正常人外周血αβ T细胞TCR β链CDR3多态性和长度分析

采用免疫扫描谱型分析技术,分析正常人外周血T细胞TCRβ链CDR3的多态性和长度分布.提取6例正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell-PBMC)的总RNA,逆转录成cDNA,以24个TCR BV基因家族为上游引物,共同的TCR BC基因为下游引物(荧光标记),6例样品PCR产物的基因扫描分析表明,24个TCRBV家族的CDR3谱型分析在1.5%琼脂糖凝胶电泳图上显示1个模糊条带.序列测定结果显示,各TCR BV家族的CDR3谱型均超过8个条带.GeneScan分析证明,正常人外周血T细胞的24个TCR BV家族的CDR3谱型为标准的高斯分布,各家族的CDR3表达频率相近,呈现不同的CDR3多态性和不同的CDR3长度.多数TCR BV家族产物为框架内重排(相邻2个PCR产物相差3个碱基),少数TCR BV家族表现为两个峰群的重排.该研究对正常人TCRβ链CDR3谱系的详细分析将为T细胞应答、TCR重组等研究提供基础.利用免疫谱型分析技术能监测到TCR CDR3谱型分布特征和表达频率的变化.

细脚拟青霉多糖对乙醇诱导L-02细胞损伤的保护作用研究

目的探讨细脚拟青霉多糖(PtPs)对乙醇诱导肝细胞损伤的体外保护作用。方法采用RT-PCR分别检测乙醇诱导损伤的乙醇组、PtPs处理组(PtPs+乙醇)及正常对照组L-02细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA和热休克蛋白90(HSP90)mRNA的表达;检测细胞培养上清液中黄嘌呤氧化酶(XOD)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)活性及丙二醛(MDA)含量;检测细胞匀浆中三磷酸腺苷酶(ATPase)活性,并对各组细胞进行Annexin-FITC标记染色观察凋亡细胞情况。结果与乙醇组比较,乙醇+PtPs组细胞内TNF-α mRNA表达下降(P<0.01),HSP90 mRNA表达增加(P<0.05或P<0.01);细胞培养上清液中SOD活性升高、XOD及LDH活性下降、MDA含量下降(P<0.05或P<0.01);细胞匀浆中ATPase活性上升(P<0.05或P<0.01);PtPs处理后可见乙醇诱导的L-02细胞凋亡和坏死被明显抑制。结论PtPs对乙醇诱导肝细胞的损伤具有保护作用。

L-甘油醛与氟化钠对血葡萄糖测定的保护效果比较

〔目的〕比较L 甘油醛与氟化钠对血葡萄糖的保护效果。〔方法〕对 3 0份志愿者肝素抗凝血标本分别用L 甘油醛、氟化钠抗红细胞糖酵解处理及加生理盐水对照 ,观察不同时间内血中葡萄糖水平。〔结果〕与 0h比较 ,L 甘油醛组在 12h内葡萄糖水平未见明显改变 (均P >0 0 5 ) ;氟化钠组在 2～ 4h内分别下降 6 1%、7 3 % ,差别均有意义 (均P <0 0 5 ) ,而在 4～ 12h内基本保持衡定。氟化钠组与L 甘油醛组比较 ,在 2、4h时差别均有意义 (均P <0 0 5 )。对照组在12h内呈线性下降 ,2、4、12h分别下降 9 4%、2 1 9%、65 5 %。〔结论〕氟化钠在 4h之后才充分发挥抗酵解作用 ;L 甘油醛在 12h内保持血葡萄糖浓度稳定 。

改良乙醇脱氢酶法测定血清中微量乙醇

目的:建立一个简便、灵敏、特异、试剂稳定的乙醇脱氢酶法检测血清中微量乙醇浓度。方法:选择Tris-HC l缓冲液作为乙醇脱氢酶法测定乙醇的反应条件,通过优化反应体系及自动生化分析仪分析参数,采用两点终点法对乙醇进行检测并评价了方法学性能。结果:乙醇脱氢酶(ADH)最适用量为1.2 g/L,氧化型辅酶I(NAD+)最适浓度为9 g/L。线性范围可达1200 mg/L,批内变异系数(CV)小于2.8%,批间变异系数(CV)小于3.9%,平均回收率为99.8%。本法(Y)与气相色谱法(X)比较,具有良好的相关性,Y=0.993X-9.76,r=0.998。胆红素159.1μmol/L、甘油三酯7.4 mmol/L、血红蛋白11.6 g/L、乙醛0.3 g/L、异丙醇0.2 g/L、甲醇0.7 g/L、甲醛0.6 g/L以下对本法测定乙醇结果无明显干扰。结论:本法测定血清中乙醇无需除蛋白,具有快速、简便、灵敏、特异等优点,适合于自动生化分析仪检测。

