似强直性脊柱炎患者中的表达

目的:探讨HLA-B*27高分辨等位基因分析对强直性脊柱炎(AS)诊断和鉴别诊断的临床应用价值。方法:采用PCR-SSP和PCR-SBT技术对2004年1月-2008年3月本院收治的广东地区1606例骨和关节疾病(OAP)患者(其中确诊AS患者1022例)进行了HLA-B*27低分辨和HLA-B*27高分辨的基因频率调查和分析。结果:OAP患者中B*27高分辨基因频率(70.50%,141/200)高于B*27低分辨基因频率(41.82%,588/1406)(P<0.001);1022例AS患者中高分辨的B*27基因频率(84.21%,121/133)也高于B*27低分辨基因频率(44.77%,398/889)(P<0.001)。HLA-B*27阳性患者表达出的HLA-B*27等位基因为B*2704占88.44%(459/519),B*2705占9.83%(51/519),B*2702占1.73%(9/519)。结论:高分辨技术能够准确检测HLA-B*27阳性患者,AS患者在不同地区或人群所表现出的HLA-B*27易感基因不同;应用高分辨技术进行HLA-B*27等位基因分型,将有益于提高AS早期诊断和鉴别诊断,发挥对AS预后预测和治疗选择的临床应用价值。

多重等位基因特异性PCR-HLA-ⅡDNA分型

【目的】对人类组织相容性抗原 (HumanLeucocyteAntigenSystem)Ⅱ类进行高分辨基因分析。【方法】用多重PCR和等位基因特异性PCR技术相结合[1,2 ] ,建立多重等位基因特异性PCR方法。【结果】 2 4对引物成功地分辨 43份DNA的HLA DRB1、B3、B4、B5 5 1个等位基因和DQB1 15个等位基因的 4位数特异性 ,识别基因片段长度为 2 81bp。【结论】多重等位基因特异性PCR技术敏感、微量、节省和分辨能力高 ,是进行复杂的HLA多态性研究中有价值的佐证试验。

人类免疫遗传基因在慢性肾小球肾炎病人中的表达

对219例慢性肾小球肾炎尿毒症（CGN）病人和406例健康人群进行HLA免疫基因的频率、单倍型频率分析和疾病关联研究。结果：在疾病组中HLA－B13、B35、B55、DR7、DR10、DR12、DQ7对基因频率和A11－B60、A11－DR10、A11－DR12、A11－DQ7、A24－DR14、DR10－B60、DR10－DQ7、DR12－DQ7单倍型频率显著升高，B46－DQ9显著降低，RR均＞3．84，P均＜0．05。提示HLA免疫基因与易感GN之间强关联，是最终导致肾功能衰竭的风险因素，其中B55、DR10、DQ7为国内外相关研究中首次报道，可能是疾病人群特有的地区性风险因子。

肾脏移植受者HLA体液免疫的研究

通过对２４７８例等待肾脏移植受者的ＨＬＡ体液致敏状态的观察，进行移植受者群体反应性抗体（ＰＲＡ）的研究及其与肾脏移植的关联。结果显示，ＰＲＡ是移植前受者是否致敏的指标，与淋巴细胞毒（ＣＤＣ）的不相合呈正相关，ＰＲＡ≥３０．００％的受者接受ＣＤＣ阴性移植肾仍然全部发生超急排斥，而ＰＲＡ阴性受者仅为１２．４６％。因此，ＰＲＡ分析对辨别ＨＬＡ基因的免疫状态和预测超急排斥反应以及改善肾脏移植的效果具有普遍意义。

干细胞移植治疗神经遗传疾病中HLA配合的几率分析

为了探讨干细胞移植 (StemCellTransplantation)对神经系统中预后不良的单基因遗传性疾病之一DMD(假肥大型肌营养不良症 )的临床可行性 ,采用PCR反向序列特异性寡核苷酸杂交技术 ( polymerasechainreaction reversesequencespecificoligonucleotide ,PCR RSSO)对 3 0例DMD患者进行HLA ABDR基因分型 ,并与广东省脐血干细胞库 668份和中国造血干细胞捐献者库 3 4 910份分别进行HLA ABDR基因频率比较和无关供者干细胞的配合性分析。结果表明 :DMD疾病组的HLA基因呈正态遗传 ,DMD患者HLA基因表达与广东健康人群无统计学上显著差异 ;DMD患者中 1/ 4寻找到合适用于移植的干细胞 ,其中在广东脐血库寻找到≥ 5个HLA ABDR基因配合的几率为 5 0 % ,在中国造血干细胞库寻找到 6个HLA ABDR基因配合的几率为 2 6%。结论 :对DMD患者进行非亲缘异基因脐带血 /外周血移植治疗具有HLA配合供者高选择几率的可行性基础 ;干细胞移植不仅将使致死性神经肌肉疾病患者获得临床症状改善 ,并且为难治性神经系统疾病受益于干细胞移植治疗打造技术平台。

造血干细胞移植中HLA-DP不相合对移植物抗宿主病的影响

【目的】探讨HLA DP座位免疫基因与造血干细胞移植 (HSCT)中移植物抗宿主病 (GVHD)发生程度的相关性。【方法】采用PCR SSP HLA DPB1基因分型方法和Thomas分度标准对已知HLA A、B、DR全相同的 12例同胞 (SiblingDonor,SD)、4例无关供者 (Unrelat edDonor,UD)和 1例父亲 (FatherDonor ,FD)捐髓的HSCT进行回顾性的调查。【结果】 12例SD中GVHD 0～Ⅲ°,HLA DPB1不相吻合率约为 4% ( 1/2 4) ,其中DP相同者的受者发生GVHD最强达到Ⅱ°。DP不同者仅为Ⅰ°,4例UD中GVHDⅡ°～Ⅳ°,HLA DPB不吻合率约为 37%( 3/8) ,其中 1例仅有DP不相同和DP相同受者的GVHD均为Ⅱ° ;而DP不相同基础上 ,1例CW 亦不相同为Ⅲ° ,另 1例DR低分辨率相同但高分辨率不相同 ( 0 40 4∶0 40 5 )和DQ不相同则发生Ⅳ°。父亲捐髓的受者GVHD为Ⅰ°,HLA DP为半相合。【结论】 17例造血干细胞移植回顾性分析显示 ,在HLA A、B、DR全相同的条件下 ,SD HLA DP配合与否与GVHD之间无相关性 ,UD HLA DP配合与GVHD显著关联 ;HLA非全相同的亲缘捐髓和无关捐髓的供受者应做HLA DPB1基因配型以准确预测和预防GVHD。