一种灵长类动物的中枢神经系统功能评价方法

一种灵长类动物的中枢神经系统功能评价方法＊张晓鹏胡加飞蔡如珏黄承瑶文淑华董萍朱诚实验证实，单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因及更昔洛韦系统（ＨＳＶ－ＴＫ／ＧＣＶ）对小鼠、大鼠及人脑恶性胶质瘤细胞有明显的杀伤作用［１］。该系统是目前较有希望的恶性胶质瘤基因治...

pLTKcSN/VPC及GCV系统的旁观者效应观察

目的：探讨单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因（ＴＫ）逆转录病毒载体生产细胞（ｐＬＴＫｃＳＮ／ＶＰＣ）和更昔洛韦（ＧＣＶ）系统杀伤恶性胶质瘤细胞过程中的旁观者效应。方法：采用大鼠胶质瘤细胞Ｃ６、人恶性胶质瘤Ｕ８７ＭＧ和它们的转染ＴＫ阳性细胞Ｃ６ＴＫ，Ｕ８７ＴＫ，将Ｃ６与Ｃ６ＴＫ，Ｕ８７ＭＧ和Ｕ８７ＴＫ按比例（ＴＫ阳性细胞占细胞总体的０％～１００％，１０％梯度）分别混合培养于９６孔板中，每种混合比例设６孔。培养２４ｈ后，６孔中３孔加入浓度为０．５μｇ／ｍｌＧＣＶ，另外３孔作为空白对照。继续培养７２ｈ，直接计数各孔活细胞数并以对照组计数结果为本底计算ＧＣＶ对各混合比例的抑制率。结果：当ＴＫ阳性细胞占１０％时，Ｃ６和Ｕ８７ＭＧ组的抑制率达到或超过３０％，当ＴＫ阳性细胞占总体的５０％以上时，ＧＣＶ对各混合比例的抑制率接近１００％。结论：ｐＬＴＫｃＳＮ／ＶＰＣ和ＧＣＶ系统杀伤恶性胶质瘤细胞过程中存在明显的旁观者效应。

RV-HSV-TKc/GCV治疗脑胶质瘤效果及其影响因素

目的研究应用逆转录病毒介导中国单纯疱疹病毒TK基因治疗系统(RV-HSV-TKc/GCV)治疗脑胶质瘤的可行性及其影响因素。方法通过体外和大鼠实验,观察转TKc细胞在治疗中的量效关系;转基因方式对疗效的影响;基因治疗细胞在瘤内的分布;治疗动物的肿瘤免疫反应。结果①TKc胶质瘤细胞对GCV的敏感浓度>0.01μg/ml,PLCTKcSN细胞与胶质瘤细胞混合培养120h较混育24h的GCV敏感性高,在GVC有效杀伤范围内,基因治疗细胞与瘤细胞数量比值>1.0;②3种方式的体内治疗结果表明TKc/GCV具有一定抑制肿瘤生长作用;③接种后第5、10、15天的针道周围可见有大量TK表达阳性细胞,距针道5mm处TK阳性细胞则难以见到,与肿瘤交界的正常脑组织无TK阳性细胞;④治疗后长期生存大鼠5只再次接种瘤细胞28d后剖检,2只未见肿瘤生长,3只有肿瘤生长但明显小于对照组;实验组NK活性和ADCC效应高于对照组。结论在治疗细胞数量足够的前提下TKc/GCV基因治疗系统对大鼠脑胶质瘤有控制生长作用;该系统具有一定调节体内主动免疫效能。治疗细胞的基因转导能力,在瘤内的分布局限性,GCV局部浓度和机体的免疫状态是影响该基因治疗效果的主要因素。

神经胶质瘤基因治疗中旁观者效应的动物试验

目的：探讨单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）Ⅰ型胸苷激酶（ＴＫ）基因逆转录病毒载体生产细胞（ｐＬＴＫｃＳＮ／ＶＰＣ）和更昔洛韦（Ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ，ＧＣＶ）系统杀伤大鼠脑内神经胶质瘤细胞的旁观者效应。方法：用Ｃ６，Ｃ６ＸＳＮ，Ｃ６ＴＫ及不同比例的ＴＫ（＋）和ＴＫ（－）混合细胞接种于大鼠右侧额叶脑内，５ｄ后动物腹腔内注射ＧＣＶ溶液，剂量为１５ｍｇ／ｋｇ，每日２次，共１０ｄ。细胞接种后３周，所有动物处死，测量肿瘤大小，计算各组动物的肿瘤平均体积和成瘤率；肿瘤组织作病理检查。结果：５０％Ｃ６ＴＫ和１００％Ｃ６ＴＫ两组动物的成瘤率和肿瘤平均体积明显小于其余３组；病理检查发现５０％Ｃ６ＴＫ组动物肿瘤灶内有明显的病理改变。结论：旁观者效应在动物体内也能介导ＧＣＶ的杀伤作用；