血清钙的偶氮氯膦Ⅰ测定法

目的 建立一种简便、灵敏、试剂稳定的分光光度法测定血清钙。方法 用国产试剂偶氮氯膦Ⅰ作显色剂测定血清钙。结果 显色络合物最大吸收波长为 5 80nm ,线性范围达 4 5mmol/L ,摩尔吸光系数为 7 72× 10 3 L·mol 1·cm 1。回收率为98 3%～ 10 1 3%,批内变异系数和批间变异系数分别为 1 87%与 2 13%,与原子吸收分光光度法Y比较具有良好的相关性 ,Y =1.0 75X - 0 .12 0 ,r =0 .984.Mg2 + 3mmol/L、Cu2 + 、Fe3 + 、Zn2 + 各 10 0 μmol/L、胆红素 2 80 μmol/L甘油三酯 4 8mmol/L、血红蛋白 2 5 g/L以下对本法测定结果无影响。 结论 该方法具有快速、简便、灵敏可靠等优点 ,适合于临床应用。

乙醇氧化酶两点速率法测定血清微量乙醇

目的:建立一个灵敏、准确、特异、试剂稳定的乙醇氧化酶法用于测定血清微量乙醇浓度。方法:利用乙醇氧化酶与过氧化物酶偶联,通过优化反应体系及自动生化分析仪分析参数,采用两点速率法对乙醇进行分析。结果:乙醇浓度在2 000 mg/L以下线性良好;批内RSD小于2.81%,批间RSD小于4.51%;平均回收率为100.7%;本法(Y)与气相色谱法(X)比较具有良好的相关性,Y=0.996X+3.58,r=0.981。胆红素159.1μmol/L、甘油三酯14.31 mmol/L、血红蛋白5.8 g/L以下对本法测定乙醇结果无干扰。结论:建立的两点速率法测定乙醇灵敏度高、准确度、特异性均较好,特别适合于血清乙醇浓度处于轻度超标的疑似酒后者的标本检测。

白细胞介素-6和转铁蛋白检测在胸腔积液诊断中的价值

目的 探讨胸腔积液患者胸水中IL 6和TRF两项指标对胸腔积液性质鉴别诊断的实用价值。方法 将 93例不同病因的胸腔积液患者分成漏出液组、结核性渗出液组和恶性渗出液组 ,平行检测患者胸腔积液中IL 6和TRF的水平。通过受试者工作特征曲线 (ROC)评价两项指标对胸腔积液性质的诊断价值。结果 IL 6在三组胸腔积液中差异均有意义 (均P <0 .0 5 )。以结核性渗出液组中最高 ,漏出液组最低。渗出液中TRF比漏出液中TRF高 (P <0 .0 5 ) ,分别以 95pg ml、70mg dl作为IL 6、TRF诊断漏出液与渗出液的临界值 ,诊断渗出液的灵敏度为 95 .2 %、85 .7%特异度为93.3%、70 %。结论 IL 6具有较高的灵敏度与特异度。胸腔积液IL 6。

碳酸酐酶自动生化分析法测定血清锌

〔目的〕建立灵敏、准确、特异、试剂稳定的碳酸酐酶自动生化分析法测定血清锌。〔方法〕用三氯醋酸沉淀血清中蛋白质 ,释放出来的锌离子复活脱辅基的碳酸酐酶 ,以醋酸对硝基酚作为酶促反应底物进行测定。〔结果〕线性范围达 61.2 μmol/L ,回收率 96.5 %～ 10 4.3 % ,批内和批间变异系数分别小于 3 .0 %与 4.2 %。本法 (X)与原子吸收分光光度法 (Y)比较具有良好的相关性 ,Y =1.0 1X + 0 .15 ,r =0 .988。Cu2 + 、Fe2 + 、Mn2 + 各 2 0 0 μmol/L对锌测定均无影响 ;Co2 +10 μmol/L、胆红素 3 42 μmol/L、甘油三酯 15 .0mmol/L、血红蛋白 5g/L以下对本法测定结果也无干扰。〔结论〕该法具有特异、准确、灵敏、试剂稳定等优点 ,适合于生化分析仪检测。

碳酸酐酶法测定尿锌

目的 :确立灵敏、准确、特异且试剂稳定的碳酸酐酶法以测定尿锌。方法 :用 3%三氯醋酸沉淀尿中蛋白质 ,释放出来的锌离子复活脱辅基的碳酸酐酶 ,以醋酸对硝基酚作为酶促反应底物进行测定。结果 :线性范围达 6 1.2 μmol/L ,回收率为 95 .6 %～ 10 3.8% ,批内和批间变异系数分别小于 3.5 %与 4 .9% ,本法 (X)与原子吸收分光光度法 (Y)比较具有良好的相关性 ,Y =0 .996X +0 .33,r =0 .98。Cu2 + 、Fe2 + 、Mn2 + 各 2 0 0μmol/L对锌测定均无影响 ;Co2 + 10 μmol/L、胆红素 342 μmol/L以下对本法测定尿锌结果也无干扰。 结论 :该法具有特异、准确、灵敏且试剂稳定等优点 ,适合于生化分析仪检测尿锌。

