广东规模化鸡场死鸡胚中鸡毒支原体的分离鉴定、致病性及药物敏感性

旨在从广东某规模化鸡场死鸡胚进行鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)的分离,并进行遗传进化分析、致病性及药物敏感性研究。本研究从广东某规模化鸡场的带菌死胚卵黄组织中分离禽支原体,通过菌落观察、血清学试验、16S rRNA支原体通用引物序列鉴定等方法,对分离的菌株进行种属鉴定,同时将分离的毒株对鸡胚和SPF鸡进行攻毒试验及抗菌药物敏感性试验。结果显示:显微镜下菌落呈典型的“荷包蛋”状。平板凝集试验显示其与MG阳性血清有凝集反应,与MS阳性血清不反应;16S rRNA序列测序发现各分离株与MG相似性达99.9%,因此确定分离株为MG。将各分离株感染7日龄SPF鸡胚,结果显示感染鸡胚大多于临近出壳时死亡;感染3周龄的SPF鸡,3周后解剖发现鸡气囊发生显著病理变化,说明其具有较强致病力;药物敏感性试验结果显示,5株分离株对盐酸沃尼妙林、多西环素、泰万菌素及泰妙菌素有较高敏感性,对替米考星、泰乐菌素、恩诺沙星、红霉素、吉他霉素、林可霉素呈现出不同程度耐药性。综上,从广东某规模化鸡场死鸡胚中成功分离到5株MG分离株,各分离株均可引起红细胞凝集,导致鸡胚死亡,对SPF鸡可引起典型的气囊炎症状,且对多种药物存在不同程度耐药性。本研究为临床MG的分离鉴定及用药选择提供了可参考的技术方法及指导,为MG攻毒模型建立提供了研究基础。

滑液囊支原体NADH氧化酶单克隆抗体的制备

为制备滑液囊支原体NADH氧化酶(NOX)的单克隆抗体。将本实验室前期构建好的重组菌株E.coliBL21(pET28a-NOX),进行诱导表达,经过纯化后免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA筛选结合有限稀释法克隆化,得到1株稳定分泌抗MSNOX抗体的杂交瘤细胞株,命名为2F4。单克隆抗体亚型鉴定结果显示,该单克隆抗体为IgG2b亚类,间接ELISA测定单克隆抗体腹水效价为1∶2048000。经Westernblot和悬浮免疫荧光试验鉴定,该株单克隆抗体与MS不同分离株均发生特异性反应,与其他禽致病菌不发生反应。通过染色体分析,该杂交瘤细胞株2F4有98±5条染色体,符合杂交瘤细胞染色体的数目,证实细胞融合成功。本研究成功制备NADH氧化酶单克隆抗体,为建立滑液囊支原体的检测方法及进一步研究NADH氧化酶在MS致病机制中的作用提供了重要的生物材料。

鹅星状病毒衣壳纤突蛋白VP27多克隆抗体的制备和鉴定

采用RT-PCR扩增获得鹅星状病毒(Goose astrovirus)的衣壳纤突蛋白基因vp27,并将其克隆至pCold-SUMO原核表达载体。重组表达载体pCold-vp27经过测序和双酶切验证正确后,转化到感受态细胞Rosetta。挑取阳性克隆子,利用异丙基硫代半乳糖苷诱导表达鹅星状病毒衣壳纤突重组蛋白,使用镍柱纯化衣壳纤突蛋白VP27,将定量的重组蛋白免疫BALB/c小鼠。利用ELISA、Western blot和IFA鉴定鼠抗衣壳纤突蛋白VP27多克隆抗体。结果显示,鼠抗衣壳纤突蛋白VP27多克隆抗体的效价大于1∶64000,Western blot试验结果证明了鼠抗衣壳纤突蛋白VP27多克隆抗体的特异性,IFA试验结果证明鼠抗衣壳纤突蛋白VP27多克隆抗体能够识别天然的鹅星状病毒衣壳纤突蛋白VP27。

鸡毒支原体VLHA3.03蛋白的原核表达及免疫原性分析

为研究鸡毒支原体(MG)的可变脂蛋白血凝素(VLHA)的生物学功能,对VLHA 3.03蛋白进行原核表达,然后进行了免疫原性和免疫反应性分析。通过Overlap PCR方法对MG Rlow株的vlha 3.03基因进行点突变扩增,将突变成功的vlha 3.03基因全长与原核表达载体pCold Ⅰ连接,连接产物转入大肠杆菌BL21进行诱导表达和纯化。用纯化后的重组蛋白rVLHA3.03免疫新西兰大白兔,制备兔多克隆抗体,并用ELISA检测抗体效价,再用制备的兔多克隆抗体、MG不同分离株阳性鸡血清及MS标准阳性血清分别与rVLHA3.03蛋白进行Western blot反应,分析rVLHA3.03蛋白的免疫原性和免疫反应性。结果表明,在大肠杆菌BL21中成功表达rVLHA3.03蛋白,且该蛋白具有较好的免疫原性和免疫反应性。

精益管理在火电厂节水中的应用

水是人类赖以生存的重要资源之一,保护和合理利用水资源已列入我国基本国策。作为用水大户的火电厂,积极采取有效的措施,开展水的回收利用,大力提高水的利用率达到节约用水,对保证国民经济的发展具有重要意义。华润电力（曹妃甸）有限公司通过开展精益管理活动,运行精益管理方法寻找用水、排水的节水技术和回收方法,并做相关介绍,倡导电厂节水降耗。