丝裂原活化蛋白激酶15(mitogen-activated protein kinase 15,MAPK15),又称ERK7或ERK8,是MAPK家族的非典型新成员。MAPK15不同程度地促进不同肿瘤细胞的增殖、迁移、自噬等细胞活动。本研究以MAPK15为靶点,筛选特异性的MAPK15纳米抗体,...丝裂原活化蛋白激酶15(mitogen-activated protein kinase 15,MAPK15),又称ERK7或ERK8,是MAPK家族的非典型新成员。MAPK15不同程度地促进不同肿瘤细胞的增殖、迁移、自噬等细胞活动。本研究以MAPK15为靶点,筛选特异性的MAPK15纳米抗体,评估其是否能够作为免疫组织化学和Western印迹中的一抗用于其抗原表达的检测,并探究该纳米抗体在B16-F10黑色素瘤细胞中的作用。通过噬菌体展示技术从B16-F10黑色素瘤细胞纳米抗体文库中进行筛选,得到1株MAPK15特异性纳米抗体,命名为MAPK15-VHH;将该菌株构建原核表达载体,进行优化诱导表达条件时发现,0.6 nmol/L IPTG,15℃,100 r/min条件下该纳米抗体的上清表达量最高。通过竞争ELISA法检测MAPK15-VHH的亲和力,结果显示,该抗体KD值为0.9829。通过Western印迹和免疫组织化学检测脑组织中MAPK15在蛋白质水平的表达量及分布情况,结果表明,MAPK15-VHH可与组织中的MAPK15结合,用于检测MAPK15蛋白的表达情况。在B16-F10黑色素瘤细胞中过表达MAPK15后向其中添加MAPK15-VHH,通过CCK8、Western印迹以及实时荧光定量PCR检测其对该细胞增殖和自噬的影响,结果显示,该MAPK15-VHH能作为MAPK15的拮抗剂,抑制B16-F10细胞的增殖和自噬,从而抑制黑素瘤细胞的生长。综上所述,本研究成功得到一株亲和力较强的MAPK15纳米抗体,可用于Western印迹及免疫组织化学以检测MAPK15在蛋白质水平的表达及分布;此外,该MAPK15纳米抗体可以作为MAPK15拮抗剂,有效地抑制B16-F10细胞的增殖和自噬进程,为临床检测试剂和治疗药物的开发提供理论基础。展开更多
文摘目的探讨局麻下使用UHS疝装置(Ultrapro Hernia System)行无张力疝修补手术的优点及临床疗效。方法采用对照研究的方法分析我院2009年12月至2010年12月间收治的114例UHS疝装置无张力疝修补患者(A组)与110例疝环充填式疝修补患者(B组)的临床资料,比较两组患者手术时间、术后住院时间、住院费用、并发症发生率等,并采用视觉模拟评分法(Visual analogue scale,VAS)随访评估其术后疼痛程度变化。结果1、两组患者在手术时间、住院时间方面无统计学差异(P<0.05),A组患者住院费用明显高于B组(8148元±1007元vs 6488元±845元,P=0.000);2、两组患者术后早期并发症总发生率无明显差异(8.8%vs 7.3%,P=0.680),A组患者术后异物感发生率低于B组(9.6%vs 20.9%,P=0.019);3、术后1天两组患者疼痛程度无明显差异(3.9±1.2 vs 4.2±1.4,P=0.120),而A组患者术后1个月及术后6个月疼痛程度均低于B组(分别为2.6±1.5 vs 3.1±1.9,P=0.032;1.2±1.1 vs 1.8±1.3,P=0.000)。结论UHS疝装置在局麻下腹股沟疝无张力修补术中疗效安全可靠,且可有效减少腹股沟疝修补术后患者的不适反应,是值得推广的腹股沟疝修补手术方式。