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因工程化细胞和更昔洛韦系统的急慢性毒性

目的：探讨单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因工程化细胞（ｐＬＴＫｃＳＮ／ＶＰＣ）和更昔洛韦（ＧＣＶ）系统的动物体内急、慢性毒性。方法：将ｐＬＴＫｃＳＮ／ＶＰＣ和（或）以β－半乳糖苷酶基因为报告基因的ＰＡ３１７细胞悬液注入小鼠、大鼠和灵长类动物体内，７ｄ后部分动物再全身应用ＧＣＶ。分批处死动物，观察ｐＬＴＫｃＳＮ／ＶＰＣ和ＧＣＶ系统在不同种属动物的体内急、慢性毒性。采用ＰＣＲ和原位杂交方法直接检测胸苷激酶基因在动物脑和全身各脏器内的整合及表达情况。结合原位杂交和Ｘ－ｇａｌ染色结果，判断注射细胞在动物脑内的存活时间。结果：ｐＬＴＫｃＳＮ／ＶＰＣ和ＧＣＶ系统对动物的心、肝、肺和肾有一定的急性损害作用。该细胞在大鼠和猴脑内的存活时间为３周。

单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因及更昔洛韦系统对S-D大鼠的毒副作用

旨探讨将单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因载体生产细胞（pLTKcSN／VPC）脑内注射和腹腔注射更昔洛韦（GCV）在大鼠体内的急性系统性毒副作用，以及载体生产细胞（VPC）在大鼠脑内的存在时问。S-D大鼠24只，雌雄各半，随机分为2组。第1组颅内注射pLTKcSN／VPC，细胞总量3ｘ106/只，7天后腹腔注射GCV30mg·kg-1·d-1，共7天。GCV用药结束后1周处死动物，进行备脏器组织学检查及TK序列的聚合酶链反应（PCR）和原位杂交检测。第2组，采用脑内注射等量整合有β半乳糖苷酶基因（β-gal／nVPC），注射后的9、14、21和30天各处死3只动物，取注射针道周围脑组织行冰冻切片x-gal组化染色，观察VPC在大鼠脑内的生存时限。结果：第1组动物的各脏器组织学病理改变主要为脑内手术部位蛛网膜下腔出血、个别动物有心肌间质灶性炎症和肝细胞脂肪变性。TK序列聚合酶链反应（PCR）检测动物体内各脏器均未检出TK序列。x-gal组化染色见9天和21天两个时问点分别有1只动物脑内有阳性细胞存在。本文结果提示：pLTKcSN／VPC及GCV系统对大鼠脑及全身各脏器有轻微非特异性急性毒副作用，pLTKcSN／VPC在大鼠体内的生存时间约为3周。为pLTKCSN／VPC及GCV系统的临床试验治疗恶性脑胶质瘤提供了脑内注射PLTK。SN／VPC的安全性依据。

疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因和更昔洛韦系统对恶性胶质瘤患者免疫功能的影响

目的：探讨疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因和更昔洛韦（ Ｈ Ｓ Ｖ Ｔ Ｋ／ Ｇ Ｃ Ｖ）系统对恶性胶质瘤患者体液免疫和细胞免疫功能的影响。方法：对１２ 例恶性胶质瘤患者采用 Ｈ Ｓ Ｖ Ｔ Ｋ／ Ｇ Ｃ Ｖ 试验治疗。分别于治疗前、治疗过程中和治疗后采外周血和脑脊液，用流式细胞仪检测外周血 Ｔ淋巴细胞亚群，用免疫比浊法测定血清和脑脊液免疫球蛋白的含量。结果：血 Ｃ Ｄ４＋ Ｔ 细胞在治疗开始后２ 周显著升高；自然杀伤（ Ｎ Ｋ）细胞在治疗过程中明显下降，治疗结束后则显著高于治疗前水平；细胞毒性细胞（ Ｃ Ｔ Ｌ）在治疗结束后显著高于治疗前水平；血清 Ｉｇ Ｍ 和脑脊液 Ｉｇ Ｇ、 Ｉｇ Ａ 和 Ｉｇ Ｍ 水平在治疗结束后均显著高于治疗前水平。结论： Ｈ Ｓ Ｖ Ｔ Ｋ／ Ｇ Ｃ Ｖ 系统对机体的体液和细胞免疫功能有明显的促进作用。

腹腔内注入顺磁性造影剂观察大鼠脑胶质瘤

目的：观察腹腔内注入顺磁性造影剂维影钆胺（Ｇｄ－ＤＴＰＡ）后大鼠脑胶质瘤的显示和强化情况。方法：８０只ＳＤ大鼠脑内胶质瘤细胞种植后分成两组，分别经静脉内和腹腔内注入造影剂后行磁共振扫描。结果：经腹腔内注入造影剂与经静脉内注入造影剂两种方法对肿瘤的显示和强化相差不显著。结论：ＳＤ大鼠脑胶质瘤磁共振造影剂Ｇｄ－ＤＴＰＡ的给药途径可选用经腹腔内注入，其合适浓度为０．１～０．５ｍｍｏｌ／ｋｇ。