血清五项指标联检诊断肝纤维化的评价

平行测定了138例肝病患者血清中Ⅱ型前胶原、Ⅳ型胶原、透明质酸、层粘连蛋白、脯氨酸肽酶5项指标水平,并与51名正常者对照。结果显示:慢性活动性肝炎、肝硬化组各项指标均明显升高（均P<0.01）,而慢性迁延性肝炎组各项指标仅轻度升高,与正常对照组比较无显著差别（均P>O.05）。五项指标联检发现慢性活动性肝炎组、肝硬化组分别有64.1％、85.6％患者出现三项指标以上阳性,而正常对照组五项指标全阴者占92.1％。提示多项指标联检可提高诊断肝纤维化的准确性。

自动生化分析法直接测定血清总铁结合力

目的:建立一种适合于自动生化分析仪检测的直接测定血清总铁结合力的方法。方法:利用pH 4.0及pH 8.4条件下,Fe3+与转铁蛋白亲和性不同,在维生素C的作用下,游离Fe3+被还原成Fe2+后与亚铁嗪反应所形成紫红色复合物的量差异来反映血清中总铁结合力浓度高低。结果:线性范围达157.1μmol/L,批内CV值小于3.8%,批间CV值小于4.4%,本法(Y)与碳酸镁吸附手工法(X)及Beckm an公司的总铁结合力试剂盒法(X)进行比较,回归方程分别为Y=-0.60+0.987X,Y=-1.54+1.02X,相关系数r分别为0.981,0.988。胆红素76μmol/L、甘油三酯3.81 mmol/L、血红蛋白1.39 g/L、镁离子5.2 mmol/L、锌离子1.25 mmol/L、铜离子0.43 mmol/L以下对本法测定总铁结合力无干扰。结论:该方法简便、准确、微量、特异性强,适合于自动生化分析仪检测。

导师队伍建设的现状与思考

本文结合研究生培养的现状,分析导师队伍建设对提高研究生培养质量的重要性以及目前研究生导师队伍建设过程中存在的一些普遍问题,并对这些问题的解决,促进导师队伍可持续发展提出对策与建议。

搞好生化检验教学及实习带教工作的体会

随着生化自动分析仪的日益普及，临床生化工作量绝大部分由生化自动分析仪完成，需要手工操作的项目越来越少。这是现代科学技术进步的必然结果，对减轻检验人员的工作负担，提高检验结果的准确度、精密度，对提高检验质量起着十分重要的作用。

搞好实习带教工作 提高学生综合素质

本文分析了目前检验科实习带教过程中普遍存在的问题,并对这些问题的解决提出对策。同时作者总结了实习带教过程中对提高学生综合素质所采取的带教方法及心得体会。

血清Ⅲ型前胶原和Ⅳ型胶原联合检测诊断肝纤维化的评价

血清Ⅲ型前胶原和Ⅳ型胶原联合检测诊断肝纤维化的评价＊温州医学院检验系（３２５０２７）胡云良池仁远１陈筱菲张胜千２沈财成温州市中医院院（３２５０００）汪菁陈鸿濂肝纤维化是多种慢性肝损害的不良结局，进一步发展可形成肝硬化，其实质是由于胶原和其他细胞外基质...

内毒素中毒时大鼠肝、脾、脑中谷胱甘肽水平的动态观察

给大白鼠腹腔注射EColi内毒素纯制剂(2mg/kg)。分别于注射后2h、4h、8h、14h、24h时将大鼠断头处死,测定肝、脾、脑等脏器中还原型谷胱甘肽(GSH)。结果表明:腹腔注射内毒素后,肝脏中GSH急剧下降(2h下降52％、4h下降33％),脾、脑中GSH在4h分别下降37％、22％。8h时各脏器中GSH均恢复正常。提示:内毒素中毒可引起肝、脾、脑等脏器损伤。

多指标检测在胸腔积液诊断中的价值

目的分析胸腔积液患者胸水中IL-6、CRP、C3及TRF四项指标水平,探讨多指标检测在胸腔积液性质鉴别诊断中的价值。方法将97例不同病因的胸腔积液患者分成漏出液组、良性渗出液组及恶性渗出液组三组,平行检测患者胸腔积液中四项指标水平,并通过受试者工作特征曲线分析。结果 IL-6、CRP、C3在三组胸腔积液中差异均有意义(均P<0.05)。以良性渗出液组中最高,漏出液组最低。渗出液中TRF比漏出液中TRF高(P<0.05),IL-6与CRP联检诊断渗出液的敏感度97.0%,特异度为100%。结论胸腔积液中CRP、C3、TRF、IL-6检测及多指标联检对鉴别胸腔积液性质有一定的实用价值。