血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂用于非ST段抬高的急性冠状动脉综合征

早期介入治疗是治疗非ST段抬高的急性冠状动脉综合征的一种有效手段,在已确立的治疗方案(肝素、阿司匹林、β受体阻断剂、硝酸酯类药物等)的基础上,加用糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂,可以减少患者复发或早期死亡的风险。

脑立体定向接种C_6细胞建立大鼠脑胶质瘤模型

应用脑立体定向术将Ｃ＿６．细胞接种在Ｓｐｒｅｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠脑尾状核，同时留置永久性聚乙烯导管建立的大鼠脑胶质瘤模型方法。将２０只ＳＤ大鼠按肿瘤生长时间分为４组。分别在接种后１、２、３、４周时进行ＭＲＩ检查，病理解剖，病理组织学以及ＧＦＡＰ和Ｓ－１００免疫组化检查。结果表明该方法建立胶质瘤模型不仅较为接近人脑胶质瘤生长特性，而且颅内生长稳定，无颅外种植生长，适于胶质瘤实验治疗研究需要。

疱疹病毒I型中国株胸苷激酶基因治疗脑瘤的临床前研究

目的验证胸苷激酶（ＴＫ）基因介导的羟甲基无环鸟苷（ＧＣＶ）系统对人脑恶性神经胶质瘤基因治疗的有效性及安全性。方法从中国疱疹病毒Ｉ型（ＨＳＶ－Ｉ）株（１７）中分离了胸苷激酶（ＴＫｃ）基因，并作了ＤＮＡ序列分析，组建了含ＴＫｃ基因的逆转录病毒重组载体（ｐＬＴＫｃＳＮ）及其含ｐＬＴＫｃＳＮ病毒的病毒生产细胞（ｐＬＴＫｃＳＮ／ＶＰＣ）。体外有效性试验：应用ｐＬＴＫｃＳＮ／ＶＰＣ与大鼠脑瘤Ｃ６细胞共培养后用ＧＣＶ处理。体内有效性试验：以ｐＬＴＫｃＳＮ／ＶＰＣ原位注入大鼠颅内移植的Ｃ６脑瘤。安全性试验：通过小鼠、大鼠和猴植入ｐＬＴＫｃＳＮ／ＶＰＣ并注射ＧＣＶ观察其毒副作用。结果ＨＳＶ－ＩＴＫｃ基因与ｐＯＰＦＨＳＶ－１ＴＫ基因比较有５个核苷酸和２个氨基酸的变异。ｐＬＴＫｃＳＮ及其ｐＬＴＫｃＳＮ／ＶＰＣ，在体内外能有效地介导ＧＣＶ对Ｃ６产生细胞毒作用。其病毒滴度为２×１０６ＣＦＵ／ｍｌ。经过４８只小鼠、２４只大鼠和６只猴体内未见严重毒副作用和不可逆的病理改变。结论疮疹病毒胸苷激酶基因治疗脑肿瘤是有效和安全的，通过药审后可用于临床试验。

单纯疱疹病毒I型胸苷激酶基因和更昔洛韦系统的灵长类动物体内毒副作用

目的在灵长类动物中观察单纯疱疾病毒１型胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ＴＫ）及更昔洛韦（ＧＣＶ）系统的短期和长期毒副作用。方法恒河猴７只，其中１只设为正常对照，其余６只动物于右侧额叶白质内注射ＨＳＶ－ＴＫ的包装细胞悬液（ｐＬＴＫｃＳＮ／ＶＰＣ），细胞注射后７天起，其中３只动物经外周浅静脉滴注ＧＣＶ，剂量５ｍｇ／ｋｇ·ｄ，共１４天；另外４只不用药。动物在不同时间点处死，取注射针道周围的脑组织进行ＨＳＶ－ＴＫ序列原位杂交，并取全身各脏器进行全面组织学检查和ＨＳＶ－ＴＫ序列ＰＣＲ检测。结果３个月内，中枢神经系统的主要病理变化为脑干脱髓鞘变。其它病理变化包括心肌间质灶性炎症，肝脏浊肿变性，肾小管浊肿变性甚至水样变性，但这些病理变化在３个月后处死的动物中已不存在。ＨＳＣ－ＴＫ序列原位杂交结果见细胞注射后３周内有阳性细胞存在，３个月后处死的动物呈阴性改变。实验过程中动物的血液和脑脊液各项指标的动态观察未见有特异性改变。结论ＨＳＶ－ＴＫ及ＧＣＶ系统在用药后短期内对灵长类动物的心脏、肝脏和肾脏有一定的毒性损害作用，但是可恢复的。关键词##4脑肿瘤;;胸苷激酶基因;;更昔洛韦;;